復(fù)方胃痛膠囊靶向磷酸化AKT1抑制前列腺癌生長(zhǎng)

余 佳, 宋 玉, 萬(wàn)小青, 程 莎, 徐應(yīng)江, 駱 衡*

(1)貴州省天然產(chǎn)物研究中心, 貴陽(yáng) 550014;2)貴州醫(yī)科大學(xué)省部共建藥用植物與功效國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 貴陽(yáng) 550014;3)貴州萬(wàn)勝藥業(yè)有限責(zé)任公司, 貴州遵義 564401)

前列腺癌(prostate cancer, PCa)目前是全世界范圍內(nèi)男性發(fā)病率第二高的惡性腫瘤,高居男性癌癥死因的第五位,每年新發(fā)病例約為140萬(wàn)例,并造成約37.5萬(wàn)名患者因其死亡[1]。目前,對(duì)于低、中危前列腺癌患者,可以通過(guò)根治性前列腺癌切除術(shù)、放射治療、化療等方式達(dá)到痊愈的目的,而對(duì)于高危前列腺癌患者,通過(guò)雄性激素剝奪療法(androgen deprivation therapy,ADT)抑制雄性激素受體(androgen receptor,AR)信號(hào)是其主要治療方法,然而,約40%～60%的前列腺癌病人接受一線治療后仍會(huì)復(fù)發(fā),發(fā)展成為更具侵略性和殺傷力的去勢(shì)抵抗的前列腺癌(CRPC)[2-3]。大多數(shù)CRPC仍然依賴AR,故已開發(fā)出有效的AR通路抑制劑(ARPI),如阿比特龍、恩扎魯胺、阿帕魯胺和達(dá)魯胺[4-5]。然而,不良反應(yīng)和耐藥性使治療過(guò)程不盡人意,因此迫切需要一種高效低毒的新靶向藥物。

鑒于中藥民族藥治療癌癥的例子屢見(jiàn)不鮮,我們對(duì)部分本土中藥制劑進(jìn)行了探索。復(fù)方胃痛膠囊主要成分為五香血藤、大果木姜子、九月生、徐長(zhǎng)卿、吳茱萸、拳參和金果欖,用于寒凝氣滯血瘀所致的胃脘刺痛、噯氣吞酸、食欲不振、淺表性胃炎以及胃、十二指腸潰瘍,是治療胃病的經(jīng)典老藥,筆者在前期研究中發(fā)現(xiàn)該藥具有抗腫瘤活性,發(fā)現(xiàn)其可以進(jìn)行藥品二次開發(fā)、拓寬老藥新用途。同時(shí),復(fù)方胃痛膠囊是已上市的苗藥,能直接應(yīng)用于人體而不再需要進(jìn)行臨床安全評(píng)估,該藥物來(lái)源廣泛,成本低廉,具有巨大市場(chǎng)潛力,應(yīng)用前景樂(lè)觀。為此,本文對(duì)其抗腫瘤活性進(jìn)行系統(tǒng)研究,旨在豐富抗腫瘤藥品資源庫(kù),也為新藥開發(fā)提供思路和理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

(1)細(xì)胞及小鼠:前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3由貴州省天然產(chǎn)物研究中心保存,Balb/c null小鼠(斯貝福實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,北京)。

(2)儀器:臺(tái)式離心機(jī)(BECKMAN COULTER,美國(guó));流式細(xì)胞儀(BD,美國(guó));二氧化碳培養(yǎng)箱(Thermofisher,美國(guó));倒置顯微鏡(Leica,德國(guó));酶標(biāo)儀(基因有限公司,香港);立式壓力蒸汽滅菌器(申安醫(yī)療器械,上海)。

(3)藥品及試劑:復(fù)方胃痛膠囊(貴州萬(wàn)勝藥業(yè)有限責(zé)任公司)、DMEM培養(yǎng)基及胰酶(Gibico,美國(guó)),胎牛血清(FBS)(四季青,浙江),ROS、四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)(Solarbio),二甲基亞砜(DMSO)及青鏈霉素混合液(Solarbio),細(xì)胞周期、FITC-AnnexinV細(xì)胞凋亡試劑盒(BD,美國(guó)),其余試劑均為分析純。

1.2 質(zhì)譜分析法(mass spectrometry, MS)

