變應(yīng)性鼻炎患者TNF-α、Tim-1及TLR4變化與病情程度的相關(guān)性研究

李增沛,李靖

(1.南陽市第一人民醫(yī)院 耳鼻咽喉科,河南 南陽 473000;2.河南省人民醫(yī)院 耳鼻咽喉科,河南 鄭州 450000)

變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis,AR)作為臨床常見慢性變態(tài)反應(yīng)性疾病,是易感機(jī)體接觸致敏變應(yīng)原后出現(xiàn)的變應(yīng)原感應(yīng)性增高的應(yīng)激反應(yīng),以鼻黏膜變態(tài)反應(yīng)性疾病為主要表現(xiàn)[1]。研究顯示,隨社會生活方式改變及環(huán)境污染加重,AR臨床發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢,且多數(shù)患者出現(xiàn)鼻塞、頭暈、頭疼等臨床癥狀,此外其反復(fù)發(fā)作或遷延致使病情難以痊愈,影響其身心健康及生活質(zhì)量[2-3]。目前學(xué)界主要根據(jù)病情變化評估AR病情程度,發(fā)病初期缺乏客觀的識別生物指標(biāo)。因此,發(fā)病初期尋求有效的生物標(biāo)志物評估AR病情程度,對患者綜合治療及對預(yù)后改善尤為重要[4]。有研究顯示,AR或與炎癥因子及免疫因子活化等多種細(xì)胞因子共同釋放與刺激相關(guān)[5]。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)可通過作用于粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞對機(jī)體免疫產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用,在炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用,并對呼吸系統(tǒng)疾病產(chǎn)生一定促進(jìn)作用[6]。T細(xì)胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-1(T cell, immunoglobulin domain and mucin domain protein-1,Tim-1)作為AR、哮喘等特應(yīng)性疾病易感因子,可表達(dá)于分化后的Th2細(xì)胞上,激活Th2型免疫應(yīng)答,據(jù)此推測Tim-1在AR發(fā)病機(jī)理中的可能作用[7]。Toll樣受體4(toll-like receptor 4,TLR4)作為機(jī)體內(nèi)重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路因子,參與影響細(xì)胞的炎性反應(yīng)、氧化應(yīng)激等病理生理過程[8]。目前臨床中有關(guān)TNF-α、Tim-1、TLR4在AR中的作用機(jī)制研究較少,為明確血清TNF-α、Tim-1、TLR4在AR中的變化及與病情程度的相關(guān)性,本研究隨機(jī)選取77例AR患者進(jìn)行研究?，F(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

隨機(jī)選取南陽市第一人民醫(yī)院2021年10月—2022年10月接收的77例AR患者為研究組,其中男36例,女41例;平均年齡(44.00±22.10)歲。按照《變應(yīng)性鼻炎及其對哮喘的影響》[9]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),分為輕度15例,中度28例,重度34例。同期選取100例健康者為對照組,其中男54例,女46例;年齡20～67歲,平均年齡(43.50±19.98)歲。兩組臨床資料相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。研究嚴(yán)格遵循倫理原則,并經(jīng)我院倫理會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn):符合《變應(yīng)性鼻炎診斷和治療指南》[10]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn);存在鼻塞、流涕、咳嗽及伴嗅覺消失等癥狀;經(jīng)血清IgE檢查確診;經(jīng)變應(yīng)原檢測對塵螨過敏;鼻分泌物鏡檢結(jié)果顯示嗜酸性粒細(xì)胞占比>5%;對照組無過敏史及哮喘病史;簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn):肝腎功能障礙;患局部或全身感染性疾病;伴血液系統(tǒng)、自身免疫性疾病;伴鼻息肉、鼻中隔嚴(yán)重偏曲或其他過敏性疾病;患其他鼻咽部疾病;惡性腫瘤;妊娠或哺乳期女性;短期內(nèi)接受激素藥物治療;存在鼻部手術(shù)史;過敏體質(zhì)者。

