四種臭椿不同葉位葉片色素組成及分布變化

鄭聰慧，徐振華，王玉忠，張蔓蔓，杜克久，李向軍，劉春鵬

（1河北省林業(yè)和草原科學(xué)研究院，河北省林木良種技術(shù)創(chuàng)新中心，石家莊 050061；2河北農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院，河北保定 071001）

0 引言

彩葉植物在城市園林綠化中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，挖掘彩葉植物資源和選育彩葉植物品種具有重要的意義。彩葉植物不同品種（系）、不同葉位（葉齡）間的葉色常常存在差異。植物葉片色素種類(lèi)和含量、葉綠體發(fā)育程度、葉片表皮結(jié)構(gòu)、葉片細(xì)胞間空隙等因素均與葉色有關(guān)[1-4]，其中色素是葉色的內(nèi)在決定物質(zhì)。高等植物葉片色素主要分為3類(lèi)，包括類(lèi)黃酮類(lèi)（以花色素苷類(lèi)為主）、類(lèi)胡蘿卜素類(lèi)和葉綠素類(lèi)[5]。為了合理應(yīng)用和配置景觀樹(shù)木，有必要研究園林樹(shù)種不同葉位葉色變化規(guī)律，解析葉片呈色化學(xué)基礎(chǔ)和葉色調(diào)控機(jī)制[6]。已有學(xué)者對(duì)金葉榆(Ulmuspumila‘Jinye’)、紫葉紫薇(Lagerstroemiaindica)、金葉女貞(Ligustrum vicaryi)、金葉連翹(Forsythiakoreana‘Sun Gold’)等彩葉植物進(jìn)行了相關(guān)研究[7-10]。

臭椿(Ailanthusaltissima(Mill) Swingle)原產(chǎn)于中國(guó)，是中國(guó)北方地區(qū)常見(jiàn)的鄉(xiāng)土樹(shù)種，全株可利用，抗逆性強(qiáng)。國(guó)內(nèi)外對(duì)臭椿的研究多集中在繁育技術(shù)、藥用價(jià)值、葉片表面結(jié)構(gòu)特征、花器官分化發(fā)育等方面[11]。近年來(lái)，中國(guó)學(xué)者選育得到幾個(gè)觀果和觀葉的新品種。其中，‘朝陽(yáng)椿’、‘千紅椿’為臭椿觀葉新品種，前者春季嫩葉為橘紅色、后漸變?yōu)樾狱S色、葉片成熟后為黃綠色，后者春季嫩葉為紫紅色、后漸變?yōu)樽睾稚?、葉片成熟后為深綠色；‘聊紅椿’為臭椿觀果新品種，紅色果皮是其最顯著的特征，同時(shí)其枝葉顏色亦異于‘普通臭椿’，春季嫩葉為紅棕色，后漸變?yōu)榫G棕色，葉片成熟后為深綠色；‘普通臭椿’相對(duì)而言葉色變化較小，嫩葉為黃棕色，后轉(zhuǎn)為深綠色。徐卉[12]對(duì)‘紅果臭椿’果實(shí)呈色機(jī)理進(jìn)行了報(bào)道。有關(guān)臭椿葉色表現(xiàn)和呈色機(jī)理尚未見(jiàn)研究。本研究以上述4種臭椿為研究對(duì)象，分葉位測(cè)定了葉片色素含量、葉色參數(shù)，觀察了葉片顯微結(jié)構(gòu)及主要呈色色素的分布位置，分析了上述指標(biāo)隨品種、葉位的變化規(guī)律，為探討臭椿葉色變異機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料及取樣

