國(guó)際FAPAS乳粉中沙門(mén)氏菌能力驗(yàn)證結(jié)果分析

秦婧 石菲

作者簡(jiǎn)介：秦婧（1989—），女，陜西西安人，碩士，工程師。研究方向：食品微生物檢測(cè)與研究。

摘 要：目的：參加FAPAS乳粉中沙門(mén)氏菌能力驗(yàn)證可維持實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)?zāi)芰?，提高檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)競(jìng)爭(zhēng)力。方法：依據(jù)FAPAS作業(yè)指導(dǎo)書(shū)及GB 4789.4—2016對(duì)乳粉中沙門(mén)氏菌進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)加入標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC 14028作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果：樣品M280d072-A檢出沙門(mén)氏菌；樣品M280d072-B未檢出沙門(mén)氏菌。結(jié)論：國(guó)際FAPAS乳粉中沙門(mén)氏菌檢測(cè)能力驗(yàn)證結(jié)果評(píng)價(jià)為滿意。

關(guān)鍵詞：FAPAS；沙門(mén)氏菌；能力驗(yàn)證

Analysis of FAPAS Salmonella Ability Verification Results in Milk Powder

QIN Jing， SHI Fei

（Shaanxi Institute of Product Quality Supervision and Inspection， Xian 710048， China）

Abstract： Objective： Participating in FAPAS Salmonella ability verification in milk power can maintain laboratory testing capacity and improve the competitiveness of testing institutions. Method： According to the instruction of FAPAS and GB 4789.4—2016， Salmonella in milk powder was detected and ATCC 14028 was added as a positive control. Result： The Salmonella was detected in sample M280d072-A; the Salmonella was undetected in sample M280d072-B. Conclusion： The results of the FAPAS test for Salmonella in milk powder were satisfactory.

Keywords： FAPAS; Salmonella; ability verification

沙門(mén)氏菌是一種常見(jiàn)的食源性致病菌，廣泛存在于自然界中，能引起人和動(dòng)物急性腸胃炎、食物中毒、敗血癥等。世界各國(guó)都將沙門(mén)氏菌視為一項(xiàng)重要的食品安全指標(biāo)，且普遍規(guī)定沙門(mén)氏菌不得檢出?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 預(yù)包裝食品中致病菌限量》

（GB 29921—2021）對(duì)沙門(mén)氏菌的要求十分嚴(yán)格，2021年新出臺(tái)的《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 散裝即食食品中致病菌限量》（GB 31607—2021）對(duì)散裝即食食品沙門(mén)氏菌規(guī)定不得檢出。食品中沙門(mén)氏菌的檢驗(yàn)是食品微生物檢驗(yàn)中的一項(xiàng)常規(guī)檢驗(yàn)，是每個(gè)檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)都應(yīng)該具備的資質(zhì)，是每個(gè)食品微生物檢驗(yàn)員都應(yīng)該具備的能力，同時(shí)對(duì)國(guó)民健康具有重要意義。中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)（China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS）規(guī)定尋求并參加能力驗(yàn)證是合格評(píng)定機(jī)構(gòu)的責(zé)任和義務(wù)[1]。在食品分析領(lǐng)域，分析實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證（Food Analysis Performance Assessment Scheme，F(xiàn)APAS）已發(fā)展成為享譽(yù)全球的國(guó)際評(píng)價(jià)體系[2]，我國(guó)已經(jīng)有越來(lái)越多的檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)參與FAPAS能力驗(yàn)證。為評(píng)估實(shí)驗(yàn)室對(duì)食品中沙門(mén)氏菌的檢驗(yàn)?zāi)芰?，本?shí)驗(yàn)室參加FAPAS于2022年11月組織的乳粉中沙門(mén)氏菌檢測(cè)能力驗(yàn)證，依據(jù)的方法是《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)》（GB 4789.4—2016）。