化學(xué)成分檢測(cè)由貴州省天然產(chǎn)物研究中心-分析測(cè)試中心完成。復(fù)方胃痛膠囊由甲醇溶液溶解。

1.3 MTT檢測(cè)

前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3按常規(guī)方法復(fù)蘇培養(yǎng)。分別取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,以5×103個(gè)/mL密度接種96孔培養(yǎng)板中,12 h時(shí)加藥。復(fù)方胃痛膠囊由DMSO溶解為100 mg/mL的母液,經(jīng)超聲過(guò)濾后稀釋方可使用。檢測(cè)不同濃度(160 μg/mL、80 μg/mL、40 μg/mL)復(fù)方胃痛膠囊對(duì)癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用,37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h,加MTT溶液20 μL(避光操作),CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h,1 500 r/min離心8 min,棄上清液,每孔加150 μL DMSO,放入搖床搖晃10 min,用酶標(biāo)儀波長(zhǎng)490 nm下測(cè)A值,計(jì)算抑制率。

1.4 細(xì)胞調(diào)亡分析

利用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行了測(cè)定。不同濃度復(fù)方胃痛膠囊處理后的癌細(xì)胞用胰蛋白酶消化,用PBS溶液清洗,在1 000 r/min離心5 min后用PBS重新懸浮,按照細(xì)胞凋亡試劑盒步驟進(jìn)行檢測(cè),通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡率。

1.5 細(xì)胞周期檢測(cè)

將處理過(guò)的細(xì)胞用PBS溶液清洗2次,并被轉(zhuǎn)移到微管上在2 000 r/min離心3 min。加入冰冷乙醇來(lái)避免細(xì)胞結(jié)塊,并置于4 ℃處理1 h,1500 r/min離心5 min,再用含有1 μg/mL 核糖核酸酶的PBS溶液將細(xì)胞顆粒重新懸浮,37 ℃培30 min后加入到最終濃度為20 μg/mL的碘化丙啶溶液中,用FACSArray的流式細(xì)胞儀分析。檢測(cè)復(fù)方胃痛膠囊的濃度為40 μg/mL、80 μg/mL時(shí)對(duì)癌細(xì)胞周期的影響,DMSO為對(duì)照組。

1.6 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

按照前面方式培養(yǎng)PC3細(xì)胞,收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,PBS混懸成1.0 ×108個(gè)/mL 細(xì)胞懸液,移至無(wú)菌凍存管帶入動(dòng)物房備用。200 μL細(xì)胞懸液于皮下緩慢注射入裸鼠體內(nèi)。灌胃100 mg/kg濃度的復(fù)方胃痛膠囊,隔天注射1次,共7次,稱體重并記錄體積變化。14天后處死小鼠,取腫瘤及內(nèi)臟組織進(jìn)行稱重。多聚甲醛固定組織,H&E染色進(jìn)行病理學(xué)分析。

1.7 Western 印跡分析

收集藥物處理的細(xì)胞于1.5 mL EP管中,預(yù)冷PBS洗滌5 min,2次,1 000 g/min離心5 min,去上清。加入蛋白質(zhì)裂解液冰上裂解30 min,加入SDS上樣緩沖液(4∶1)105 ℃變性蛋白質(zhì)。上樣后經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白質(zhì),將目的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)到PVDF膜上,TBST清洗3次,5% BSA封閉2 h,一抗孵育4 ℃過(guò)夜。次日去一抗,TBST清洗3次,二抗孵育2 h,TBST清洗3次,拍照并進(jìn)行計(jì)算。

1.8 生物信息學(xué)及分子對(duì)接

據(jù)LS-MS檢測(cè)獲得復(fù)方胃痛膠囊成分,在TCMSP網(wǎng)站上獲取相關(guān)成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)式,在Swisstargetprediction網(wǎng)站上進(jìn)行結(jié)合靶點(diǎn)預(yù)測(cè)。通過(guò)GO、KEGG進(jìn)行成分及通路富集分析。利用DisGeNET、OMIM和GeneCards疾病數(shù)據(jù)庫(kù)搜索癌癥相關(guān)基因,通過(guò)Venny、PPI網(wǎng)絡(luò)互作縮小范圍,分析其可能的作用靶點(diǎn)。通過(guò)GEPIA網(wǎng)站,分析靶基因在癌癥患者中的差異表達(dá)及生存預(yù)后。在PDB網(wǎng)站下載靶蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),利用PYMOL、AutodockTools、DS軟件進(jìn)行分子對(duì)接及可視化分析。