4種葉色的一年生臭椿苗木：‘朝陽(yáng)椿’、‘千紅椿’、‘聊紅椿’和‘普通臭椿’均來(lái)自河北省林業(yè)和草原科學(xué)研究院臭椿種質(zhì)資源圃（見(jiàn)圖1）。2021年7月，各種臭椿分別隨機(jī)選取5 株樹(shù)木，每株樹(shù)木選定一個(gè)當(dāng)年生向陽(yáng)枝條，于頂梢部開(kāi)始、由上而下依次選取5個(gè)存在葉色明顯轉(zhuǎn)換的葉位進(jìn)行葉片采集。其中，葉位1、2為位于枝條頂部的未舒展的幼葉，葉位3 為位于枝條中上部的部分舒展的葉片，葉位4、5 為位于枝條中部的完全舒展的健康功能葉片。4 種臭椿5 個(gè)葉位葉片的上表面顏色描述見(jiàn)表1。將同種臭椿5 株樹(shù)木相同葉位的葉片進(jìn)行混合，一部分用于葉片顯微結(jié)構(gòu)及顏色的觀察，另一部分置于-40℃冰箱中保存待測(cè)。

表1 葉片顏色描述

圖1 四種臭椿一年生苗木外觀

1.2 色素含量及比值的測(cè)算

1.2.1 葉綠素和類(lèi)胡蘿卜素對(duì)不同品種臭椿，分葉位各稱(chēng)取采集的葉片0.2 g，磨成勻漿后用80%丙酮定容至20 mL，4000 r/min離心15 min，取上清液，以80%丙酮為空白對(duì)照，用TU-1901 型雙光束紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)470、645、663 nm 下測(cè)定吸光度值，根據(jù)馮露等[13]的公式計(jì)算葉綠素a(Chla)、葉綠素b(Chlb)、總?cè)~綠素(Chl)及類(lèi)胡蘿卜素(Car)的含量（單位均為“mg/g”）。以上測(cè)定均重復(fù)9次。

《自然》近日發(fā)表的一項(xiàng)研究稱(chēng),全球變暖可能會(huì)導(dǎo)致“海洋熱浪”(即海洋表面長(zhǎng)時(shí)間的反常高溫)的發(fā)生頻次更高、襲擊范圍更廣、強(qiáng)度更大。研究人員指出,1982年至2016年期間,海洋熱浪天數(shù)增加了1倍。

圖2 顯示各個(gè)葉色參數(shù)隨臭椿品種和葉位的變化。同一品種，亮度L*值、黃藍(lán)屬性色相b*值與彩度C*值隨葉位的變化趨勢(shì)基本相同，‘朝陽(yáng)椿’不同葉位的L*、b*、C*值均差異顯著（P＜0.05，均以葉位4 最大），另外3 種臭椿的L*、b*、C*值隨葉位的變化多不顯著(P＞0.05)；‘朝陽(yáng)椿’、‘千紅椿’、‘聊紅椿’的紅綠屬性色相a*值均隨葉位下降而顯著減少（P＜0.05，均以葉位1最大），‘普通臭椿’的a*值隨葉位的變化不顯著(P＞0.05)。同一葉位，4 種臭椿的L*、b*、C*值均存在顯著差異(P＜0.05)，各葉位L*、b*、C*值多以‘朝陽(yáng)椿’最大、‘千紅椿’較??；4種臭椿的a*值，在葉位1時(shí)差異顯著(P＜0.05)，在其余葉位時(shí)差異不顯著(P＞0.05)，葉位1～4的a*值排序均為‘朝陽(yáng)椿’＞‘千紅椿’＞‘聊紅椿’＞‘普通臭椿’。

（3）凌文輇、張治燦與方俐洛通過(guò)對(duì)5000名員工的7輪預(yù)測(cè)和2000名員工的正式測(cè)驗(yàn)，編制出了由情感承諾、理想承諾、規(guī)范承諾、機(jī)會(huì)承諾和經(jīng)濟(jì)承諾五因素構(gòu)成的“中國(guó)職工組織承諾量表”。該量表的總方差解釋量達(dá)66.11%，相關(guān)分析也表明，各因素與效標(biāo)的相關(guān)均達(dá)到非常顯著水平，各因素的信度在0.7-0.89之間，量表的信度和效度良好。因?yàn)榇朔萘勘硎窃谥袊?guó)文化背景下編制的，因而對(duì)國(guó)內(nèi)的研究有很大的指導(dǎo)意義。

