魚類免疫因子作用機(jī)制及其相關(guān)技術(shù)的研究進(jìn)展

摘要：魚類疾病的不斷暴發(fā)給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了嚴(yán)重危害，因此魚病的免疫防治變得日趨重要。作為機(jī)體免疫的重要組成部分，魚類免疫因子日益受到研究者們的重視。與人類和高等脊椎動(dòng)物相比，魚類免疫因子的研究起步較晚，但隨著研究的深入，已發(fā)現(xiàn)了多種魚類免疫因子。本文對(duì)現(xiàn)目前已報(bào)道的魚類免疫因子，如白細(xì)胞介素、干擾素、抗體、補(bǔ)體、主要組織相容性復(fù)合體、Toll樣受體、抗菌肽、溶菌酶及凝集素等結(jié)構(gòu)與功能、作用機(jī)制及它們的研究現(xiàn)狀進(jìn)行概述，并對(duì)部分免疫因子在魚類養(yǎng)殖中的應(yīng)用進(jìn)行了總結(jié)；在魚類免疫學(xué)研究中，一些現(xiàn)代生物技術(shù)被廣泛應(yīng)用。本文概述了轉(zhuǎn)錄組技術(shù)在快速鑒定和篩選魚類免疫相關(guān)基因、魚類免疫信號(hào)通路的研究進(jìn)展；并對(duì)魚類免疫因子的研究發(fā)展前景進(jìn)行展望，以期為更深入研究魚類免疫系統(tǒng)的發(fā)生、探討免疫因子在魚類免疫中的作用和應(yīng)用提供文獻(xiàn)依據(jù)和參考，促進(jìn)魚類養(yǎng)殖業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。

關(guān)鍵詞：免疫因子；魚類；作用機(jī)制；轉(zhuǎn)錄組技術(shù)；研究進(jìn)展

中圖分類號(hào)：S942.5" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2024）04-0001-08

收稿日期：2023-06-06

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（編號(hào)：31672264）；天津市淡水養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)體系創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目（編號(hào)：ITTFRSA2021000）；天津市海水養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（編號(hào)：ITTMRS2021000）。

作者簡(jiǎn)介：藍(lán) 一（1999—），男，天津人，碩士研究生，主要從事水產(chǎn)增養(yǎng)殖的研究。E-mail：layi3018@163.com。

通信作者：王 茜，博士，教授，主要從事水產(chǎn)增養(yǎng)殖、水產(chǎn)遺傳與育種的研究。E-mail：wqgt1999@163.com。

魚類是廣泛存在于全球各地水域中的生物，是人類重要的食品資源之一。與陸生動(dòng)物相比，魚類的免疫系統(tǒng)在進(jìn)化過(guò)程中逐漸形成了獨(dú)特特征。雖然魚類的免疫系統(tǒng)與哺乳動(dòng)物的免疫系統(tǒng)有所不同，但它們也擁有自己的免疫組織、免疫細(xì)胞及免疫因子。魚類免疫系統(tǒng)包括非特異性的防御系統(tǒng)和特異性的防御系統(tǒng)，非特異性防御系統(tǒng)是先天形成，僅能清除一般的異物，而特異性防御系統(tǒng)是后天形成，能夠有目的地清除異物，使機(jī)體獲得更強(qiáng)的保護(hù)能力［1］。魚類免疫系統(tǒng)的發(fā)育、維持及正常運(yùn)行均依賴于各類免疫因子的表達(dá)和調(diào)控［2］。魚類免疫因子的研究可為揭示脊椎動(dòng)物免疫系統(tǒng)進(jìn)化史、全面理解魚類免疫系統(tǒng)組成及機(jī)制提供關(guān)鍵依據(jù)，并在魚類疾病防治及抗病育種中具有廣闊的應(yīng)用前景［3-4］。免疫因子可協(xié)調(diào)展開免疫反應(yīng)，從而幫助魚類對(duì)抗各種病原體的侵襲，在保障其生存和繁衍的同時(shí)，也為魚類養(yǎng)殖和經(jīng)濟(jì)發(fā)展提供有力的保障［5］。

1 免疫因子的種類及作用機(jī)制

1.1 白細(xì)胞介素

白細(xì)胞介素（interleukin，IL）是一類細(xì)胞因子，其結(jié)構(gòu)由蛋白質(zhì)組成。白細(xì)胞介素的結(jié)構(gòu)因其種類而異，但它們通常是由單個(gè)多肽鏈組成，包括1個(gè)信號(hào)序列、1個(gè)成熟肽序列和1個(gè)C末端序列，這些多肽鏈通常包含100～200個(gè)氨基酸殘基，具有不同的序列和結(jié)構(gòu)［6］。白細(xì)胞介素的結(jié)構(gòu)決定了它們的生物活性和功能。

白細(xì)胞介素廣泛存在于哺乳動(dòng)物和鳥類等高等脊椎動(dòng)物中，并在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。近年來(lái)，越來(lái)越多研究表明，魚類也能產(chǎn)生和分泌多種類型的白細(xì)胞介素，并且白細(xì)胞介素在調(diào)節(jié)魚類免疫系統(tǒng)中也起著至關(guān)重要的作用，如Wang等的研究表明，白細(xì)胞介素等細(xì)胞因子可促進(jìn)免疫細(xì)胞的增殖、分化、成熟和活化［7］；Secombes等通過(guò)對(duì)白細(xì)胞介素的探究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子可調(diào)節(jié)細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo)和免疫反應(yīng)［8］；薛婷婷等在對(duì)褐牙鲆（Paralichthys olivaceus）白細(xì)胞介素21（IL-21）基因克隆及表達(dá)分析中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子可以在免疫炎癥和免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用［9］。

