復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)幼貓生長(zhǎng)指標(biāo)和免疫功能的影響

◆作者：肖再利 唐超 趙世元 ?；?黎華浩

◆單位：佛山市雷米高動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)保健科技有限公司

近年來(lái)，養(yǎng)貓人數(shù)激增，根據(jù)《中國(guó)寵物行業(yè)白皮書(shū)》，2021年城鎮(zhèn)貓數(shù)量為5806 萬(wàn)只，貓的整體年齡較低，2 歲以下貓咪占比56.9%，養(yǎng)寵時(shí)間在1 年以內(nèi)的貓主人占比26.9%，說(shuō)明在養(yǎng)貓人群中，幼貓的占比較大。然而幼貓的抵抗力較差。因此，貓咪自身免疫力的加強(qiáng)顯得十分重要，通過(guò)寵物食品來(lái)幫助貓咪提高免疫力尚為一種可行方式。

目前，市場(chǎng)上能夠提供激活免疫力的營(yíng)養(yǎng)素較多，如維生素C、牛磺酸、β- 胡蘿卜素、牛初乳、羊初乳和β- 葡聚糖等（王昱丁等，2018）。根據(jù)前人研究報(bào)道，在幼貓飼糧中添加0.1%的牛初乳粉，有助于增強(qiáng)機(jī)體免疫力（GORE 等，2021）；飼糧中添加0.03%和0.05%殼寡糖，成貓血清的免疫球蛋白A（Immunoglobulin A，IgA）水平顯著上升（王莎等，2022）；在育成羔羊飼糧中添加10 g/kg 黃芪根粉，能改善平均日增重、抗氧化和免疫功能（HAO 等，2020），而黃芪多糖應(yīng)用在蛋雞飼糧上，具有提高禽流感疫苗抗體效果的趨勢(shì)（王天元，2016）。此外，β- 葡聚糖也報(bào)道過(guò)具有增強(qiáng)動(dòng)物免疫、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的作用（賈淑庚等，2014）。然而，這些營(yíng)養(yǎng)素以組合形式添加在幼貓飼糧中的研究尚未報(bào)道。因此，本試驗(yàn)?zāi)康氖翘骄繉ⅫS芪、牛初乳粉、殼寡糖和β- 葡聚糖以適宜添加量組成的復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)幼貓生長(zhǎng)指標(biāo)、血常規(guī)指標(biāo)和免疫功能的影響，以期為復(fù)合免疫增強(qiáng)成分在貓糧上的應(yīng)用提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所使用的黃芪購(gòu)自安徽某生物科技公司，牛初乳粉購(gòu)自上海某生物科技有限公司，殼寡糖購(gòu)自陜西某生物科技有限公司，β- 葡聚糖購(gòu)自湖北某股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選用24 只4～6 月齡、體重為1.7±0.4kg 的健康英短藍(lán)貓幼貓，公母各半，隨機(jī)分為3組，每組8 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分為低濃度組（飼喂基礎(chǔ)飼糧+0.30%黃芪+0.10%牛初乳粉+0.025%殼寡糖+0.025%β- 葡聚糖）和高濃度組（飼喂基礎(chǔ)飼糧+0.60%黃芪+0.20%牛初乳粉+0.05%殼寡糖+0.05%β- 葡聚糖）復(fù)合免疫增強(qiáng)成分，配制基礎(chǔ)飼糧參照NRC（2006）中幼貓營(yíng)養(yǎng)需要 和 國(guó) 標(biāo)《GB/T 31217-2014 全價(jià)寵物食品貓糧》，基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平參見(jiàn)表1。預(yù)飼期7d，正式試驗(yàn)期14d。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理

本試驗(yàn)所有的貓飼養(yǎng)于同一貓舍，單籠飼養(yǎng)。試驗(yàn)前已做好驅(qū)蟲(chóng)和按照常規(guī)免疫程序注射三聯(lián)疫苗。貓的飼喂時(shí)間分別為每天08:00 和16:00 各飼喂30g 飼糧，記錄每餐的采食量和每天的糞便評(píng)分，糞便評(píng)分（fecal score,FS）標(biāo)準(zhǔn)參考表2。試驗(yàn)期間保持貓舍清潔，通風(fēng)良好，保證貓咪自由飲水。每日糞便評(píng)分后，鏟干凈貓砂，日常做好環(huán)境的消毒清潔。動(dòng)物試驗(yàn)在廣東省云浮市雷米高犬貓科學(xué)試驗(yàn)中心進(jìn)行。

表2 糞便評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1.4 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.4.1 日采食量和糞便評(píng)分

