絞股藍(lán)改善睡眠有效成分的研究

史臘臘 申世紅

(西北大學(xué)化工學(xué)院,西安,710069)

失眠癥是影響人民生命質(zhì)量的高發(fā)病率疾病,全球失眠癥患病率在15%左右。長(zhǎng)期失眠會(huì)給人的正常生活和工作帶來(lái)不良影響,甚至對(duì)生命造成危害[1]。臨床常見(jiàn)的失眠形式有睡眠潛伏期延長(zhǎng)、睡眠維持障礙、睡眠質(zhì)量下降、睡眠時(shí)間縮短、日間殘留效應(yīng)等[2]。

藥物是治療失眠癥的重要方法之一,中藥作為藥物的重要組成部分,治療失眠歷史悠久,不良反應(yīng)小且效果顯著[3]。已有研究表明,絞股藍(lán)、茯苓、酸棗仁、柏子仁、靈芝、五味子、菊花、甘草、龍眼、西番蓮、西紅花、梔子等中藥提取物具有促進(jìn)睡眠的作用[4-6]。絞股藍(lán)[GynostemmaPentaphyllum(Thunb.)Makino]是葫蘆科絞股藍(lán)屬植物之一。其含有皂苷、多糖、黃酮類(lèi)等化合物及鐵、鋅、銅、錳、硒等20多種微量元素[7],具有滋補(bǔ)保健、抗癌防衰、增強(qiáng)體質(zhì)和改善睡眠等多種功能,是近年來(lái)國(guó)內(nèi)植物源治療失眠藥物的研究熱點(diǎn)[8]。徐露等[9-10]研究了絞股藍(lán)皂苷對(duì)小鼠睡眠的影響,證明絞股藍(lán)皂苷具有催眠、鎮(zhèn)靜作用。李景良等[11]研究了絞股藍(lán)多糖口服液對(duì)失眠患者的睡眠影響,驗(yàn)證了絞股藍(lán)多糖的睡眠改善功效。然而,目前關(guān)于絞股藍(lán)改善睡眠的研究主要集中在生藥或某一單一組分的改善睡眠功效,尚無(wú)對(duì)絞股藍(lán)各活性組分之間藥效比較的研究。

本研究以小鼠為試驗(yàn)對(duì)象,對(duì)絞股藍(lán)生藥水提物、絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)多糖進(jìn)行改善睡眠功能試驗(yàn),評(píng)價(jià)不同組分對(duì)小鼠睡眠的影響,探究絞股藍(lán)改善睡眠功效的主要來(lái)源,為絞股藍(lán)開(kāi)發(fā)改善睡眠產(chǎn)品提供理論支持。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)昆明小鼠(體質(zhì)量18～22 g),雌性,由陜西省西安市西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(許可證號(hào):SCXK(陜)2020-001)。動(dòng)物飼養(yǎng)于屏障級(jí)動(dòng)物房,溫度20～25 ℃,相對(duì)濕度50%～60%,12 h照明和12 h黑暗交替,允許動(dòng)物自由攝食和飲水。

1.2 藥物 絞股藍(lán)水提物(提取得率為18%)、絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)多糖均購(gòu)自陜西漢中天然谷生物科技股份有限公司。

1.3 儀器與試劑 計(jì)時(shí)器、玻璃勻漿器、ME104E/02型電子天平,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司產(chǎn)品;BioTek全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀,美國(guó)伯騰儀器有限公司產(chǎn)品;TGL-20臺(tái)式高速離心機(jī),山東百歐醫(yī)療科技有限公司產(chǎn)品。生理鹽水、戊巴比妥鈉,中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上海化學(xué)試劑公司產(chǎn)品;巴比妥鈉,中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司產(chǎn)品;五羥色胺(5-HT)、γ-氨基丁酸(GABA)和多巴胺(DA)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELSIA)試劑盒,南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。