研究發(fā)現(xiàn)，魚類中具有多種類型的白細(xì)胞介素，這些白細(xì)胞介素在魚類中的分布和表達(dá)水平與不同的物種、組織和免疫狀態(tài)等因素有關(guān)。其中，IL-1 是最早被發(fā)現(xiàn)的白細(xì)胞介素之一，Ogryzko等通過(guò)研究IL-1發(fā)現(xiàn)，其信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)可以導(dǎo)致許多病理，從而誘發(fā)多種炎癥性疾病，結(jié)果表明IL-1在魚類免疫系統(tǒng)中起著誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和分化等多個(gè)方面的作用［10］；Sáenz-Martínez等在感染鮭魚皮氏菌的虹鱒魚（Oncorhynchus mykiss）脾臟中檢測(cè)到了來(lái)自IL-8的C端片段存在，證明虹鱒魚IL-8的C端雖被裂解，但保留了其抗菌特性，為IL-8具有調(diào)節(jié)魚類炎癥反應(yīng)和吞噬作用提供依據(jù)［11］；IL-12是一種多效性細(xì)胞因子，Tsai等認(rèn)為IL-12能夠增強(qiáng)魚類先天性和適應(yīng)性免疫應(yīng)答，并可應(yīng)用于魚類抗病原體感染的基本疫苗制劑［12］；IL-17是一種標(biāo)志性的炎性細(xì)胞因子，Zhang等發(fā)現(xiàn)病原體通過(guò)獨(dú)特的受體亞類IL-17R發(fā)出信號(hào)，可誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生相關(guān)免疫因子，并在宿主防御自身免受病原體入侵中起著關(guān)鍵作用［13］；IL-21 在應(yīng)對(duì)炎癥和自身免疫性疾病的發(fā)展中起關(guān)鍵作用，Zhang等對(duì)草魚（Ctenopharyngodon idella）IL-21的特征和生物活性進(jìn)行研究，首次揭示了魚類 IL-21 的產(chǎn)生及功能與炎癥反應(yīng)的密切關(guān)系，并突出了其抗菌和抗炎能力［14］。

1.2 干擾素

干擾素（interferon，IFN）早在20世紀(jì)80年代已被科學(xué)家關(guān)注，但在魚類中干擾素研究開展較晚，直至2003年，魚類干擾素才被成功克隆。隨著硬骨魚類的干擾素基因被陸續(xù)報(bào)道，魚類干擾素的結(jié)構(gòu)越來(lái)越明晰［15］。哺乳類、爬行類和鳥類等動(dòng)物干擾素基因僅有單個(gè)外顯子，而魚類干擾素則截然相反，魚類Ⅰ型干擾素基因包含5個(gè)外顯子區(qū)域和4個(gè)內(nèi)含子區(qū)域，這是魚類IFN獨(dú)特的結(jié)構(gòu)［16］。

IFN是一類能夠誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒狀態(tài)的細(xì)胞因子，它不直接參與抗病毒的生物學(xué)過(guò)程，而是通過(guò)產(chǎn)生靶基因下游的效應(yīng)基因來(lái)調(diào)控病毒的感染，具有多效能、低分子量、分泌型等特點(diǎn)［17］。通過(guò)對(duì)細(xì)胞表面的受體結(jié)合，啟動(dòng)一系列信號(hào)傳導(dǎo)通路，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，如：IFN在針對(duì)魚類病毒感染的先天免疫應(yīng)答中起著至關(guān)重要的作用；Ohta等在對(duì)七帶石斑魚（Epinephelus septemfasciatus）的研究中，報(bào)道了來(lái)自七帶石斑魚IFN基因的克隆和表征，結(jié)果表明重組IFN蛋白具有抗病毒作用［18］；Matsuura等在IFN研究中指出IFNγ是一種關(guān)鍵的細(xì)胞因子，可促進(jìn)和協(xié)調(diào)細(xì)胞內(nèi)病原體先天性細(xì)胞和適應(yīng)性細(xì)胞介導(dǎo)的免疫［19］。

1.3 抗體

抗體是脊椎動(dòng)物為應(yīng)對(duì)外來(lái)入侵蛋白（抗原），保護(hù)機(jī)體不被傷害而分泌的，在體內(nèi)進(jìn)行循環(huán)的蛋白質(zhì)分子，是機(jī)體體液免疫的主要參與者。作為一種功能蛋白，抗體整體由4條多肽鏈構(gòu)成，分別為2條結(jié)構(gòu)相同的輕鏈（L chain）和2條結(jié)構(gòu)相同的重鏈（H chain），4條鏈形成典型的“Y”形抗體結(jié)構(gòu)，經(jīng)氨基酸序列比較研究表明，抗體的輕鏈和重鏈均由一系列結(jié)構(gòu)相似的單元結(jié)構(gòu)域重復(fù)連接組成，每一個(gè)單元結(jié)構(gòu)域內(nèi)大約含有110個(gè)氨基酸殘基，被稱為Ig結(jié)構(gòu)域［20］。

抗體，也稱為免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig），是適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的主要體液免疫成分，Ig分為分泌型Ig和膜型Ig 2種類型，具有抗體活性的分泌型Ig主要存在于體液中，與抗原中有關(guān)的膜型Ig作為抗原受體分布于B細(xì)胞膜表面［21］。目前，魚類抗體主要分別為IgM、IgD、IgT和IgZ等［22-25］。硬骨魚類淋巴細(xì)胞由B細(xì)胞和T細(xì)胞組成，它們可調(diào)控機(jī)體發(fā)生適應(yīng)性免疫反應(yīng)。B細(xì)胞主要作用是參與體液免疫應(yīng)答并分泌抗體，主要功能包括分泌抗體和呈遞抗原［26］；Zhao等研究大西洋鮭魚（Salmo salar）MHC基因，成功生產(chǎn)了針對(duì)MHC I類重鏈和β2-微球蛋白（β2-MG）的單克隆抗體，顯示出與重組分子的結(jié)合，得出了鮭魚的抗體通過(guò)與病原體特定的抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物并參與清除病原體的結(jié)論［27］。

1.4 補(bǔ)體

硬骨魚類的補(bǔ)體系統(tǒng)由30多種成分組成，這些成分主要由3種途徑來(lái)激活，C3是補(bǔ)體激活途徑中的核心組分，其激活對(duì)于補(bǔ)體系統(tǒng)的功能至關(guān)重要，其中，α鏈（120 ku）和β鏈（75 ku）通過(guò)二硫鍵和非共價(jià)力連接而成［28-29］。Kato等的研究表明，在激活后，C3（約190 ku的糖蛋白）被C3轉(zhuǎn)化酶裂解為C3a（約8 ku的多肽）和C3b（約175 ku的糖蛋白），其中，C3a（C3α鏈的N端8～10 ku的片段）具有一定的生物活性，主要表現(xiàn)為促進(jìn)炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能、增加血管通透性等作用［30］。

補(bǔ)體系統(tǒng)是機(jī)體免疫的重要組成部分，其功能主要是促進(jìn)吞噬和溶解靶細(xì)胞，由于魚類生存在有眾多病原菌的水環(huán)境中，因此補(bǔ)體系統(tǒng)在硬骨魚類的先天免疫防御中起著至關(guān)重要的作用。含C1q 結(jié)構(gòu)域蛋白（C1q domain containing，C1qDC）是經(jīng)典補(bǔ)體途徑的起始分子，能夠識(shí)別免疫復(fù)合物，啟動(dòng)補(bǔ)體系統(tǒng)經(jīng)典途徑，對(duì)免疫有重要影響；Li等研究了褐牙鲆（Paralichthys olivaceus）C1qDC的免疫學(xué)特征，表明褐牙鲆C1qDC通過(guò)與IgM相互作用，對(duì)細(xì)菌感染產(chǎn)生積極影響［31］；Qi等在對(duì)大黃魚（Larimichthys crocea）的免疫應(yīng)答試驗(yàn)中驗(yàn)證補(bǔ)體是一種復(fù)雜的先天免疫監(jiān)視系統(tǒng)，對(duì)宿主體內(nèi)平衡、消除炎癥和防御病原體方面起著關(guān)鍵作用［32］。

