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    ‘三友金香’七寶十條筋黃金瓜新品種親本組織培養(yǎng)提純復(fù)壯技術(shù)

    2023-12-22 11:38:21邢博聞趙晟晨湯桂鈞胡海峰姜亮趙韻王能殷麗青
    上海農(nóng)業(yè)科技 2023年4期
    關(guān)鍵詞:七寶三友試管

    邢博聞 趙晟晨 湯桂鈞 胡海峰 姜亮 趙韻 王能 殷麗青

    (1 上海市閔行區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心,上海 201109;2 上海三友種苗有限公司,上海 201617;3 上海市閔行區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)服務(wù)中心,上海 201199;4 上海市閔行區(qū)三農(nóng)綜合服務(wù)中心,上海 201109;5上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院林木果樹(shù)研究所,上海 201403) *為通信作者

    七寶十條筋黃金瓜是上海市四大名瓜之一,距今已有100 多年的栽培歷史,深受廣大市民青睞,2019年被列為農(nóng)產(chǎn)品地理標(biāo)志產(chǎn)品?!呀鹣恪怯缮虾H逊N苗有限公司于近年通過(guò)雜交配組選育而成的七寶十條筋黃金瓜新品種(F1代組合),2017年12月注冊(cè)登記為國(guó)家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部非主要農(nóng)作物新品種[編號(hào):GPD甜瓜(2017)310036][1]。2018年開(kāi)始,‘三友金香’作為可替代老七寶十條筋黃金瓜的新品種,在長(zhǎng)三角地區(qū)被廣泛推廣應(yīng)用。

    甜瓜為異花授粉作物,常受昆蟲(chóng)、風(fēng)力等外界自然因素的影響而產(chǎn)生天然雜交,致使品種的優(yōu)良遺傳性狀發(fā)生退化與變異。為保證其種性長(zhǎng)期不發(fā)生混雜和退化,生產(chǎn)單位常采用人工單株(單瓜)選擇的方法進(jìn)行提純復(fù)壯,以獲得純合一致的種子。鑒于七寶十條筋黃金瓜是異花授粉作物,采用人工單株(單瓜)選擇的方法進(jìn)行提純復(fù)壯,其效果甚微,更無(wú)法脫病毒。而應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù),特別是莖尖離體培養(yǎng)方法,不僅可有效解決品種退化和自然雜交混雜的問(wèn)題,還具有工廠化快繁、脫病毒的優(yōu)勢(shì)。例如,廣泛采用莖尖脫毒方法,可在無(wú)菌條件下培養(yǎng)獲得脫毒植株[2]。在此背景下,為了使‘三友金香’七寶十條筋黃金瓜新品種優(yōu)良種性不退化及保持雜交雙親的高度純合,筆者進(jìn)行了‘三友金香’七寶十條筋黃金瓜新品種親本組織培養(yǎng)提純復(fù)壯技術(shù)研究,主要通過(guò)應(yīng)用莖尖離體培養(yǎng)方法,對(duì)其雜交雙親(編號(hào)為M2014-09 虎皮斑金黃十條筋和M2014-18 橙黃斑金黃十條筋)進(jìn)行提純復(fù)壯,最終育出了優(yōu)質(zhì)試管苗,經(jīng)鑒定純度達(dá)99%以上?,F(xiàn)將相關(guān)研究結(jié)果報(bào)道如下,以期為‘三友金香’七寶十條筋黃金瓜新品種的推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

    1 外植體發(fā)生培養(yǎng)

    1.1 雜交雙親來(lái)源

    在原七寶十條筋黃金瓜的原始群體中,通過(guò)多年多代自交、回交,選育獲得高純度的親本材料。其中,以M2014-09 虎皮斑金黃十條筋黃金瓜為母本,M2014-18 橙黃斑金黃十條筋黃金瓜為父本。

    1.2 外植體取材

    2個(gè)親本于3月上旬在上海三友種苗有限公司位于閔行區(qū)浦江鎮(zhèn)育種基地的塑料大棚內(nèi)進(jìn)行育苗;4月中旬進(jìn)行移栽;5 月上旬、主蔓4 葉1 心時(shí)進(jìn)行摘心,不久主蔓即抽生2~3根子蔓;待到5月中下旬、子蔓長(zhǎng)至5 葉以上時(shí),剪取長(zhǎng)度約4 cm 的子蔓頂端作為外植體,存放于塑料瓶中,并擰緊瓶蓋,以防其失水萎蔫。