1.3 葉色參數(shù)的測(cè)算

對(duì)不同品種臭椿，分葉位各取采集的葉片3個(gè)，使用便攜式分光色差儀NF555（日本）測(cè)算葉色參數(shù)，包括亮度L*、紅綠屬性色相a*（由負(fù)變正表明由綠變紅）、黃藍(lán)屬性色相b*（由負(fù)變正表明由藍(lán)變黃）和彩度C*（由(a*2+b*2)1/2算得）[16]。每個(gè)葉片測(cè)3次，共9次重復(fù)。

1.4 葉片顯微結(jié)構(gòu)及顏色的觀察

1.4.1 表皮對(duì)不同品種臭椿，分葉位各取葉6片，在體式顯微鏡SZ61（日本）和正置熒光顯微鏡Ni-U（日本）下，對(duì)表皮結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察拍照，測(cè)量腺毛直徑(GH)。各葉片選5個(gè)視野進(jìn)行觀測(cè)。

總之，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)水平的不斷提高和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，農(nóng)業(yè)在發(fā)展過(guò)程中得到了先進(jìn)的科學(xué)技術(shù)的支持，農(nóng)業(yè)機(jī)械化的應(yīng)用得到了有效的推廣，不管是農(nóng)業(yè)機(jī)械設(shè)備的各項(xiàng)技術(shù)創(chuàng)新，還是對(duì)農(nóng)機(jī)設(shè)備的推廣渠道，都需要建立一個(gè)完善的制度，這樣才能夠使農(nóng)業(yè)機(jī)械設(shè)備的發(fā)展得到保證，從而促進(jìn)社會(huì)的和諧進(jìn)步。

1.4.2 橫切面對(duì)不同品種臭椿，分葉位各取葉6片，采用徒手切片法制取橫截面切片[13]，在正置熒光顯微鏡Ni-U（日本）下觀察拍照。測(cè)量葉片厚度(LB)、葉肉厚度(LM)、上表皮厚度(UE)、下表皮厚度(LE)、柵欄組織厚度(PT)、海綿組織厚度(ST)等指標(biāo)，計(jì)算PT:ST。各橫切面選5個(gè)視野進(jìn)行觀測(cè)。

1.5 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，采用Nemenyi 檢驗(yàn)法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行兩兩比較(P＜0.05)。圖表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。

2 結(jié)果與分析

2.1 葉片色素含量及比值

順著葉位從上到下：‘朝陽(yáng)椿’的Chl 含量漸增(P＜0.05)，Car 含量先增（P＜0.05，葉位4 最大）后減(P＞0.05)，Car:Chl 先增（P＞0.05，葉位2 最大）后減(P＜0.05)，Ant 含量和Ant:Chl 漸減(P＜0.05)，Chla:Chlb 先增（P＜0.05，葉位4 最大）后減(P＞0.05)；‘千紅椿’的Chl 含量漸增(P＜0.05)，Car 含量先增（P＜0.05，葉位3最大）后減(P＞0.05)，Ant 含量、Car:Chl 和Ant:Chl 均漸減(P＜0.05)，Chla:Chlb 先增（P＜0.05，第4 葉位最大）后減(P＞0.05)；‘聊紅椿’的Chl、Car 含量漸增(P＜0.05)，Ant 含量、Car:Chl 和Ant:Chl 均漸減(P＜0.05)，Chla:Chlb 漸增(P＞0.05)；‘普通臭椿’的Chl、Car 含量均先增（P＜0.05，第3 葉位最大）后減(P＞0.05)，Car:Chl 漸減(P＜0.05)，Ant 含量和Ant:Chl 均先減（P＜0.05，第3 葉位最?。┖笤?P＞0.05)，Chla:Chlb 漸增(P＞0.05)。