1.5 主要組織相容性復(fù)合體

主要組織相容性復(fù)合體（MHC）是脊椎動(dòng)物中一組高度多態(tài)的蛋白復(fù)合體，其主要功能為呈遞抗原，使其為T細(xì)胞所識(shí)別，激活體液免疫和細(xì)胞免疫。與哺乳類相似，魚類MHC主要分為MHC Ⅰ和MHC Ⅱ 2類［33］。其中，MHC Ⅰ復(fù)合體由1條具有多態(tài)性的MHC Ⅰ蛋白重鏈與1條β2-微球蛋白輕鏈非共價(jià)結(jié)合組成。

MHC類分子在魚類免疫系統(tǒng)中起著重要的作用，可在魚類的體內(nèi)展示各種蛋白質(zhì)片段（抗原），并通過(guò)T細(xì)胞的識(shí)別來(lái)引發(fā)免疫應(yīng)答。同時(shí)，MHC類分子不僅在免疫反應(yīng)和非自身識(shí)別中發(fā)揮著核心作用，還參與了自身免疫調(diào)節(jié)和免疫耐受等方面，Dirscherl等重點(diǎn)討論斑馬魚（Danio rerio）MHC Ⅰ類基因的多面性，分析不同Ⅰ類譜系間已知和假設(shè)的功能差異，為該物種多樣化的MHC位點(diǎn)提供新的線索［34］；Li等通過(guò)確定香魚（Plecoglossus altivelis）MHC Ⅱ類分子的α（PaMHCIIα）鏈基因，發(fā)現(xiàn)MHC Ⅱ類分子僅存在于抗原呈遞細(xì)胞上，為MHC Ⅱ類分子在脊椎動(dòng)物免疫系統(tǒng)中起主要作用提供依據(jù)［35］。

1.6 Toll樣受體

Toll 樣受體（TLRs，Toll like receptors）能特異識(shí)別病原相關(guān)分子模式（PAMP），是一類在先天免疫和獲得性免疫中均發(fā)揮重要作用的蛋白質(zhì)。TLRs為I型跨膜糖蛋白，胞外結(jié)構(gòu)域由19～25個(gè)前后相連的片段所組成，各片段包括24～29個(gè)氨基酸殘基，帶有x-L-x-x-L-x-L-x-x基序（L為亮氨酸，x為任意氨基酸），稱為富含亮氨酸的重復(fù)體（leucine-richrepeat，LRR），簡(jiǎn)稱亮氨酸重復(fù)序列。

TLRs基因在宿主防御系統(tǒng)第一防線中起到防止病原體附著和進(jìn)入的角色，具有物種特定性。TLRs具有LRRs結(jié)構(gòu)域的胞外區(qū)，能促進(jìn)PAMPs的識(shí)別；跨膜區(qū)，便于與膜體附著；以及含TIR結(jié)構(gòu)域的胞內(nèi)區(qū)，可進(jìn)行下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在魚類中，TLR9是識(shí)別DNA中寡核苷酸分子（CpG ODN）的受體，CpG ODN 常見于細(xì)菌和病毒的基因組［36］。

Gao等采用同源克隆和cDNA末端快速擴(kuò)增（RACE）技術(shù)克隆了銀鯧（Pampus argenteus）中TLR2的全長(zhǎng)cDNA，結(jié)果表明，TLR2在宿主的先天免疫中對(duì)病原微生物防御起著至關(guān)重要的作用［37］；TLRs能夠通過(guò)激活信號(hào)傳遞通路，激發(fā)宿主的免疫防御反應(yīng)，在魚類中，TLRs的信號(hào)傳遞通路主要包括2種類型：MyD88依賴性和TRIF依賴性［38］；TLRs在魚類中可調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞（DCs）的成熟和抗原呈遞，也對(duì)免疫應(yīng)答起到重要的調(diào)節(jié)作用。具體來(lái)說(shuō)，TLRs激活DCs后能夠促進(jìn)其成熟和功能的增強(qiáng)，從而提高對(duì)病原菌的識(shí)別和抗原呈遞能力，Lauriano等的研究為上述結(jié)論提供支撐［39］。

1.7 抗菌肽

抗菌肽（AMPs）是生物體產(chǎn)生的一類小分子多肽，對(duì)真菌、細(xì)菌等病原微生物、具有抑制或殺滅作用，通常被稱為“第二防御體系”。按照結(jié)構(gòu)特點(diǎn)魚類抗菌肽可分為兩大類，一類是不含半胱氨酸、具有疏水性或雙親性α螺旋結(jié)構(gòu)的抗菌肽，包括Piscidins、Pleurocidins和Misgurins等；另一類是含有多個(gè)半胱氨酸β折疊結(jié)構(gòu)的抗菌肽，包括Hepcidin、Cathelicidins等。Piscidins類抗菌肽家族中的成熟肽富含組氨酸和苯丙氨酸，長(zhǎng)度一般為 18～26，目前在莫桑比克羅非魚（Oreochromis mossambicus）、條紋狼鱸（Morone saxatilis）和條石鯛（Oplegnathus fasciatus）中發(fā)現(xiàn)5個(gè)亞型，主要在鰓、皮膚和腸等器官組織中表達(dá)，除了具有廣譜抗菌性外，還具有抗真菌、抗寄生蟲和抗病毒的活性［40］。Defensins類抗菌肽含有18～45個(gè)氨基酸殘基，呈陽(yáng)離子，其中，包含6～8個(gè)保守的半胱氨酸，具有廣譜的抗微生物活性。Defensins是一類具有抗微生物活性的非特異性免疫分子，通常具有由二硫鍵穩(wěn)定的α螺旋或β折疊結(jié)構(gòu)，根據(jù)半胱氨酸的位置和所形成的二硫鍵結(jié)構(gòu)，可被分為α-Defensins、β-Defensins和θ-Defensins，魚類體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)的Defensins通常為β-Defensins，具有6個(gè)保守的半胱氨酸殘基，在斑馬魚、虹鱒等魚的肝臟、肌肉、皮膚、腸道和鰓等多種組織中表達(dá)［41］。Hepcidin又稱鐵調(diào)素，是一種富含半胱氨酸的抗菌多肽，其前肽含有85個(gè)氨基酸殘基，包含信號(hào)肽、前肽和成熟肽3個(gè)部分。前肽轉(zhuǎn)化酶通過(guò)識(shí)別C端的R-X-K/R-R結(jié)構(gòu)進(jìn)行前肽酶切，形成有活性的成熟Hepcidin抗菌肽［42］。魚類Hepcidin具有一定的抗腫瘤、抗病毒活性，還作為免疫調(diào)節(jié)因子調(diào)控魚類的免疫功能，參與肝細(xì)胞和巨噬細(xì)胞鐵釋放的調(diào)控［43-44］。Cathelicidins是一類成熟肽序列相似性很低的抗菌肽，廣泛存在于脊椎動(dòng)物體內(nèi)，它是根據(jù)保守的N端Cathelin結(jié)構(gòu)域命名的，該區(qū)域保守的4個(gè)半胱氨酸殘基形成2對(duì)二硫鍵。在斑馬魚體內(nèi)鑒定得到了來(lái)源于魚類的Cathelicidins，該類抗菌肽具有強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)功能和廣譜的殺菌作用［45-46］。