    1.3 外植體的清洗與消毒

    將剪取的子蔓頂端用洗潔精清洗3遍后,用干凈紗布包裹,然后置于水龍頭下用自來(lái)水沖洗2 h。然后,在超凈工作臺(tái)上將上述材料用3步法進(jìn)行消毒:第1 步,用75%酒精消毒1 min,無(wú)菌水沖洗1 遍;第2 步,用1∶50 的潔爾敏消毒15 min,無(wú)菌水沖洗1 遍;第3 步,用12%次氯酸鈉消毒10 min,無(wú)菌水沖洗3 遍,最后用無(wú)菌濾紙吸干材料備用。

    1.4 莖尖的剝?nèi)∨c接種

    因甜瓜屬雙子葉植物,與大部分單子葉植物相比,其莖尖不是特別明顯,故需在超凈工作臺(tái)上借助80 倍解剖鏡用解剖針、手術(shù)刀小心剝?nèi)∏o尖,長(zhǎng)度掌握在0.5~1.0 mm;切取莖尖以下0.5 cm 長(zhǎng)度的頂端,接種于發(fā)生培養(yǎng)基上,每瓶接種1 個(gè)莖尖,以誘導(dǎo)莖尖生長(zhǎng),使其成為無(wú)菌系的“叢生芽”。

    1.5 發(fā)生培養(yǎng)

    發(fā)生培養(yǎng)基配方以MS+BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L(另加瓊脂粉5 g/L、蔗糖30 g/L,調(diào)節(jié)pH 至5.8 左右)較為適宜,培養(yǎng)室溫度為24 ℃、24 h 恒溫,光照時(shí)間為12 h/d(7:00—19:00),光照強(qiáng)度為3 000 lx 左右(采用LED 光源),光照與溫度實(shí)行自動(dòng)調(diào)節(jié)控制,最終莖尖發(fā)生成功率可達(dá)98%,且莖尖生長(zhǎng)早而快。

    2 無(wú)菌系的繼代增殖培養(yǎng)

    2.1 繼代增殖培養(yǎng)基配方

    繼代增殖培養(yǎng)基配方以MS+BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L(另加瓊脂粉5 g/L、蔗糖30 g/L,調(diào)節(jié)pH 至5.8 左右)較為適宜,在25 d 增殖1 次的情況下,增殖系數(shù)可保持在1∶3.0~4.5的合理區(qū)間內(nèi),且瓶苗生長(zhǎng)健壯,無(wú)“玻璃苗”產(chǎn)生。

    2.2 培養(yǎng)周期

    繼代增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)周期以25 d左右為宜,在此培養(yǎng)周期內(nèi),瓶苗葉色正常,叢生芽生長(zhǎng)較多,枝條直立挺拔。當(dāng)培養(yǎng)周期超過(guò)25 d(尤其是超過(guò)30 d)時(shí),瓶苗生長(zhǎng)變差,葉色褪淡甚至發(fā)黃,部分枝條細(xì)長(zhǎng)扭曲,達(dá)不到壯苗的標(biāo)準(zhǔn)。

    2.3 培養(yǎng)室條件

    繼代增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)室溫度為25 ℃、24 h 恒溫,光照時(shí)間為12 h/d(7:00—19:00),光照強(qiáng)度為3 500 lx 左右(采用LED 光源),光照與溫度實(shí)行自動(dòng)調(diào)節(jié)控制。值得注意的是,在繼代增殖培養(yǎng)中,需掌握好培養(yǎng)室的光照強(qiáng)度。當(dāng)光照強(qiáng)度在3 000 lx 以上時(shí),瓶苗生長(zhǎng)良好;當(dāng)光照強(qiáng)度低于3 000 lx時(shí),瓶苗表現(xiàn)不佳,甚至?xí)霈F(xiàn)較多的“玻璃苗”,這可能與七寶黃金瓜喜光、喜溫的生物學(xué)特性有關(guān)。

    3 無(wú)菌系的生根培養(yǎng)

    3.1 生根培養(yǎng)方法

    當(dāng)繼代增殖培養(yǎng)的瓶苗長(zhǎng)至高3 cm 左右、無(wú)“玻璃苗”產(chǎn)生時(shí),即可進(jìn)行生根培養(yǎng),從而培育成完整的“試管苗”。具體方法為:將瓶苗中的“叢生芽”切成單株(因節(jié)間處富含生長(zhǎng)素類(lèi)物質(zhì),容易生根,故切割時(shí)要切在節(jié)間處),接種至生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根。當(dāng)生根苗根系長(zhǎng)度達(dá)1 cm左右時(shí),即可將瓶苗移出培養(yǎng)室,置于常規(guī)室溫、自然光照條件下培養(yǎng)24 h,使其適應(yīng)外界氣候環(huán)境。