1 材料與方法

1.1 試劑

緩沖蛋白胨水（Buffered Peptone Water，BPW）、四硫磺酸鈉煌綠增菌液（Tetrathionate Broth Base，TTB）、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（Selenite Cystine Broth，SC）、亞硫酸鉍瓊脂（Bismuth Sulfite Agar，BS）、木糖賴(lài)氨酸脫氧膽鹽（Xylose Lysine Desoxycholate，XLD）瓊脂、沙門(mén)顯色培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、沙門(mén)氏菌干制生化鑒定試劑盒等均來(lái)自北京陸橋技術(shù)股份有限責(zé)任公司。

1.2 儀器與設(shè)備

生化培養(yǎng)箱（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠，SPX-250B-Z）；二級(jí)生物安全柜（美國(guó)賽默飛世爾科技，1300SERIESA2）；Vitek 2 Compact全自動(dòng)微生物生化鑒定儀（法國(guó)生物梅里埃股份有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 樣品的接收和確認(rèn)

實(shí)驗(yàn)室收到FAPAS乳粉中沙門(mén)氏菌能力驗(yàn)證樣品2份，樣品編碼是M280d072-A、M280d072-B，樣品為25 g乳粉，塑料瓶包裝，外包裝完好，樣品性狀為白色粉末，且無(wú)結(jié)塊等異常現(xiàn)象，因此確認(rèn)樣品完整。2份樣品標(biāo)記為072A和072B，安排兩位檢驗(yàn)員共同檢測(cè)，同時(shí)用實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC 14028做陽(yáng)性對(duì)照。

1.3.2 樣品的前處理和預(yù)增菌

根據(jù)此次能力驗(yàn)證作業(yè)指導(dǎo)書(shū)的說(shuō)明，開(kāi)啟樣品前應(yīng)先將兩份樣品072A和072B置于室溫下

30 min。在P2生物安全實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜中以無(wú)菌操作開(kāi)啟樣品，將樣品置于提前準(zhǔn)備好的無(wú)菌均質(zhì)袋中，先加入少量BPW充分沖洗塑料瓶?jī)?nèi)部，并將BPW吸出轉(zhuǎn)入之前的無(wú)菌均質(zhì)袋中，最終使水化的BPW總量為225 mL。用均質(zhì)器將樣品和BPW充分混勻1～2 min，即為預(yù)增菌液，并做好標(biāo)記，分別標(biāo)記為072A和072B。同時(shí)接種ATCC 14028做陽(yáng)性對(duì)照，以未接種的BPW做空白對(duì)照，將預(yù)增菌液于（36±1）℃培養(yǎng)8～18 h。后續(xù)依據(jù)GB 4789.4—2016進(jìn)行檢測(cè)分析。

1.3.3 選擇性增菌

將072A、072B、ATCC 14028、空白對(duì)照的預(yù)增菌液于（36±1）℃培養(yǎng)18 h后取出，混勻，移取1 mL，轉(zhuǎn)種于10 mL TTB內(nèi)，于（42±1）℃培養(yǎng)18～24 h。同時(shí)，另取1 mL轉(zhuǎn)種于10 mL SC內(nèi)，于（36±1）℃培養(yǎng)18～24 h。分別做好樣品標(biāo)記，以上操作均在生物安全柜中進(jìn)行。

1.3.4 分離

將所有TTB、SC選擇性增菌液于（36±1）℃培養(yǎng)24 h后取出，經(jīng)混勻后，將每支TTB和SC分別劃線接種于BS瓊脂、XLD瓊脂和沙門(mén)顯色培養(yǎng)基上，并做好樣品標(biāo)識(shí)。其中BS瓊脂于（36±1）℃培養(yǎng)48 h，XLD瓊脂和沙門(mén)顯色培養(yǎng)基于（36±1）℃培養(yǎng)24 h。

1.3.5 生化試驗(yàn)