1.9 細(xì)胞熱穩(wěn)定性檢測(cè)(cellular thermal shift assay,CETSA)

將細(xì)胞鋪板至大皿以貼壁,后加不同濃度(50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL、400 μg/mL、600 μg/mL)藥物處理細(xì)胞2 h。分別收集細(xì)胞,經(jīng)金屬浴52 ℃處理3 min,室溫放置5 min,再經(jīng)液氮-37 ℃水浴循環(huán)3次,接著通過(guò)12000 g/5 min離心去掉未結(jié)合蛋白質(zhì)。再按照Western印跡所述方法,檢測(cè)復(fù)方胃痛膠囊有效抗癌成分與AKT1及p-AKT蛋白質(zhì)結(jié)合的穩(wěn)定性情況。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)進(jìn)行3次,所得數(shù)據(jù)均以平均±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)表示。采用Graghpad進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,差異的顯著性是通過(guò)one-way ANOVA及t檢驗(yàn)來(lái)確定的,P<值為0.05為具有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方胃痛膠囊含幾十種抗癌活性化學(xué)成分

采用質(zhì)譜分析法鑒定了復(fù)方胃痛膠囊的主要成分,其主要由五香血藤、大果木姜子、九月生、徐長(zhǎng)卿、吳茱萸、拳參和金果欖等多味中藥材組成,Fig.1是LC-MS的總流離子圖,與這些化合物的鑒定相關(guān)結(jié)果見(jiàn)Table 1。結(jié)果正如Table 1和Fig.1所示,這些化合物被鑒定為右旋奎寧酸、檸檬酸、沒(méi)食子酸、原兒茶酸、兒茶素、綠原酸、原兒茶醛、1-咖啡酰奎寧酸、木蘭花堿、對(duì)羥基肉桂酸、 7-羥基香豆素、黨參炔苷、蘆丁、異槲皮苷、去亞甲基小檗堿、β-蛻皮激素、花椒油素、樟腦、壬二酸、地奧司明、藥根堿、去氫吳茱萸堿、吲哚醇、黃藤素、小檗堿、咖啡酸乙酯、古倫賓、丹皮酚、吳茱萸苦素、檸檬苦素、香豆素、馬兜鈴內(nèi)酰胺、青花椒堿、吳茱萸堿、馬兜鈴酸、吳茱萸次堿、棕櫚酸甲酯、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子酚、α-亞麻酸、苜蓿酸、五味子乙素、甘草次酸、光甘草內(nèi)酯、三七素。

Fig.1 Diagram of MS total flow ion of compound stomachache capsule The CSC is dissolved by methanol solution

2.2 復(fù)方胃痛膠囊體外抗前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)

在PC3細(xì)胞中對(duì)復(fù)方胃痛膠囊的體外活性進(jìn)行了初步檢測(cè),通過(guò)濃度梯度分析復(fù)方胃痛膠囊的最佳作用濃度,與對(duì)照(抑制率5.12%)相比,在40 μg/mL、80 μg/mL、160 μg/mL濃度的復(fù)方胃痛膠囊對(duì)PC3細(xì)胞抑制率顯著增加,分別為28.1%(P<0.05)、32.8%(P<0.05)、45.47%(P<0.01)(Fig.2A)。此外,復(fù)方胃痛膠囊促進(jìn)細(xì)胞死亡,并上調(diào)細(xì)胞ROS水平(Fig.2B)。進(jìn)一步的流式細(xì)胞結(jié)果顯示,與對(duì)照組(凋亡率1.93%)相比,40 μg/mL、80 μg/mL、160 μg/mL的復(fù)方胃痛膠囊對(duì)PC3細(xì)胞凋亡率顯著增加,分別為6.62%(P<0.05)、25.78%(P<0.01)、37%(P<0.01)。細(xì)胞周期結(jié)果顯示,與對(duì)照組(G2/M期15.6%)相比,40 μg/mL、80 μg/mL的復(fù)方胃痛膠囊將PC3細(xì)胞顯著阻滯在G2/M期,分別為44%(P<0.01)、53.5%(P<0.01),并具有一定的濃度梯度依賴性(Fig.2C-F)。以上結(jié)果顯示,復(fù)方胃痛膠囊具有顯著的體外抗前列腺癌的作用。