1.4 方法

1.4.1 動(dòng)物分組及給藥 將70只小鼠按照體質(zhì)量隨機(jī)分為7個(gè)組,即6個(gè)觀察組和1個(gè)空白對(duì)照組,每組10只。以灌胃的方式給予小鼠受試藥物,灌胃量為10 mL/(kg·BW),1次/d,空白對(duì)照組給予等量的蒸餾水。設(shè)置絞股藍(lán)水提物低、高劑量組,分別按50、100 mg/(kg·BW)給藥;絞股藍(lán)皂苷低、高劑量組,分別按5、10 mg/(kg·BW),給藥;絞股藍(lán)多糖低、高劑量組,分別按5、10 mg/(kg·BW)給藥。試驗(yàn)期間動(dòng)物自由攝食飲水,每天觀察小鼠的活動(dòng)及生長(zhǎng)情況。灌胃30 d后,對(duì)各組小鼠進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。

1.4.2 直接睡眠試驗(yàn) 在末次灌胃15 min后觀察小鼠睡眠情況。當(dāng)清醒小鼠置于背臥位時(shí),能夠立即翻正身位。如果超過(guò)60 s小鼠不能翻正,說(shuō)明翻正反射消失,記為小鼠進(jìn)入睡眠,從翻正反射消失到其恢復(fù)的時(shí)間為小鼠的睡眠時(shí)間。分別觀察并計(jì)算各組小鼠的入睡只數(shù)及睡眠時(shí)間。

1.4.3 延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間試驗(yàn) 在末次灌胃15 min后,各組小鼠腹腔注射戊巴比妥納45 mg/(kg·BW),分別記錄各組動(dòng)物的平均睡眠時(shí)間。

1.4.4 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn) 在末次灌胃15 min后,各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉27 mg/(kg·BW),分別記錄各組30 min內(nèi)入睡動(dòng)物只數(shù)。

1.4.5 巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗(yàn) 在末次灌胃15 min后,各組小鼠腹腔注射巴比妥鈉230 mg/(kg·BW),觀察受試藥物能否縮短巴比妥鈉睡眠潛伏期。

1.4.6 腦組織5-HT、GABA、DA含量的檢測(cè) 各組小鼠連續(xù)灌胃30 d后,禁食12 h,處死小鼠,取出腦組織,用生理鹽水沖洗后稱(chēng)其質(zhì)量,用勻漿器制備10%的腦組織勻漿,4 ℃條件下8 000 r/min離心10 min后取上清液,按照試劑盒說(shuō)明書(shū)采用ELISA測(cè)定各組小鼠腦組織中5-HT、GABA、DA的含量。

2 結(jié)果

2.1 直接睡眠試驗(yàn) 空白對(duì)照組、絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)多糖各劑量組的小鼠均未出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象,各組均無(wú)直接睡眠效果(均P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷及絞股藍(lán)多糖對(duì)小鼠直接睡眠試驗(yàn)的影響(n=10)

2.2 延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間試驗(yàn) 與空白對(duì)照組比較,絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)多糖高劑量組小鼠的戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間與空白對(duì)照組比較極顯著延長(zhǎng)(P<0.01或P<0.001);且絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷高劑量組與絞股藍(lán)多糖組比較,更能顯著延長(zhǎng)小鼠戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間(P<0.05),但是絞股藍(lán)水提物組與絞股藍(lán)皂苷高劑量組差異不顯著。低劑量組中僅有絞股藍(lán)皂苷組小鼠的戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間與空白對(duì)照組比較顯著延長(zhǎng)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷及絞股藍(lán)多糖對(duì)戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時(shí)間的影響(n=10)

2.3 戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn) 與空白對(duì)照組比較,絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷高劑量組能顯著增加戊巴比妥鈉閾下催眠劑量入睡小鼠只數(shù)(P<0.001),但絞股藍(lán)水提物與絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)多糖組差異不顯著。絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷低劑量組以及絞股藍(lán)多糖高劑量組能顯著增加戊巴比妥鈉閾下催眠劑量入睡小鼠只數(shù)(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷及絞股藍(lán)多糖對(duì)巴比妥鈉閾下劑量催眠作用的影響(n=10)

2.4 巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗(yàn) 與空白對(duì)照組比較,絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷高劑量組顯著縮短巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠潛伏期的作用(P<0.001)。與絞股藍(lán)多糖組比較,絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷高劑量組更能顯著縮短小鼠睡眠潛伏期(P<0.05),但是絞股藍(lán)水提物與絞股藍(lán)皂苷高劑量組之間差異不顯著。絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷低劑量組與空白對(duì)照組比較,小鼠睡眠潛伏期顯著縮短(P<0.05),但是2組組間差異不顯著。見(jiàn)表4。

