• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    蛹蟲草茯茶的加工工藝及其代謝產(chǎn)物特征分析

    2024-01-03 12:05:50曹時(shí)玲鄔培鴻高悅?cè)A
    關(guān)鍵詞:茯茶蟲草代謝物

    夏 飛, 曹時(shí)玲, 鄔培鴻, 高悅?cè)A, 成 欣

    (陜西科技大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院, 陜西 西安 710021)

    0 引言

    茯茶是一種后發(fā)酵茶,可以補(bǔ)充人體維生素、礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分,具有減肥、助消化、降脂、調(diào)節(jié)腸道菌群[1,2]等多種功能,被茶學(xué)界認(rèn)定為21世紀(jì)健康飲料.在Eurotium cristatum(冠突散囊菌,俗稱“金花菌”)作用下,黑毛茶中大分子物質(zhì)轉(zhuǎn)化為小分子物質(zhì),形成茯茶特有醇厚滋味.因此冠突散囊菌的數(shù)量往往是判斷茯茶品質(zhì)的關(guān)鍵指標(biāo)之一.自古以來,茯茶深受奶肉食品為主的西北、邊疆乃至中亞各民族喜愛.近年來,人們對(duì)自身健康關(guān)注度不斷提高,茯茶因其健康功效受到了廣大消費(fèi)者的青睞.目前,傳統(tǒng)的茯茶種類相對(duì)單一,茯茶的加工工藝主要以經(jīng)驗(yàn)為主,不利于茯茶產(chǎn)品多元化以及茯茶產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展,亟待開發(fā)新的茯茶品類.現(xiàn)階段,茯茶新品類的開發(fā)主要是將黑毛茶與其他藥食同源物質(zhì)復(fù)配[3,4]或采用傳統(tǒng)茯茶加工工藝對(duì)其他藥食同源的植物資源加工[5,6]等方面.

    蛹蟲草是一種與冬蟲夏草同屬的食藥用真菌,主產(chǎn)于云南、吉林、河北、內(nèi)蒙古等地區(qū)[7,8],具有調(diào)節(jié)免疫[9]、抗腫瘤[10]、抗菌、抗炎[11]及抗氧化[12]等多種功效.蛹蟲草中核苷類化合物、蟲草酸及多種氨基酸等[11,13]是其發(fā)揮藥用功能的物質(zhì)基礎(chǔ).蛹蟲草與黑毛茶復(fù)配,有望得到兼具免疫調(diào)節(jié)和降血脂、降血糖的復(fù)合功能性蛹蟲草茯茶,以豐富茯茶的功能,提升茯茶的飲用價(jià)值.然而,已有研究證實(shí),茯茶加工過程中,原料的配比及加工關(guān)鍵步驟會(huì)影響茯茶的品質(zhì)及其代謝產(chǎn)物組成特征[14-16].而關(guān)于蛹蟲草茯茶制作工藝的研究鮮少報(bào)道,其加工關(guān)鍵工藝步驟仍需進(jìn)一步研究.與傳統(tǒng)茯茶相比,蛹蟲草茯茶中特有的代謝產(chǎn)物,具有哪些特征還尚待闡明.通常,茯茶的品質(zhì)主要通過冠突散囊菌的數(shù)量以及代謝物來表征.茯茶加工過程中,汽蒸環(huán)節(jié)往往是影響茯茶中微生物的關(guān)鍵因素,物料配比決定了茯茶中物質(zhì)的組成及含量.

    為明確影響蛹蟲草茯茶品質(zhì)的關(guān)鍵加工工藝及其代謝產(chǎn)物特征,本研究針對(duì)原料配比和加工過程中汽蒸時(shí)間對(duì)蛹蟲草茯茶品質(zhì)的影響展開關(guān)鍵工藝步驟的探索實(shí)驗(yàn).同時(shí),利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry,LC-MS)對(duì)蛹蟲草茯茶中代謝產(chǎn)物特征進(jìn)行解析,揭示蛹蟲草茯茶特有的代謝產(chǎn)物種類組成.本研究進(jìn)一步促進(jìn)茯茶產(chǎn)品的多元化,并為深入開發(fā)蛹蟲草茯茶的功能提供理論物質(zhì)基礎(chǔ).

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    市售三四級(jí)黑毛茶,蛹蟲草(產(chǎn)地吉林).

    主要試劑:甲醇、乙腈、異丙醇和甲酸均為色譜純.碳酸鈉、福林酚試劑、濃硫酸、苯酚、考馬斯亮藍(lán)G-250、蛋白胨、葡萄糖、瓊脂等均為分析純.