從072A、ATCC 14028的選擇性瓊脂平板上分別挑取可疑菌落接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板進(jìn)行純培養(yǎng)，于（36±1）℃培養(yǎng)24 h。將培養(yǎng)好的純培養(yǎng)物接種至沙門(mén)氏菌干制生化鑒定試劑盒，同時(shí)采用Vitek2 Compact全自動(dòng)微生物生化鑒定儀對(duì)純培養(yǎng)物進(jìn)行鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 選擇性增菌結(jié)果

1.3.3中培養(yǎng)后的TTB、SC培養(yǎng)物觀察情況如表1所示，兩名檢驗(yàn)員檢測(cè)的結(jié)果一致。

2.2 分離結(jié)果

按1.3.4方法進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果見(jiàn)表2。TTB和SC培養(yǎng)結(jié)果相一致，其中072A和ATCC 14028的選擇性培養(yǎng)基上各有一種可疑菌落，需要進(jìn)行后續(xù)生化試驗(yàn)；072B的選擇性培養(yǎng)基未見(jiàn)菌落生長(zhǎng)，判定M280d072B沙門(mén)氏菌未檢出（25 g乳粉）。兩名檢驗(yàn)員檢測(cè)結(jié)果一致。

2.3 生化試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 沙門(mén)氏菌干制生化鑒定試劑盒結(jié)果

沙門(mén)氏菌干制生化鑒定試劑盒鑒定結(jié)果見(jiàn)表3。依據(jù)GB 4789.4—2016中5.4.1～5.4.2對(duì)生化反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行判定，樣品072A和ATCC 14028均為沙門(mén)氏菌屬，且兩名檢驗(yàn)員檢測(cè)結(jié)果一致。

2.3.2 Vitek 2 Compact全自動(dòng)微生物生化鑒定儀結(jié)果

經(jīng)鑒定，發(fā)現(xiàn)樣品072A和ATCC 14028均為鼠傷寒沙門(mén)氏菌，且兩名檢驗(yàn)員檢測(cè)結(jié)果一致。

2.4 結(jié)果報(bào)告

綜合生化試驗(yàn)和Vitek 2 Compact全自動(dòng)微生物生化鑒定儀的結(jié)果，樣品M280d072-A檢出沙門(mén)菌/

25 g，樣品M280d072-B未檢出沙門(mén)菌/25 g。

3 結(jié)論與討論

此次國(guó)際FAPAS乳粉中沙門(mén)氏菌能力驗(yàn)證結(jié)果評(píng)價(jià)為滿意，表明該實(shí)驗(yàn)室具備沙門(mén)氏菌檢測(cè)分析能力。BPW是一種廣泛性增菌液，也可作為稀釋液，具有修復(fù)細(xì)胞的作用，可復(fù)蘇沙門(mén)氏菌，也可用與單增李斯特氏菌的檢驗(yàn)。TTB、SC是選擇性增菌液，其含有的選擇性抑制劑對(duì)不同沙門(mén)氏菌的選擇效果不同，因此在檢測(cè)過(guò)程中TTB和SC兩種增菌液需要同時(shí)使用，避免漏檢[3]。BS瓊脂選擇性比較強(qiáng)，對(duì)樣品中的雜菌有抑制作用，能更好地分離出目標(biāo)菌[4]。XLD瓊脂選擇性較低，在日常檢驗(yàn)中常遇到一些樣品在XLD瓊脂上為黃色菌落且不帶黑色中心，符合GB 4789.4—2016中沙門(mén)氏菌在XLD瓊脂上的菌落特征，但最終經(jīng)生化試驗(yàn)或Vitek生化鑒定儀鑒定并不是沙門(mén)氏菌屬。與BS瓊脂和XLD瓊脂不同的是，沙門(mén)顯色培養(yǎng)基在觀察菌落時(shí)更加直觀、容易辨認(rèn)。對(duì)于本次能力驗(yàn)證所采用的沙門(mén)顯色培養(yǎng)基，說(shuō)明書(shū)上明確沙門(mén)氏菌典型菌落為紫紅色，其他為藍(lán)綠色、無(wú)色或不生長(zhǎng)。也有研究表明科馬嘉顯色培養(yǎng)基比SS、XLD和HE的假陽(yáng)性更少[5]。當(dāng)然沙門(mén)顯色培養(yǎng)基單瓶?jī)艉啃?，且單價(jià)比其他幾種選擇性培養(yǎng)基要高。許多實(shí)驗(yàn)室通常選擇性培養(yǎng)基選用BS瓊脂和XLD瓊脂，在必要時(shí)如高風(fēng)險(xiǎn)食品或能力驗(yàn)證時(shí)再加入沙門(mén)顯色培養(yǎng)基。

