茅尾海紅樹(shù)根際土壤可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性及抑菌活性研究

李王靖, 李 蜜, 徐淑芬, 黎芳婷, 易湘茜, 劉永宏, 高程海*

( 1. 廣西中醫(yī)藥大學(xué) 海洋藥物研究院/藥學(xué)院, 南寧 530200; 2. 廣西海洋藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 南寧530200 )

紅樹(shù)植物因受潮汐活動(dòng)影響而長(zhǎng)期被海水周期性淹沒(méi),獨(dú)特的生境蘊(yùn)藏豐富且特殊的微生物資源,由于生長(zhǎng)環(huán)境特殊及現(xiàn)有分離技術(shù)手段有限,因此僅1%的紅樹(shù)林微生物資源可通過(guò)現(xiàn)有分離方法獲得(李蜜等,2020)。廣西茅尾海紅樹(shù)林地處亞熱帶海灣,海水溫度較高且鹽度較低, 適宜桐花樹(shù)和秋茄等鄉(xiāng)土紅樹(shù)植物生長(zhǎng),近幾年從國(guó)外引入大量無(wú)瓣海桑(黃祥娟等,2022),具有生態(tài)系統(tǒng)復(fù)雜、微生物群落結(jié)構(gòu)特殊和活性微生物多樣性豐富等特征。顏棟美等(2018)從茅尾海無(wú)瓣海桑根際土壤中,分離獲得57株細(xì)菌,其中有1株潛在新菌種,50.88%的菌株對(duì)甘蔗鞭黑粉菌具有抑制作用。鄭紅蕓等(2019)從茅尾海紅樹(shù)植物根際淤泥中獲得244株放線(xiàn)菌,60株隸屬鏈霉菌屬,4株為潛在新物種。抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,83株放線(xiàn)菌中有59株對(duì)多種致病菌具有抑制作用,包括1株潛在新菌,6株細(xì)菌表現(xiàn)出廣譜的抑菌活性。葉景靜等(2018)使用8種培養(yǎng)基從3種紅樹(shù)植物中分離獲得261株細(xì)菌,其中3株為潛在新物種,83株放線(xiàn)菌中有10株具有廣譜抑菌活性。Lu等(2019)從茅尾海紅樹(shù)植物土壤的1株小單孢菌中分離得到對(duì)耐藥大腸桿菌和藥敏肺炎克雷伯菌有較強(qiáng)抑制活性的7個(gè)喹諾啉類(lèi)抗生素,包括quinomycin A, quinomycin monosulfoxide和5個(gè)新化合物。Li等(2019)和Gong等(2018)從茅尾海紅樹(shù)林分別發(fā)現(xiàn)5株具有產(chǎn)生核糖體抑制劑的細(xì)菌和16株含有I型聚酮合酶和II型聚酮合成酶的菌株。由此可見(jiàn),茅尾海紅樹(shù)林菌株資源豐富,部分菌株對(duì)多種致病菌有抑菌效果且活性顯著,有開(kāi)發(fā)成為抗生素的潛力。

富集培養(yǎng)作為一種分離未培養(yǎng)和難培養(yǎng)微生物的方法,被驗(yàn)證能夠有效促進(jìn)海洋細(xì)菌從休眠狀態(tài)下復(fù)蘇(王肖慢等,2019),分離得到多樣性豐富的微生物。該方法已在海洋沉積物中被應(yīng)用,Mu等(2018)研究結(jié)果顯示,富集培養(yǎng)后同一樣品相比傳統(tǒng)培養(yǎng)方法微生物物種多樣性提高2倍以上。目前還未有文獻(xiàn)報(bào)道使用富集培養(yǎng)法富集紅樹(shù)林根際土壤微生物。因此,本研究使用該方法富集微生物提高其物種多樣性,具有較大研究?jī)r(jià)值。

