針刺對(duì)偏頭痛大鼠三叉神經(jīng)節(jié)和三叉神經(jīng)脊束尾核A1R/ERK1/2/CGRP通路的影響

林淑芳,王 艦,陳 白,饒 婷,姚娟娟,曹麗萍,江一靜△

(1.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬康復(fù)醫(yī)院,福建 福州 350003;2.福建省康復(fù)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福建 福州 350003)

偏頭痛是一種反復(fù)發(fā)作且高度致殘的慢性神經(jīng)障礙性疾病,每年的患病率達(dá)15%[1-2],是部分心血管疾病的重要危險(xiǎn)因素[3],長期反復(fù)發(fā)作使患者生活質(zhì)量受到嚴(yán)重影響[4]。在偏頭痛的辨證分型中,肝陽上亢證最為常見[5]。針刺在偏頭痛的治療中應(yīng)用廣泛,臨床療效確切[6]。目前已有機(jī)構(gòu)正進(jìn)行針刺治療偏頭痛相關(guān)循證指南的研制,致力于推動(dòng)針刺治療偏頭痛在國內(nèi)外安全、規(guī)范地應(yīng)用和推廣[7]。課題組前期已證實(shí)針刺太沖穴可改善偏頭痛臨床癥狀[8],但機(jī)制不明。在偏頭痛發(fā)生發(fā)展機(jī)制中,以神經(jīng)源性炎性反應(yīng)為主要特征的三叉神經(jīng)血管反射學(xué)說是國內(nèi)外學(xué)者研究探討的焦點(diǎn)[9]。三叉神經(jīng)節(jié)(Trigeminal ganglion,TG)分布著三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)的一級(jí)神經(jīng)元,三叉神經(jīng)脊束尾核(Spinal trigeminal nucleus caudalis,TNC)分布著該系統(tǒng)的二級(jí)神經(jīng)元。降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin gene-related peptide,CGRP)是引起神經(jīng)源性炎癥反應(yīng)的重要血管活性物質(zhì),廣泛表達(dá)于TG和TNC中,是偏頭痛病理生理過程的重要參與者[10]。研究發(fā)現(xiàn),腺苷A1受體(Adenosine A1 receptor, A1R)激活后能抑制偏頭痛大鼠三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)中神經(jīng)源性炎性反應(yīng)及痛覺敏化,顯著降低CGRP表達(dá)[11-12],并且觀察到激活的A1R能通過細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(Extracellular signal regulated kinase 1/2,ERK1/2)進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)[13],阻斷ERK1/2信號(hào)通路疼痛信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),實(shí)現(xiàn)鎮(zhèn)痛作用。因此,本研究以肝陽上亢偏頭痛大鼠為研究對(duì)象,通過觀察大鼠TG、TNC中 A1R、ERK1/2和CGRP表達(dá),探討針刺太沖穴治療偏頭痛的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

66只健康雄性SD大鼠,體質(zhì)量180～220 g,由福建中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供[許可證號(hào)：SYXK(閩)2020-0002],在福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心動(dòng)物房(SPF級(jí))喂養(yǎng),自由攝食、飲水。動(dòng)物房溫度恒定于22 ℃,濕度恒定于50%,光暗周期為12 h。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中以《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》[14]作為處理動(dòng)物的參考,經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意(FJTCM IACUC：2022054),遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)原則。

適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,66只大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組10只、模型組56只,其中50只模型組大鼠順利建模(附子湯灌胃結(jié)合頸肩部皮下注射硝酸甘油建立肝陽上亢偏頭痛模型),將成模的大鼠隨機(jī)分為模型組、太沖組、非穴組、太沖+DPCPX組和太沖+EGF組,每組10只。

1.2 主要儀器和試劑

1.2.1 儀器 華佗牌無菌針灸針(0.25 mm×13 mm,200135,蘇州醫(yī)療用品廠有限公司);恒溫水浴鍋(HWS24,上海一恒科技有限公司);光學(xué)顯微鏡(DM750,德國LEICA公司);蛋白成像系統(tǒng)(ChemiDoc XRS+,美國Bio-Rad伯樂);研磨機(jī)(JXFTPRP-48,上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司);超微量紫外可見分光光度計(jì)(ND-100c,杭州米歐儀器有限公司);高速冷凍離心機(jī)(5810R,德國Eppendorf公司);激光共聚焦顯微鏡(TCS-SP8 SR,德國LEICA公司);熒光定量PCR儀(ABI7500,美國ABI公司);瓊脂糖水平電泳儀(DYCP-31DN,北京六一生物科技有限公司)。