1.8 溶菌酶

溶菌酶是生物體內(nèi)重要的非特異性免疫因子，與抵御細(xì)菌感染的免疫功能密切相關(guān)［47］。水產(chǎn)動(dòng)物在抵抗外來(lái)病原體的入侵時(shí)，溶菌酶能夠增強(qiáng)其他免疫因子的抗菌活性，并通過(guò)協(xié)同作用來(lái)抵制病原微生物的入侵［48］。溶菌酶是一種天然的堿性抗菌蛋白，通過(guò)水解肽聚糖β-1，4-糖苷鍵發(fā)揮溶菌功能［49］。根據(jù)來(lái)源、免疫特性、結(jié)構(gòu)及催化特征的不同，動(dòng)物體內(nèi)的溶菌酶主要分為G型、C型和I型，廣泛存在于免疫器官和細(xì)胞中［50］。近年來(lái)，越來(lái)越多研究發(fā)現(xiàn)，水生動(dòng)物G型溶菌酶在不同組織中發(fā)揮一定的免疫防御作用，如紫貽貝（Mytilus edulislinnaeus）、長(zhǎng)牡蠣（Crassostrea gigas）和櫛孔扇貝（Chlamys farreri）等［51-53］。

1.9 凝集素

凝集素是一類含有糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域（car-bohydrate recognition domain，CRD），可與糖類可逆結(jié)合的非酶、非抗體的蛋白質(zhì)或糖蛋白，凝集素還參與凝血、細(xì)胞黏連、蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)及創(chuàng)傷修復(fù)等系列的生理進(jìn)程［54］。目前，從魚類中鑒定出的凝集素主要為半乳糖凝集素（galectins）、C-型凝集素（C-type lectins）和F-型凝集素（F-type lectins）等，具有廣譜的抗菌、病毒、寄生蟲和真菌活性，及免疫調(diào)節(jié)的功能［55］。半乳糖凝集素廣泛表達(dá)于各種細(xì)胞，典型的特征是具有保守的CRD，根據(jù)分子結(jié)構(gòu)可分為3類：原型（proto），包含1個(gè)CRD，多以非共價(jià)鍵連接的二聚體形式存在；串聯(lián)重復(fù)型（tandem-repeat），包含2個(gè)由短肽相連的CRD，多以單體的形式發(fā)揮作用；嵌合型（chimera），在C端含有1個(gè)CRD，N端富含脯氨酸和甘氨酸，一般形成多聚體發(fā)揮作用［56］。

2 轉(zhuǎn)錄組技術(shù)在免疫因子研究中的應(yīng)用

2.1 魚類免疫相關(guān)基因的研究

轉(zhuǎn)錄組技術(shù)是一種利用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)細(xì)胞或組織中所有的mRNA進(jìn)行測(cè)序和分析的方法。通過(guò)轉(zhuǎn)錄組技術(shù)，可對(duì)這些免疫因子的基因表達(dá)譜進(jìn)行分析，了解它們?cè)诓煌砗筒±頎顟B(tài)下的變化規(guī)律，并對(duì)免疫因子在魚類免疫系統(tǒng)中的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制進(jìn)行深入的研究。目前，轉(zhuǎn)錄組技術(shù)已成功應(yīng)用于免疫相關(guān)基因的研究，通過(guò)轉(zhuǎn)錄組技術(shù)，研究者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多魚類免疫相關(guān)基因。如，虹鱒的TLR4、翹嘴鱖（Siniperca chuatsi）的NLRP3、鯉魚（Cyprinus carpio）的NLR-C等［57-59］。這些基因在免疫反應(yīng)過(guò)程中起到關(guān)鍵作用，對(duì)于探究魚類免疫機(jī)制具有重要意義，如，Yang等使用HiSeqTM2 500（Illumina）獲得了感染和未感染的草魚脾臟轉(zhuǎn)錄組圖譜，對(duì)感染嗜水氣單胞菌的草魚脾臟進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析，發(fā)現(xiàn)2 121個(gè)差異表達(dá)基因，對(duì)105個(gè)重要的免疫相關(guān)基因進(jìn)行了分類和討論，為了解草魚對(duì)嗜水氣單胞菌感染的免疫反應(yīng)提供依據(jù)［60］；許寶紅分析了感染呼腸孤病毒（GCRV）的草魚脾臟轉(zhuǎn)錄組，為后續(xù)分子標(biāo)記輔助育種或轉(zhuǎn)基因育種方法解決草魚出血病問(wèn)題提供基礎(chǔ)［61］；潘玉財(cái)采用RNA-Seq技術(shù)對(duì)感染和未感染傳染性造血器官壞死病病毒（IHNV）的虹鱒脾臟進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組分析，篩選并獲得參與抗IHNV非特異性免疫反應(yīng)的關(guān)鍵基因，這些免疫相關(guān)基因的表達(dá)，提示它們?cè)谡{(diào)控虹鱒抗IHNV免疫過(guò)程中發(fā)揮了重要作用［62］；Niu等研究模擬了自然的寄生蟲感染，并對(duì)受感染的金鯧魚（Trachinotus ovatus）魚鰓進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析，探索宿主對(duì)眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲（Amyloodinium ocellatum）侵襲的免疫反應(yīng)，確定了 4 388 個(gè)差異表達(dá)基因，揭示了眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲侵襲引起的宿主免疫反應(yīng)中編碼和非編碼RNAs的分子變化，對(duì)全面了解眼點(diǎn)淀粉卵渦鞭蟲侵襲的宿主免疫反應(yīng)提供很大幫助［63］。以上研究表明，轉(zhuǎn)錄組分析可獲得豐富的免疫學(xué)信息，為分析魚類對(duì)病原體入侵的防御機(jī)制及進(jìn)一步研究魚類免疫學(xué)奠定了基礎(chǔ)。