日采食量（g/d）= 統(tǒng)計(jì)期內(nèi)總采食量/ 天數(shù)

糞便評(píng)分= 統(tǒng)計(jì)期內(nèi)總糞便評(píng)分/ 統(tǒng)計(jì)次數(shù)

1.4.2 血液指標(biāo)檢測(cè)

于試驗(yàn)前1 天和第14 天08:00 空腹采集貓左前肢靜脈血1.5 mL，取0.5mL 入乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na2）抗凝管中，充分抗凝，用于血常規(guī)指標(biāo)測(cè)定。使用BC-5000 Vet 邁瑞獸用全自動(dòng)血常規(guī)分析儀，測(cè)定了紅細(xì)胞、白細(xì)胞及血小板相關(guān)指標(biāo)，具體包括：白細(xì)胞數(shù)目、中性粒細(xì)胞數(shù)目及百分比、淋巴細(xì)胞數(shù)目及百分比、單核細(xì)胞數(shù)目及百分比、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目及百分比、嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)目及百分比、紅細(xì)胞數(shù)目、血紅蛋白濃度（HGB）、紅細(xì)胞壓積、平均紅細(xì)胞體積、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)、紅細(xì)胞分布寬度標(biāo)準(zhǔn)差、血小板數(shù)目、平均血小板體積、血小板分布寬度和血小板壓積。剩下1 mL置于管內(nèi)，常溫傾斜30min 后以3000 r/min 離心15min，收集血清于-20℃冰箱保存，用于測(cè)定血清免疫球蛋白 A（Immunoglobulin A，IgA）、免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）和免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM）含量，采用貓酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒（購(gòu)自江蘇酶免生物科技有限公司）進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 數(shù)據(jù)分析

用EXCEL 2019 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，三組比較采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，Duncan’s 方法進(jìn)行多重比較，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P＜0.05 代表差異顯著。兩組比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，采用Graphpad Prism 8.0 軟件進(jìn)行圖形繪制，*表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)幼貓生長(zhǎng)指標(biāo)的影響

由表3 可知，三組貓的試驗(yàn)前體重?zé)o差異（P＞0.05），飼糧中添加復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)貓咪的試驗(yàn)后體重、日采食量及糞便評(píng)分均無(wú)顯著影響（P＞0.05）。其中各組的糞便評(píng)分均在2～3 分，屬正常糞便。

表3 復(fù)合免疫成分增強(qiáng)劑對(duì)貓咪生長(zhǎng)指標(biāo)的影響

2.2 復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)幼貓血常規(guī)指標(biāo)的影響

由表4 可知，飼糧中添加復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)幼貓血液中的白細(xì)胞數(shù)目、中性粒細(xì)胞數(shù)目及百分比、淋巴細(xì)胞數(shù)目及百分比、單核細(xì)胞數(shù)目及百分比、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目及百分比、嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)目及百分比、紅細(xì)胞數(shù)目、血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞壓積、平均紅細(xì)胞體積、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)、紅細(xì)胞分布寬度標(biāo)準(zhǔn)差、血小板數(shù)目、平均血小板體積、血小板分布寬度和血小板壓積均無(wú)顯著影響（P＞0.05），均在正常范圍內(nèi)。

表4 復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)幼貓血常規(guī)指標(biāo)的影響

表4 復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)幼貓血常規(guī)指標(biāo)的影響（續(xù)）

2.3 復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)幼貓血清免疫指標(biāo)的影響

由圖1 可知，試驗(yàn)前后，試驗(yàn)各組幼貓的血清IgA 和IgG均無(wú)顯著變化（P＞0.05）。而與試驗(yàn)前相比，試驗(yàn)后高濃度組顯著提高了幼貓血清IgM 的水平（P＜0.05），試驗(yàn)前平均值6.59 mg/L，試驗(yàn)后平均值8.55 mg/L，提升幅度為29.74%，這表明飼喂含高濃度復(fù)合免疫增強(qiáng)成分的飼糧能顯著提高貓咪的免疫力。

圖1 復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)幼貓血清免疫指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)貓咪生長(zhǎng)指標(biāo)的影響