表2 葉片色素含量及比值的變化

相同葉位時(shí)：對(duì)于Chl 和Car 含量，‘普通臭椿’均高于‘朝陽(yáng)椿’(P＜0.05)、‘聊紅椿’（葉位3 和4 時(shí)，P＜0.05）；‘普通臭椿’與‘千紅椿’無(wú)顯著差異。Ant 含量以‘千紅椿’最高(P＜0.05)、‘普通臭椿’最低(P＜0.05)。就Car:Chl 而言，‘朝陽(yáng)椿’高于‘普通臭椿’(P＜0.05)、‘千紅椿’(P＜0.05)、‘聊紅椿’（葉位4和5時(shí)，P＜0.05），為該比值最高的品種；‘千紅椿’和‘普通臭椿’差異不顯著；‘聊紅椿’在葉位1 和2 時(shí)顯著高于‘普通臭椿’(P＜0.05)。就Ant:Chl而言，‘朝陽(yáng)椿’高于‘普通臭椿’(P＜0.05)、‘千紅椿’(P＞0.05)、‘聊紅椿’（葉位1～3時(shí)P＜0.05），為該比值最高的品種；‘普通臭椿’低于‘聊紅椿’(P＞0.05)和‘千紅椿’(P＜0.05)。Chla:Chlb 以‘朝陽(yáng)椿’最高(P＜0.05)，‘聊紅椿’與‘普通臭椿’差異不顯著，‘千紅椿’僅在葉位1時(shí)顯著低于‘普通臭椿’(P＜0.05)、其余葉位二者均無(wú)顯著差異。

由表2 可知，Chla、Chlb、Chl、Car 和Ant 含量及Car:Chl、Ant:Chl 在同一葉位不同品種間和同一品種不同葉位間均存在顯著差異(P＜0.05)；Chla:Chlb 在同一葉位不同品種間差異顯著(P＜0.05)，‘朝陽(yáng)椿’、‘千紅椿’的該值在葉位間均差異顯著(P＜0.05),‘普通臭椿’、‘聊紅椿’的該值在葉位間均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

2.2 葉色參數(shù)

1.2.2 花青素對(duì)不同品種臭椿，分葉位各稱(chēng)取采集的葉片1 g，剪碎后用0.1 mol/L HCl 定容至10 mL，于32℃溫箱中浸提6 h，4000 r/min 離心15 min，取上清液，以0.1 mol/L HCl為空白對(duì)照，用TU-1901型雙光束紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)530 nm下讀取吸光度，用吸光度值乘以10 代表花青素(Ant)的相對(duì)濃度（單位為“色素單位”）[8,14]。以上測(cè)定均重復(fù)9次。

本研究基于葉片解剖和色素測(cè)定的結(jié)果，完成了對(duì)臭椿不同品種、不同葉位葉色呈現(xiàn)原因的初步研究。4種臭椿葉色差異的出現(xiàn)與葉片表皮結(jié)構(gòu)及細(xì)胞排列方式無(wú)關(guān)，色素為其葉色差異形成的決定性物質(zhì)，色素種類(lèi)、含量及分布為造成臭椿不同品種及葉位葉色差異的主要原因?！募t椿’、‘千紅椿’中高含量的花青素為其葉色發(fā)紅的關(guān)鍵色素?！?yáng)椿’上葉位高含量的花青素和各葉位低含量的總?cè)~綠素可能為其葉片艷麗的直接原因，至于‘朝陽(yáng)椿’葉片葉綠體結(jié)構(gòu)及發(fā)育程度對(duì)葉色的影響需通過(guò)進(jìn)一步研究來(lái)加以確定。4 種臭椿中，‘朝陽(yáng)椿’的亮度、黃色度、彩度觀賞性最顯著，且以葉位4、5 時(shí)最佳；‘朝陽(yáng)椿’、‘千紅椿’的紅色度觀賞性較顯著，均以葉位1時(shí)最佳。