    1.2 主要儀器及設(shè)備

    LRH-400-GS智能型人工氣候培養(yǎng)箱(廣東省醫(yī)療器械廠);SP-756PC紫外可見分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司);Wonbio-96c多樣品冷凍研磨儀(上海萬柏生物科技有限公司);JXDC-20氮?dú)獯祾邇x(海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司);Vanquish Horizon system UHPLC液相色譜系統(tǒng)(美國(guó)賽默飛世爾科技公司);ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱(美國(guó)沃特世公司);Q-Exactive HF-X質(zhì)譜儀(美國(guó)賽默飛世爾科技公司).

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 汽蒸時(shí)間對(duì)蛹蟲草茯茶的影響

    稱取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%的蛹蟲草及黑毛茶共500 g,蛹蟲草切成茶葉大小,混合均勻.用高壓滅菌鍋分別汽蒸5 min、10 min、15 min、20 min、25 min,汽蒸溫度為100 ℃,汽蒸后渥堆4小時(shí).渥堆結(jié)束后,用蒸鍋汽蒸20 s,之后筑茶磚、標(biāo)記,放入人工氣候培養(yǎng)箱內(nèi).茶磚間距5 cm,設(shè)定溫度為28 ℃,濕度78%,發(fā)花14天后取出備用.

    1.3.2 原料配比對(duì)蛹蟲草茯茶的影響

    將蛹蟲草分別按質(zhì)量分?jǐn)?shù)0%(FT)、2%(C-1)、4%(C-2)、6%(C-3)以及8%(C-4)與黑毛茶復(fù)配至500 g,按照1.3.1所述制備成品茶磚.

    1.3.3 蛹蟲草茯茶內(nèi)含成分含量測(cè)定

    蛹蟲草茯茶樣品中冠突散囊菌數(shù)量測(cè)定參考前人工作中所使用的方法[17].茶多酚含量測(cè)定參考《GB/T 8313-2008茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測(cè)方法》.茶多糖含量采用苯酚-硫酸法測(cè)定[18].蛋白質(zhì)含量采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定[19].茶葉中干物質(zhì)含量測(cè)定參考《GB/T 8303-2013 茶 磨碎試樣的制備及其干物質(zhì)含量測(cè)定》.

    1.3.4 蛹蟲草茯茶感官評(píng)審

    參照GB/T 23776-2018《茶葉感官審評(píng)方法》對(duì)蛹蟲草茯茶進(jìn)行感官評(píng)審.

    1.3.5 蛹蟲草茯茶代謝物特征分析

    精確稱取50 ± 5 mg蛹蟲草茯茶樣品(CFT)和茯茶樣品(FT)至2 mL離心管中,加入一顆直徑6 mm的研磨珠.向離心管中加入400 μL 80%甲醇水,使用研磨儀研磨6 min(-10 ℃,50 Hz),低溫超聲提取30 min(5 ℃,40 KHz).將樣品于-20 ℃靜置30 min.在4 ℃下13 000 rpm離心15 min,移取上清液待測(cè).

    LC-MS檢測(cè)分析色譜條件:色譜柱為ACQUITY UPLC HSS T3(100 mm×2.1 mm i.d.,1.8 μm,Waters,Milford,USA);流動(dòng)相A為95%水+5%乙腈(含0.1%甲酸),流動(dòng)相B為47.5%乙腈+47.5%異丙醇+5%水(含0.1%甲酸).進(jìn)樣量為3 μL,柱溫為40 ℃.質(zhì)譜條件:樣品經(jīng)電噴霧電離,分別采用正、負(fù)離子掃描模式采集質(zhì)譜信號(hào).噴霧電壓(正模式)為3.5 kV,噴霧電壓(負(fù)模式)為-3.5 kV,S-Lens電壓為50 kV,鞘氣50 arb,輔助氣13 arb,加熱溫度為425 ℃,毛細(xì)管溫度為325 ℃,質(zhì)譜全掃模式下,儀器分辨率設(shè)置為60 000,掃描范圍為70~1 050 m/z.

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    將代謝組原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入代謝組學(xué)處理軟件ProgenesisQI(Waters Corporation,Milford,USA)進(jìn)行基線過濾、峰識(shí)別、積分、保留時(shí)間校正、峰對(duì)齊等操作,最終得到含保留時(shí)間、質(zhì)荷比和峰強(qiáng)度等信息的數(shù)據(jù)矩陣.之后進(jìn)行特征峰搜庫(kù)鑒定,將MS和MS/MS質(zhì)譜信息與代謝數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.hmdb.ca/)進(jìn)行匹配,MS質(zhì)量誤差設(shè)置為小于10 ppm,同時(shí)根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜匹配得分鑒定代謝物.對(duì)鑒定后的矩陣文件進(jìn)行過濾、補(bǔ)值、歸一化、對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)化等數(shù)據(jù)預(yù)處理過程.

