肖海君,梅小偉
[禮藍(上海)動物保健有限公司,上海 201499]
豬增生性腸病(porcine proliferative enteropathy,PPE)又稱回腸炎,是由胞內勞森菌(Lawsoniaintracellularis,LI)引起的一種腸道傳染病。豬回腸炎在全球范圍內分布廣泛,且感染率普遍較高,這奠定了其對豬群危害的普遍性[1];豬感染后,胞內勞森菌主要破壞小腸上皮細胞的完整性,影響腸道對營養(yǎng)物質的消化和吸收;豬從感染到康復需要經(jīng)歷較長的時間,造成發(fā)病豬的消化吸收功能受影響的時間較長。另外,急性回腸炎會造成感染豬出現(xiàn)便血和急性猝死,病死率可達50%左右[2]。Scholz 等[3]研究表明,發(fā)病豬的平均日增重降低了9%~35%,飼料報酬降低了6%~20%,經(jīng)常使相同日齡的保育-育肥豬表現(xiàn)出明顯的體重差異。養(yǎng)豬業(yè)應重視回腸炎給豬場帶來的嚴重危害與經(jīng)濟損失[4]。截止到目前,針對豬回腸炎,生產(chǎn)現(xiàn)場主要還是使用敏感藥物或接種疫苗的方式來進行治療和預防。回腸炎造成的經(jīng)濟損失因豬場的飼養(yǎng)規(guī)模以及所采用的生產(chǎn)模式和生物安全等因素的不同而差異巨大。根據(jù)豬的發(fā)病年齡及疾病進程,采用科學的方案組合可有效控制豬群的發(fā)病,及時止損。對特定豬群進行胞內勞森菌感染的診斷與評估,以及及時執(zhí)行藥物或疫苗干預,對降低豬回腸炎造成的經(jīng)濟損失有著重要作用。為了高效控制胞內勞森菌的感染,我們亟須全面調查豬回腸炎的流行病學,探索不同生產(chǎn)模式豬場的感染規(guī)律。
本調查擬對來自全國主要養(yǎng)豬地區(qū)的母豬與保育-育肥豬的糞便樣本進行檢測、分析,理清不同生產(chǎn)階段豬群與不同飼養(yǎng)模式下豬感染胞內勞森菌的狀況,了解發(fā)病豬的臨床癥狀(正常糞便、水泥樣糞便、血便)與排菌量的關系,評估豬在各個生產(chǎn)階段胞內勞森菌的感染壓,為科學、高效防控回腸炎提供依據(jù)。
1.1.1 樣本來源
2022 年9 月至2023 年7 月,我們共收集來自全國26 個省、市、自治區(qū)169 家豬場的1 667 份糞便樣本。按照糞便的形態(tài)對樣本進行分類,其中水泥樣糞便1 099 份,正常糞便452 份,血便67 份,水樣糞便39 份和其他類型糞便10 份(圖1)。豬場規(guī)模主要集中在母豬存欄1 000~5 000 頭,或保育-育肥豬存欄0~5 000 頭。
1.1.2 試劑
胞內勞森菌DNA 提取試劑盒(Stool DNA Kit)為OMEGA 公司生產(chǎn),熒光定量PCR 檢測試劑盒(Thermo VetMax ?Lawsoniaintracellulariskit)由賽默飛公司生產(chǎn)。
DNA 提取及熒光定量PCR 操作步驟分別按照試劑盒說明書進行。
使用針對胞內勞森菌的熒光定量PCR 試劑盒對來自全國169 家豬場的1 667 份糞便樣本進行檢測,其中陽性糞便樣本為1 433 份,陽性率達86.0%;在提供糞便樣本的169 家豬場中,糞便中檢測胞內勞森菌的豬場有163家,豬場陽性率為96.4%;按月份統(tǒng)計了糞便樣本的胞內勞森菌陽性率,發(fā)現(xiàn)陽性率61.5%~100.0%,其中1~7 月份每月的陽性率均超過了80.0%(表1)。
表2 統(tǒng)計了全國7 大地區(qū)豬糞便中胞內勞森菌檢出情況。表2 顯示,華中地區(qū)的感染率稍低,為80.5%;華南、華東地區(qū)的陽性率分別為82.2%和87.2%;其他4 個區(qū)域的陽性率都超過了90.0%,鑒于這幾個區(qū)域的總體樣本量偏少,這一結果可能不具有代表性。
不同規(guī)模的豬群胞內勞森菌檢出結果見圖2。由圖2 可知,存欄量為0~5 000 頭的保育-育肥豬的商品豬場,糞便樣本胞內勞森菌陽性率為83.1%;存欄量為5 000~10 000 頭及10 000 頭以上的商品豬場,陽性率分別為89.5%和91.7%;另外,三種不同存欄規(guī)模的母豬場,陽性率變化不大,分別為78.8%,80.0%和88.2%(圖2)。
我們的調查結果顯示,保育豬、育肥豬和母豬的糞便胞內勞森菌的陽性率都超過了80.0% (圖3);后備母豬、妊娠母豬和哺乳母豬的糞便陽性率也普遍偏高,其中后備母豬的糞便CT 值低于妊娠母豬的;各年齡段保育豬和育肥豬的糞便都能檢出,結合臨床表現(xiàn)及檢測結果,豬在13 周齡和19 周齡前后對回腸炎的感染壓較高。