Fig.2 CSC inhibited prostate cancer cell growth in vitro (A) The inhibitory activity was increased by different concentrations CSC on PC3 cells; (B) Bright field photo and ROS staining of PC3 cells were increased after drug treatment; (C) The apoptosis of PC3 treated with different concentrations of CSC wasincreased by flow cytometry and (D) the bar graph of cell apoptosis was shown.*P<0.05,**P<0.01; (E) PC3 cellswere arrested in G2/M phase aftertreated with different concentrations of CSC by flow cytometry cell cycle analysis and (F)the bar graph of the cell population in G0/G1, S, and G2/M phaseswas shown. *:G0/G1 phase,#:S phase,@:G2/M phase. *P<0.05,**P<0.01.All the experiments were performed in triplicate

2.3 復(fù)方胃痛膠囊體內(nèi)抗前列腺癌腫瘤生長(zhǎng)

在深入探討復(fù)方胃痛膠囊抗前列腺癌的物質(zhì)作用基礎(chǔ)前,本文進(jìn)行了體內(nèi)抗癌活性評(píng)價(jià)。模型建立前1周灌胃100 mg/kg復(fù)方胃痛膠囊100 μL(母液由DMSO溶解后超聲過(guò)濾)生理鹽水溶液,培養(yǎng)前列腺癌PC3細(xì)胞并注射到裸鼠皮下構(gòu)建前列腺癌皮下動(dòng)物模型,持續(xù)灌胃復(fù)方胃痛膠囊溶液2周,每2 d記錄體重及腫瘤體積。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,復(fù)方胃痛膠囊體內(nèi)顯著抑制前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)(Fig.3A,B,D),并顯著上調(diào)炎性細(xì)胞(Fig.3C)。此外,對(duì)小鼠體重、心、脾、肺、腎等幾乎未見(jiàn)影響,但似乎對(duì)肝有一定的毒性作用(Fig.3E,F)。以上結(jié)果提示,復(fù)方胃痛膠囊具有良好的體內(nèi)抗前列腺癌活性。

2.4 復(fù)方胃痛膠囊作用核心靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)

為了進(jìn)一步分析復(fù)方胃痛膠囊在前列腺癌中的相關(guān)作用機(jī)制,本文將前期LS-MS成分分析結(jié)果中的53種化學(xué)物質(zhì)在TCMSP中搜索其化學(xué)結(jié)構(gòu)式,在SwisstargetPrediction進(jìn)行靶點(diǎn)結(jié)合預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn)53種化學(xué)物質(zhì)共計(jì)有4 942個(gè)可結(jié)合靶點(diǎn)。結(jié)果正如Fig.4所示,通過(guò)對(duì)復(fù)方胃痛膠囊的LS/MS成分分析結(jié)果,靶點(diǎn)預(yù)測(cè)結(jié)果,及主要中藥材組分(五香血藤、大果木姜子、九月生、徐長(zhǎng)卿、吳茱萸、拳參、金果欖)共同構(gòu)建了藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病網(wǎng)絡(luò)圖。此外,還對(duì)這些預(yù)測(cè)靶點(diǎn)進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,GO分析結(jié)果顯示,復(fù)方胃痛膠囊對(duì)細(xì)胞凋亡、增殖、炎癥響應(yīng)及蛋白質(zhì)磷酸化等生物學(xué)過(guò)程,細(xì)胞膜等細(xì)胞組分,ATP能力代謝、蛋白激酶活性等分子功能產(chǎn)生影響(Fig.5A)。此外,KEGG信號(hào)通路富集分析結(jié)果顯示,復(fù)方胃痛膠囊的這些成分可能主要影響多種癌癥,例如前列腺癌、肺癌和胰腺癌,并通過(guò)TNF、PI3K/AKT、HIF等信號(hào)通路發(fā)揮作用(Fig.5B)。進(jìn)一步將復(fù)方胃痛膠囊成分靶點(diǎn)與DisGeNET、OMIM和GeneCards三種癌癥疾病數(shù)據(jù)庫(kù)中的前列腺癌相關(guān)基因進(jìn)行Venny分析,發(fā)現(xiàn)8個(gè)相關(guān)基因(Fig.5C),通過(guò)PPI網(wǎng)絡(luò)相互作用分析發(fā)現(xiàn),AKT1(AKT serine/threonine kinase 1)、CCND1(Cyclin D1)、ERS1(estrogen receptor 1)、EGFR(epidermal growth factor receptor)等靶點(diǎn)發(fā)揮核心作用(Fig.5D)。

