Ⅱ型心腎綜合征大鼠模型制備方法的改良

劉茜,王新婷,程培培,戎靖楓,楊天舒,周華*

(1. 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合心血管研究室,上海 201203;2. 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院心內(nèi)科,上海 200071)

心腎綜合征(cardio-renal syndrome,CRS)是指心臟和腎任意一個(gè)器官急性或慢性功能不全導(dǎo)致的另一器官急性或慢性損傷而引起的臨床綜合征,根據(jù)其病理生理特點(diǎn)和病程長短,可分為5 個(gè)亞型:Ⅰ型為急性心腎綜合征,即急性心功能障礙(如急性失代償性心力衰竭、急性冠脈綜合征)導(dǎo)致的急性腎損傷;Ⅱ型為慢性心腎綜合征,即慢性心功能障礙(如慢性心力衰竭、先天性心臟病)導(dǎo)致的慢性腎損傷;Ⅲ型為急性腎心綜合征,即急性腎損傷(如急性腎小管壞死、急性腎小球疾病)導(dǎo)致的急性心功能障礙;Ⅳ型為慢性腎心綜合征,即慢性腎病(如慢性腎小球或間質(zhì)病變)導(dǎo)致的心功能障礙;Ⅴ型為繼發(fā)性心腎綜合征,即全身性疾病(如膿毒血癥、糖尿病)導(dǎo)致的心臟、腎功能同時(shí)發(fā)生障礙[1-2]。 在心血管領(lǐng)域,2021 年流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示,全球心力衰竭患者人數(shù)已達(dá)6430 萬[3],約63%的慢性心力衰竭患者存在Ⅱ型CRS,明確Ⅱ型CRS 的發(fā)病機(jī)制并研發(fā)安全有效的藥物迫在眉睫,急需通過高度模擬臨床Ⅱ型CRS 的動(dòng)物模型為發(fā)病機(jī)制研究及藥物開發(fā)提供依據(jù)。 目前很多心腎綜合征的動(dòng)物模型構(gòu)建相對籠統(tǒng),并未區(qū)分以上5 個(gè)亞型,而現(xiàn)有的Ⅱ型CRS 動(dòng)物模型構(gòu)建術(shù)式繁多,手術(shù)創(chuàng)傷大,有些并不能很好地模擬發(fā)病和病情進(jìn)展過程[4-5]。 本研究參考國內(nèi)外學(xué)者的研究方法并進(jìn)行改良,通過結(jié)扎冠狀動(dòng)脈+ 單側(cè)腎切除術(shù)成功建立Ⅱ型CRS大鼠動(dòng)物模型,為進(jìn)一步的發(fā)病機(jī)制及藥物開發(fā)研究奠定了良好的基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

20 只SPF 級健康的6 ~ 7 周齡SD 雄性大鼠,體重180 ~ 200 g,購于上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)營部【SCXK(滬)2018-0006】。 飼養(yǎng)環(huán)境:室溫(23 ± 2)℃,濕度(50 ± 5)%,12 h 光照/12 h 黑暗,普通飼料喂養(yǎng),自由獲取純凈水,飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心【SYXK(滬)2020-0009】。 本實(shí)驗(yàn)開展獲得了上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會審核批準(zhǔn)(IACUC: PZSHUTCM 2303220006)。

1.1.2 主要試劑與儀器

異氟烷(220405,深圳市瑞沃德生命科技有限公司),慶大霉素(2207202222,辰欣藥業(yè)股份有限公司),蘇木素-伊紅(HE)染色試劑盒(C0105S,上海碧云天生物技術(shù)有限公司),改良天狼星紅染色試劑盒(G1472,北京索萊寶科技有限公司),大鼠腦鈉肽(BNP)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(H166-1-2,南京建成生物工程研究所有限公司),肌酐(Cr)測定試劑盒(肌氨酸氧化酶法)(C011-2-1,南京建成生物工程研究所有限公司),尿素氮(BUN)測試盒(二乙酰肟比色法)(C013-1-1,南京建成生物工程研究所有限公司),尿蛋白定量測試盒(CBB 法)(C035-2-1,南京建成生物工程研究所有限公司)。