    根據(jù)代謝物在不同樣本間的表達(dá)情況,對(duì)預(yù)處理后的矩陣文件進(jìn)行PCA主成分分析.進(jìn)而采用t檢驗(yàn)、OPLS-DA分析及倍數(shù)變化值(fold change)篩選差異代謝物(VIP>2,p<0.05).之后根據(jù)OPLS-DA模型,選擇VIP值前30的代謝物作為主要差異代謝物,以完全連鎖的方法對(duì)這30種關(guān)鍵差異代謝物進(jìn)行聚類,并對(duì)其含量值進(jìn)行歐式距離矩陣(Euclidean distance matrix)計(jì)算,繪制聚類熱圖.最后,通過KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.kegg.jp/kegg/pathway.html)注釋差異代謝物參與的主要通路.

    數(shù)據(jù)以“mean ± sd”表示.數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2010和SPSS 20.0軟件的Ducan′s多重比較法進(jìn)行差異性分析,并采用Origin 2022繪圖.

    2 結(jié)果與討論

    2.1 蛹蟲草茯茶制備關(guān)鍵工藝

    2.1.1 汽蒸時(shí)間對(duì)冠突散囊菌數(shù)量的影響

    影響茯茶品質(zhì)形成的主要因素包括濕熱作用和微生物發(fā)酵作用,而汽蒸會(huì)影響茶葉原料中微生物的生存率.因此本研究首先關(guān)注汽蒸時(shí)間對(duì)蛹蟲草茯茶中冠突散囊菌數(shù)量的影響.汽蒸處理10 min的蛹蟲草茯茶樣品中,冠突散囊菌的數(shù)量達(dá)到1.4×105CFU/g,顯著高于其他汽蒸時(shí)間組.汽蒸處理5 min的蛹蟲草茯茶樣品中冠突散囊菌數(shù)量為1.2×105CFU/g.而當(dāng)汽蒸時(shí)間為15 min時(shí),冠突散囊菌數(shù)量最低,僅為6.7×104CFU/g.當(dāng)汽蒸時(shí)間為20 min及25 min時(shí),茯磚茶中冠突散囊菌數(shù)量明顯下降,這可能是由于汽蒸時(shí)間過長(zhǎng),增大了茶胚含水量[20],導(dǎo)致茯茶其他霉菌的快速生長(zhǎng).根據(jù)以上結(jié)果,最終選擇蛹蟲草茯茶的最佳汽蒸時(shí)間為10 min.

    2.1.2 原料配比對(duì)蛹蟲草茯茶的影響

    將蛹蟲草與黑毛茶按不同比例混合拼配后,汽蒸10 min制備蛹蟲草茯茶,以確定原料配比對(duì)蛹蟲草茯茶品質(zhì)的影響.蛹蟲草質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%(C-1)和4%(C-2)時(shí),蛹蟲草茯茶中茶多酚含量略有增加,然而并不具有顯著性.而6%(C-3)和8%(C-4)的蛹蟲草配比顯著降低了蛹蟲草茯茶中茶多酚的含量(p<0.05),尤其是C-4組中茶多酚含量最少,為47.84 ± 2.33 mg/g,顯著低于FT組(如圖1所示).表明蛹蟲草的添加能夠降低茶多酚含量,有利于改善茯茶的苦澀味.茶多糖的含量隨著蛹蟲草添加量的增多而逐漸增加,其中,C-4組的茶多糖含量最高,達(dá)到174.11 ± 2.70 mg/g(如圖1所示).然而,C-4組的茶多糖含量仍顯著低于FT組,表明在茯茶中添加蛹蟲草會(huì)降低茶多糖的含量,這可能是由于成品茶中蛋白質(zhì)類物質(zhì)含量的顯著增加.隨著蛹蟲草比例的增加,蛹蟲草茯茶中蛋白質(zhì)的含量顯著增高.C-4組蛹蟲草茯茶的蛋白質(zhì)含量達(dá)到233.89 ± 4.30 mg/g,較FT組增加了70.83 mg(如圖1所示).蛋白質(zhì)類物質(zhì)能夠提高茯茶的鮮爽程度,表明蛹蟲草的添加可以提升成品茶的鮮爽口感[5,6].成品茶中干物質(zhì)含量在C-1組中最高,為87.49 ± 0.06%,然而與C-2、C-3組中干物質(zhì)含量相比并沒有顯著性差異(如圖1所示).

    圖1 不同原料配比的蛹蟲草茯茶內(nèi)含成分含量

    2.1.3 感官評(píng)審

    不同原料配比的蛹蟲草茯茶感官評(píng)審結(jié)果表明,隨著蛹蟲草添加量的增多,蛹蟲草茯茶的蟲草香逐漸濃郁,而湯色也會(huì)逐漸變成橙紅色,口感更醇和,且回感甘甜無澀味.其中以C-3組及C-4組色香味俱全,香氣濃、湯色紅、滋味佳(如圖2及表1所示).綜合不同原料配比蛹蟲草茯茶關(guān)鍵內(nèi)含物含量情況及感官評(píng)審結(jié)果,確定8%(C-4)的蛹蟲草比例為最佳的蛹蟲草茯茶配比.