圖2 葉色參數(shù)的變化

2.3 葉片顯微結(jié)構(gòu)及顏色

4 種臭椿各葉位葉片上、下表皮均為排列緊密的單細(xì)胞，下表皮的氣孔密度大于上表皮；均分布有兩種表皮毛（無(wú)色的單細(xì)胞非腺毛、有色或無(wú)色的多細(xì)胞頭狀腺毛），表皮毛分布密度都隨葉位下降而減少，腺毛密度均以葉片上表面較高；柵欄組織均為排列緊密的柱狀細(xì)胞，海綿組織均為排列疏松的不規(guī)則細(xì)胞。

葉片腺毛顏色、橫切面顏色及柵欄組織細(xì)胞層數(shù)因臭椿品種和葉位的不同而有所區(qū)別?！?yáng)椿’1～3葉位腺毛以粉或紫色為主、4～5 葉位多呈無(wú)色透明，‘千紅椿’各葉位腺毛均以紫紅色為主，‘聊紅椿’各葉位腺毛以無(wú)色透明為主、少數(shù)粉或紫色，‘普通臭椿’各葉位腺毛以無(wú)色透明為主、少數(shù)橘、粉或紫色，4 種臭椿葉位1 葉片的腺毛形態(tài)見(jiàn)圖3A，F(xiàn)，K，P。各種臭椿葉片橫切面的結(jié)構(gòu)及顏色如圖3所示：葉片表皮顏色，4種臭椿均隨葉位降低而逐漸變淺，由葉位1時(shí)的橘紅色（‘朝陽(yáng)椿’）、紫紅色（‘千紅椿’）、橘粉色（‘聊紅椿’）、杏黃色（‘普通臭椿’）逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)槿~位5 時(shí)的近無(wú)色，上葉位表皮顏色按深淺排序?yàn)椤Ъt椿’＞‘朝陽(yáng)椿’＞‘聊紅椿’＞‘普通臭椿’；葉肉主體顏色，4 種臭椿均隨葉位降低而逐漸加深，‘朝陽(yáng)椿’表現(xiàn)為由杏黃色逐漸向黃綠色轉(zhuǎn)變，其余3 種臭椿則由黃綠色逐漸向綠色轉(zhuǎn)變，且4種臭椿海綿組織的綠色度均較柵欄組織淺；上位葉靠近表皮的葉肉（尤其是海綿組織），‘千紅椿’、‘朝陽(yáng)椿’、‘聊紅椿’分別顯現(xiàn)出橘色、橘色、杏黃色的條帶，‘普通臭椿’無(wú)明顯異于葉肉主體顏色的條帶出現(xiàn)；柵欄組織的細(xì)胞層數(shù)，‘朝陽(yáng)椿’、‘聊紅椿’為1～2層（葉位1）、2層（葉位2～3）或1層（葉位4～5），‘千紅椿’、‘普通臭椿’各葉位均為1層。

圖3 葉片橫切面

理論研究和實(shí)踐進(jìn)路是相輔相成、相互促進(jìn)的耦合互動(dòng)關(guān)系。在對(duì)就地就近城鎮(zhèn)化研究現(xiàn)狀進(jìn)行爬梳的基礎(chǔ)上，筆者結(jié)合在江蘇豐縣的實(shí)地訪談?wù){(diào)研，從理念意識(shí)、動(dòng)力機(jī)制、發(fā)展模式、推進(jìn)路徑、制度供給等方面著眼，試圖建構(gòu)一個(gè)整體性框架，從而形成一條“理念—驅(qū)動(dòng)—模式、路徑和制度”的人口就地就近城鎮(zhèn)化推進(jìn)路徑(見(jiàn)圖1)。

1.2.3 色素比值 計(jì)算Chla:Chlb、Car:Chl 和Ant:Chl。因Ant與Chl的單位不同，需采用極差標(biāo)準(zhǔn)化法對(duì)原始數(shù)據(jù)作無(wú)量綱處理[15]后再計(jì)算Ant:Chl。