在1 667 份糞便樣本中,水泥樣糞便居多,為1 099 份,其次是正常糞便452 份,我們也收集了67 份血便樣本??傮w來看,從正常糞便中檢出胞內勞森菌的概率小于水泥樣糞便及血便的概率,其中水泥樣糞便和正常糞便的陽性率分別為97.8%和55.5%(圖4)。從胞內勞森菌的CT 值來看,血便的CT 值最低,平均為24.68,其次是水樣糞便,CT 值為28.41,而水泥樣糞便的CT 值則為34.13,正常糞便的CT 值高于以上三種糞便的,為40.99(圖5)。不同類型的糞便對應的CT 值區(qū)間范圍也存在一定的差別,在正常糞便中,CT 值大于35 的比例達到了97%,其中超過40 的為52%;而在水樣糞便中,它們的CT 值都小于35;另外,在水泥樣糞便中,CT 值介于30~35 的比例最高,達到57%,CT 值介于35~40 的比例則是34%;而血便中,93%樣本的CT 值都低于30(圖6)。
(1) 全國26 個省、市、自治區(qū)、直轄市169 家豬場的1 667 份糞便樣本進行胞內勞森菌的檢測,樣本陽性率達到了86.0%,豬場陽性率為96.4%,與國外主要養(yǎng)豬區(qū)域豬場陽性率基本相符,說明回腸炎已經(jīng)成為影響豬群健康的重要疾病之一,需引起養(yǎng)豬業(yè)的高度重視。
(2)根據(jù)糞便樣本的檢測結果,不同季節(jié)、不同區(qū)域、不同規(guī)模的豬場胞內勞森菌檢出率均達到80.0%以上;可見氣候、地理環(huán)境與豬場規(guī)模對豬感染回腸炎的影響較小。
(3)母豬在各個生產(chǎn)階段的陽性率也普遍偏高,結合臨床表現(xiàn)及檢測結果,保育-育肥豬群在13 周齡和19 周齡前后對回腸炎的感染壓較高。
(4)后備母豬的糞便樣本胞內勞森菌的CT值比妊娠母豬的低;不同類型的糞便對應的CT 值也存在差異,血便的CT 值最低,正常糞便的CT 值最高。
此次調查總共收集了來自169 家豬場的1 667 份糞便樣本,基本覆蓋了我國主要養(yǎng)豬生產(chǎn)地區(qū)不同規(guī)模不同飼養(yǎng)模式的豬場,具有一定的代表性。檢測結果顯示,糞便樣本的胞內勞森菌陽性率為86.0%,豬場的陽性率為96.4%。曲向陽等[5]在2009 年12 月至2011 年4 月對華東地區(qū)的21 家規(guī)模化豬場進行回腸炎流行病學調查,豬場陽性率達到了100%,樣本陽性率為59.81%,樣本陽性率低于本調查的結果。楊小燕等[6]也對閩西地區(qū)的回腸炎感染情況進行了調查,豬場陽性率也達到了100%。可見胞內勞森菌在全國的流行依然非常普遍,感染率相當高。
本次對來自保育豬、育肥豬和母豬的糞便樣本進行檢測,均存在胞內勞森菌的感染,結合臨床表現(xiàn)及檢測結果,保育-育肥豬群在13 周齡和19 周齡前后的回腸炎感染壓較高。楊小燕等[6]的報告顯示,在6~8 周齡、9~13 周齡、14~20 周齡這幾個生產(chǎn)階段的陽性率超過了40%,這3 個生產(chǎn)階段在回腸炎發(fā)病率上無明顯差異,這也給回腸炎的科學防控提出了更大挑戰(zhàn)。仔豬斷奶后,由于母源抗體水平的下降,加上斷奶、轉群、環(huán)境轉變等的應激,其體內胞內勞森菌開始增殖,從而表現(xiàn)出感染率隨年齡的增大而上升。我們也從產(chǎn)房發(fā)生腹瀉的10 日齡仔豬的糞便中檢測到了胞內勞森菌,同時還發(fā)現(xiàn)存在豬流行性腹瀉病毒的感染情況。胞內勞森菌主要影響保育期、育肥期的豬,對產(chǎn)房哺乳期仔豬的影響有多大還需要進一步研究。
本調查主要針對保育-育肥豬群在臨床上出現(xiàn)了腹瀉問題,故以采集水泥樣糞便進行檢測為主,水泥樣糞便的胞內勞森菌陽性率達到了97.8%,而正常糞便的陽性率為55.5%,樣本的總體陽性率高于其他研究人員的報道。從正常糞便中也能檢測到胞內勞森菌,表明存在亞臨床感染,這值得養(yǎng)豬生產(chǎn)者的警惕。我們在臨床上也遇到了大量的拉血便的問題,以母豬群為主,特別是后備母豬,血便的胞內勞森菌檢出率達到了100%,且CT 值明顯低于其他類型的糞便。我們檢測了其他引起血便的病原,均未測到混合感染的情況,同時使用藥物及時得到了控制。針對后備母豬及經(jīng)產(chǎn)母豬出現(xiàn)的急性回腸炎引起的血便問題,提前保健預防顯得尤為重要。
不同糞便類型對應的CT 值區(qū)間范圍也存在一定的差別,在保育-育肥階段最容易出現(xiàn)水泥樣糞便,57%的樣本的CT 值介于30~35,另有34%的樣本的CT 值介于35~40;血便樣本的CT 值幾乎都低于30。有研究報道,與沒有增生性病變的豬(中值排菌量:<3.30log10 個細菌/g 糞便) 相比,有增生性病變的豬的胞內勞森菌排菌量中值極顯著高(中值排菌量:5.92log10 個細菌/g糞便)(P<0.001)[7]。在本調查中,我們并未對回腸炎臨床表現(xiàn)嚴重的豬進行解剖以觀察其腸道增生情況,但其糞便胞內勞森菌的CT值相對較低,說明排菌量大,在一定程度上反映了其感染的嚴重程度,也可從側面通過CT值初步判斷增生的嚴重程度。