1.2.2 試劑 硝酸甘油注射液(1210901,廣州白云山明興制藥有限公司);8-環(huán)戊基-1,3二丙基黃嘌呤(DPCPX)、表皮生長因子(EGF)(美國Sigma-Aldrich公司);CGRP、A1R、ERK1、ERK2及GAPDH引物(上海博尚生物工程技術(shù)有限公司);Western blot試劑盒(E-IR-R304B,武漢伊萊瑞生物科技股份有限公司);兔抗大鼠CGRP抗體、兔抗大鼠A1R抗體、兔抗大鼠p-A1R抗體、兔抗ERK1/2抗體、辣根酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG抗體、鼠抗p-ERK1/2抗體和GAPDH單克隆抗體(北京樂博生物科技有限公司);逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(R123-01,南京諾唯贊生物科技股份有限公司);總RNA提取試劑盒(RN0101,北京艾德萊生物科技有限公司);QPCR試劑盒(S2024LT,Singabio公司)。

1.3 偏頭痛大鼠模型制備

本研究以附子湯灌胃[15]加注射硝酸甘油方法[16]復(fù)制肝陽上亢型偏頭痛模型。將20 g制附子浸泡30 min,煎煮2次后將藥液混合,濃縮為含生藥0.1 g/mL的附子濃縮液,以20 mL/kg/d的劑量連續(xù)灌胃21 d,當(dāng)大鼠出現(xiàn)眼結(jié)膜顏色變紅,抓尾時(shí)尖叫、驚跳甚至咬人等易激惹表現(xiàn)時(shí)提示肝陽上亢證模型復(fù)制成功;再用0.9% NaCL將硝酸甘油注射液稀釋成濃度為2 mg/mL溶液,以10 mg/kg算出每只SD大鼠所需注射的劑量,用5 mL注射器抽取相對(duì)應(yīng)劑量溶液,在大鼠右肩頸部皮下緩緩注射,1次/d,共5 d;給藥后5 min內(nèi),SD大鼠出現(xiàn)雙耳發(fā)紅,爬籠以及撓頭次數(shù)增加等煩躁不安的癥狀,為偏頭痛模型制備成功[17]。

1.4 干預(yù)方法

造模成功且第1次行為學(xué)觀察后進(jìn)行針刺干預(yù),具體方法如下。

1.4.1 空白對(duì)照組 常規(guī)飼養(yǎng),僅抓取,不予治療。

1.4.2 模型組 常規(guī)飼養(yǎng),僅抓取,不予治療。

1.4.3 太沖組 針刺雙側(cè)太沖穴[18],用0.25 mm×13 mm的一次性無菌針灸針直刺2～3 mm,捻轉(zhuǎn)瀉法1 min,每10 min行針1次,留針30 min。

1.4.4 非穴組 針刺雙側(cè)脅下固定非穴點(diǎn)(雙側(cè)髂嵴直上10 mm處),約30°斜刺2～3 mm,行針手法同太沖組。

1.4.5 太沖+DPCPX組 注射硝酸甘油后隨即腹腔注射DPCPX[19](0.125 mL/100 g,A1R拮抗劑);針刺雙側(cè)太沖穴,操作同太沖組。

1.4.6 太沖+EGF組 注射硝酸甘油后隨即腹腔注射EGF[20](50 μg/Kg,ERK1/2激動(dòng)劑);針刺雙側(cè)太沖穴,操作同太沖組。

1.5 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

1.5.1 行為學(xué) 觀察大鼠耳紅持續(xù)時(shí)間、撓頭和爬籠次數(shù)[21]：記錄給藥后大鼠耳紅癥狀出現(xiàn)及消失的時(shí)間,并計(jì)算整個(gè)耳紅過程的持續(xù)時(shí)間(耳紅持續(xù)時(shí)間=耳紅癥狀消失的時(shí)間-耳紅癥狀出現(xiàn)的時(shí)間);單位時(shí)間內(nèi)撓頭和爬籠次數(shù)：在針刺前1 h、針刺后1 h和針刺后2 h共3個(gè)時(shí)間段內(nèi)(以每1 h作為1個(gè)時(shí)間段),觀察記錄每個(gè)單位時(shí)間段內(nèi)大鼠撓頭(以前肢撓頭作為撓頭行為標(biāo)志,以連續(xù)撓頭達(dá)5次及以上作為撓頭出現(xiàn)的標(biāo)志)和爬籠(以前肢抓籠作為爬籠行為標(biāo)志)的次數(shù),針刺治療期間不記次。