    表1 蛹蟲草茯茶的感官評(píng)審結(jié)果

    圖2 蛹蟲草茯茶的茶湯評(píng)審

    2.2 蛹蟲草茯茶(CFT)與茯茶(FT)的代謝物差異

    2.2.1 主成分分析(PCA)

    由PCA分析結(jié)果可知,正離子模式下,主成分1和主成分2的貢獻(xiàn)和為59.28%(如圖3(a)所示).負(fù)離子模式下,主成分1和主成分2的貢獻(xiàn)和為62.73%(如圖3(b)所示),該分析結(jié)果能較好的說明蛹蟲草茯茶代謝物組成特征.

    圖3 CFT和FT組各樣本的PCA分析圖

    PCA可以從總體上反應(yīng)各組樣本之間的總體差異和組內(nèi)樣本之間的變異度大小[21].蛹蟲草茯茶與茯茶樣本在正、負(fù)離子模式下均表現(xiàn)出明顯的分離趨勢(shì),蛹蟲草茯茶的代謝產(chǎn)物與茯茶的代謝產(chǎn)物差異較大[22],因此相較于傳統(tǒng)茯茶,蛹蟲草茯茶的代謝產(chǎn)物具有一定的獨(dú)特特征.

    2.2.2 蛹蟲草茯茶代謝產(chǎn)物組成分析

    利用差異火山圖分析蛹蟲草茯茶與茯茶的差異性標(biāo)志代謝物,使用VIP>2.0,p<0.05為篩選標(biāo)準(zhǔn).紅色點(diǎn)表示顯著上調(diào)的代謝物,藍(lán)色點(diǎn)表示顯著下調(diào)的代謝物,灰色點(diǎn)代表變化不顯著的代謝物.與茯茶相比,蛹蟲草茯茶有119種代謝物顯著發(fā)生變化,其中72種代謝產(chǎn)物相對(duì)含量顯著增加,47種代謝產(chǎn)物相對(duì)含量顯著下降(如圖4所示).

    圖4 CFT與FT組間差異代謝物火山圖

    通過文獻(xiàn)調(diào)研,蛹蟲草茯茶的差異代謝物主要可分為氨基酸及其衍生物、脂質(zhì)、生物堿、黃酮類、香豆素類、多酚、糖醇類、萜類等[21,23-25](如表2所示).其中,氨基酸及其衍生物是數(shù)量最多的差異代謝物,占總數(shù)19.33%.而核苷、核苷酸及其類似物、生物堿及其衍生物、香豆素類、萜類以及黃酮類化合物數(shù)量極少,占比均不足5%.除核苷酸類、香豆素類、萜類及黃酮類,蛹蟲草茯茶中其他類代謝產(chǎn)物均以上調(diào)為主,其中,氨基酸類代謝物上調(diào)數(shù)量明顯高于下調(diào)數(shù)量.因此,蛹蟲草茯茶中氨基酸類物質(zhì)含量高于傳統(tǒng)茯茶.

    表2 CFT與FT的差異代謝物種類及變化情況

    2.2.3 蛹蟲草茯茶與茯茶主要差異代謝成分分析

    依據(jù)VIP>2,選取蛹蟲草茯茶和茯茶之間差異代謝產(chǎn)物的前30種進(jìn)行分析.與茯茶相比,蛹蟲草茯茶中有22種代謝物含量顯著增加(p<0.05),同時(shí)有8種代謝物顯著降低(p<0.05)(如圖5所示).共有14種代謝產(chǎn)物在蛹蟲草茯茶和茯茶之間差異非常明顯(VIP>4.0,p<0.05),其中顯著上調(diào)的代謝物包括Bursopoietin(法氏囊生成素,VIP=6.35),Azaleatin 3-arabinoside(杜鵑素3-阿拉伯糖苷,VIP=6.10),Toremifene(托瑞米芬,VIP=4.88),Deoxycholic acid(脫氧膽酸,VIP=4.54),1-Aminoglucose(1-氨基葡萄糖,VIP=4.46),Guanidino arginine(胍基精氨酸,VIP=4.43),Curcumenol(姜黃素醇,VIP=4.30),Quinolinic Acid(喹啉酸,VIP=4.16)及Gln Tyr Leu(谷氨酰胺、絡(luò)氨酸、亮氨酸,VIP=4.12)等.這些代謝物可能是蛹蟲草茯茶的主要特征代謝物.