3 結(jié)論

根據(jù)學(xué)生學(xué)習(xí)教材，制作與學(xué)生學(xué)習(xí)密切相關(guān)的寫(xiě)字微課，把重點(diǎn)課文中難寫(xiě)字、易錯(cuò)字挑選出來(lái)，作為微課制作的主要內(nèi)容。依據(jù)各個(gè)學(xué)段對(duì)寫(xiě)字要求不同，在制作寫(xiě)字微課時(shí)難易程度也不一樣。如低年級(jí)生字“木”的微課制作，注重字的間架結(jié)構(gòu)以及在田字格的位置，同時(shí)強(qiáng)調(diào)筆畫(huà)順序，讓學(xué)生先觀看運(yùn)筆演示，然后模仿在田字格中練習(xí)，教師從中巡視給予糾正，直至完全會(huì)寫(xiě)，要求學(xué)生課下適當(dāng)練習(xí)鞏固。又如制作生字“獼”的微課重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)字的間架結(jié)構(gòu)，明白“獼”左右穿插避讓?zhuān)筮叿慈詫?xiě)的窄小避讓右邊，這樣整個(gè)字看起來(lái)勻稱(chēng)得體，給人以美的感覺(jué)。

各個(gè)葉片顯微結(jié)構(gòu)指標(biāo)，包括LB、LM、UE、LE、PT、ST、PT:ST、GH 等，在不同品種（同一葉位）間或不同葉位（同一品種）間大多存在顯著差異(P＜0.05)（表3）。各種臭椿順著葉位從上到下，葉片逐漸成熟，UE、LE、GH 大致呈下降趨勢(shì)；LB、LM、PT、ST 及PT:ST 大體呈上升趨勢(shì)。與‘普通臭椿’相比：‘千紅椿’葉片較薄，腺毛較小，PT、ST、UE、LE 和PT:ST 均較小；‘朝陽(yáng)椿’葉片較厚，腺毛較大，PT、ST 和LE 均較大，UE（葉位2、3 除外）和PT:ST（葉位2 除外）較??；‘聊紅椿’葉片較厚，腺毛較小，PT（葉位3、4 除外）、ST 和LE 均較大，UE（葉位3、4除外）和PT:ST較小。

4 討論

自然界中的彩葉植物大體上有4 種類(lèi)型，分別為葉綠素型、色素型、表皮型和空隙型。葉綠素(Chl)是高等植物進(jìn)行光合作用的主要色素，可使植物葉片呈現(xiàn)綠色，類(lèi)胡蘿卜素(Car)作為植物葉色構(gòu)成的主要色素，可使植物呈現(xiàn)橙黃色，而葉片的變紅常與類(lèi)黃酮中花青素(Ant)的合成代謝和組成有關(guān)[6]。類(lèi)黃酮、葉綠素和類(lèi)胡蘿卜素在葉片中的比例和種類(lèi)是葉片表現(xiàn)為紅色或者黃色的主要因素。表皮型和空隙型為結(jié)構(gòu)型變異[17]，表皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)、葉肉細(xì)胞之間的大空隙、及葉肉細(xì)胞與表皮細(xì)胞之間的大空隙會(huì)引發(fā)光的薄膜干涉、反射、折射或漫射等現(xiàn)象，進(jìn)而產(chǎn)生葉色變異[5]。除此之外，外界環(huán)境條件及色素在葉片中的空間分布也是影響植物葉片呈色的因素[18]。本研究的臭椿樣品均取自同一圃地，其生長(zhǎng)環(huán)境條件一致，因此本研究暫未考慮外界環(huán)境對(duì)葉色的影響。徐卉[12]在研究‘紅果臭椿’果實(shí)呈色機(jī)理時(shí)發(fā)現(xiàn)，與‘普通臭椿’相比，變紅的‘紅果臭椿’翅果內(nèi)富含高含量的Ant。因此，本研究重點(diǎn)就3大色素(Chl、Car、Ant)含量及葉片顯微結(jié)構(gòu)對(duì)葉色的影響進(jìn)行了研究探討。