抗生素作為人類(lèi)對(duì)抗感染性疾病的有效武器,在人類(lèi)社會(huì)中扮演著重要角色。由于抗生素在農(nóng)業(yè)、醫(yī)療等各個(gè)領(lǐng)域的濫用,因此促使了致病菌耐藥性的產(chǎn)生,從而推動(dòng)了抗生素耐藥危機(jī)爆發(fā)(王旭陽(yáng)等,2020),人類(lèi)將面臨無(wú)有效抗生素可用的“后抗生素時(shí)代”。預(yù)計(jì)到2050年,抗生素耐藥危機(jī)每年可能造成約1 000萬(wàn)人死亡(El-Kurdi et al.,2020)。2014—2019年臨床研究結(jié)果顯示,金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和銅綠假單胞菌是臨床上最為常見(jiàn)的人體致病菌,對(duì)當(dāng)前常見(jiàn)的抗生素具有耐藥性(全國(guó)細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng),2021)。因此,開(kāi)發(fā)新型有效的抗生素迫在眉睫,而尋找能夠產(chǎn)生新型抗生素的菌株是前提條件。本研究以茅尾海不同種類(lèi)紅樹(shù)植物根際土壤為對(duì)象,首次嘗試用富集培養(yǎng)法分離共生細(xì)菌,用紙片法對(duì)菌株代謝產(chǎn)物粗提物進(jìn)行抑菌活性篩選,擬探討:(1)富集培養(yǎng)法能否從紅樹(shù)植物根際土壤中分離得到多樣性豐富的微生物;(2)富集培養(yǎng)法能否有效從紅樹(shù)植物根際土壤中分離到未培養(yǎng)和難培養(yǎng)的微生物;(3)紅樹(shù)林環(huán)境樣品是否存在具有抑菌活性的微生物資源。以期挖掘更多潛在新物種和具有抑制人類(lèi)致病菌活性的微生物資源,為抗生素的開(kāi)發(fā)提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 根際土壤樣品的采集 2021年9月于茅尾海紅樹(shù)林自治區(qū)級(jí)自然保護(hù)區(qū)采集紅樹(shù)植物紅海欖、黃槿、無(wú)瓣海桑、桐花樹(shù)、闊苞菊的根際泥土樣本。采集5～10 cm深度的紅樹(shù)植物根際土壤,除去石塊和斷根等雜質(zhì)后裝入無(wú)菌采樣袋存放于4 ℃保溫箱中,帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行菌株分離實(shí)驗(yàn)。樣品采集信息詳情如表1所示。

表 1 茅尾海紅樹(shù)根際土壤樣品采集的信息Table 1 Information of collected mangrove rhizosphere soil samples from the Maowei Sea

1.1.2 檢定菌來(lái)源 表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)和銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)由廣東省微生物研究所提供。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcusaureus)由廣西中醫(yī)藥大學(xué)海洋藥物研究院提供。

1.1.3 主要試劑及儀器設(shè)備 二甲基亞砜(DMSO)和甲醇為國(guó)產(chǎn)分析純,購(gòu)于西隴科學(xué)股份有限公司;聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)引物(27F, 1492R)購(gòu)于北京全式金生物技術(shù)有限公司;Chelex-100 樹(shù)脂購(gòu)于美國(guó) BioRad 公司;Taq PCR Master Mix (2 ×)購(gòu)于康為世紀(jì)生物科技股份有限公司。

1.1.4 培養(yǎng)基 富集培養(yǎng)基:氯化銨1.0 g,乙酸鈉2.0 g,七水硫酸鎂0.20 g,酵母提取物0.20 g,蛋白胨0.20 g,EDTA-Na21.0 g,丙酮酸鈉1.1 g,海水1 L,滅菌后另加無(wú)菌的10% NaHCO3和2% KH2PO4溶液(10 mL·L-1)。分離培養(yǎng)基:參考李蜜等(2020)使用2216E瓊脂培養(yǎng)基(2216E)、2216E/10培養(yǎng)基、酪氨酸-天冬酰胺培養(yǎng)基(P7)、改良ISP5培養(yǎng)基(M7)、Am6-1培養(yǎng)基、燕麥培養(yǎng)基(P3)。滅菌后添加重鉻酸鉀使其終濃度為25 mg·L-1。純化及保藏培養(yǎng)基:ISP2和LB固體培養(yǎng)基。發(fā)酵培養(yǎng)基:AM3和AM6液體培養(yǎng)基。檢定菌培養(yǎng)基:LB固體培養(yǎng)基。