    圖5 CFT與CT組間主要差異代謝物相關(guān)性分析(VIP柱狀圖表示代謝產(chǎn)物在CFT和FT之間的差異.“*”表示p<0.05;“**”表示p<0.01;“***”表示p<0.001)

    2.2.4 蛹蟲草茯茶及茯茶間差異代謝物代謝途徑

    對(duì)蛹蟲草茯茶中119種顯著差異性代謝物(VIP>2.0,p<0.05)進(jìn)行通路富集分析(如圖6所示).圖6中,X軸代表通路影響,Y軸代表通路富集,富集點(diǎn)直徑代表通路的豐度,深色代表更高的通路影響值.結(jié)果發(fā)現(xiàn)有四種代謝途徑在蛹蟲草茯茶與茯茶之間顯示出較高的途徑影響值.其中,精氨酸和脯氨酸代謝(Arginine and proline metabolism)通路對(duì)蛹蟲草茯茶中P-Coumaroylagmatine(對(duì)酰基胍基丁胺)、4-Hydroxycinnamoylagmatine(4-羥基肉桂酰丁胺)、L-4-Hydroxyglutamate semialdehyde(L-4-羥基谷氨酸半醛)、L-Phosphoarginine(L-磷酸精氨酸)及Ornithine(鳥氨酸)等物質(zhì)的形成具有重要影響.氨基糖和核苷酸糖代謝(Amino sugar and nucleotide sugar metabolism)通路對(duì)蛹蟲草茯茶中UDP-N-acetyl-D-mannosamine(UDP-N-乙酰-D-甘露糖胺)、N-Glycolylneuraminic acid(N-羥乙酰神經(jīng)氨酸)、D-Glucuronic acid 1-phosphate(D-葡萄糖醛酸1-磷酸)及Uridine diphosphate-N-acetylglucosamine(尿苷二磷酸-N-乙酰氨基葡萄糖)的代謝影響也較大.而煙酸和煙酰胺的代謝(Nicotinate and nicotinamide metabolism)及精氨酸生物合成(Arginine biosynthesis)兩種代謝通路會(huì)影響蛹蟲草茯茶中Quinolinic Acid(喹啉酸)、6-Hydroxynicotinic Acid(6-羥基煙酸)、N-alpha-Acetyl-L-citrulline(N-α-乙酰-L-瓜氨酸)及Ornithine(鳥氨酸)等代謝物的變化.因此,蛹蟲草茯茶中的氨基酸類物質(zhì)含量相較于傳統(tǒng)茯茶有所增加,該結(jié)果與章節(jié)2.2.2一致.

    圖6 CFT與FT的差異代謝物代謝途徑的拓?fù)浞治?/p>

    3 結(jié)論

    本研究探索了影響蛹蟲草茯茶品質(zhì)的關(guān)鍵加工步驟,并對(duì)蛹蟲草茯茶的代謝產(chǎn)物特征進(jìn)行解析.黑毛茶中添加8%的蛹蟲草,汽蒸10 min制得的蛹蟲草茯茶具有茶多酚含量低,茶多糖、蛋白質(zhì)含量高等特點(diǎn).且湯色橙紅透亮,口感醇和回甘.與傳統(tǒng)茯茶相比,蛹蟲草茯茶中氨基酸類物質(zhì)含量明顯增加.同時(shí),脂質(zhì)、生物堿、黃酮類、香豆素類、多酚、糖醇類、萜類等物質(zhì)也發(fā)生明顯變化.代謝通路分析證實(shí),蛹蟲草茯茶中氨基酸類物質(zhì)可能是通過精氨酸和脯氨酸代謝等途徑產(chǎn)生.本研究初步探索了蛹蟲草茯茶的加工工藝關(guān)鍵步驟,揭示了蛹蟲草茯茶的代謝產(chǎn)物特征,為促進(jìn)茯茶產(chǎn)品多元化以及深入開發(fā)蛹蟲草茯茶功能奠定物質(zhì)理論基礎(chǔ).

