復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)公犢牛腎陽(yáng)虛功能性腹瀉療效觀察

馬尚杰，馬 強(qiáng)，張 晉

（甘肅省家畜繁育改良管理站，甘肅武威 733000）

21 世紀(jì)以來(lái)，微生態(tài)制劑研發(fā)一直是行業(yè)內(nèi)的研究熱點(diǎn)。眾多研究表明微生態(tài)制劑可以提高飼料轉(zhuǎn)化率并提升動(dòng)物免疫力，但其對(duì)幼齡家畜消化道疾病的預(yù)防、治療方面臨床應(yīng)用甚少[1,2]。微生態(tài)制劑具有無(wú)毒、不產(chǎn)生耐藥性，長(zhǎng)期存活于消化道等優(yōu)點(diǎn)，在疾病診療中是最理想的抗生素替代品，因此利用微生態(tài)制劑治療疾病具有一定科研價(jià)值[3,4]。腎陽(yáng)虛是最為常見(jiàn)的犢牛腹瀉病類(lèi)型，且公犢牛臨床癥狀表征突出，以公犢牛腎陽(yáng)虛功能性腹瀉病癥為基礎(chǔ)研究微生態(tài)制劑對(duì)消化系統(tǒng)的干預(yù)作用最具代表性。本文旨在建立腎陽(yáng)虛功能性腹瀉公牛犢模型，并用復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)其進(jìn)行治療，為復(fù)合微生態(tài)制劑的科研提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 微生態(tài)制

復(fù)合微生態(tài)制劑配方：枯草芽孢桿菌+植物乳桿菌+低聚果糖。單一微生態(tài)制劑配方：枯草芽抱桿菌制劑（活菌數(shù)109CFU/g）。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

雄性3 月齡內(nèi)公犢牛72 頭（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所提供），體重(100±20)kg，飼養(yǎng)于武威市牛樂(lè)有限責(zé)任公司養(yǎng)殖場(chǎng)，自由飲水和采食。

1.1.3 試驗(yàn)器材

采血針、手術(shù)刀、醫(yī)用手套、一次性注射器、電子體溫計(jì)、真空采血管、電子天平、冷凝回流裝置、實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)用超純水機(jī)CREAT、SHZ循環(huán)水真空泵、恒溫箱和電冰箱等。

1.1.4 主要試劑

75%酒精（批號(hào)201910087）購(gòu)自于甘肅蘭州生工生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；甲醛（批號(hào)20190106）購(gòu)自北京化工廠生產(chǎn)；水合氯醛（批號(hào)20190620）購(gòu)自于北京北方生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 預(yù)試驗(yàn)

選西門(mén)塔爾公犢牛12 頭，隨機(jī)分為3 組，分別為：對(duì)照組、模型組、復(fù)合微生態(tài)制劑組。除腎陽(yáng)虛功能性腹瀉模型組采取肌肉注射氫化可的松以外，其余均進(jìn)行灌服給藥，給藥前后測(cè)體溫、體重，預(yù)試驗(yàn)為期7d。

1.2.2 正式試驗(yàn)

挑選72 頭公牛犢，隨機(jī)分為6 組，對(duì)照組、復(fù)合微生態(tài)制劑高、中、低劑量組、單一組和腎陽(yáng)虛模型組，各組處理方式見(jiàn)表1。各組公犢牛體重進(jìn)行t 檢驗(yàn)，P=0.378＞0.05，差異不顯著，說(shuō)明各組之間犢牛體質(zhì)量差別不會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成影響。犢牛分群飼養(yǎng)，接受自然光照，可自由飲水和采食。公犢?；A(chǔ)日糧與飼養(yǎng)管理按《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 中國(guó)地鼠飼養(yǎng)管理》（DB14/T 1945—2019）標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。正式試驗(yàn)于2023 年6 月15 日至8 月3 日進(jìn)行，共計(jì)50d。

表1 各試驗(yàn)組處理劑量

1.2.3 公犢牛臨床癥狀觀察

造模和給藥前對(duì)72 頭公犢牛進(jìn)行體溫和體重的測(cè)量，觀察并記錄其精神狀態(tài)，采食量，飲水量，體毛光澤度和是否有蜷縮，弓背姿態(tài)等一般臨床癥狀。給藥和造模1h 后，再測(cè)量體重和體溫，觀察是否出現(xiàn)蜷縮弓背姿態(tài)等一般理指標(biāo)。

1.2.4 公犢牛的剖檢和采樣

試驗(yàn)第25、50 天觀察犢牛腹瀉情況，用羅馬Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)診斷，計(jì)算腹瀉發(fā)病率。給藥共計(jì)50d，第50 天給藥結(jié)束后，注射水合氯醛麻醉公犢牛后頸靜脈采血，以4000r/min 離心15min 分離血清；處死公犢牛后，每組選4 頭體重差異較小公犢牛，取腎臟、睪丸、丘腦、垂體、下丘腦稱(chēng)重并采樣于甲醛溶液中固定。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析