表4 絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷及絞股藍(lán)多糖對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響(n=10)

2.5 絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)多糖對(duì)失眠小鼠腦組織5-HT、GABA、DA含量的影響 與空白對(duì)照組比較,絞股藍(lán)水提物高劑量組5-HT、GABA顯著升高(P<0.01),DA含量顯著降低(P<0.01);絞股藍(lán)皂苷高劑量組5-HT、GABA含量顯著升高(P<0.01或P<0.001),DA含量顯著降低(P<0.01);絞股藍(lán)多糖高劑量組GABA含量顯著升高(P<0.01),DA含量顯著降低(P<0.05)。其中,與絞股藍(lán)多糖組比較,絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷高劑量組小鼠的DA含量顯著降低(P<0.05),但是2組之間無(wú)顯著性差異。見(jiàn)表5。

表5 各組小鼠腦組織中5-HT、GABA、DA的含量比較

3 討論

本研究為探討絞股藍(lán)改善睡眠的功效成分,采用絞股藍(lán)水提物、絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)多糖灌胃小鼠,通過(guò)直接睡眠法、延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間、戊巴比妥鈉閾下劑量催眠試驗(yàn)、巴比妥鈉睡眠潛伏期試驗(yàn)比較不同組分對(duì)小鼠睡眠的作用,并對(duì)小鼠腦組織中的5-HT、GABA、DA含量進(jìn)行了測(cè)定,結(jié)果顯示,絞股藍(lán)皂苷、絞股藍(lán)水提物在10 mg/kg以及100 mg/kg劑量下對(duì)小鼠的改善睡眠作用明顯,此時(shí)小鼠腦組織的5-HT、GABA含量與空白對(duì)照組比較顯著升高(P<0.05或P<0.01或P<0.001),DA水平也顯著低于空白對(duì)照組(P<0.05或P<0.001)。但是絞股藍(lán)皂苷與絞股藍(lán)水提物組對(duì)小鼠睡眠的改善作用差異不明顯。研究表明,周署[12]等人在臨床上用絞股藍(lán)總皂苷100～200 mg/(kg·d),患者連續(xù)服用1個(gè)月,對(duì)失眠、精神不安等神經(jīng)官能證均有顯著療效。絞股藍(lán)水提物中含有多糖和皂苷等成分[13-14],但絞股藍(lán)多糖對(duì)小鼠的改善睡眠作用并不明顯,這說(shuō)明絞股藍(lán)對(duì)小鼠改善睡眠作用的主要功效成分可能是絞股藍(lán)皂苷。

據(jù)《本草綱目》記載,絞股藍(lán)性寒、味苦,常用絞股藍(lán)泡水飲,可治療咽喉炎及氣管炎、偏頭痛及睡眠不良[15]。皂苷、多糖與黃酮類(lèi)化合物是其主要活性成分[16]。絞股藍(lán)黃酮類(lèi)化合物改善睡眠功效未見(jiàn)報(bào)道,因此本試驗(yàn)未設(shè)置絞股藍(lán)黃酮組。湯浮康[17]采用絞股藍(lán)復(fù)方中藥治療不寐癥患者93例,治愈38例,有效51例,無(wú)效4例,總有效率為95.7%,證明絞股藍(lán)水溶液能夠治療不寐癥。江硯等[18]采用整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法,檢測(cè)大鼠下丘腦中的單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)(L-NE、DA、5-HIAA、5-HT)和小鼠海馬組織中的谷氨酸、γ-氨基丁酸,對(duì)給藥后動(dòng)物腦神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)行含量測(cè)定,結(jié)果表明絞股藍(lán)總皂苷具有明顯的鎮(zhèn)靜、催眠作用。3種成分均可改善睡眠,這與本試驗(yàn)的結(jié)果一致。絞股藍(lán)水提物與絞股藍(lán)皂苷改善睡眠效果無(wú)顯著性差異,這是因?yàn)榻g股藍(lán)皂苷大多溶于水[19]。且水提絞股藍(lán)工藝簡(jiǎn)單、成本較低、無(wú)溶劑污染,日常生產(chǎn)中廣為使用[20]。

綜上所述,絞股藍(lán)皂苷具有明顯的鎮(zhèn)靜、催眠作用,是絞股藍(lán)改善睡眠主要功效成分,其作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

利益沖突聲明:無(wú)。