1.5.2 熒光定量PCR法檢測(cè)大鼠TG、TNC中A1R、ERK1、ERK2及CGRP mRNA表達(dá) 行為學(xué)觀察后,腹腔注射0.3%戊巴比妥鈉(10 mL/kg)麻醉,斷頭處死大鼠,迅速分離取出TG和TNC,置冰盒內(nèi)放-80 ℃冰箱暫存。取出TG或TNC,在液氮中研磨后取適量組織,用Trizol法提取總RNA;按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的說明,配置逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系30 μL(42 ℃,孵育2 min),合成cDNA;設(shè)置擴(kuò)增條件(95 ℃預(yù)變性5 min,95 ℃變性10 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,共循環(huán)40次)進(jìn)行q-PCR擴(kuò)增;電泳后用凝膠圖像處理系統(tǒng)采集分析數(shù)據(jù),參考大鼠A1R、ERK1、ERK2及CGRP的mRNA序列,內(nèi)參基因?yàn)橄鄳?yīng)種屬的GAPDH;目標(biāo)基因和內(nèi)參基因均運(yùn)用Primer Premier5.0進(jìn)行設(shè)計(jì),用2-△△Ct計(jì)算各樣品的相對(duì)表達(dá)量,PCR引物詳細(xì)信息見表1。

表1 PCR引物序列

1.5.3 Western blot法檢測(cè)大鼠TG、TNC中A1R、p-A1R、ERK1/2、p-ERK1/2及CGRP蛋白表達(dá) 在-80 ℃冰箱中取出并稱取TG或TNC組織塊,在液氮中研磨后取適量組織加入1 mL蛋白裂解液,以60 Hz,30 s,振動(dòng)3次進(jìn)行粉碎,在4 ℃條件下,12 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心15 min,收集上清液;參照試劑盒測(cè)定蛋白濃度;配膠(現(xiàn)配現(xiàn)用),蛋白電泳順序?yàn)?30V10 min-80 V30 min-120 V40～50 min);轉(zhuǎn)移到PVDF膜,封閉過夜,加一抗(兔抗大鼠CGRP抗體1∶500、兔抗大鼠A1R抗體1∶500、兔抗大鼠p-A1R抗體1∶500、兔抗ERK1/2抗體1∶500、鼠抗p-ERK1/2抗體1∶500及GAPDH單克隆抗體1∶1 000),4 ℃溫度環(huán)境下孵育過夜;第2天清洗PBST3次,每次5 min,再加辣根酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG抗體(1∶1 000)孵育,PBST清洗(5 min×3次)后經(jīng)化學(xué)發(fā)光,顯影后用蛋白成像系統(tǒng)拍照分析,測(cè)定各個(gè)條帶光密度值,以目的條帶光密度值與內(nèi)參GAPDH光密度值的比值來量化A1R、p-A1R、ERK1/2、p-ERK1/2及CGRP mRNA的表達(dá)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠造模后行為學(xué)觀察

空白對(duì)照組不出現(xiàn)耳紅,其余各組均在注射硝酸甘油后3～4 min出現(xiàn)耳紅,持續(xù)3 h左右后消失;與模型組比較,太沖組大鼠耳紅持續(xù)時(shí)間明顯減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與太沖組比較,非穴組、太沖+DPCPX組和太沖+EGF組大鼠耳紅持續(xù)時(shí)間明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠造模后耳紅持續(xù)時(shí)間的比較

空白對(duì)照組在各時(shí)間段內(nèi)僅有少數(shù)幾次撓頭、爬籠。在針刺前1 h,與空白對(duì)照組比較,其余組大鼠撓頭、爬籠次數(shù)均頻繁,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,太沖組、非穴組、太沖+DPCPX組和太沖+EGF組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。針刺后1 h、2 h,與模型組相比較,太沖組大鼠撓頭、爬籠次數(shù)均明顯減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與太沖組比較,非穴組、太沖+DPCPX組和太沖+EGF組撓頭、爬籠次數(shù)均明顯增多,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 各組大鼠針刺前后各時(shí)間段撓頭和爬籠次數(shù)的比較

2.2 各組大鼠TG、TNC中A1R、ERK1、ERK2及CGRP的mRNA表達(dá)水平比較

與空白對(duì)照組比較,模型組大鼠TG、TNC中ERK1、ERK2及CGRP的mRNA表達(dá)均增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),A1R mRNA表達(dá)均減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,太沖組大鼠TG、TNC中ERK1、ERK2及CGRP的mRNA表達(dá)均減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),A1R mRNA表達(dá)均增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與太沖組比較,非穴組、太沖+DPCPX組及太沖+EGF組大鼠TG、TNC中ERK1、ERK2及CGRP的mRNA表達(dá)均增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),A1R mRNA表達(dá)均減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4、5及圖1。