隨著利用轉(zhuǎn)錄組研究魚類相關(guān)免疫基因技術(shù)的不斷發(fā)展，研究者們篩選出具有抗病性優(yōu)勢(shì)的基因，該研究的開展將對(duì)抗病性育種和提高水產(chǎn)養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益具有重要指導(dǎo)意義，同時(shí)為進(jìn)一步理解水產(chǎn)動(dòng)物免疫機(jī)制提供新思路。如，Zhao等通過(guò)RNA測(cè)序技術(shù)對(duì)2組幼蚌進(jìn)行基因分型，開發(fā)抗病單核苷酸多態(tài)性（SNP）標(biāo)記，結(jié)果表明SNPs與疾病具有顯著相關(guān)性，此研究有助于深入了解水產(chǎn)動(dòng)物免疫相關(guān)基因抵抗病原體感染過(guò)程中的作用，也為抗病性育種的研究提供理論依據(jù)［64］。

2.2 魚類免疫信號(hào)通路的研究

轉(zhuǎn)錄組技術(shù)在魚類免疫信號(hào)通路研究中具有廣泛應(yīng)用，近年來(lái)出現(xiàn)多種信號(hào)通路的研究，其中，Toll樣受體信號(hào)通路、NLR信號(hào)通路和JAK-STAT信號(hào)通路等在魚類免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用［65-67］。通過(guò)對(duì)差異表達(dá)基因的功能注解和信號(hào)通路分析，研究者可揭示魚類免疫反應(yīng)過(guò)程中的關(guān)鍵調(diào)控節(jié)點(diǎn)和信號(hào)通路，如，Huang等利用轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序分析點(diǎn)帶石斑魚（Epinephelus coioides）虹彩病毒（SGIV）感染點(diǎn)帶石斑魚脾臟的基因表達(dá)情況，表明某些與絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、趨化因子、Toll樣受體信號(hào)通路和RIG-I信號(hào)通路相關(guān)的基因在SGIV感染后出現(xiàn)了交替，證明Toll樣受體信號(hào)通路和RIG-I信號(hào)通路參與了點(diǎn)帶石斑魚免疫反應(yīng)過(guò)程，推測(cè)MAPK在病毒感染過(guò)程中可能發(fā)揮著關(guān)鍵作用［68］；Mo等為了研究刺激隱核蟲（Cryptocaryon irritans）對(duì)虎龍石斑魚雜交種（Epinephelus fuscogutatus×Epinephelus lanceolatus）的感染程度，從而對(duì)其進(jìn)行了比較轉(zhuǎn)錄組分析，在對(duì)照組和感染組間的虎龍石斑魚雜交種皮膚中鑒定出6 464個(gè)DEGs，表明先天免疫成分，如補(bǔ)體系統(tǒng)、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）、白細(xì)胞介素17（IL-17）信號(hào)通路和TLR信號(hào)通路，在感染期間上調(diào)，結(jié)果表明，C. irritans感染可誘發(fā)虎龍石斑魚雜交種的顯著炎癥反應(yīng)，其中，IL-17信號(hào)通路和TLR信號(hào)通路在其免疫反應(yīng)中起到重要作用［69］。

3 免疫因子在魚類養(yǎng)殖中的應(yīng)用

免疫因子在魚類免疫方面的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。通過(guò)研究魚類免疫因子，可開發(fā)出多種免疫工具和免疫保健品，如疫苗、飼料添加劑等，以期來(lái)提高魚類抗病能力、降低養(yǎng)殖成本、保障魚類生產(chǎn)和經(jīng)濟(jì)效益。近年來(lái)，研究人員已經(jīng)開始嘗試?yán)没蛐揎椉夹g(shù)改良魚類免疫系統(tǒng)，使其更為強(qiáng)大、高效和可靠。

3.1 飼料添加劑

某些情況下，在飲食中添加魚類免疫調(diào)節(jié)劑已被證明可增強(qiáng)魚類先天免疫防御機(jī)制。近期研究表明，在魚蛋白水解物中發(fā)現(xiàn)的多肽級(jí)分子可能會(huì)刺激魚類中對(duì)抗病性很重要的因子。Serradell等研究發(fā)現(xiàn)，在海魚日糧中使用陸地原料替代魚粉（FM）和魚油（FO）可能會(huì)影響魚類的生長(zhǎng)性能和健康，同時(shí)在膳食中補(bǔ)充轉(zhuǎn)基因生物和植物化合物會(huì)增加已經(jīng)感染疾病魚類的血清溶菌酶，將免疫因子添加到魚類飼料中，能夠提高魚類的免疫力，增強(qiáng)其抗病能力［70］；Gisbert等研究水解蝦蛋白（shrimp protein hydrolysate，SPH）對(duì)幼年挪威舌齒鱸（Dicentrarchus labrax）體細(xì)胞生長(zhǎng)性能、先天免疫應(yīng)答的影響，通過(guò)挪威舌齒鱸在感染弧菌（Vibrio）時(shí)的死亡率，發(fā)現(xiàn)日糧中加入SPH顯著增強(qiáng)了體液非特異性免疫應(yīng)答（溶菌酶、溶菌和補(bǔ)體活性），顯示出SPH對(duì)促進(jìn)魚類健康和預(yù)防疾病具有免疫調(diào)節(jié)作用［71］。

3.2 疫苗

利用免疫因子制備的疫苗可有效地預(yù)防魚類病原體感染。如，Yuan等為提高草魚抗GCRV的能力，研究制備干擾素α（IFN-α）疫苗，通過(guò)腹腔注射，評(píng)估IFN-α疫苗對(duì)草魚感染GCRV的免疫反應(yīng)，結(jié)果表明，IFN-α疫苗可啟動(dòng)先天免疫應(yīng)答，保護(hù)草魚免受GCRV感染，為預(yù)防GCRV感染提供有效的策略［72］；近年來(lái)，使用分子佐劑來(lái)提高DNA疫苗免疫原性的研究越來(lái)越多，Huang等為提高點(diǎn)帶石斑魚DNA疫苗（pcacfA）的效果，構(gòu)建質(zhì)粒pcMyD88，并通過(guò)與編碼AcfA的DNA疫苗聯(lián)合注射來(lái)探索MyD88作為分子佐劑的能力，結(jié)果顯示pcMyD88增強(qiáng)了pcacfA對(duì)溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）感染的免疫保護(hù)，證明MyD88是pcacfA的有效佐劑［73］。以上利用免疫因子所制備的疫苗能夠?yàn)樘岣唪~類的免疫力及抗病毒能力提供佐證。