以機(jī)械制圖為例，教學(xué)中，教師不必急于告訴學(xué)生應(yīng)該怎樣做，到底怎樣做才是對(duì)的，而應(yīng)該關(guān)注學(xué)生的實(shí)際，引導(dǎo)學(xué)生思考，并在引導(dǎo)中幫助學(xué)生了解知識(shí)，鼓勵(lì)學(xué)生自主探索。當(dāng)學(xué)生得出答案的時(shí)候，教師不應(yīng)該直接回答對(duì)錯(cuò)，而應(yīng)該肯定學(xué)生的努力，弱化對(duì)結(jié)果的評(píng)價(jià)。無(wú)論對(duì)錯(cuò)，都要給予充分地肯定，從而為學(xué)生學(xué)習(xí)提供源源不斷的動(dòng)力，促進(jìn)學(xué)生能力的提升。

排除標(biāo)準(zhǔn):(1)已發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥者;(2)精神異常、自理能力差或意識(shí)障礙者;(3)伴有心、肝及腎臟等功能?chē)?yán)重異常者;(4)不能配合護(hù)理干預(yù)者。

筆者綜合葉片表型觀測(cè)、色素測(cè)定、顯微結(jié)構(gòu)及顏色觀察結(jié)果得出，葉片柵欄組織的細(xì)胞層數(shù)、葉片表面腺毛的密度和顏色、以及葉片橫切面各部分結(jié)構(gòu)的厚度和顏色等均因品種和葉位的不同而有所區(qū)別，除此之外，4 種臭椿各葉位葉片顯微結(jié)構(gòu)之間無(wú)其它明顯差異，由此得出，4種臭椿葉色差異的出現(xiàn)與葉片表皮結(jié)構(gòu)及細(xì)胞排列方式無(wú)關(guān)，色素種類(lèi)、含量及分布為造成臭椿不同品種及葉位的葉片顏色差異的主要原因。具體為：

‘聊紅椿’和‘普通臭椿’上位葉表皮細(xì)胞及葉肉細(xì)胞（尤其是海綿組織）略微發(fā)紅（或棕黃）的物質(zhì)主要是Ant，葉位由上而下，Ant、Car:Chl、Ant:Chl 的逐漸減少與Chl的增加使兩種臭椿葉片由棕色向綠色轉(zhuǎn)變。‘聊紅椿’葉色較‘普通臭椿’略微發(fā)紅亦由高含量Ant 直接引起。即，‘聊紅椿’高含量的花青素為其葉色略微發(fā)紅的關(guān)鍵色素。姜新強(qiáng)等[18]、姜文龍等[19]研究風(fēng)箱果、觀賞海棠的紫紅色葉片呈色機(jī)理時(shí)，也得出Ant是使葉片呈現(xiàn)紫紅色的主要原因，與本研究此處結(jié)論一致。

‘千紅椿’葉片表皮細(xì)胞及葉肉細(xì)胞（尤其是海綿組織）中的紅色物質(zhì)主要為Ant，葉位由上而下，Ant、Ant:Chl的逐漸減少和Chl的增加，使其葉片由紅色向綠色逐漸轉(zhuǎn)變?！Ъt椿’各葉位葉片較另3 類(lèi)臭椿發(fā)紫紅亦由高含量Ant和高Ant:Chl造成。即，‘千紅椿’高含量的花青素為其葉色發(fā)紫紅的關(guān)鍵色素。姜文龍等[19]在觀賞海棠葉色變化研究中指出，紫紅色海棠的上位葉具有最多的Ant，而中位葉有所淡化。Ant的合成與降解因素可分為外因（光照、溫度、水分、施肥元素配比等）和內(nèi)因（結(jié)構(gòu)基因和轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控），通過(guò)低氮脅迫、低溫誘導(dǎo)、調(diào)節(jié)光照等方法可減緩葉片生長(zhǎng)過(guò)程中色素的淡化，使整株葉片達(dá)到“全紅”效果[19]。日后，可對(duì)‘千紅椿’葉色穩(wěn)定性的保持及改良策略作進(jìn)一步研究，以發(fā)揮其更大的觀賞價(jià)值。