圖1 大鼠RNA瓊脂糖凝膠電泳圖

表4 各組大鼠TG中A1R、ERK1、ERK2及CGRP mRNA相對(duì)表達(dá)量比較

表5 各組大鼠TNC中A1R、ERK1、ERK2及CGRP mRNA相對(duì)表達(dá)量比較

2.3 各組大鼠TG、TNC中A1R、p-A1R、ERK1/2、p-ERK1/2及CGRP蛋白表達(dá)比較

與空白對(duì)照組比較,模型組大鼠TG、TNC中ERK1/2、p-ERK1/2及CGRP蛋白表達(dá)均增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),A1R、p-A1R蛋白表達(dá)均減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,太沖組大鼠TG、TNC中ERK1/2、p-ERK1/2及CGRP蛋白表達(dá)均減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),A1R、p-A1R蛋白表達(dá)均增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與太沖組比較,非穴組、太沖+DPCPX組及太沖+EGF組大鼠TG、TNC中ERK1/2、p-ERK1/2、CGRP蛋白表達(dá)均增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),A1R、p-A1R蛋白表達(dá)均減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表6、7及圖2、3。

圖2 各組大鼠TG中A1R、p-A1R、ERK1/2、p-ERK1/2及CGRP蛋白表達(dá)

圖3 各組大鼠TNC中A1R、p-A1R、ERK1/2、p-ERK1/2及蛋白表達(dá)

表6 各組大鼠TG中A1R、p-A1R、ERK1/2、p-ERK1/2及CGRP蛋白相對(duì)表達(dá)量

表7 各組大鼠TNC中A1R、p-A1R、ERK1/2、p-ERK1/2及CGRP蛋白相對(duì)表達(dá)量

3 討論

在偏頭痛的發(fā)病機(jī)制研究中,三叉神經(jīng)血管學(xué)說受到普遍關(guān)注,該學(xué)說認(rèn)為神經(jīng)源性炎性反應(yīng)是偏頭痛發(fā)病的關(guān)鍵[9,22],TG和TNC是三叉神經(jīng)血管上行疼痛通路中參與神經(jīng)源性反應(yīng)的重要組成部分,二者均可表達(dá)與偏頭痛發(fā)病和慢性化相關(guān)的炎性介質(zhì),如CGRP、ERK、5-HT及PACAP等,TG中參與了偏頭痛的周圍敏化過程,TNC中參與偏頭痛的中樞敏化過程,二者與偏頭痛的發(fā)生、疼痛傳遞及敏化相關(guān)[23]。本研究同時(shí)檢測(cè)這兩個(gè)部位,說明了相同的介質(zhì)在不同部位共同參與偏頭痛過程。偏頭痛屬中醫(yī)“少陽頭痛”范疇,在偏頭痛的辨證分型中,肝陽上亢證最常見[5]。根據(jù)人體經(jīng)絡(luò)中肝膽表里絡(luò)屬的關(guān)系及“病在上者下取之”的治療原則,對(duì)于肝陽上亢型偏頭痛,多責(zé)之于肝,臨床上取肝經(jīng)的輸穴太沖清泄肝膽,疏通少陽經(jīng)氣[5,24]。研究報(bào)道[25],太沖作為偏頭痛最常用的遠(yuǎn)端取穴的原因之一在于針刺太沖迅速顯著地調(diào)節(jié)腦血流量。有學(xué)者通過復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)太沖是針灸治療偏頭痛的核心節(jié)點(diǎn)腧穴之一[26]。前期臨床觀察證實(shí)針刺雙側(cè)太沖可明顯改善偏頭痛臨床癥狀,提高生活質(zhì)量[8]。針刺治療無毒副作用、創(chuàng)傷小且取穴精簡。因此,本研究以神經(jīng)源性炎性反應(yīng)為切入點(diǎn),探討針刺雙側(cè)太沖治療偏頭痛的可能機(jī)制。

CGRP的釋放是引起偏頭痛神經(jīng)源性炎性反應(yīng)產(chǎn)生疼痛的重要環(huán)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn),偏頭痛大鼠TG和TNC中CGRP釋放明顯增多[27];近期研究也證實(shí)偏頭痛大鼠TNC中的CGRP mRNA水平明顯升高,針刺治療后CGRP mRNA表達(dá)降低,偏頭痛緩解[28],本研究結(jié)果再次證實(shí)偏頭痛大鼠TG和TNC中CGRP mRNA及蛋白高表達(dá),而針刺雙側(cè)太沖后,TG和TNC中CGRP mRNA及蛋白均明顯下調(diào),說明針刺雙側(cè)太沖通過降低CGRP的釋放緩解偏頭痛。