在寵物行業(yè)，1-12 月齡的貓為幼貓，12 月齡以上的貓為成貓。貓的一生中，幼貓由于離開(kāi)原有的母體喂養(yǎng)，免疫力低下，容易生病，因此幼貓的免疫情況尤為重要（夏婷婷，2022）。而幼貓的生長(zhǎng)情況，如體重、采食量和糞便情況恰恰是判斷幼貓是否處于健康狀況最直觀的表現(xiàn)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，三組幼貓?jiān)谠囼?yàn)后體重?zé)o差異，說(shuō)明幼貓?jiān)谠囼?yàn)期間，體重的增幅無(wú)差異，均表現(xiàn)出良好的生長(zhǎng)，幼貓糧中添加免疫增強(qiáng)成分在短期內(nèi)對(duì)幼貓能達(dá)到同樣的增重效果。另一結(jié)果顯示，飼喂添加復(fù)合免疫增強(qiáng)成分的貓糧對(duì)貓咪采食量也無(wú)顯著影響，表明在飼糧中添加以黃芪為主要的復(fù)合免疫增強(qiáng)成分不會(huì)影響貓糧的適口性，這與前人研究結(jié)果相似，HAO 等（2020）在育肥羔羊飼糧中添加5～30 g/kg 黃芪，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)飼糧的干物質(zhì)攝入量與基礎(chǔ)飼糧無(wú)差異。

貓咪的糞便情況反映糧食在貓咪體內(nèi)的消化情況，也間接反映貓咪健康狀況。本試驗(yàn)結(jié)果表示，與對(duì)照組相比，飼糧中添加復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)貓咪的糞便評(píng)分無(wú)顯著影響。其中，高濃度組貓咪的糞便情況與對(duì)照組更為接近，而低濃度組的糞便評(píng)分雖在數(shù)值上高于對(duì)照組，但在2-3 分，屬于正常糞便。王莎等（2022）研究表明，飼糧中加入0.03%和0.05%殼寡糖能保持成年貓糞便正常, 對(duì)糞便初水分無(wú)顯著影響，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。王忠等（2007）在飼糧中添加50 mg/kgβ-1,3/1,6- 葡聚糖飼喂斷奶仔豬，顯著提高日增重和降低腹瀉發(fā)生率，這與本試驗(yàn)結(jié)果不相一致，可能是因?yàn)橐环矫鏀嗄套胸i比本試驗(yàn)4 月齡幼貓的生長(zhǎng)速度更快，另一方面28日齡斷奶仔豬更易受到外界環(huán)境影響而造成腹瀉。以上結(jié)果表明，當(dāng)飼糧中添加復(fù)合免疫增強(qiáng)成分，糧食的消化效果較好，可以維持貓咪良好的糞便狀況。

3.2 復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)幼貓血常規(guī)指標(biāo)的影響

機(jī)體血液中有著參加機(jī)體免疫功能的主要成分，如白細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，以及血漿中的抗體等相關(guān)免疫蛋白（張立春等，2018），其數(shù)量的變化通常代表著機(jī)體抵抗疾病能力高低和健康程度，而健康的機(jī)體內(nèi)相關(guān)細(xì)胞和蛋白含量會(huì)處于相對(duì)恒定的范圍（ABDEL等，2016）。本試驗(yàn)中各組幼貓血常規(guī)指標(biāo)都處在正常范圍，說(shuō)明試驗(yàn)幼貓較為健康，而飼糧中添加復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)血常規(guī)指標(biāo)無(wú)顯著影響，證明能夠保持幼貓的機(jī)體健康。目前，關(guān)于飼糧中添加黃芪、牛初乳粉、殼寡糖和β- 葡聚糖對(duì)動(dòng)物血常規(guī)指標(biāo)影響的報(bào)道較少，王天元等（2016）在海蘭褐蛋雞飼糧中添加維生素C 和黃芪多糖，發(fā)現(xiàn)對(duì)平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量及濃度、白細(xì)胞數(shù)目、紅細(xì)胞體積、壓積及數(shù)目、血紅蛋白影響不顯著，這與本試驗(yàn)結(jié)果相似。有報(bào)道表明，飼糧中添加200 mg/kgβ-1,3/1,6- 葡聚糖可極顯著提高仔豬血清球蛋白水平,顯著降低血清總膽固醇和低密度脂蛋白水平,對(duì)血清甘油三酯、高密度脂蛋白和葡萄糖的水平均無(wú)顯著影響，同樣也證明復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)幼貓機(jī)體的安全性（王忠等，2007）。