    猜你喜歡
    茯茶蟲草代謝物
    阿爾茨海默病血清代謝物的核磁共振氫譜技術(shù)分析
    蟲草素提取物在抗癌治療中顯示出巨大希望
    中老年保健(2022年2期)2022-08-24 03:20:44
    蟲草素提取物在抗癌治療中顯示出巨大希望
    去流浪,去換成長(zhǎng)——三生三世,片片茯茶入水流
    關(guān)中古道茶事新
    關(guān)中古道茶事新
    ——陜西涇陽縣茯茶小鎮(zhèn)轉(zhuǎn)型觀察
    涇渭茯茶:做老百姓喝得起的好茶
    蛹蟲草液體發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選
    柱前衍生化結(jié)合LC-MSn分析人尿中茶堿及其代謝物
    HPLC-MS/MS法分析乙酰甲喹在海參中的主要代謝物
    日韩欧美 国产精品| 91久久精品国产一区二区三区| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产一区有黄有色的免费视频 | av播播在线观看一区| 国产黄a三级三级三级人| 欧美成人a在线观看| 久久草成人影院| 亚洲精品一二三| 国产免费一级a男人的天堂| 七月丁香在线播放| 精品久久久久久久末码| 国产精品久久久久久久久免| 十八禁网站网址无遮挡 | 欧美极品一区二区三区四区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久99精品国语久久久| 一级毛片久久久久久久久女| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 爱豆传媒免费全集在线观看| 久久国内精品自在自线图片| 观看免费一级毛片| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 日韩伦理黄色片| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 最近2019中文字幕mv第一页| 日韩在线高清观看一区二区三区| 婷婷色麻豆天堂久久| 搡女人真爽免费视频火全软件| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 免费高清在线观看视频在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 在线观看人妻少妇| 欧美日韩综合久久久久久| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 天美传媒精品一区二区| 男人狂女人下面高潮的视频| 岛国毛片在线播放| av国产免费在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产黄片美女视频| 亚洲av男天堂| 男人爽女人下面视频在线观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 最近中文字幕2019免费版| 草草在线视频免费看| 免费观看性生交大片5| 亚洲欧美一区二区三区国产| 日韩成人伦理影院| av在线观看视频网站免费| 搡老乐熟女国产| 国产成人aa在线观看| 日韩电影二区| 男人舔奶头视频| 久久久久久久午夜电影| 美女高潮的动态| 人妻一区二区av| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲av二区三区四区| 成人国产麻豆网| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国内精品一区二区在线观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 777米奇影视久久| 乱人视频在线观看| 免费看美女性在线毛片视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 午夜福利在线观看吧| 水蜜桃什么品种好| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产免费又黄又爽又色| 十八禁网站网址无遮挡 | 精品久久国产蜜桃| 好男人视频免费观看在线| 色视频www国产| 国产亚洲精品av在线| 中文欧美无线码| 搡老妇女老女人老熟妇| 直男gayav资源| 夫妻性生交免费视频一级片| 一级a做视频免费观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 3wmmmm亚洲av在线观看| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲人成网站高清观看| 国产极品天堂在线| 国产精品女同一区二区软件| 如何舔出高潮| 精品熟女少妇av免费看| 听说在线观看完整版免费高清| 啦啦啦啦在线视频资源| av天堂中文字幕网| 亚洲国产欧美人成| 嘟嘟电影网在线观看| 九草在线视频观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 在线 av 中文字幕| 国产伦在线观看视频一区| 国产 一区精品| 国产av国产精品国产| 最近2019中文字幕mv第一页| 国产又色又爽无遮挡免| 国产精品无大码| 国产黄片视频在线免费观看| 午夜精品国产一区二区电影 | 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 麻豆成人午夜福利视频| 日韩国内少妇激情av| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 成人美女网站在线观看视频| 久久99精品国语久久久| 久久97久久精品| 亚洲美女搞黄在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 国国产精品蜜臀av免费| 女人被狂操c到高潮| h日本视频在线播放| 久久久久久久久久黄片| 麻豆成人午夜福利视频| 女人久久www免费人成看片| 亚洲伊人久久精品综合| 国产精品嫩草影院av在线观看| 精品一区二区三卡| 亚洲av中文av极速乱| 国产精品女同一区二区软件| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美三级亚洲精品| 一级毛片久久久久久久久女| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲高清免费不卡视频| 国产午夜精品一二区理论片| 久久这里只有精品中国| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲无线观看免费| 一级毛片 在线播放| 熟女人妻精品中文字幕| 看免费成人av毛片| 国产av不卡久久| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲经典国产精华液单| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 久久精品国产亚洲网站| 插逼视频在线观看| 免费大片18禁| 亚洲av在线观看美女高潮| 全区人妻精品视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 中文字幕免费在线视频6| 国产成人freesex在线| 久久久久精品久久久久真实原创| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 不卡视频在线观看欧美| 国产亚洲91精品色在线| 中文字幕制服av| 九九在线视频观看精品| 超碰av人人做人人爽久久| 欧美极品一区二区三区四区| 国产精品不卡视频一区二区| 天堂中文最新版在线下载 | av福利片在线观看| 国产精品无大码| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产精品久久久久久久久免| 免费av观看视频| 男女啪啪激烈高潮av片| 一级毛片电影观看| 亚洲成人久久爱视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 午夜亚洲福利在线播放| 极品教师在线视频| 全区人妻精品视频| 久久久精品欧美日韩精品| 国产久久久一区二区三区| 男的添女的下面高潮视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 中文在线观看免费www的网站| 男女边摸边吃奶| 综合色av麻豆| 听说在线观看完整版免费高清| 日日啪夜夜撸| 日本午夜av视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 最近的中文字幕免费完整| av专区在线播放| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 日本爱情动作片www.