小動(dòng)物麻醉機(jī)(R540,瑞沃德),動(dòng)物心電圖機(jī)(VECG-2302B,廣州市三銳電子科技有限公司),心臟超聲儀器(Vivid,GE),石蠟包埋機(jī)(HistoCore Arcadia H, LEICA), 組織包埋冷臺(HistoCore Arcadia C,LEICA),手動(dòng)輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)(HistoCore BIOCUT,LEICA),石蠟切片水浴攤片機(jī)(HI1210,LEICA),組織病理學(xué)用烘片儀(HI1220,LEICA),顯微數(shù)碼CCD (DP71, Olympus), 全功能酶標(biāo)儀(Synergy H1, BioTek), 離心機(jī)(Avanti J-15R,Beckman Coulter)。

1.2 方法

1.2.1 分組和造模

20 只SD 大鼠經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后被隨機(jī)分為假手術(shù)組(n= 7)和模型組(n= 13)。 Ⅱ型CRS 造模:心肌梗死造模1 周后行單側(cè)腎切除術(shù),第6 周Ⅱ型CRS 成模(圖1)。

圖1 Ⅱ型心腎綜合征造模路線圖Figure 1 Model road map for type Ⅱcardio-renal syndrome

心肌梗死后慢性心衰模型的建立:在Johns 法建立心梗模型的基礎(chǔ)上,參考文獻(xiàn)[6-8]略作修改,采取結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈前降支制備慢性心衰大鼠模型。 取雄性SD 大鼠術(shù)前禁食禁水12 h,將大鼠放入誘導(dǎo)盒中3%異氟烷誘導(dǎo)麻醉,待大鼠麻醉后仰臥位固定在手術(shù)臺上,使用面罩將大鼠臉部罩住,予2%異氟烷維持麻醉。 常規(guī)胸部消毒、備皮,于心尖搏動(dòng)最強(qiáng)處稍上(第4、5 肋間)與胸骨平行處作一長約2 ~ 3 cm 的橫向切口,鈍性分離胸大肌,右手持鈍頭剪緊靠胸骨左緣插入肋間肌,沿肋骨走向擴(kuò)大胸腔,暴露心臟,剪開心包膜,雙手?jǐn)D壓胸部使心臟自行跳出胸腔外,迅速于左冠狀動(dòng)脈前降支起始處下方約2 mm 處用6-0 帶線縫針進(jìn)行永久性結(jié)扎(深度約2 mm,寬度約3 mm),結(jié)扎后確認(rèn)心肌明顯發(fā)白,回納心臟至胸腔,逐層縫合胸部肌肉和皮膚,乙醇消毒術(shù)口。 以上操作均嚴(yán)格在無菌條件下進(jìn)行。 術(shù)后立即行心電圖檢查,以標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)聯(lián)Ⅱ(紙速25 mm/s,電壓10 mm/mV)中ST 段弓背抬高為心肌梗死形成的標(biāo)準(zhǔn)。 假手術(shù)組除不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈,其余操作同前。 術(shù)后腹腔注射慶大霉素預(yù)防感染。

單側(cè)腎切除造模:心梗術(shù)后1 周,術(shù)前禁食禁水12 h。 腹腔注射2%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)麻醉大鼠,使大鼠俯臥位固定于手術(shù)臺上,右側(cè)肋下脊直肌外側(cè)常規(guī)消毒、備皮,在右側(cè)肋弓下1 cm 處,脊柱向右旁開1 cm 處切開一平行于脊柱長約1.5 cm 切口,逐層切開肌肉進(jìn)入腹腔,暴露右腎,分離腎包膜,暴露腎門,永久性結(jié)扎右側(cè)腎蒂,切除右腎,注意不要傷及腎上腺。 逐層縫合背部肌肉、皮膚,乙醇消毒傷口。 假手術(shù)組除了不結(jié)扎腎蒂、不切除右腎,余操作同前。 術(shù)后腹腔注射慶大霉素預(yù)防感染。