1.2 指標(biāo)觀察

1.2.1 生化指標(biāo) 于入組次日采集兩組受檢者空腹外周靜脈血5 mL,常溫靜置,高速離心,靜置,分離上清,-20 ℃冰箱保存待檢。血清TNF-α、Tim-1、TLR4水平檢測均采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法,分別采用TNF-α檢測試劑盒(上海喬羽生物科技有限公司)、Tim-1檢測試劑盒(北京奧維亞生物技術(shù)有限公司)、TLR4檢測試劑盒(杭州聯(lián)科生物科技有限公司)進(jìn)行。設(shè)酶標(biāo)板為空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,各加入50 μL稀釋液及樣品稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣品,混勻,覆膜,孵育2 h。棄孔內(nèi)液體,甩干,清洗反應(yīng)板。加入100 μL TNF-α、Tim-1、TLR4檢測液,覆膜,孵育1 h,棄孔內(nèi)液體,甩干、洗滌反應(yīng)板,加入100 μL底物溶液,遮光顯色0.5 h,加入終止液,輕彈酶標(biāo)板終止反應(yīng)。酶標(biāo)儀(型號iMark,Bio-RAD公司)450 nm處測定吸光值,由高資歷檢驗醫(yī)生嚴(yán)格遵循試劑說明書進(jìn)行。

1.2.2 指標(biāo)評估 采用AR評分量表(score for allergic rhinitis,SFAR)從鼻癢、鼻塞、噴嚏、流涕4方面評估患者病情嚴(yán)重程度,每項0～3分,總分為4項之和,SFAR分值與病情程度呈正比。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

使用SPSS 20.0軟件分析。應(yīng)用Kolmogorov-Smirnov檢驗數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布,符合正態(tài)分布的計量資料采用 描述,兩組間比較采用獨立樣本t檢驗,多組間行F值數(shù)據(jù)計算,以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組TNF-α、Tim-1、TLR4水平比較

如表1所示,研究組血清TNF-α、Tim-1、TLR4水平高于對照組,組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表1 兩組TNF-α、Tim-1、TLR4水平比較

2.2 不同病情程度TNF-α、Tim-1、TLR4水平及SFAR評分比較

如表2所示,不同病情程度AR患者血清TNF-α、Tim-1、TLR4水平及SFAR評分整體比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。重度患者血清TNF-α、Tim-1、TLR4水平及SFAR評分顯著高于輕度、中度,組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表2 不同病情程度TNF-α、Tim-1、TLR4水平及SFAR評分比較

2.3 TNF-α、Tim-1、TLR4與SFAR評分的關(guān)系

如表3、圖1所示,以TNF-α、Tim-1、TLR4進(jìn)行相關(guān)性研究,結(jié)果顯示TNF-α、Tim-1、TLR4與SFAR評分呈正相關(guān)。

圖1 TNF-α、Tim-1、TLR4與SFAR評分的關(guān)系

表3 TNF-α、Tim-1、TLR4與SFAR評分的關(guān)系

2.4 AR患者疾病嚴(yán)重程度多因素Logistic回歸分析

如表4所示,以SFAR評分為因變量,將TNF-α、Tim-1、TLR4作為自變量,賦值升高設(shè)為1,正常設(shè)為0,納入二分類多因素Logistic回歸模型分析,結(jié)果顯示,TNF-α、Tim-1、TLR4是影響AR病情程度的危險因素(P<0.05)。

表4 AR患者疾病嚴(yán)重程度多因素Logistic回歸分析

3 討論

AR作為耳鼻咽喉科常見過敏性病變,受遺傳因素及環(huán)境因素影響,隨工業(yè)化程度發(fā)展,其發(fā)病率呈逐年遞增趨勢。AR發(fā)病后主要表現(xiàn)為鼻塞、鼻癢、流涕等;此外還可致鼻竇炎、氣管炎、咽炎、哮喘等耳鼻咽喉科疾病,且病情受變應(yīng)原刺激可反復(fù)發(fā)作,病情遷延,患者身心健康及生活質(zhì)量受到嚴(yán)重影響,是臨床研究的重點及熱點問題,因此尋找AR早期識別指標(biāo)及影響因素,對改善患者癥狀及預(yù)后尤為重要[11-12]。