1.2 方法

1.2.1 土壤樣品的處理 參照王肖慢等(2019)的方法,取20 g土壤加入滅菌后的500 mL液體富集培養(yǎng)基(Mu et al.,2018)中,震蕩混勻,置于28 ℃恒溫箱靜置培養(yǎng),分別于第0天和第7天取原液、10-1和10-3稀釋液,在6種不同的分離培養(yǎng)基上涂布培養(yǎng)(李蜜等,2020)。

1.2.2 菌株的分離純化和保藏 參考李蜜等(2020)的方法,將涂布后的培養(yǎng)基置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng),分別于第5、第17、第41天從涂布培養(yǎng)基中挑選單一菌落,采用三區(qū)劃線(xiàn)法在ISP2培養(yǎng)基上分離純化,編號(hào)且記錄其生長(zhǎng)培養(yǎng)基類(lèi)型和形態(tài)特征;將純化的菌株保藏于25%(M/M)無(wú)菌甘油管中。

1.2.3 菌株的鑒定 純化的菌株根據(jù)形態(tài)特征進(jìn)行排重,采用Chelex-100法(周雙清等,2010)對(duì)已排重細(xì)菌的基因組DNA進(jìn)行提取,參照Walsh 等(1991)的方法對(duì)細(xì)菌基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。將擴(kuò)增產(chǎn)物委托生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。經(jīng)SeqMan軟件整理16S rRNA基因測(cè)序結(jié)果,并在數(shù)據(jù)庫(kù)EzBioClou(http://www.eztaxon.org/)進(jìn)行相似性比對(duì),根據(jù)16S rRNA相似度對(duì)菌株的種屬進(jìn)行確定。

1.2.4 可培養(yǎng)細(xì)菌活性篩選

1.2.4.1 可培養(yǎng)細(xì)菌粗提物的提取 參考李蜜等(2020)的方法,將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌株分別接種于100 mL的AM3和AM6液體培養(yǎng)基中,在28 ℃、180 r·min-1恒溫振蕩培養(yǎng)箱中發(fā)酵7 d。用等體積的乙酸乙酯萃取發(fā)酵液3次,取乙酸乙酯萃取溶液進(jìn)行減壓旋蒸,揮干得到細(xì)菌粗提物,粗提物置于4 ℃環(huán)境保存。

1.2.4.2 細(xì)菌粗提物的抑菌實(shí)驗(yàn) 參考鄭紅蕓等(2019)的方法,將致病菌接種于50 mL LB液體培養(yǎng)基中,在37 ℃、180 r·min-1的搖床中培養(yǎng)7 h獲得種子液。種子液加到未凝固的LB固體培養(yǎng)基中滅菌后冷卻至50 ℃左右的LB固體培養(yǎng)基中,稀釋至0.2%濃度。充分振搖后傾注到培養(yǎng)皿中,待其冷卻后備用。

參考葉景靜等(2018)的方法。使用甲醇溶解細(xì)菌粗提物,最終配制成20 mg·mL-1溶液,取15 μL分多次滴加到直徑6 mm的無(wú)菌濾紙片中。等體積甲醇、DMSO、空白AM3培養(yǎng)基、空白AM6培養(yǎng)基的濾紙片作陰性對(duì)照。以分別加入3 μL甲氧芐啶和環(huán)丙沙星的濾紙片作為陽(yáng)性對(duì)照。37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí),觀察抑菌結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性分析

使用6種分離培養(yǎng)基從7份紅樹(shù)植物根際土壤樣品中分離到266株可培養(yǎng)細(xì)菌。根據(jù)菌株的形態(tài)特征和生長(zhǎng)情況進(jìn)行排重,通過(guò)16S rRNA基因序列測(cè)序比對(duì),鑒定獲得120種細(xì)菌,包括放線(xiàn)菌門(mén)、厚壁菌門(mén)和變形菌門(mén),隸屬于35科47屬,分離情況如表2所示。紅樹(shù)植物根際土壤中放線(xiàn)菌資源豐富,分離得到49種放線(xiàn)菌占分離菌株總數(shù)的40.8%。鏈霉菌屬 (Streptomyces)分離獲得最多,共17種,占細(xì)菌物種總數(shù)的14.2%;其次為芽孢桿菌屬(Bacillus),共獲得9種。分離得到5種潛在新菌,與有效發(fā)表菌株相比較最高相似度均低于97.00%,其中MarmoricolasilvestrisGXIMD2799、ActinomycetosporachiangmaiensisGXIMD3297、ShewanellamangroviGXIMD2807、FulvimarinamanganoxydansGXIMD2794均來(lái)源于桐花樹(shù)的根際土壤,詳細(xì)物種信息如表3所示。