1.2.2 超聲心動(dòng)圖檢測

兩組大鼠于Ⅱ型CRS 建模完成后進(jìn)行超聲心動(dòng)圖檢測,注射戊巴比妥鈉麻醉大鼠,應(yīng)用GE Vivid心臟超聲儀器,M 型超聲心動(dòng)圖測量大鼠左心室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fractions,LVEF)和左心室短軸縮短率 ( left ventricular fractional shortening,LVFS)。

1.2.3 樣本采集及心臟、左腎重量指數(shù)測定

在大鼠取血前1 d,將大鼠放入代謝籠收集24 h尿液,并記錄24 h 尿液總量。 將留取的尿液離心(常溫,1500 r/min,5 min),取上清液放入-80℃保存。 留取完大鼠尿液后,稱取大鼠體重,注射戊巴比妥鈉麻醉大鼠,采用腹主動(dòng)脈取血法收集大鼠血液標(biāo)本,靜置2 h 后離心(4℃,3000 r/min,15 min),取上清液放入-80℃保存。 取完血后開胸、開腹依次取出心臟、左腎,用生理鹽水泡洗,濾紙吸干心臟、左腎表面水分,分別稱量心臟、左腎重量。 心臟重量指數(shù)= (心臟重量/體重) × 100%。 左腎重量指數(shù)= (左腎重量/體重) × 100%。

1.2.4 心臟、腎生化指標(biāo)檢測

采用競爭法檢測血腦鈉肽(BNP),并用酶標(biāo)儀分析計(jì)算吸光度。 以肌氨酸氧化酶法檢測大鼠血肌酐(Scr)、尿肌酐(Ucr)。 以二乙酰肟比色法檢測血尿素氮(BUN)。 以CBB 法檢測24 h 尿蛋白。 計(jì)算內(nèi)生肌酐清除率(creatinine clearance rate,Ccr):Ccr(mL/min) = 尿肌酐× 24 h 尿量(mL)/血肌酐× 1440。

1.2.5 組織病理學(xué)檢查

取大鼠心臟、左腎組織,置于4%多聚甲醛固定、不同濃度乙醇脫水、二甲苯透明,石蠟包埋、切片。 常規(guī)脫蠟后按說明書進(jìn)行HE、苦味酸-天狼星紅染色,封片后采用OlympusDP71 顯微數(shù)碼CCD 采集圖片,用Image-Pro Plus 6.1 軟件進(jìn)行心臟、左腎組織天狼星紅陽性染色面積比(%)分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 計(jì)量資料若符合正態(tài)分布、方差齊性,組間分析采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),并采用平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差(±s)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述。 若不符合正態(tài)分布、方差齊性,組間分析采用兩獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)方法Mann-Whitney U 檢驗(yàn),并采用中位數(shù)、四分位數(shù)間距M(P25,P75)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述。 統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均采用雙側(cè)檢驗(yàn),P< 0.05 為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 造模死亡率及心衰成功率

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,假手術(shù)組無大鼠死亡;模型組大鼠死亡3 只,剩余10 只,死亡率為23.1%(3/13),心梗造模術(shù)后24 h 內(nèi)死亡2 只,考慮死亡原因?yàn)樾脑葱孕菘?心梗+ 單側(cè)腎切除術(shù)后2 周死亡1 只,考慮死亡原因?yàn)樾?、腎功能衰竭。 心梗術(shù)后4 周行心臟超聲檢測,EF > 50%則心衰造模失敗,故剔除大鼠2 只,大鼠心衰成功率為80%(8/10)。

2.2 心電圖檢測結(jié)果

與假手術(shù)組相比,模型組大鼠心梗造模后心電圖顯示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、aVF 導(dǎo)聯(lián)ST 段呈弓背向上型抬高,提示心肌梗死造模成功(圖2)。

圖2 假手術(shù)組和模型組大鼠心肌梗死造模后心電圖Figure 2 Electrocardiograms of rats in the sham group and model group after myocardial infarction modeling