4 未來(lái)與展望

未來(lái)，隨著對(duì)免疫因子機(jī)制的深入研究和應(yīng)用技術(shù)的不斷發(fā)展，免疫因子在魚類養(yǎng)殖中的應(yīng)用和前景將會(huì)更加廣闊和重要。主要有以下方面的趨勢(shì)。

4.1 轉(zhuǎn)錄組技術(shù)的發(fā)展

轉(zhuǎn)錄組技術(shù)為魚類免疫因子研究提供了一種高效、全面、系統(tǒng)的方法，可深入了解魚類免疫因子在免疫反應(yīng)中的作用及其調(diào)控機(jī)制。未來(lái)，隨著轉(zhuǎn)錄組技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，我們有理由相信，將有更多的魚類免疫因子得到深入研究，并為魚類養(yǎng)殖的健康管理和免疫防治提供更為有效的支持。

4.2 基因編輯技術(shù)的發(fā)展

基因編輯技術(shù)在免疫因子應(yīng)用方面具有廣闊的未來(lái)發(fā)展前景。通過(guò)基因編輯技術(shù)，可精確地修改免疫因子的基因序列，使其在魚類體內(nèi)的表達(dá)量和活性得到優(yōu)化，提高魚類對(duì)病原體的免疫能力。這不僅可有效預(yù)防和控制魚類疾病的發(fā)生，還能夠提高養(yǎng)殖效益和水產(chǎn)品的質(zhì)量，具有重要的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)意義。此外，基因編輯技術(shù)還可用于研究免疫因子的功能和調(diào)控機(jī)制，為深入理解魚類免疫系統(tǒng)提供新的思路和方法。

4.3 精準(zhǔn)免疫技術(shù)的發(fā)展

精準(zhǔn)免疫技術(shù)是指根據(jù)魚類免疫系統(tǒng)的特點(diǎn)，精確地選擇和設(shè)計(jì)免疫因子，從而實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)的免疫治療和預(yù)防。利用精準(zhǔn)免疫技術(shù)，可快速、準(zhǔn)確地診斷魚類疾病，并且可對(duì)魚類免疫基因進(jìn)行編輯和調(diào)控，從而增強(qiáng)或抑制魚類免疫反應(yīng)，提高其抗病能力。未來(lái)，隨著精準(zhǔn)免疫技術(shù)的不斷發(fā)展和應(yīng)用，將有助于提高魚類的免疫力，減少疾病發(fā)生和死亡率，促進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

4.4 免疫因子與微生物群落的相互作用

微生物群落是指生活在魚類腸道和周圍環(huán)境中的微生物群體。近年來(lái)的研究表明，免疫因子與微生物群落間存在著復(fù)雜的相互作用關(guān)系［74］。未來(lái)，將從深入了解免疫因子與微生物群落的相互作用入手，探究其對(duì)免疫調(diào)節(jié)和養(yǎng)殖效益的影響，為魚類養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展提供新的思路和途徑。

總之，免疫因子作為一種重要的免疫調(diào)節(jié)分子，在魚類養(yǎng)殖中具有廣泛的應(yīng)用前景，要繼續(xù)深入研究免疫因子的機(jī)制和應(yīng)用，發(fā)掘新型免疫因子，提高免疫因子的應(yīng)用效果和經(jīng)濟(jì)效益，促進(jìn)我國(guó)魚類養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

［1］姚一彬，劉 臻，魯雙慶，等. 魚類免疫因子作用機(jī)制及其應(yīng)用［J］. 湖南飼料，2011（3）：32-35.

［2］Mokhtar D M，Zaccone G，Alesci A，et al. Main components of fish immunity：an overview of the fish immune system［J］. Fishes，2023，8（2）：93.

［3］Zhu L Y，Nie L，Zhu G，et al. Advances in research of fish immune-relevant genes：a comparative overview of innate and adaptive immunity in teleosts［J］. Developmental amp; Comparative Immunology，2013，39（1/2）：39-62.

［4］Kordon A O，Pinchuk L，Karsi A.Adaptive immune system in fish［J］. Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences，2021，22（4）：TRJFAS20235.

［5］徐 昊，梁化亮，戈賢平，等. 團(tuán)頭魴必需氨基酸營(yíng)養(yǎng)研究進(jìn)展［J］. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2020，32（11）：5105-5116.

［6］Kwak A，Lee Y，Kim H，et al. Intracellular interleukin （IL）-1 family cytokine processing enzyme［J］. Archives of Pharmacal Research，2016，39（11）：1556-1564.

［7］Wang W，Wang J Y，Lei L N，et al. Characterisation of IL-15 and IL-2Rβ in grass carp：IL-15 upregulates cytokines and transcription factors of type 1 immune response and NK cell activation［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2020，107：104-117.

［8］Secombes C J，Wang T，Bird S.The interleukins of fish［J］. Developmental amp; Comparative Immunology，2011，35（12）：1336-1345.

［9］薛婷婷，鄭津輝，周 密，等. 褐牙鲆白細(xì)胞介素21基因克隆及表達(dá)分析［J］. 水產(chǎn)科學(xué)，2020，39（2）：151-159.

［10］Ogryzko N V，Renshaw S A，Wilson H L. The IL-1 family in fish：swimming through the muddy waters of inflammasome evolution［J］. Developmental amp; Comparative Immunology，2014，46（1）：53-62.

［11］Sáenz-Martínez D E，Santana P A，Aróstica M，et al. Immunodetection of rainbow trout IL-8 cleaved-peptide：tissue bioavailability and potential antibacterial activity in a bacterial infection context［J］. Developmental amp; Comparative Immunology，2021，124：104182.

［12］Tsai J L，Jose Priya T A，Hu K Y，et al. Grouper interleukin-12，linked by an ancient disulfide-bond architecture，exhibits cytokine and chemokine activities［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2014，36（1）：27-37.

［13］Zhang X Y，Cao M，Xue T，et al. Characterization of IL-17/IL-17R gene family in Sebastes schlegelii and their expression profiles under Aeromonas salmonicida and Edwardsiella piscicida infections［J］. Aquaculture，2022，551：737901.

［14］Zhang A Y，Jian X Y，Wang D，et al. Characterization and bioactivity of grass carp （Ctenopharyngodon idella） interleukin-21：inducible production and involvement in inflammatory regulation［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2020，99：19-26.