2.2 不同樣品和培養(yǎng)基的獲得菌株種類(lèi)分析

經(jīng)過(guò)富集培養(yǎng)處理后,不同樣品獲得可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性差異明顯,樣品B(黃槿根際土壤)中分離得到的菌種數(shù)目最多(為43種),優(yōu)勢(shì)菌屬為微桿菌屬(Microbacterium)。其次是樣品F(桐花樹(shù)根際土壤)分離得到35種細(xì)菌,鏈霉菌屬最為豐富。樣品E(桐花樹(shù)根際土壤)中分離得到的菌種數(shù)目最少,而放線(xiàn)菌占比最高(57.89%)。此外,各樣品中均能分離得到芽孢桿菌屬和希瓦氏菌屬(Shewanella)菌株。不同樣品菌株分離情況如圖1所示。

由于不同培養(yǎng)基存在營(yíng)養(yǎng)成分差異,因此分離得到的細(xì)菌物種多樣性差異顯著。就菌種多樣性而言,P7培養(yǎng)基分離效果最好,獲得60種細(xì)菌,隸屬于18個(gè)屬,其中56.67%為放線(xiàn)菌,鏈霉菌屬最為豐富。P3培養(yǎng)基和2216E培養(yǎng)基分離得到的菌株數(shù)目最少,分別得到11種和14種菌,隸屬于10個(gè)屬和12個(gè)屬,優(yōu)勢(shì)菌屬為鏈霉菌屬。與2216E培養(yǎng)基相比,具有相同種類(lèi)成分的2216E/10培養(yǎng)基分離得到的菌株種類(lèi)更為多樣,共獲得35種菌,隸屬于20個(gè)屬。此外,壤霉菌屬(Agromyces)、芽孢桿菌屬、鏈霉菌屬和Rossellomorea在6種分離培養(yǎng)基中均有生長(zhǎng)。不同培養(yǎng)基菌株分離情況如圖2所示。

2.3 細(xì)菌發(fā)酵產(chǎn)物的抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果

9種菌株對(duì)至少一種致病菌有抑菌活性,其中7種分離自P7培養(yǎng)基。菌株StreptomyceshyderabadensisGXIMD3077、AgromyceskandeliaeGXIMD3249、StreptomycessundarbansensisGXIMD3242、CurtobacteriumluteumGXIMD3684、MicromonosporarifamycinicaGXIMD3699對(duì)3種人體致病菌均具有抑制活性。GordoniadidemniGXIMD3861、ShewanellaalgaeGXIMD3241對(duì)MRSA和銅綠假單胞菌具有抑制活性。NocardiaarthritidisGXIMD3088、GXIMD3297對(duì)銅綠假單胞菌具有一定的抑制活性。放線(xiàn)菌在抑菌活性研究方面有較大潛力,通過(guò)篩選發(fā)現(xiàn)8種活性菌株為放線(xiàn)菌,2種來(lái)源于鏈霉菌屬,其余6種菌株分別來(lái)自壤霉菌屬、短桿菌屬(Curtobacterium)、小單孢菌屬(Micromonospora)、戈登氏菌屬(Gordonia)、諾卡氏菌屬(Nocardia)和放線(xiàn)孢菌屬(Actinomycetospora),其中GXIMD3297為潛在新菌,對(duì)銅綠假單胞菌具有一定的抑菌活性。同一菌株不同發(fā)酵培養(yǎng)基其代謝產(chǎn)物抑菌活性檢測(cè)結(jié)果不同,部分菌株的抑菌活性只存在于其中一種發(fā)酵培養(yǎng)基的代謝產(chǎn)物,9株活性菌株中GXIMD3699和GXIMD3061在2種發(fā)酵培養(yǎng)基的代謝產(chǎn)物均有抑菌活性。抑菌活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4和圖3所示。