2.3 超聲心動(dòng)圖檢查結(jié)果

采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析顯示,與假手術(shù)組相比,模型組大鼠LVEF 明顯降低(P< 0.01)。 采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)分析顯示,與假手術(shù)組相比,模型組大鼠LVFS 明顯降低(P< 0.01)。 提示模型組大鼠心功能受損明顯,心衰模型造模成功(圖3)。

圖3 大鼠超聲心動(dòng)圖檢查結(jié)果Note. A. Representative echocardiographic images of rats. B. Results of LVEF and LVFS in rats. Compared with the sham group, **P < 0.01. (The same in the following figures and tables)Figure 3 Results of rat echocardiography examination

2.4 心臟、左腎重量指數(shù)比較

采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析顯示,模型組大鼠的心臟重量指數(shù)較假手術(shù)組明顯升高(P< 0.01)。采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)分析顯示,模型組大鼠的左腎重量指數(shù)較假手術(shù)組明顯升高(P< 0.01)。 提示模型組大鼠的心臟、左腎體積存在代償性增大(表1)。

表1 心臟、左腎重量指數(shù)比較(± s,M(P25,P75))Table 1 Comparison of heart weight/body weight and left kidney weight/body weight(± s,M(P25,P75))

表1 心臟、左腎重量指數(shù)比較(± s,M(P25,P75))Table 1 Comparison of heart weight/body weight and left kidney weight/body weight(± s,M(P25,P75))

?

2.5 心臟、腎生化指標(biāo)檢測結(jié)果

2.5.1 心臟生化指標(biāo)檢測結(jié)果

采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析顯示,與假手術(shù)組相比,模型組大鼠BNP 水平明顯升高(P< 0.01),提示模型組大鼠心功能降低明顯(表2)。

表2 心臟、腎生化指標(biāo)比較(± s,M(P25,P75))Table 2 Comparison of biochemical indicators of heart and kidney(± s,M(P25,P75))

表2 心臟、腎生化指標(biāo)比較(± s,M(P25,P75))Table 2 Comparison of biochemical indicators of heart and kidney(± s,M(P25,P75))

?

2.5.2 腎生化指標(biāo)檢測結(jié)果

采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)分析顯示,與假手術(shù)組相比,模型組大鼠Scr、BUN 水平升高(P<0.01)。 采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析顯示,與假手術(shù)組相比,模型組大鼠24 h 尿蛋白水平升高(P<0.01),Ccr 降低(P< 0.01)。 提示模型組大鼠腎功能降低(表2)。

2.6 組織病理學(xué)改變

2.6.1 體表形態(tài)

假手術(shù)組大鼠心臟表面血管分布清晰,色澤紅潤,腎表面光滑有色澤。 模型組大鼠心臟呈暗紅色,左心室壁梗死區(qū)明顯發(fā)白,腎表面凹凸不平,可見瘀斑(圖4)。

圖4 大鼠心臟和腎體表形態(tài)Figure 4 Surface morphology of rats’ heart and kidney

2.6.2 HE 染色結(jié)果

假手術(shù)組的心肌細(xì)胞大小正常,心肌纖維排列整齊、分界輪廓清晰,間質(zhì)內(nèi)無明顯炎癥細(xì)胞浸潤。模型組的心肌細(xì)胞排列紊亂,心肌細(xì)胞明顯水腫甚至壞死,管壁外及間質(zhì)中有炎癥細(xì)胞浸潤,結(jié)締組織增生。 假手術(shù)組的腎小管和腎小球形態(tài)正常,無萎縮腫脹,腎小管間質(zhì)無明顯炎癥細(xì)胞浸潤。 模型組的腎小管萎縮,腎小管壁增厚伴管腔擴(kuò)張,排列不規(guī)則,間質(zhì)內(nèi)可見炎癥細(xì)胞浸潤及粘液物質(zhì)(圖5)。

