腦膠質(zhì)瘤患者血清lncRNA NEAT1表達與放療敏感性的關(guān)系

董正航 李洋洋 高亞楠

腦膠質(zhì)瘤是大腦和脊髓膠質(zhì)細胞癌變所產(chǎn)生的最常見的原發(fā)性顱內(nèi)惡性腫瘤。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示[1],腦膠質(zhì)瘤發(fā)病率占顱內(nèi)腫瘤的35%～60%,且近年來呈現(xiàn)逐年升高的趨勢?，F(xiàn)階段臨床上治療腦膠質(zhì)瘤主要以手術(shù)切除為主,同時配合放、化療的綜合性治療來改善患者疾病癥狀。但臨床研究發(fā)現(xiàn),即使腫瘤直徑、腫瘤數(shù)目等相同,癌癥患者放射治療仍存在較大差異,因而在放療前預(yù)測放療敏感性對臨床調(diào)整治療方案具有重要意義[2]。長鏈非編碼核糖核酸(ong noncoding RNA,lncRNA)是長度大于200堿基的非編碼RNA,最初被認為不具有生物學(xué)活性。但也有研究表明lncRNA在基因表達、核內(nèi)運輸、細胞凋亡過程發(fā)揮重要作用[3]。核富集轉(zhuǎn)錄體(nuclear enriched abundant transcript 1,NEAT1)通過RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄獲得。近年來,有較多研究指出lncRNA NEAT1與胃癌[4]、卵巢癌[5]、肝癌[6]等多種疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)?；诖?本研究旨在探討腦膠質(zhì)瘤患者血清lnc RNA NEAT1表達與放療敏感性的關(guān)系,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2019年9月至2022年9月收治的96例腦膠質(zhì)瘤患者作為研究對象,入院患者年齡32～64歲,平均年齡(46.25±10.57)歲;男性44例,女性52例;體重指數(shù)19～25 kg/m2,平均體重指數(shù)(21.65±3.15)19～25 kg/m2;病理分級Ⅰ～Ⅱ級36例,Ⅲ～Ⅳ級60例;腫瘤直徑<4 cm 36例,≥4 cm 60例。納入標準:①符合《腦膠質(zhì)瘤診療規(guī)范》[7]中診斷標準;②經(jīng)病理檢查確診;③術(shù)前均未接受放療、化療等抗癌治療;④功能狀態(tài)評分>70分;⑤臨床資料完整。排除標準:①合并糖尿病等慢性疾病;②放療不耐受;③肝、腎功能障礙;④合并其他惡性腫瘤;⑤合并艾滋病等免疫缺陷疾病。本研究經(jīng)我院倫理委員審核批準通過。

1.2 放療方法

通過CT斷層掃描采集解剖圖像,在相同的體位下融合MRI圖像,將重要器官和腫瘤靶區(qū)進行勾畫。使用磁共振T2 flair勾畫出大體腫瘤;GTV+2.5 cm,病灶靶體積外放2.5 cm,包括腫瘤周圍亞臨床病變;亞臨床病變外擴,CTV+0.3～0.5 cm。采用瑞典Elekta公司生產(chǎn)的Precise 1120直線加速器以220 cGy/min的劑量率對患者進行6MV X線治療,單次劑量1.8～2.2 Gy,隨后縮野至GTV+1.5 cm,1次/天,每周5次,連續(xù)治療4周。

1.3 觀察指標

(1)收集患者臨床資料,包括年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)、病理分級、腫瘤直徑、腫瘤位置、腫瘤數(shù)目。(2)提取RNA及實時檢測NEAT1水平:采取Trizol法提取組織總RNA,在提取過程中保證吸光度值在1.9～2.0范圍。提取1 μl總RNA,根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進行逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,完成后采用PCR檢測方法檢測NEAT1水平。將CAPDH基因作為參考基因,探針及引物序列:NEAT1引物正向5'-T TGGCTAGCTCAGGGCTTCAG-3',反向5'-TCTCCTTGCCAAGCTTCCTTC-3',CAPDH引物正向:5'-TGTTGCCATCAATGACCCCTT-3',反向 5'-CTC-CACGACGTACTCAGCG-3'。采用2-△△Ct法進行計算,得到NEAT1水平,試驗步驟至少重復(fù)3次。(3)敏感性參照WTO的RECIST標準評估[8]:①靶病灶消失,且持續(xù)時間>4周為完全緩解;②靶病灶體積縮小超過50%,且持續(xù)時間>4周為部分緩解;③靶病灶體積縮小<50%或增大<25%為疾病穩(wěn)定;④靶病灶體積增大>25%,或出現(xiàn)新病灶為疾病進展。放療敏感為完全緩解+部分緩解,放療耐受為疾病穩(wěn)定+疾病進展。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組標準根治術(shù)放療效果

96例腦膠質(zhì)瘤患者中放療敏感78例,放療耐受18例,放療敏感率81.25%。

2.2 2組臨床資料比較

放療敏感組病理分級Ⅰ～Ⅱ級患者所占比高于放療耐受組(P<0.05);2組年齡、性別、體重指數(shù)、腫瘤直徑、腫瘤位置、腫瘤數(shù)目比較,無顯著差異(P>0.05),見表1。