3.3 復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)幼貓血清免疫指標(biāo)的影響

免疫系統(tǒng)主要由免疫器官、細(xì)胞和分子構(gòu)成，免疫分子中的免疫球蛋白IgA、IgG 與IgM 的含量是反映免疫功能的重要指標(biāo)，具有高特異性和高親和性（王莎等，2022）。因此，免疫球蛋白的提高，對(duì)動(dòng)物免疫機(jī)能的提升具有一定意義。據(jù)前人研究報(bào)道，本研究使用的黃芪（馬學(xué)明，2022）、牛初乳（SATYARAJ 等，2013）、殼寡糖（張麗萍等，2016）和β- 葡聚糖（唐佩娟等，2014；楊天驕等，2008；劉影等，2003）均有提高動(dòng)物機(jī)體免疫力的相關(guān)報(bào)道，但目前研究多集中在單獨(dú)添加，以復(fù)合形式添加的報(bào)道較少。本研究結(jié)果表明，與試驗(yàn)前相比，復(fù)合免疫增強(qiáng)成分對(duì)幼貓血清的IgA 和IgG 無(wú)影響，能夠顯著提高IgM 的含量，這可能是由于本次添加的復(fù)合成分均具有提高免疫力的作用。

黃芪是一種可飼用天然植物，其中有多糖、甲苷、黃酮、生物堿等多種有效成分，在體內(nèi)外均有較好的免疫調(diào)節(jié)作用。目前大多報(bào)道集中在黃芪多糖，舒迎霜等（2019）在犬糧中添加1%和2%黃芪多糖發(fā)現(xiàn)，顯著提高犬血清中IgA、IgG、IgM 和γ 干擾素水平，促進(jìn)犬小腸IgA mRNA 和分泌型IgA 蛋白表達(dá)，提高機(jī)體免疫力。趙桂秀等（2012）使用0.5 mL/（kg 體重）黃芪多糖給犬肌肉注射，發(fā)現(xiàn)不僅大幅度提高機(jī)體C3、C4 補(bǔ)體水平，還能顯著提高機(jī)體IgG 和IgA 的含量。

免疫球蛋白是牛初乳中最主要的免疫因子，其中IgG 約占免疫球蛋白總含量的（楊紅等，2022）。GORE 等（2021）和SATYARAJ 等（2013）分別在幼貓和犬的飼糧中添加0.1%噴霧干燥牛初乳，均發(fā)現(xiàn)加強(qiáng)了糞便IgA的表達(dá)以及更高的疫苗反應(yīng)。

殼寡糖是由2-10 個(gè)氨基葡萄糖通過(guò)β-1,4- 糖苷鍵鏈接而成的低聚糖（胡志鵬，2003），王莎等（2022） 在貓糧中添加0.03%和0.05%殼寡糖，顯著提高成貓血清總蛋白和IgA 水平。LAN 等（2020）報(bào)道，飼糧中添加殼寡糖可以減輕熱應(yīng)激引起的肉雞腸道氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)（降低十二指腸和空腸黏膜IL-1β含量）。

β葡聚糖普遍存在于細(xì)菌、真菌、酵母和植物細(xì)胞壁中。劉影等（2003）在飼糧中添加β-1,3/1,6- 葡聚糖，發(fā)現(xiàn)提高了肉仔雞的體液免疫和細(xì)胞免疫，主要體現(xiàn)在提高法氏囊的重量和新城疫疫苗的抗體水平和免疫應(yīng)答。同樣地，研究顯示，實(shí)驗(yàn)小鼠口服β- 葡聚糖4 周以后，增強(qiáng)了體液免疫活性，主要體現(xiàn)在B淋巴細(xì)胞數(shù)量、IgM 和IgG 的含量顯著增加（VETVICKA 等，2007）。VOJTEK 等（2017）報(bào)道，幼犬口服可溶性葡聚糖4 mg·kg-1·d-1，比未口服幼犬更早達(dá)到抗狂犬病毒和抗犬細(xì)小病毒2型抗體的保護(hù)水平。王忠等（2007） 在飼糧中添加50～200 mg/kgβ-1,3/ 1,6- 葡聚糖飼喂斷奶仔豬，發(fā)現(xiàn)可極顯著提高血清球蛋白的濃度，表明可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。

以上研究均表明，飼糧中添加黃芪、牛初乳、β- 葡聚糖和殼聚糖可以提高動(dòng)物機(jī)體免疫能力。但在寵物貓上的研究還需要更為長(zhǎng)期和更多的試驗(yàn)驗(yàn)證，作用機(jī)理也需進(jìn)一步探索。

4 結(jié)論

飼糧中添加復(fù)合免疫增強(qiáng)成分（0.60%黃芪+0.20%牛初乳粉+0.05%殼寡糖+0.05%β- 葡聚糖），幼貓的采食量、糞便評(píng)分均可保持正常，能顯著提高幼貓血清中IgM的水平，增強(qiáng)幼貓免疫力，呵護(hù)貓咪健康成長(zhǎng)。

參考文獻(xiàn)：（略）