3 討論

茅尾海紅樹(shù)林海水鹽度較低且紅樹(shù)植物種類(lèi)多樣,其根際土壤微生物群落復(fù)雜。據(jù)2015—2021年的文獻(xiàn)報(bào)道,通過(guò)傳統(tǒng)分離方法從茅尾海紅樹(shù)林土壤分離得到的潛在新菌(<98.65%)比例為2.34% (張榮燦等,2015;吳家法等,2017;顏棟美等,2018;葉景靜等,2018;石松標(biāo)等,2018;鄭紅蕓等,2019)。由于海洋環(huán)境難以模擬、某些微量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺失、不同微生物之間的生物聯(lián)系切斷等制約條件,導(dǎo)致部分微生物為避免外界環(huán)境威脅,啟動(dòng)自我保護(hù)機(jī)制而陷入休眠狀態(tài)(王保軍等,2013),因此在實(shí)驗(yàn)室分離得到的菌株種類(lèi)極其有限。為分離未培養(yǎng)和難培養(yǎng)微生物,本研究采用富集培養(yǎng)法富集土壤樣品中的微生物,以期復(fù)蘇休眠菌株,提高微生物多樣性,獲得更多潛在新物種,最終分離得到5株相似度低于97.00%的菌種,潛在新菌比例為4.17%。富集培養(yǎng)所用培養(yǎng)基是在寡營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了丙酮酸鈉和乙酸鈉,為合成細(xì)菌生長(zhǎng)所需的丙酮酸和乙酰輔酶A提供底物,進(jìn)而增強(qiáng)細(xì)菌基礎(chǔ)代謝,促進(jìn)細(xì)菌復(fù)蘇,同時(shí)降解富集過(guò)程中細(xì)菌產(chǎn)生的有害代謝產(chǎn)物,在富集過(guò)程中打破部分微生物的受脅迫狀態(tài)(Mu et al.,2018;王肖慢等,2019),使其可以正常生長(zhǎng),盡可能多的分離出未培養(yǎng)和難培養(yǎng)細(xì)菌。

圖 1 不同茅尾海紅樹(shù)根際土壤分離得到的細(xì)菌種類(lèi)Fig. 1 Bacteria isolated from different mangrove rhizosphere soils of the Maowei Sea

圖 2 不同培養(yǎng)基分離得到的細(xì)菌總數(shù)Fig. 2 Total number of bacteria isolated from different media

表 2 茅尾海紅樹(shù)林樣品根際土壤可培養(yǎng)細(xì)菌Table 2 Culturable bacteria of mangrove rhizosphere soil from the Maowei Sea

表 3 潛在疑似新物種Table 3 Potential new species

本研究在富集培養(yǎng)的基礎(chǔ)上,采用6種分離培養(yǎng)基對(duì)茅尾海7份不同地點(diǎn)的紅樹(shù)植物根際土壤進(jìn)行細(xì)菌的分離純化,共獲得120種細(xì)菌,隸屬于35科47屬,鏈霉菌屬數(shù)量最多,優(yōu)勢(shì)屬與葉景靜等(2018)、鄭紅蕓等(2019)研究結(jié)果相同。不同培養(yǎng)基的菌株分離結(jié)果顯示,P7培養(yǎng)基(甘油、L-酪氨酸、L-天冬酰胺、復(fù)合鹽溶液)分離得到的菌株多樣性最豐富,共分離得到60種細(xì)菌,占總菌種數(shù)的50.00%,包括7種活性菌株。P3和2216E培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)豐富,分離效果遜于寡營(yíng)養(yǎng)的P7培養(yǎng)基。這說(shuō)明在紅樹(shù)林特殊生境中,較多微生物的生長(zhǎng)需要補(bǔ)充氨基酸,并要求培養(yǎng)基微量元素多樣、非營(yíng)養(yǎng)豐富,P7培養(yǎng)基可作為紅樹(shù)植物根際土壤微生物分離的參考培養(yǎng)基。