［15］Chen L，Liu J，Yan J，et al. Cloning and characterization of type Ⅳ interferon from black carp Mylopharyngodon piceus［J］. Developmental amp; Comparative Immunology，2023，140：104614.

［16］Qi Z T，Nie P，Secombes C J，et al. Intron-containing type I and type Ⅲ IFN coexist in amphibians：refuting the concept that a retroposition event gave rise to type Ⅰ IFNs［J］. The Journal of Immunology，2010，184（9）：5038-5046.

［17］孔德榮，王智誠(chéng)，劉海映，等. 重組魚類干擾素研究進(jìn)展［J］. 河北漁業(yè)，2016（7）：75-78，84.

［18］Ohta T，Ueda Y，Ito K，et al. Anti-viral effects of interferon administration on sevenband grouper，Epinephelus septemfasciatus［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2011，30（4/5）：1064-1071.

［19］Matsuura Y，Takano T，Matsuyama T，et al. Development of a method to quantify endogenous IFNγ protein in amberjack species［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2020，107：251-259.

［20］劉 峰，李家樂. 草魚免疫因子研究進(jìn)展［J］. 上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，18（4）：502-507.

［21］Luo Y，Liu L，Yang P，et al. Advances in intestinal mucosal immunoglobulins of teleost fish （review）［J］. Israeli Journal of Aquaculture-Bamidgeh，2019，71：1-8.

［22］Wu L T，Yang Y J，Gao A L，et al. Teleost fish IgM+plasma-like cells possess IgM-secreting，phagocytic，and antigen-presenting capacities［J］. Frontiers in Immunology，2022，13：1016974.

［23］Gutzeit C，Chen K，Cerutti A. The enigmatic function of IgD：some answers at last［J］. European Journal of Immunology，2018，48（7）：1101-1113.

［24］Zhang Y A，Salinas I，Li J，et al. IgT，a primitive immunoglobulin class specialized in mucosal immunity［J］. Nature Immunology，2010，11（9）：827-835.

［25］Ryo S，Wijdeven R H M，Tyagi A，et al. Common carp have two subclasses of bonyfish specific antibody IgZ showing differential expression in response to infection［J］. Developmental amp; Comparative Immunology，2010，34（11）：1183-1190.

［26］Zhu L Y，Lin A F，Shao T，et al. B cells in teleost fish act as pivotal initiating APCs in priming adaptive immunity：an evolutionary perspective on the origin of the B-1 cell subset and B7 molecules［J］. The Journal of Immunology，2014，192（6）：2699-2714.

［27］Zhao H，Stet R J M，Skjdt K，et al. Expression and characterization of recombinant single-chain salmon class I MHC fused with β2-microglobulin with biological activity［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2008，24（4）：459-466.

［28］馬自有. 草魚補(bǔ)體分子C3a通過(guò)受體C3aR促進(jìn)IgM+B細(xì)胞吞噬活性的研究［D］. 武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2022：3-5.

［29］Liao Z W，Wan Q Y，Yuan G L，et al. The systematic identification and mRNA expression profiles post viral or bacterial challenge of complement system in grass carp Ctenopharyngodon idella［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2019，86：107-115.

［30］Kato Y，Nakao M，Shimizu M，et al. Purification and functional assessment of C3a，C4a and C5a of the common carp （Cyprinus carpio） complement［J］. Developmental amp; Comparative Immunology，2004，28（9）：901-910.

［31］Li M F，Zhang H Q，Sun J S. A novel C1qDC （PoC1qDC） with a collagen domain in Paralichthys olivaceus mediates complement activation and against bacterial infection［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2023，132：108472.

［32］Qi P Z，Wu B，Guo B Y，et al. The complement factor H （CFH） and its related protein 2 （CFHR2） mediating immune response in large yellow croaker Larimichthys crocea［J］. Developmental amp; Comparative Immunology，2018，84：241-249.

［33］Cardwell T N，Sheffer R J，Hedrick P W. MHC variation and tissue transplantation in fish［J］. Journal of Heredity，2001，92（4）：305-308.

［34］Dirscherl H，McConnell S C，Yoder J A，et al. The MHC class Ⅰ genes of zebrafish［J］. Developmental amp; Comparative Immunology，2014，46（1）：11-23.

［35］Li C H，Ding F F，Chen J，et al. Cloning，expression，and functional analyses of MHC class Ⅱ A in ayu，Plecoglossus altivelis［J］. Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences，2018，18（9）：1091-1100.

［36］王冠杰，胡國(guó)斌. Toll樣受體9（TLR9）在魚類中的研究進(jìn)展［J］. 畜牧獸醫(yī)科技信息，2021（2）：17-18.

［37］Gao Q X，Xiao Y P，Zhang C J，et al. Molecular characterization and expression analysis of toll-like receptor 2 in response to bacteria in silvery pomfret intestinal epithelial cells［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2016，58：1-9.

［38］Tang X Q，Yang M J，Liu J X，et al. Identification，functional characterization and expression pattern of myeloid differentiation factor 88 （MyD88） in Nibea albiflora［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2022，124：380-390.

［39］Lauriano E R，F(xiàn)aggio C，Capillo G，et al. Immunohistochemical characterization of epidermal dendritic-like cells in giant mudskipper，Periophthalmodon schlosseri［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2018，74：380-385.

［40］Chen W，Cotten M L. Expression，purification，and micelle reconstitution of antimicrobial piscidin 1 and piscidin 3 for NMR studies［J］. Protein Expression and Purification，2014，102：63-68.

［41］Chen Y Y，Zhao H，Zhang X S，et al. Identification，expression and bioactivity of Paramisgurnus dabryanus β-defensin that might be involved in immune defense against bacterial infection［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2013，35（2）：399-406.

［42］Hilton K B，Lambert L A. Molecular evolution and characterization of hepcidin gene products in vertebrates［J］. Gene，2008，415（1/2）：40-48.

［43］Chen J Y，Lin W J，Lin T L.A fish antimicrobial peptide，tilapia hepcidin TH2-3，shows potent antitumor activity against human fibrosarcoma cells［J］. Peptides，2009，30（9）：1636-1642.

［44］何建瑜，劉慧慧，薛超波. 魚類鐵調(diào)素（Hepcidin）的研究進(jìn)展［J］. 水產(chǎn)養(yǎng)殖，2011，32（7）：50-53.

［45］Uzzell T，Stolzenberg E D，Shinnar A E，et al. Hagfish intestinal antimicrobial peptides are ancient cathelicidins［J］. Peptides，2003，24（11）：1655-1667.