基于本次試驗(yàn)，將乳粉中沙門(mén)氏菌能力驗(yàn)證中操作關(guān)鍵點(diǎn)總結(jié)如下。①準(zhǔn)備工作。先確定檢驗(yàn)人員，提前準(zhǔn)備和檢查相關(guān)試劑、器具和設(shè)備。②樣品確認(rèn)。實(shí)驗(yàn)室收到FAPAS樣品時(shí)，應(yīng)先對(duì)樣品進(jìn)行確認(rèn)，如仔細(xì)核對(duì)樣品信息、檢查樣品的外包裝是否完整、樣品性狀是否正常（顏色、有無(wú)結(jié)塊等）。③作業(yè)指導(dǎo)書(shū)和檢驗(yàn)方案。收到樣品后，應(yīng)先制定作業(yè)指導(dǎo)書(shū)和確定檢驗(yàn)方法。檢驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)應(yīng)包括檢驗(yàn)人員、檢驗(yàn)地點(diǎn)、時(shí)間安排、試劑配制、樣品前處理、預(yù)增菌、選擇性增菌、分離及鑒定等操作關(guān)鍵點(diǎn)，以及突發(fā)狀況的應(yīng)對(duì)預(yù)案。④試劑配制。TTB增菌液經(jīng)121 ℃、20 min高壓滅菌后，應(yīng)立即放入冷水中冷卻，在臨用前以無(wú)菌操作加入碘液和煌綠，然后進(jìn)行分裝。BS瓊脂平板、XLD瓊脂平板及沙門(mén)顯色平板均不需要高壓滅菌，在制備過(guò)程中不宜過(guò)分加熱，否則會(huì)降低其選擇性，BS和XLD兩種瓊脂平板應(yīng)于使用的前一天配制。兩種瓊脂平板應(yīng)貯于室溫暗處，BS瓊脂平板應(yīng)在48 h內(nèi)使用，否則容易影響分離鑒定結(jié)果。制備好的沙門(mén)顯色平板應(yīng)于2～

8 ℃冰箱冷藏保存一周。⑤混勻的重要性和必要性。在所有食品微生物檢驗(yàn)過(guò)程中，每個(gè)步驟應(yīng)使用均質(zhì)機(jī)和混勻器進(jìn)行均質(zhì)混勻。⑥樣品的前處理過(guò)程控制。整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)在P2生物安全實(shí)驗(yàn)室中的生物安全柜中進(jìn)行。樣品由冷藏室中取出后應(yīng)先在室溫下靜置30 min使其復(fù)蘇；兩名檢驗(yàn)員共同確認(rèn)樣品的性狀正常后，以無(wú)菌操作開(kāi)啟樣品。⑦檢驗(yàn)過(guò)程控制。每個(gè)步驟務(wù)必做好樣品標(biāo)識(shí)避免混淆，且應(yīng)有實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量監(jiān)督員在旁指導(dǎo)監(jiān)督。操作完成后，應(yīng)對(duì)生物安全柜和實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行徹底清理消毒，避免造成陽(yáng)性污染。⑧結(jié)果分析。每個(gè)步驟樣品和陽(yáng)性對(duì)照培養(yǎng)好后，注意觀察反應(yīng)現(xiàn)象。

參考文獻(xiàn)

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