放線(xiàn)菌是抗生素的主要來(lái)源,為應(yīng)對(duì)抗生素耐藥危機(jī)提供重要菌種資源。抑菌活性篩選結(jié)果顯示,有9種細(xì)菌具有抑菌活性, 其中8種為放線(xiàn)菌。GXIMD3077、GXIMD3249、GXIMD3242、GXIMD3684、GXIMD3699對(duì)3種人體致病菌均有一定的抑制作用。GXIMD3249為秋茄壤霉菌(Agromyceskandeliae),最早發(fā)現(xiàn)于2020年(Wang et al., 2020),目前未見(jiàn)有抑菌活性方面的報(bào)道。GXIMD3699和GXIMD3061在兩種發(fā)酵培養(yǎng)基的代謝產(chǎn)物均有抑菌活性,其余活性菌株只篩選到一種培養(yǎng)基的代謝產(chǎn)物具有活性,說(shuō)明培養(yǎng)基的組成變化對(duì)菌株的次級(jí)代謝產(chǎn)物合成有一定的影響(孫志敏等,2022)。銅綠假單胞菌是臨床上常見(jiàn)的病原菌,容易感染人體導(dǎo)致肺炎、菌血癥和敗血癥等,對(duì)于免疫力低下人群具有嚴(yán)重的危害。其外膜通透性較低,并能產(chǎn)生碳青霉烯酶和多種β-內(nèi)酰胺酶對(duì)抗生素進(jìn)行滅活,對(duì)多種常用抗菌藥物具有明顯耐藥性(岳卓等,2020)。本研究分離得到1株最高相似度為96.61%的稀有放線(xiàn)菌GXIMD3297(Actinomycetosporachiangmaiensis),為潛在新物種,該菌在AM6液體培養(yǎng)基中的代謝產(chǎn)物對(duì)銅綠假單胞菌具有一定的抑制作用。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,該屬菌株僅在蘭花(Sakdapetsiri et al., 2018)、地衣(Yamamura et al., 2011)和土壤(Zhang et al., 2014)中被發(fā)現(xiàn),目前暫無(wú)關(guān)于該屬抑菌活性的相關(guān)研究。因此,本研究篩選到的潛在新物種GXIMD3297具有深入開(kāi)發(fā)研究的潛力。下一步計(jì)劃開(kāi)展?jié)撛谛戮亩囗?xiàng)分類(lèi)鑒定及活性菌株的條件優(yōu)化、活性化合物分離純化等,為新型抗生素的研發(fā)提供科學(xué)基礎(chǔ)。

1. 銅綠假單胞菌; 2. 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌; 3. 表皮葡萄球菌; A. AM3培養(yǎng)基; B. AM6培養(yǎng)基; C. 甲醇; D. 二甲基亞砜; E. 甲氧芐啶; F. 環(huán)丙沙星。1. Pseudomonas aeruginosa; 2. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus; 3. S. epidermidis; A. AM3 medium; B. AM6 medium; C. MeOH; D. DMSO; E. TMP; F. CPFX.圖 3 3種人體致病菌抑菌活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖Fig. 3 Results of antibacterial activity from three kinds human pathogenic bacteria

表 4 具有抑制3種人類(lèi)致病菌活性的紅樹(shù)林根際土壤可培養(yǎng)菌株Table 4 Culturable strains of mangrove rhizosphere soil with inhibitory activity against three human pathogenic bacteria

4 結(jié)論

本研究結(jié)果可為富集培養(yǎng)方法在紅樹(shù)植物根際土壤微生物分離的應(yīng)用提供參考。從茅尾海紅樹(shù)植物根際土壤中分離得到120種細(xì)菌,包括5種潛在新物種,說(shuō)明茅尾海紅樹(shù)植物根際土壤蘊(yùn)藏的微生物資源豐富,具有較大的開(kāi)發(fā)價(jià)值。抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,8種放線(xiàn)菌對(duì)多種致病菌表現(xiàn)出抑制作用,其中包括1株潛在新菌,說(shuō)明海洋放線(xiàn)菌是新型抗生素生產(chǎn)來(lái)源的潛力菌株,并且具有較大研究潛力。