‘朝陽(yáng)椿’上位葉表皮細(xì)胞及葉肉細(xì)胞（尤其是海綿組織）中的高含量Ant及高Ant:Chl使上位葉呈橘紅色；葉位逐漸往下，Ant 減少使葉片表皮紅色漸褪，葉片顯現(xiàn)出葉肉細(xì)胞可能因高Car:Chl導(dǎo)致的亮黃色；之后可能隨Ant的持續(xù)減少、及Chl較Car更大幅度地漸增（使Car:Chl漸減），葉片又轉(zhuǎn)為黃綠色。與另3種臭椿相比，‘朝陽(yáng)椿’各葉位葉肉發(fā)黃亦可能由高Car:Chl造成。潘晶晶等[20]、郁萬(wàn)文等[21]研究金葉復(fù)葉槭、金葉銀杏在整個(gè)生長(zhǎng)季的葉色變化時(shí)，也得出Car:Chl值會(huì)影響葉片黃色呈現(xiàn)的結(jié)論。相同葉位時(shí)，‘朝陽(yáng)椿’的Chl 含量和Car 含量均低于另3 種臭椿，但Chl 低下的程度更甚，因此‘朝陽(yáng)椿’的Car:Chl 均較另3 種臭椿高，這與張振宇等[22]的研究結(jié)果一致。換言之，‘朝陽(yáng)椿’的高Car:Chl更直接地是由低含量Chl而引起。同時(shí)，‘朝陽(yáng)椿’Chlb含量較‘普通臭椿’的低下較Chla更甚，推測(cè)‘朝陽(yáng)椿’可能屬于總?cè)~綠素及葉綠素b 合成減少突變體[10]。由葉片葉綠素含量減低引起的葉色變異（即葉綠素型變異）是一種常見(jiàn)的葉色變異類(lèi)型[17]，前人在對(duì)彩葉竹種、中華金葉榆、鑫葉欒、金葉銀杏、水稻等葉色突變體的研究中發(fā)現(xiàn)，葉綠體結(jié)構(gòu)異?；虬l(fā)育成熟度均可造成光合色素的積累差異，進(jìn)而引發(fā)葉色變異[1-2,17,21,23-24]。綜上，‘朝陽(yáng)椿’上葉位高含量的花青素和各葉位低含量的總?cè)~綠素可能為其葉片艷麗的直接原因。突變的黃色葉植株是研究葉綠體發(fā)育、葉綠素代謝、光合特性的理想材料[25]，日后應(yīng)對(duì)‘朝陽(yáng)椿’葉片葉綠體結(jié)構(gòu)、發(fā)育程度及光合特性作進(jìn)一步研究，為葉色變異機(jī)制提供細(xì)胞學(xué)依據(jù)，為推進(jìn)‘朝陽(yáng)椿’的栽培和推廣奠定理論基礎(chǔ)。

本研究?jī)H測(cè)定了類(lèi)黃酮中Ant 的含量，而未測(cè)定其它類(lèi)型的類(lèi)黃酮，如能夠使得葉片呈現(xiàn)黃色或橙色的黃酮、黃酮醇、查爾酮等組分。因此，未來(lái)應(yīng)基于類(lèi)黃酮代謝組、葉綠體超微結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)錄組等結(jié)果對(duì)臭椿的葉片成色機(jī)理作更深入的研究，這對(duì)觀賞臭椿葉色育種及良種選育具有重要意義。