圖5 大鼠心臟組織和腎組織HE 染色Figure 5 HE staining of rats’ heart tissue and kidney tissue

2.6.3 苦味酸-天狼星紅染色結(jié)果

假手術(shù)組心肌膠原纖維分布均勻、排列整齊、集合成束。 模型組心肌膠原纖維明顯增多,分布不均,排列紊亂,粗大的膠原纖維互相交錯(cuò)成網(wǎng)狀。假手術(shù)組腎小管和腎小球結(jié)構(gòu)正常,無萎縮腫脹,無纖維組織增生。 模型組可見腎間質(zhì)中大量膠原纖維沉積,腎小球結(jié)構(gòu)紊亂伴周圍纖維化,腎小管排列不規(guī)則。 采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)分析顯示,模型組心臟、腎的天狼星紅陽性染色面積比均較假手術(shù)組明顯增加(P< 0.01)(圖6)。

圖6 大鼠心臟組織、腎組織苦味酸-天狼星紅染色及陽性染色面積比Note. A. Picric acid Sirius red staining of rats’ heart tissue and positive staining area ratio in rats. B. Picric acid Sirius red staining of rats’ kidney tissue and positive staining area ratio in rats.Figure 6 Picric acid Sirius red staining and positive staining area ratio in rats’ heart tissue and kidney tissue

3 討論

Ⅱ型CRS 是近年來全球關(guān)注的熱點(diǎn)和難點(diǎn)問題,構(gòu)建規(guī)范的、高度模擬臨床Ⅱ型CRS 的動(dòng)物模型可以為Ⅱ型CRS 的發(fā)病機(jī)制研究和藥物開發(fā)提供依據(jù)。 Ⅱ型CRS 的造模可分為單一模型和復(fù)合模型。 單一模型造模時(shí)間長,其中給藥動(dòng)物模型與人體CRS 發(fā)生過程存在差異,目前最常用的是冠脈結(jié)扎聯(lián)合5/6 腎切除的復(fù)合模型[9-10]。 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,冠脈結(jié)扎多采用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后先行氣管插管,再開胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈,結(jié)扎完后關(guān)閉胸腔,待大鼠恢復(fù)自主呼吸后拔除氣管插管完成造模[11]。 此心梗造模方法耗時(shí)長,氣管插管不當(dāng)可引起喉頭水腫、氣道損傷,增加了感染率,氣管穿孔、出血、分泌物過多則易阻塞氣道,引起窒息等并發(fā)癥,增加造模的死亡率。 5/6 部分腎切除采用腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉,切除一側(cè)腎皮質(zhì)的2/3 或結(jié)扎腎動(dòng)脈的2/3 分支,1 周后再行第2 次手術(shù),同樣方法麻醉,切除另一側(cè)腎[12-13]。 5/6 腎切除需要二次開腹,殘留腎少,手術(shù)創(chuàng)傷大,死亡率高。 盡管上述復(fù)合模型使大鼠在短時(shí)間出現(xiàn)嚴(yán)重的心、腎功能損傷,但對于后期進(jìn)行藥效學(xué)研究,尤其治療周期長的研究,心、腎功能衰竭導(dǎo)致的死亡率會增加,需擴(kuò)大模型樣本量。

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,大鼠冠脈結(jié)扎2 周后即可出現(xiàn)心衰[14],4 周后心衰模型明確建立[7]。 大鼠單側(cè)腎切除術(shù)常用于制備早期腎功能不全模型,腎切除第2 周時(shí)另一側(cè)腎進(jìn)入代償期[15],第4 周出現(xiàn)腎功能損傷[16]。 冠脈結(jié)扎聯(lián)合單側(cè)腎切除術(shù)的復(fù)合模型制備Ⅱ型CRS 的研究發(fā)現(xiàn),2 周內(nèi)分別行冠脈結(jié)扎+ 單側(cè)腎切除術(shù),第6 周Ⅱ型CRS 即可成模[17-18]。因此,在確保心臟、腎功能出現(xiàn)障礙的前提下應(yīng)選擇最短成模時(shí)間,節(jié)約造模成本,縮短實(shí)驗(yàn)周期。