［46］Chen C，Wang A L，Zhang F，et al. The protective effect of fish-derived cathelicidins on bacterial infections in zebrafish，Danio rerio［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2019，92：519-527.

［47］張 潔，王國(guó)棟. 雜色鮑C型溶菌酶基因的克隆及表達(dá)分析［J］. 集美大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2020，25（5）：328-335.

［48］魏世娜，秦啟偉. 魚類溶菌酶和組織蛋白酶研究進(jìn)展［J］. 廣西科學(xué)，2018，25（1）：32-35.

［49］顏倩倩，陶 妍，李 雯，等. 鯉魚c型溶菌酶在畢赤酵母中的重組表達(dá)及其抑菌活性［J］. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2019，27（11）：1912-1922.

［50］邱本丹.大黃魚溶菌酶對(duì)鰻弧菌脅迫的響應(yīng)研究［D］. 舟山：浙江海洋大學(xué)，2016：6-9.

［51］岳志遠(yuǎn)，張 儀，郭云海，等. 福壽螺感染廣州管圓線蟲后G型溶菌酶基因差異表達(dá)分析［J］. 中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志，2019，37（3）：326-331.

［52］Itoh N，Takahashi K G. A novel peptidoglycan recognition protein containing a goose-type lysozyme domain from the Pacific oyster，Crassostrea gigas［J］. Molecular Immunology，2009，46（8/9）：1768-1774.

［53］Zhao J M，Song L S，Li C H，et al. Molecular cloning of an invertebrate goose-type lysozyme gene from Chlamys farreri，and lytic activity of the recombinant protein［J］. Molecular Immunology，2007，44（6）：1198-1208.

［54］El-Maradny Y A，El-Fakharany E M，Abu-Serie M M，et al. Lectins purified from medicinal and edible mushrooms：insights into their antiviral activity against pathogenic viruses［J］. International Journal of Biological Macromolecules，2021，179：239-258.

［55］Ayona D，F(xiàn)ournier P E，Henrissat B，et al. Utilization of galectins by pathogens for infection［J］. Frontiers in Immunology，2020，11：1877.

［56］吳寶蘭. 黃姑魚抗菌肽和凝集素基因的免疫功能研究［D］. 廈門：集美大學(xué)，2021：3-6.

［57］盧軍浩，李蘭蘭，權(quán)金強(qiáng)，等. 小瓜蟲對(duì)虹鱒組織病理變化及TLR信號(hào)通路基因表達(dá)影響［J］. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2022，30（4）：739-750.

［58］歐陽(yáng)號(hào)鋒，韓 崇，盧灝銘，等. 翹嘴鱖雄性特異NLRP3基因cDNA的克隆及表達(dá)分析［J］. 海南熱帶海洋學(xué)院學(xué)報(bào)，2021，28（5）：1-8.

［59］張 珍，楊桂文，黃建勛，等. 鯉魚NLR-C基因分子克隆及其特性分析［J］. 濟(jì)南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2013，27（1）：92-96.

［60］Yang Y，Yu H，Li H，et al. Transcriptome profiling of grass carp （Ctenopharyngodon idellus） infected with Aeromonas hydrophila［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2016，51：329-336.

［61］許寶紅. 感病草魚脾臟的比較轉(zhuǎn)錄組分析［D］. 長(zhǎng)沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012：1-11.

［62］潘玉財(cái). 虹鱒感染IHNV后脾臟的轉(zhuǎn)錄組分析及復(fù)方中草藥對(duì)其非特異性免疫的影響［D］. 蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，2022：1-13.

［63］Niu J J，Sun M M，Li Z Y，et al. Whole transcriptome analysis provides new insight on immune response mechanism of golden pompano （Trachinotus ovatus） to Amyloodinium ocellatum infestation［J］. Aquaculture，2022，560：738396.

［64］Zhao X L，Wan J J，F(xiàn)u J P，et al. Identification of SNPs associated with disease resistance in juveniles of Sinonovacula constricta using RNA-seq and high-resolution melting analysis［J］. Aquaculture，2021，544：737109.

［65］趙 飛，譚愛萍，孔璐璐，等. 多子小瓜蟲感染后草魚TLR信號(hào)通路基因的表達(dá)動(dòng)態(tài)［J］. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2019，50（9）：1885-1892.

［66］高風(fēng)英. 尼羅羅非魚RLR與NLR家族6個(gè)基因的克隆、功能分析及IPS-1基因、NOD1基因SNPs與抗病性狀的相關(guān)性分析［D］. 上海：上海海洋大學(xué)，2018：7-13.

［67］Liu Y P，Du H L，Wang S H，et al. Grass carp （Ctenopharyngodon idella） TNK1 modulates JAK-STAT signaling through phosphorylating STAT1［J］. Developmental amp; Comparative Immunology，2021，116：103951.

［68］Huang Y H，Huang X H，Yan Y，et al. Transcriptome analysis of orange-spotted grouper （Epinephelus coioides） spleen in response to Singapore grouper iridovirus［J］. BMC Genomics，2011，12：556-556.

［69］Mo Z Q，Wu H C，Hu Y T，et al. Transcriptomic analysis reveals innate immune mechanisms of an underlying parasite-resistant grouper hybrid （Epinephelus fuscogutatus×Epinephelus lanceolatus）［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2021，119：67-75.

［70］Serradell A，Torrecillas S，Makol A，et al. Prebiotics and phytogenics functional additives in low fish meal and fish oil based diets for European Sea bass （Dicentrarchus labrax）：effects on stress and immune responses［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2020，100：219-229.

［71］Gisbert E，F(xiàn)ournier V，Solovyev M，et al. Diets containing shrimp protein hydrolysates provided protection to European sea bass （Dicentrarchus labrax） affected by a Vibrio pelagius natural infection outbreak［J］. Aquaculture，2018，495：136-143.

［72］Yuan X M，Yao J Y，Liu L，et al. Preparation of liposome-encapsulated interferon alpha （IFN-α） vaccine and anti-grass carp reovirus effect［J］. Aquaculture Research，2019，50（9）：2600-2607.

［73］Huang Y C，Cai S H，Pang H Y，et al. Immunogenicity and efficacy of DNA vaccine encoding antigenic AcfA via addition of the molecular adjuvant Myd88 against Vibrio alginolyticus in Epinephelus coioides［J］. Fish amp; Shellfish Immunology，2017，66：71-77.

［74］Connelly M T，McRae C J，Liu P J，et al. Lipopolysaccharide treatment stimulates Pocillopora coral genotype-specific immune responses but does not alter coral-associated bacteria communities［J］. Developmental and Comparative Immunology，2020，109：103717.