Table 1 Composition analysis of compound stomachache capsules by MS

Fig.5 Target analysis of CSC in prostate cancer The Gene Ontology analysis (A)and KEGG enrichment pathway analysis (B) of targets in CSC; (C) Venny analysis of CSC component targets, the prostate cancer target genes in DisGeNET, OMIM and GeneCards disease databases; (D) PPI network interaction analysis of 8 targets in prostate cancer by STRING

2.5 蛋白激酶B1與前列腺癌癥患者預(yù)后呈正相關(guān)

進(jìn)一步對(duì)8個(gè)靶基因及對(duì)應(yīng)結(jié)合的化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行分析,通過(guò)在前列腺癌患者(number:492)及正常組織(number:152)中的表達(dá)及生存相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)EGFR(epidermal growth factor receptor)、ESR1(estrogen receptor 1)、CCND1(cyclin D1)表達(dá)下調(diào),而AURKA、FOLH1(folate hydrolase 1)、AKT1(AKT serine/threonine kinase 1)表達(dá)下調(diào)(Fig.6),EGFR(epidermal growth factor receptor)、ESR1(estrogen receptor 1)、CCND1(Cyclin D1)、ERBB2(Erb-b2 receptor tyrosine kinase 2)與前列腺癌癥患者生存及預(yù)后呈負(fù)相關(guān),而AURKA(aurora kinase A)、FOLH1(folate hydrolase 1)、AKT1(AKT serine/threonine kinase 1)、PIK3CA(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha)與前列腺癌癥患者生存及預(yù)后呈正相關(guān)(Fig.6)。

Fig.6 Analysis of the differential expression of CSC targets in the tissues of prostate cancer The differential expression analysis were performed by GEPIA 2 website (http://gepia2.cancer-pku.cn/#index). PRAD: Prostate adenocarcinoma. T:tumor, N:normal

Fig.7 Survival correlation analysis of the targets of CSC in prostate cancer patients The survival correlation analysis was performed by GEPIA 2 website (http://gepia2.cancer-pku.cn/#index)

2.6 復(fù)方胃痛膠囊靶向蛋白激酶B1發(fā)揮抗前列腺癌作用

對(duì)復(fù)方胃痛膠囊抗前列腺癌的活性成分及靶點(diǎn)進(jìn)行進(jìn)一步分析。通過(guò)靶基因逆推其結(jié)合的化學(xué)物質(zhì)主要包括木蘭花堿[(+)-magnoflorine]、對(duì)羥基肉桂酸(p-coumaric acid)、7-羥基香豆素(7-hydroxycoumarin)、α-亞麻酸(α-linolenic acid)、壬二酸(azelaic acid)、棕櫚酸甲酯(methyl hexadecanoate),對(duì)其依次進(jìn)行分子對(duì)接獲得其結(jié)合能,結(jié)果正如Table 2所示,大部分化學(xué)物質(zhì)與靶點(diǎn)的結(jié)合能均在-6以下,其中AKT1的結(jié)合活性最好。AutodockTools軟件分子對(duì)接的結(jié)果顯示,AKT1與木蘭花堿[(+)-magnoflorine]在Gln79、Thr211、Ser205位點(diǎn)存在碳?xì)浣Y(jié)合健,同時(shí)與7-羥基香豆素(7-hydroxycoumarin)在Ile290、The211位點(diǎn)存在常規(guī)氫鍵(Fig.8A,B)。細(xì)胞熱力學(xué)結(jié)果顯示,復(fù)方胃痛膠囊活性成分能與p-AKT (Ser473)結(jié)合(Fig.8C,D)。此外,免疫印跡結(jié)果證實(shí),復(fù)方胃痛膠囊能顯著抑制p-AKT (Ser473)水平(Fig.8E)。以上結(jié)果提示,復(fù)方胃痛膠囊是通過(guò)多個(gè)成分及多個(gè)靶點(diǎn)發(fā)揮抗前列腺癌的作用,而磷酸化的AKT1是其中非常突出的抗癌靶點(diǎn)之一。