學(xué)界認(rèn)為AR發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,有研究顯示,AR的發(fā)生發(fā)展過程與患者體內(nèi)多種血液指標(biāo)異常波動相關(guān),其中炎性介質(zhì)及免疫調(diào)節(jié)因子指標(biāo)異常在其中發(fā)揮關(guān)鍵作用[13]。TNF-α作為巨噬細(xì)胞分泌生成的系統(tǒng)性炎癥細(xì)胞因子,與B淋巴細(xì)胞增殖和成熟關(guān)系密切,TNF-α通過作用于B淋巴細(xì)胞上相關(guān)受體激活、促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖分化,產(chǎn)生大量具有抗體分泌功能的效應(yīng)性B淋巴細(xì)胞,參與炎癥反應(yīng)及體液免疫過程[14-15]。研究顯示,TNF-α還可增加肥大細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞釋放,對AR發(fā)病及炎性介質(zhì)釋放具有促進(jìn)作用[16]。本文研究結(jié)果顯示,TNF-α在AR患者血清中呈現(xiàn)異常波動,且其水平變化與AR病情程度變化相關(guān),并隨疾病加重而升高,表明監(jiān)測AR患者TNF-α變化可對疾病進(jìn)展作出判斷。分析其原因或與變應(yīng)原作用致使患者機(jī)體TNF-α水平升高,其通過作用于B淋巴細(xì)胞激活信號通路,活化B淋巴細(xì)胞,致使大量變應(yīng)原特異性IgE抗體產(chǎn)生,導(dǎo)致鼻黏膜組織遭受免疫細(xì)胞浸潤,產(chǎn)生相應(yīng)AR癥狀。

Tim-1基因家族主要表達(dá)于Th2細(xì)胞,可調(diào)節(jié)Th2細(xì)胞因子表達(dá)及增強(qiáng)其分化、生成,提示Tim-1可通過刺激Th2細(xì)胞參與促炎癥反應(yīng),介導(dǎo)變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)病過程[17]。研究顯示,Th1/Th2免疫反應(yīng)失衡是導(dǎo)致AR的免疫學(xué)基礎(chǔ);同時研究顯示,AR患兒血清Tim-1呈異常波動,并顯著高于健康兒童,推測Tim-1在AR發(fā)病機(jī)制中的可能作用[18]。通過對比兩組研究結(jié)果,Tim-1在AR血清中呈異常高表達(dá),且其水平變化隨疾病發(fā)展而升高,并與SFAR評分呈正相關(guān)性。

TLRs通過結(jié)合相應(yīng)病原相關(guān)分子模式,激活信號傳導(dǎo)途徑,誘導(dǎo)免疫效應(yīng)分子表達(dá)[19]。研究顯示,抗體相關(guān)信號通路激活致組胺、炎癥因子及免疫活性因子等多因子遞質(zhì)傳遞,加重呼吸道黏膜分泌,抑制TLR4信號通路對機(jī)體炎癥蔓延抑制,減輕炎性遞質(zhì)產(chǎn)生,降低黏膜損害等具有積極作用,由此認(rèn)為TLR4是免疫反應(yīng)中固有的關(guān)鍵組分[20-21]。通過對比兩組研究結(jié)果,AR患者血清中TLR4呈現(xiàn)異常波動,且其水平變化與AR病情程度變化相關(guān),并隨疾病加重而升高,表明監(jiān)測AR患者TLR4變化可對疾病進(jìn)展作出判斷。本研究通過多因素Logistic回歸模型分析顯示TNF-α、Tim-1、TLR4是影響AR病情的獨立危險因素,臨床可通過測定上述指標(biāo)水平為AR病情程度評估提供信息支持。

綜上所述,隨病情嚴(yán)重程度發(fā)展AR患者機(jī)體內(nèi)血清TNF-α、Tim-1、TLR4水平升高,血清TNF-α、Tim-1、TLR4變化與SFAR評分呈正相關(guān)性,同時TNF-α、Tim-1、TLR4水平是影響AR嚴(yán)重程度的影響因素,為臨床判斷AR病情程度提供信息支持,利于基層醫(yī)院推廣。故TNF-α、Tim-1、TLR4在AR病情程度判斷中具有潛在廣闊的應(yīng)用前景,有望發(fā)展為AR病情判斷的重要輔助指標(biāo),為臨床治療方案確定提供更為準(zhǔn)確的量化參考。