在线观看| 日本黄色片子视频| 麻豆成人av视频| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲av成人av| 日日干狠狠操夜夜爽| 青春草国产在线视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久热精品热| 97在线视频观看| 国产精品一区www在线观看| 欧美97在线视频| 国产午夜福利久久久久久| 日本午夜av视频| or卡值多少钱| 国产淫片久久久久久久久| 最近的中文字幕免费完整| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 国产免费一级a男人的天堂| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产亚洲精品久久久com| 免费黄频网站在线观看国产| 免费av不卡在线播放| 99久久精品热视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 免费看av在线观看网站| 看黄色毛片网站| 国产三级在线视频| 免费观看性生交大片5| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 最近中文字幕2019免费版| 国产亚洲91精品色在线| 色视频www国产| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲欧美精品专区久久| 亚州av有码| 在线观看免费高清a一片| 国产精品伦人一区二区| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲精品456在线播放app| 国产成人freesex在线| 看非洲黑人一级黄片| 一边亲一边摸免费视频| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产极品天堂在线| 国产黄片视频在线免费观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产一区亚洲一区在线观看| 男人爽女人下面视频在线观看| 高清视频免费观看一区二区 | 赤兔流量卡办理| 日本wwww免费看| 久久精品国产亚洲网站| 国产永久视频网站| 性色avwww在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产男人的电影天堂91| 高清毛片免费看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产精品三级大全| 精品一区二区三卡| 日韩大片免费观看网站| 亚洲精品一区蜜桃| 日韩中字成人| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲精品自拍成人| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国内精品美女久久久久久| 男女视频在线观看网站免费| 伊人久久精品亚洲午夜| 嫩草影院精品99| 亚洲在线自拍视频| 少妇丰满av| 久久精品国产亚洲网站| 国产乱人视频| 成年人午夜在线观看视频 | 69人妻影院| 久久这里有精品视频免费| 亚洲国产精品专区欧美| 久热久热在线精品观看| 国产真实伦视频高清在线观看| 成人av在线播放网站| 99视频精品全部免费 在线| 国产黄色小视频在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 免费电影在线观看免费观看| 精品久久久久久久久久久久久| 免费观看a级毛片全部| 在线免费观看不下载黄p国产| 欧美三级亚洲精品| 日本一二三区视频观看| 国产精品久久久久久久电影| videossex国产| 日韩国内少妇激情av| 91久久精品国产一区二区三区| 国产成人a区在线观看| 亚洲怡红院男人天堂| 女人被狂操c到高潮| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲欧美一区二区三区国产| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国模一区二区三区四区视频| 国产高清不卡午夜福利| 成人无遮挡网站| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲国产欧美人成| 天堂网av新在线| 久久久久久久久大av| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 哪个播放器可以免费观看大片| 三级毛片av免费| 身体一侧抽搐| 男人爽女人下面视频在线观看| 高清午夜精品一区二区三区| 午夜老司机福利剧场| 久久久久国产网址| 一个人免费在线观看电影| 亚洲欧美成人精品一区二区| 青春草亚洲视频在线观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 久久久久久久久久黄片| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲av男天堂| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲av免费在线观看| av线在线观看网站| 最新中文字幕久久久久| 免费看av在线观看网站| 少妇人妻一区二区三区视频| 99久国产av精品| 欧美日韩在线观看h| 熟女人妻精品中文字幕| 日韩av不卡免费在线播放| 老司机影院成人| 免费观看在线日韩| 国内精品宾馆在线| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产亚洲av嫩草精品影院| av福利片在线观看| 一本久久精品| 天堂中文最新版在线下载 | 三级国产精品片| 日韩人妻高清精品专区| 51国产日韩欧美| 国产高潮美女av| 日本欧美国产在线视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | av天堂中文字幕网| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产高清不卡午夜福利| 最近手机中文字幕大全| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲综合精品二区| 寂寞人妻少妇视频99o| 99久久精品国产国产毛片| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 99久国产av精品国产电影| 99视频精品全部免费 在线| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 人妻制服诱惑在线中文字幕| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久久久免费精品人妻一区二区| 欧美一区二区亚洲| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 日本爱情动作片www.在线观看| 搞女人的毛片| 国产免费视频播放在线视频 | 一本一本综合久久| 国产高潮美女av| av女优亚洲男人天堂| 麻豆久久精品国产亚洲av| 在线 av 中文字幕| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 少妇熟女欧美另类| 亚洲精品,欧美精品| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲精品,欧美精品| 欧美丝袜亚洲另类| 91av网一区二区| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲精品成人久久久久久| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲综合色惰| 夜夜爽夜夜爽视频| 淫秽高清视频在线观看| 一个人看视频在线观看www免费| 午夜亚洲福利在线播放| 三级经典国产精品| 六月丁香七月| 全区人妻精品视频| 人妻少妇偷人精品九色| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲av不卡在线观看| 在线观看一区二区三区| videos熟女内射| 国产 亚洲一区二区三区 | 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产成人91sexporn| 十八禁国产超污无遮挡网站| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产伦精品一区二区三区四那| 