表1 2組臨床資料比較

2.3 2組血清lnc RNA NEAT1水平比較

放療敏感組血清lnc RNA NEAT1為(2.04±0.69)、放療耐受組為(3.21±1.05),放療敏感組血清lnc RNA NEAT1低于放療耐受組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=5.828,P<0.05)。見圖1。

圖1 2組血清lnc RNA NEAT1水平比較

2.4 腦膠質(zhì)瘤發(fā)生放療耐受的多因素Logistic回歸分析

以放療是否敏感為因變量,以病理分級、血清lnc RNA NEAT1作為自變量,進行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示血清lnc RNA NEAT1是腦膠質(zhì)瘤患者放療耐受的影響因素(P<0.05),見表2。

表2 腦膠質(zhì)瘤發(fā)生放療耐受的多因素Logistic回歸分析

3 討論

腦膠質(zhì)瘤是34歲以下腫瘤患者的第2位死亡原因,是35～54歲患者的第3位死亡原因[9]。腦膠質(zhì)瘤偏良性者生長緩慢,病程較長,但惡性者腫瘤體生長快,病程短,多數(shù)患者在確診1年內(nèi)死亡,具有發(fā)病率高、死亡率高、復(fù)發(fā)率高及治愈率低的特點[10]。目前,腦膠質(zhì)瘤以手術(shù)治療為主,但由于生長位置及侵襲性生長的特殊性,即使術(shù)中達到影像學(xué)全切除,但仍有部分腫瘤細胞殘余,造成預(yù)后較差,大部分患者需接受放射治療,但由于癌細胞的放射抗拒性會降低放療敏感性,導(dǎo)致治療失敗[11]。因此,在放療前有效評估放療敏感性對臨床治療方案的調(diào)整尤為重要。

采用精準放療治療腦膠質(zhì)瘤患者放療敏感率為75%[12]。本組資料顯示,96例腦膠質(zhì)瘤患者中放療敏感78例,放療敏感率81.25%,略高于上述文獻報道,可能是與本研究存在病理分級Ⅰ～Ⅱ級患者有關(guān)。目前,癌細胞的放射抗拒機制尚不明確,多數(shù)癌細胞處于不同周期,對放療敏感性也存在差異。WHO將腦膠質(zhì)瘤Ⅰ～Ⅱ級為低等級膠質(zhì)瘤,若早期能得到有效診斷和治療,預(yù)后相對較好;Ⅲ～Ⅳ級為高等級膠質(zhì)瘤,生長速度快,預(yù)后較差[13]。 有研究發(fā)現(xiàn)[14],對于低級別的腦膠質(zhì)瘤患者,盡可能全切腫瘤,術(shù)后輔以放療,其無進展生存時間及生活質(zhì)量會得到顯著的提升。同時還有研究指出[15],病理分級是影響惡性腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后的危險因素。本研究結(jié)果顯示,放療敏感組病理分級Ⅰ～Ⅱ級所占比均高于放療耐受組,表明低等級膠質(zhì)瘤患者對放療較為敏感。lnc RNA屬于長鏈非編碼RNA,余永佳等[16]學(xué)者提出,lncRNA是一種新發(fā)現(xiàn)的RNA轉(zhuǎn)錄本,一些lncRNA異常表達與腦膠質(zhì)瘤的復(fù)發(fā)相關(guān),參與了腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生與發(fā)展。lncRNA NEAT1是核旁斑重要結(jié)構(gòu)的組織部分,通過靶向上調(diào)下游癌基因(如RTCB)表達,促進腫瘤細胞的生長及遷移。同時還有學(xué)者提出[17],lncRNA NEAT1在人腦膠質(zhì)瘤中表達水平升高,其表達水平與預(yù)后顯著相關(guān),這一研究結(jié)果的提出為腦膠質(zhì)瘤患者血清lncRNA NEAT1與放療敏感性的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。本研究結(jié)果顯示,放療敏感組血清lnc RNA NEAT1低于放療耐受組,提示血清lnc RNA NEAT1表達升高可能導(dǎo)致患者放療敏感性降低。Xufei F等[18]研究表明,血清lnc RNA NEAT1受到微小RNA-18a-5p在轉(zhuǎn)錄后水平上的抑制,RNA-18a-5p表達水平下調(diào),使血清lnc RNA NEAT1穩(wěn)定性增高,從而引起其水平的升高,提示腫瘤持續(xù)性生長,發(fā)生復(fù)發(fā)的風(fēng)險較高,因而臨床療效較差,患者表現(xiàn)出對放療不敏感。我們進一步分析了腦膠質(zhì)瘤患者血清lnc RNA NEAT1與放療敏感的關(guān)系,多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示,血清lnc RNA NEAT1高表達是腦膠質(zhì)瘤患者放療耐受的影響因素,通過檢測血清lnc RNA NEAT1水平表達可為臨床腦膠質(zhì)瘤早期制定放療方案提供參考。

綜上所述,腦膠質(zhì)瘤患者血清lnc RNA NEAT1表達與放療敏感性密切相關(guān),血清lnc RNA NEAT1高表達是腦膠質(zhì)瘤患者發(fā)生放療耐受的危險因素。