ERK1/2在ERK亞族中表達(dá)最多,廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,在疼痛信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究中備受關(guān)注[29]。ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與偏頭痛的發(fā)生,偏頭痛模型大鼠TG中ERK1/2表達(dá)增加[30]。本研究發(fā)現(xiàn)偏頭痛大鼠TG和TNC中ERK1、ERK2 mRNA及ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)升高,說明偏頭痛的發(fā)生與ERK1/2、磷酸化ERK1/2 轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)升高有關(guān);針刺雙側(cè)太沖后,TG和TNC中ERK1、ERK2 mRNA及ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)降低,說明針刺雙側(cè)太沖可下調(diào)TG和TNC中ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中疼痛信號(hào)的傳導(dǎo)緩解偏頭痛。研究發(fā)現(xiàn)外周血中ERK1/2表達(dá)量與CGRP含量呈正相關(guān)[31];下調(diào)ERK1/2基因和的表達(dá)和磷酸化可抑制CGRP等疼痛相關(guān)因子的釋放[32]。本研究顯示,與太沖組比較,注射ERK1/2激動(dòng)劑組大鼠的TG和TNC中CGRP轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)升高,說明ERK1/2激動(dòng)劑EGF具有拮抗針刺雙側(cè)太沖的抗偏頭痛作用,針刺太沖可通過下調(diào)ERK1/2的信號(hào)傳導(dǎo),抑制CGRP釋放。

A1R是腺苷受體的重要一員,在神經(jīng)系統(tǒng)中分布最多。A1R在炎性反應(yīng)及痛覺信息的傳遞和調(diào)控過程中發(fā)揮重要作用。偏頭痛模型中TG和TNC的A1R表達(dá)量低于正常大鼠,并且A1R的表達(dá)與CGRP水平呈負(fù)相關(guān)[33-34];本研究顯示偏頭痛大鼠TG和TNC中A1R mRNA及A1R、p-A1R蛋白低表達(dá),針刺雙側(cè)太沖可上調(diào)TG和TNC中A1R mRNA及A1R、p-A1R蛋白。激活的A1R可降低三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)的激活程度,減少CGRP的釋放,抑制神經(jīng)源性炎性反應(yīng)和痛覺敏化[35],且激活的A1R能抑制ERK1/2磷酸化,通過ERK1/2信號(hào)通路阻斷疼痛信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[36]。本研究發(fā)現(xiàn),與太沖組比較,運(yùn)用A1R拮抗劑DPCPX后,偏頭痛大鼠TG和TNC中CGRP、ERK1/2及p-ERK1/2的基因和蛋白均偏高,A1R拮抗劑DPCPX可抑制針刺雙側(cè)太沖對(duì)偏頭痛的治療作用,可見激活的A1R可通過抑制ERK1/2磷酸化,即阻斷ERK1/2對(duì)疼痛信號(hào)的傳遞而減少CGRP釋放,緩解偏頭痛。

本研究發(fā)現(xiàn)非穴組對(duì)TG和TNC中A1R、ERK和CGRP的mRNA和蛋白的調(diào)控結(jié)果更接近太沖組,雖然兩組間的療效有顯著差異,但也說明針刺大鼠雙側(cè)脅下非穴對(duì)偏頭痛也有一定的療效?？紤]一方面可能與非穴點(diǎn)未避開脅下的足少陽膽經(jīng)經(jīng)線有關(guān),本研究僅對(duì)非穴縱坐標(biāo)進(jìn)行定位,位于雙側(cè)髂嵴直上10 mm處,有學(xué)者認(rèn)為還應(yīng)補(bǔ)充橫坐標(biāo)后正中線旁開20 mm[37];另一方面,有學(xué)者[38]認(rèn)為體表非穴也有一定的治療效應(yīng),針尖刺激體表的任何一個(gè)位點(diǎn)都可能產(chǎn)生多重疊加的治療效應(yīng)。

綜上所述,針刺雙側(cè)太沖通過激活A(yù)1R,抑制ERK1/2磷酸化,阻斷ERK1/2信號(hào)通路疼痛信號(hào)向下轉(zhuǎn)導(dǎo),進(jìn)而抑制CGRP的釋放,達(dá)到治療偏頭痛的目的;調(diào)控A1R/ERK1/2/CGRP信號(hào)通路是針刺雙側(cè)太沖治療肝陽上亢型偏頭痛的可能機(jī)制之一。