Fig.8 The active compounds of CSC binded with AKT1 (A-B) Molecular docking were performed by AutodockTools, and molecular structure was download in TCMSP.The AKT1 protein structure (PDB: 3o96) was download in RCSB PDB; (C) The cellular thermal shift assay was used to test the CSC with p-AKT (Ser473) and (D)its statistical results showed the p-AKT (Ser473) binded with CSC. (E)The p-AKT (Ser473) level in PC3 under CSC.All the experiments were performed in triplicate.*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

3 討論

中醫(yī)藥天然產(chǎn)物療效優(yōu)良、毒副作用小,成為研發(fā)高效低毒抗癌藥物的新方向。本文通過(guò)體外細(xì)胞研究了復(fù)方胃痛膠囊的抗前列腺癌活性,并發(fā)現(xiàn)了該藥具有良好的體內(nèi)外抗腫瘤效果;體外進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),復(fù)方胃痛膠囊對(duì)PC3細(xì)胞具有上調(diào)ROS水平、促進(jìn)凋亡及G2/M期阻滯作用(Fig.2),體內(nèi)腫瘤H&E染色結(jié)果顯示,復(fù)方胃痛膠囊灌胃的腫瘤組織炎性細(xì)胞數(shù)目顯著增加,但具有一定肝毒副作用(Fig.3)。本文的研究結(jié)果表明,復(fù)方胃痛膠囊能作為抗前列腺癌的潛在藥物,但使用仍需考慮其肝毒性作用。

復(fù)方胃痛膠囊是主治胃病的經(jīng)典老藥,主要成分為五香血藤,大果木姜子,九月生,徐長(zhǎng)卿,吳茱萸,拳參和金果欖,用于寒凝氣滯血瘀所致的胃脘刺痛、噯氣吞酸、淺表性胃炎等常見(jiàn)胃部疾病。本文的研究結(jié)果(Table 1)中,復(fù)方胃痛膠囊主要包含的右旋奎寧酸[54]、檸檬酸[55]、沒(méi)食子酸[56]、原兒茶酸[57]、兒茶素[58]、綠原酸[59]和去亞甲基小檗堿[60]等37種化合物均有抗癌相關(guān)報(bào)道。其中,小檗堿[61]、黃藤素[62]、丹皮酚[63]、吳茱萸堿[64]、香豆素[65]等多種活性成分被報(bào)道具有抗前列腺癌活性。此外,靶點(diǎn)預(yù)測(cè)、生物信息學(xué)分析及分子對(duì)接預(yù)測(cè)到的6種抗前列腺癌活性成分(Tabe 2),經(jīng)查閱發(fā)現(xiàn),這六種活性成分例如木蘭花堿[66]、對(duì)羥基肉桂酸[67]、壬二酸[68]、棕櫚酸甲酯[69]、α-亞麻酸[70]和7-羥基香豆素[71],均已被報(bào)道具明顯抗癌作用,其中的α-亞麻酸[72]、7-羥基香豆素[73]、對(duì)羥基肉桂酸[74]則被報(bào)道具有抗前列腺癌的作用。本文的研究結(jié)果闡明了復(fù)方胃痛可能的作用物質(zhì)基礎(chǔ),其是一個(gè)含有多個(gè)活性成分的抗前列腺癌中藥制劑。

研究顯示,除了AR外,MAPK/PI3K/Akt通路是治療前列腺癌的主要靶通路之一[75]。在前列腺癌中AKT1被顯著激活、PIK3CA發(fā)生了突變[75],而沉默AKT1會(huì)增強(qiáng)前列腺癌細(xì)胞對(duì)饑餓的抵抗力,并通過(guò)前列腺癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化抑制饑餓誘導(dǎo)的肺轉(zhuǎn)移[76],因此,靶向該通路成為抗前列腺癌的研究熱點(diǎn)之一,但靶向AKT1的中藥復(fù)方研究較少。本文的研究結(jié)果中,AKT1是復(fù)方胃痛膠囊抗前列腺癌的主要靶點(diǎn)之一(Table 1,Fig.8)。本文的研究結(jié)果提供了一種靶向AKT1等治療前列腺癌的中藥制劑治療策略。

Table 2 Molecular docking results between active components of CSC and the target protein