97在线视频观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 日日干狠狠操夜夜爽| 三级经典国产精品| 亚洲四区av| 91久久精品电影网| 久久久久性生活片| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲av在线观看美女高潮| 日韩大片免费观看网站| 日韩欧美一区视频在线观看 | 色网站视频免费| 天天躁日日操中文字幕| h日本视频在线播放| videossex国产| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 在现免费观看毛片| 男人舔奶头视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产精品av视频在线免费观看| 高清在线视频一区二区三区| 一边亲一边摸免费视频| 欧美一区二区亚洲| 中文字幕久久专区| 国产精品久久久久久精品电影| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | eeuss影院久久| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产成人精品久久久久久| 免费观看无遮挡的男女| 色5月婷婷丁香| 国产av不卡久久| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 欧美丝袜亚洲另类| 22中文网久久字幕| 亚洲精品国产av成人精品| 欧美最新免费一区二区三区| 丝袜美腿在线中文| 免费看光身美女| 免费大片18禁| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产精品三级大全| 日韩视频在线欧美| 国产精品一区二区三区四区久久| 亚洲av免费高清在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 黄片wwwwww| 久热久热在线精品观看| 精华霜和精华液先用哪个| 一本久久精品| 久久久久久久久久久免费av| 日韩av在线大香蕉| 日韩电影二区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美成人午夜免费资源| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 午夜精品在线福利| 欧美区成人在线视频| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 一边亲一边摸免费视频| 国产在视频线在精品| av国产免费在线观看| 免费在线观看成人毛片| 精品人妻偷拍中文字幕| 麻豆成人午夜福利视频| 欧美xxⅹ黑人| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲成人av在线免费| 午夜福利视频精品| 看免费成人av毛片| 综合色丁香网| 中文资源天堂在线| 日韩强制内射视频| 国产免费又黄又爽又色| 在线观看一区二区三区| 亚洲av不卡在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 在线免费观看不下载黄p国产| 成人毛片a级毛片在线播放| 能在线免费看毛片的网站| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 欧美+日韩+精品| 美女内射精品一级片tv| 22中文网久久字幕| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲在久久综合| 亚洲欧美清纯卡通| 日日啪夜夜撸| 伊人久久国产一区二区| 一级a做视频免费观看| 国产成人freesex在线| 美女cb高潮喷水在线观看| 午夜福利在线在线| 精品久久久久久久久久久久久| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产亚洲精品av在线| 欧美性感艳星| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 视频中文字幕在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 嫩草影院入口| 麻豆成人av视频| 国国产精品蜜臀av免费| 赤兔流量卡办理| 国产精品日韩av在线免费观看| av线在线观看网站| 黄片无遮挡物在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 精品久久久久久久久久久久久| 五月玫瑰六月丁香| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产成人福利小说| 亚洲人成网站在线观看播放| 午夜亚洲福利在线播放| av福利片在线观看| 毛片女人毛片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 51国产日韩欧美| 亚洲av中文av极速乱| 韩国高清视频一区二区三区| 日韩欧美精品v在线| 欧美3d第一页| 亚洲自偷自拍三级| 欧美+日韩+精品| 大香蕉97超碰在线| 精品人妻视频免费看| 国产成人a区在线观看| 日本av手机在线免费观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 91精品国产九色| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 成年人午夜在线观看视频 | 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 神马国产精品三级电影在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 激情五月婷婷亚洲| 免费无遮挡裸体视频| 在线免费十八禁| 国内揄拍国产精品人妻在线| 成人午夜精彩视频在线观看| 大片免费播放器 马上看| 神马国产精品三级电影在线观看| 午夜久久久久精精品| 国产精品女同一区二区软件| 国产成人精品久久久久久| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 99久久九九国产精品国产免费| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲伊人久久精品综合| av在线亚洲专区| 亚洲av免费高清在线观看| 黄片wwwwww| 午夜视频国产福利| 一级毛片我不卡| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产日韩欧美在线精品| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 综合色丁香网| 成人毛片a级毛片在线播放| 99久久人妻综合| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产成人精品久久久久久| 久久久久久久国产电影| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲国产高清在线一区二区三| 如何舔出高潮| 男女国产视频网站| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 女人久久www免费人成看片| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 在线免费观看的www视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 成年人午夜在线观看视频 | 18禁动态无遮挡网站| 激情五月婷婷亚洲| 精品熟女少妇av免费看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久久精品欧美日韩精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 中文字幕免费在线视频6| 搡老乐熟女国产| 国产成人精品久久久久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 91久久精品国产一区二区三区| av.在线天堂| 国产91av在线免费观看| 国产亚洲最大av| 大陆偷拍与自拍| 久热久热在线精品观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 欧美极品一区二区三区四区| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久久久久久国产电影| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日日啪夜夜爽| 日日干狠狠操夜夜爽|