本研究參考了上述成模時(shí)間并對術(shù)式進(jìn)行改良,通過小動(dòng)物麻醉機(jī)下擠心臟法進(jìn)行永久性結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支造成心肌梗死,1 周后行單側(cè)腎(右腎)切除術(shù),第6 周建立Ⅱ型心腎綜合征大鼠動(dòng)物模型。 麻醉機(jī)下擠心臟法所需麻醉時(shí)間短,無需氣管插管,不存在氣道損傷,減少了感染風(fēng)險(xiǎn),降低了死亡率。 單側(cè)腎切除減輕了造模對腎的損傷,避免了二次開腹,減少了麻藥使用及感染風(fēng)險(xiǎn)。 盡管單側(cè)腎切除不能在短時(shí)間內(nèi)引起嚴(yán)重的腎損傷,但更符合Ⅱ型CRS 的發(fā)病特點(diǎn),即慢性心功能障礙導(dǎo)致的慢性腎損傷[15]。

本研究改良的大鼠模型,降低了死亡率,同時(shí),造模成功率也得驗(yàn)證。 心超中EF、FS 主要反映左心室的收縮功能,EF、FS 越低提示心肌收縮力越弱,心衰越嚴(yán)重。 BNP 主要儲存于心室肌內(nèi),心衰時(shí)大量分泌,是評價(jià)心功能紊亂最敏感和特異性最高的指標(biāo)之一,常用于心衰的診斷和治療。 本研究中模型組大鼠EF、FS 較假手術(shù)組明顯降低,BNP 明顯升高,提示大鼠心功能損傷明顯,心衰造模成功。 Scr、BUN、Ccr 和24 h 尿蛋白都是常用的反映腎功能的經(jīng)典指標(biāo),當(dāng)出現(xiàn)腎功能受損時(shí),腎小球?yàn)V過功能下降,使得血液中Scr、BUN 排泄受到影響,造成Scr、BUN 在血液中積累。 Ccr 反映腎小球的濾過功能,判斷腎小球損傷程度,濾過率越低則腎損傷越大。 腎小球損傷使濾過膜通透性增加,尿液中蛋白質(zhì)含量升高,24 h 尿蛋白是反映早期腎損傷的主要指標(biāo)[19]。 與假手術(shù)組相比,模型組大鼠Scr、BUN、24 h 尿蛋白水平明顯升高,Ccr 明顯降低,提示模型組大鼠腎功能降低。 CRS 發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,目前較為公認(rèn)的機(jī)制包括交感神經(jīng)系統(tǒng)過度興奮、RAAS 過度激活、炎性反應(yīng)、氧化應(yīng)激等,最終表現(xiàn)為心肌重構(gòu)和腎纖維化[20-22]。 本研究通過組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn),模型組大鼠心肌細(xì)胞排列紊亂,管壁外及間質(zhì)中炎癥細(xì)胞浸潤,結(jié)締組織增生,心肌膠原纖維明顯增多且排列紊亂。 腎小球結(jié)構(gòu)紊亂伴周圍纖維化,腎小管排列不規(guī)則,間質(zhì)內(nèi)可見炎癥細(xì)胞浸潤、粘液物質(zhì)及膠原纖維沉積。 模型組心臟、腎的天狼星紅陽性染色面積比較假手術(shù)組明顯增加,提示模型組大鼠出現(xiàn)了心肌重構(gòu)及腎纖維化。 上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了本模型制備方法的改良能較好地模擬Ⅱ型CRS 發(fā)病早期的心臟、腎功能損傷和病理改變。

綜上所述,本研究采用在小動(dòng)物麻醉機(jī)下擠心臟法進(jìn)行永久性結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支造成心肌梗死,1 周后行單側(cè)腎(右腎)切除術(shù),成功建立Ⅱ型心腎綜合征大鼠動(dòng)物模型。 此改良模操作簡便、手術(shù)創(chuàng)傷小、死亡率低,能很好地模擬了Ⅱ型心腎綜合征早期的心臟、腎功能損傷和病理改變,為系統(tǒng)深入研究Ⅱ型心腎綜合征的發(fā)病機(jī)制及藥效作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)。