上述記錄的數(shù)據(jù)錄入Excel 2010，由他人核查數(shù)據(jù)，保證數(shù)據(jù)的高度精確后，導(dǎo)入SPSS 21.0 進(jìn) 行t 檢 驗(yàn)，P＜0.05 表示差異顯著。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

由表2 可知，灌服后腎陽(yáng)虛功能性腹瀉模型組、微生態(tài)組與對(duì)照組相比，體溫、體重顯著降低（P＜0.05），說(shuō)明微生態(tài)制劑可能對(duì)公犢牛體溫、體重具有一定影響。

表2 預(yù)試驗(yàn)用藥前后平均體重和平均溫度

2.2 正式試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 一般臨床癥狀

對(duì)照組公犢牛在試驗(yàn)流程中被毛光滑潔白、活動(dòng)性高、食欲飲水良好；模型組漸漸出現(xiàn)精神萎靡、倦怠少動(dòng)、弓背豎毛、體溫與體重度降低等癥狀，伴隨給藥天數(shù)的延長(zhǎng)，上述癥狀日益明顯，且出現(xiàn)不同程度的腹瀉，表明模型建立成功；復(fù)合微生態(tài)制劑組與單一組無(wú)肉眼可見(jiàn)臨床癥狀變化。

2.2.2 用藥后對(duì)公犢牛體重、體溫、腹瀉率和臟器系數(shù)的影響

由表3 可知，模型組與空白組相比體重顯著降低（P＜0.05），表明腎陽(yáng)虛功能性腹瀉證公犢牛體重增長(zhǎng)緩慢；高劑量組與單一組相比，體重顯著升高（P＜0.05），表明復(fù)合微生態(tài)制劑與單一促進(jìn)腎陽(yáng)虛功能性腹瀉公犢牛體重增長(zhǎng)，而且復(fù)合微生態(tài)制劑的促進(jìn)效果隨用藥劑量升高而提升。

表3 用藥后公犢牛體重、體溫、腹瀉率和臟器系數(shù)對(duì)比

模型組與空白組相比體溫差顯著降低（P＜0.05），與腎陽(yáng)虛功能性腹瀉臨床癥狀畏寒肢冷是相互一致的，證明本試驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⒊晒?；?fù)合微生態(tài)制劑低劑量組、高劑量組與模型組體溫相比顯著升高（P＜0.05），表明復(fù)合微生態(tài)制劑與單一均能促進(jìn)公犢牛產(chǎn)熱致使體溫升高，且復(fù)合微生態(tài)制劑明顯優(yōu)于單一微生態(tài)制劑。

模型組下丘腦和垂體臟器系數(shù)均高于對(duì)照組（P＜0.05），表明腎陽(yáng)虛功能性腹瀉損傷公犢牛下丘腦-腺垂體系統(tǒng)功能，抑制神經(jīng)、體液性聯(lián)系；復(fù)合微生態(tài)制劑高劑量組與模型組相比，下丘腦和垂體臟器系數(shù)明顯偏高（P＜0.05），表明復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)下丘腦與垂體作用效果明顯，能調(diào)節(jié)腎陽(yáng)虛模型公犢牛下丘腦與垂體的機(jī)能。

模型組與空白組相比，睪丸指數(shù)顯著降低（P＜0.05），且均低于其他組，表明腎陽(yáng)虛證引起睪丸萎縮，降低睪丸質(zhì)量。單一組、復(fù)合微生態(tài)制劑與對(duì)照組相比，睪丸質(zhì)量無(wú)顯著差異（P＞0.05），表明單一微生態(tài)制劑與復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)腎陽(yáng)虛證引起的睪丸萎縮均有療效。

腎陽(yáng)虛模型組腹瀉率最高（44.81%），證明公犢牛腎陽(yáng)虛癥狀常伴隨腹瀉的出現(xiàn)；復(fù)合微生態(tài)制劑組和單一組腹瀉率明顯低于模型組，證明微生態(tài)制能降低腹瀉的發(fā)生。第50 天時(shí)復(fù)合微生態(tài)制中劑量試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，腹瀉率降低，但低劑量、高劑量組高于對(duì)照組，低于單一組和模型組，證明微生態(tài)制劑對(duì)腎陽(yáng)虛功能性腹瀉有一定治療作用。

3 結(jié)論

復(fù)合微生態(tài)制劑與單一枯草芽抱桿菌制劑均能改善公犢牛腎陽(yáng)虛功能性腹瀉臨床癥狀，增加公犢牛體重、下丘腦和垂體指數(shù)，提升公犢牛體溫，改善機(jī)體下丘腦—垂體—睪丸軸的功能，從而降低腹瀉的發(fā)生。在體溫調(diào)節(jié)方面，復(fù)合微生態(tài)制劑療效整體優(yōu)于單一枯草芽抱桿菌制劑。復(fù)合微生態(tài)制劑給藥量10.2g/(kg·d)時(shí)治療腎陽(yáng)虛功能性腹瀉效果最佳。