    3.2 生根培養(yǎng)基配方

    生根培養(yǎng)基配方以1/2MS+IBA 0.2 mg/L(另加瓊脂粉5 g/L、蔗糖20 g/L、鐵鈉鹽38.23 mg/L,調(diào)節(jié)pH 至5.8 左右)較為適宜,培養(yǎng)3 周后,其生根率可達(dá)99%以上,有時(shí)可達(dá)100%,且根系為白色、較發(fā)達(dá),每株有5~6條根(多的可達(dá)10余條根)。值得注意的是,為利于試管苗煉苗馴化及提高成活率,不宜采用NAA 作為生根誘導(dǎo)劑,這是因?yàn)椴捎肗AA 作生根誘導(dǎo)劑的瓶苗生根狀況不如采用IBA作生根誘導(dǎo)劑,表現(xiàn)為瓶苗根少、粗短,且會(huì)在根基部著生愈傷組織,而當(dāng)生根培養(yǎng)苗基部產(chǎn)生愈傷組織后,會(huì)導(dǎo)致其生根數(shù)減少甚至不生根[3]。

    3.3 生根培養(yǎng)室管理

    生根培養(yǎng)的培養(yǎng)室溫度為24~25 ℃、24 h 恒溫,當(dāng)90%以上幼苗開(kāi)始生根、根系長(zhǎng)度為0.3 mm時(shí),將培養(yǎng)室溫度調(diào)至22~23 ℃,以使根系粗壯飽滿(mǎn),同時(shí)可防止因溫度過(guò)高而使葉片蒸騰黃化;光照時(shí)間為12 h/d(7:00—19:00),光照強(qiáng)度為3 000~3 500 lx。

    4 試管苗的煉苗馴化

    4.1 試管苗清洗

    用鑷子將生根并適應(yīng)24 h的試管苗輕輕取出培養(yǎng)瓶,于清水中漂盡根部瓊脂。此階段葉片較脆嫩,操作時(shí)需注意不要傷及葉片。

    4.2 煉苗基質(zhì)

    煉苗基質(zhì)以泥炭∶椰糠∶珍珠巖=2∶1∶1(質(zhì)量比)為好,基質(zhì)在充分拌和后噴一些清水,以使基質(zhì)保持濕潤(rùn)。

    4.3 試管苗移栽

    穴盤(pán)育苗法是目前國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用的育苗技術(shù),尤其在組培育苗中應(yīng)用較多[4],故試管苗同樣采用穴盤(pán)育苗法進(jìn)行煉苗馴化。試管苗的移栽時(shí)間以2 月下旬—4月下旬為宜,具體操作為:先將充分拌和的基質(zhì)裝入72孔的硬質(zhì)塑料穴盤(pán),然后將穴盤(pán)置于苗床上;用鑷子或竹片將試管苗筆直淺栽入穴盤(pán)基質(zhì),栽后立即澆足活棵水;移栽后在苗床上方搭好塑料小環(huán)棚,如遇晴熱天氣,需用75%遮光率的黑色遮陽(yáng)網(wǎng)覆蓋,以防幼苗失水萎蔫。

    4.4 煉苗期管理

    4.4.1 葉面噴霧補(bǔ)水

    鑒于2個(gè)親本的試管苗葉片相對(duì)較大,但葉片較薄,極易失水萎蔫,故需在移栽后第2天進(jìn)行葉面噴霧補(bǔ)水。若苗床上方有噴淋裝置,則每天葉面噴霧3~5次,每次噴霧20 s(視天氣情況靈活掌握噴霧次數(shù),陰天噴霧補(bǔ)水1~2次,晴天則相應(yīng)增加噴霧補(bǔ)水次數(shù));若無(wú)噴淋裝置,可用噴霧器進(jìn)行葉面噴霧補(bǔ)水。

    4.4.2 掌握好適宜的棚內(nèi)溫度

    上海地區(qū)春季天氣多變,棚內(nèi)溫度忽高忽低,對(duì)幼苗生長(zhǎng)十分不利,因此應(yīng)根據(jù)天氣變化情況,因地制宜地采取應(yīng)對(duì)措施,保障棚內(nèi)溫度適宜(棚內(nèi)溫度以24~28 ℃為好,最高不超過(guò)30 ℃),以確保幼苗正常生長(zhǎng)。

    4.4.3 適時(shí)追肥

    待幼苗長(zhǎng)出新根和新葉后,應(yīng)適時(shí)追施速效化肥,以0.5%尿素或三元復(fù)合肥(N∶P∶K=15∶15∶15,質(zhì)量分?jǐn)?shù))兌水澆灌為好,每月追肥2次,以促進(jìn)幼苗正常生長(zhǎng)。

    4.5 穴盤(pán)苗適時(shí)移栽

    當(dāng)穴盤(pán)苗長(zhǎng)至高度8 cm以上并具5張以上葉片時(shí),即可將穴盤(pán)苗拔出,連帶基質(zhì)一起移栽至育苗大棚內(nèi)。

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