牛結(jié)節(jié)性皮膚病研究進(jìn)展

程肖曄，王曉亮，常廣軍，左冉坤，沈向真*，李知新*

(1. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210095；2. 寧夏動物疾病預(yù)防控制中心，寧夏 銀川 750000)

牛結(jié)節(jié)性皮膚病(lumpy skin disease，LSD)是一種由痘病毒科的結(jié)節(jié)性皮膚病病毒(lumpy skin disease virus，LSDV)導(dǎo)致的牛傳染性疾病[1]，是一種急性至亞急性的疾病，其特征是發(fā)熱、皮膚黏膜及內(nèi)臟結(jié)節(jié)、消瘦、淋巴結(jié)腫大、皮膚水腫，有時甚至死亡。LSDV感染的發(fā)病率差異很大(5%～45%)，一般來說，其死亡率小于10%，但發(fā)病率高達(dá)90%[2]，能夠在短時間內(nèi)出現(xiàn)在距離最初(局灶性)暴發(fā)地點(diǎn)幾百公里的地方。牛群患病后，身上會出現(xiàn)大量的皮膚結(jié)節(jié)，損害皮膚的完整性影響皮革生產(chǎn)，食欲減退體重下降。除此之外，LSD還會影響奶牛產(chǎn)乳性能，導(dǎo)致產(chǎn)奶量急劇下降，有時還會導(dǎo)致死亡，嚴(yán)重影響奶牛經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

1 病原學(xué)

1.1 病毒特征

引起牛結(jié)節(jié)性皮膚病的LSDV與綿羊痘病毒(sheeppox virus，SPPV)的同源性高達(dá)98%以上，與山羊痘病毒(goatpox virus，GTPV)基因組核苷酸之間的同源性高達(dá)96%，三者只能通過分子特征來進(jìn)行區(qū)分。LSDV在電鏡下呈橢圓形或磚形，覆蓋著短管結(jié)構(gòu)，病毒粒子大小約320 nm×260 nm[3]。痘病毒中的正痘病毒可以引起水牛痘，病毒粒子由1個核心、2個側(cè)體和2層脂質(zhì)外膜組成，是動物病毒中體積最大、結(jié)構(gòu)最復(fù)雜的病毒。與許多在宿主細(xì)胞核中復(fù)制的 dsDNA 病毒不同，痘病毒有自己的復(fù)制機(jī)制，因此在細(xì)胞質(zhì)中復(fù)制；病毒基因以雙相方式表達(dá)，早期基因編碼參與基因組復(fù)制的非結(jié)構(gòu)蛋白，晚期基因編碼病毒結(jié)構(gòu)蛋白。

1.2 基因組功能

LSDV基因組是雙鏈DNA，含有156個開放閱讀框(ORF)，由一個被2.4 kb的末端反向重復(fù)序列(ITR)包圍的中間編碼區(qū)域和156個假設(shè)基因組成[4]。痘病毒的進(jìn)化通常是通過基因丟失和縮小宿主范圍而進(jìn)行的，通過基因組序列分析發(fā)現(xiàn)，在SPPV、GTPV和LSDV的端粒中也有同樣的基因丟失模式[5]。SPPV和GTPV的大多“管家”基因氨基酸序列原本與LSDV有98%以上的同源性，但由于插入剪切和移碼突變，有3個蛋白質(zhì)家族的C末端結(jié)構(gòu)域發(fā)生改變，于是SPPV和GTPV與LSDV中的ORF_138基因同源性降低到了84%[5]。LSDV的基因功能包括復(fù)制、結(jié)構(gòu)和組裝、轉(zhuǎn)錄和翻譯、生長和凋亡、錨蛋白重復(fù)、宿主免疫逃避、毒力、假定蛋白和體液免疫等[6]。

1.3 免疫機(jī)理

痘病毒在感染宿主細(xì)胞過程中，通過抑制宿主細(xì)胞中白介素-1(IL-1)的合成和釋放，編碼可溶性細(xì)胞因子如：腫瘤壞死因子(TNF-α)、IL-1和干擾素-γ(IFN-γ)等，合成病毒編碼的類表皮生長因子和類轉(zhuǎn)化生長因子等，對抗宿主細(xì)胞介導(dǎo)的抗病毒免疫作用，從而逃避宿主的天然免疫和適應(yīng)性免疫[7]。山羊痘病毒的免疫逃避主要通過細(xì)胞介導(dǎo)，除了通過受感染細(xì)胞的出芽釋放到細(xì)胞外的包膜病毒粒子外，大多數(shù)病毒仍留在受感染的細(xì)胞內(nèi)。這些細(xì)胞可能會感染鄰近的細(xì)胞或使病毒逃到血液中傳播到全身。據(jù)報(bào)道，皮內(nèi)接種后，SPPV和GTPV能夠感染單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞，表明這些細(xì)胞可能有助于病毒的全身性傳播[8]。最近有研究顯示痘病毒還可能使用 G 蛋白偶聯(lián)的趨化因子受體樣蛋白來促進(jìn)免疫逃避[9]。ORF_138是山羊痘病毒屬共有的基因，其作用類似于OX-2樣蛋白，OX2/CD200家族蛋白通過膜定位和與CD200R受體的特定相互作用，下調(diào)體內(nèi)巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞活性，并抑制抗原啟動。山羊痘病毒屬(CaPVs)成員在基因組水平上有95%以上的相似性，因此所有CaPVs都具有共同的主要抗原，從自然感染中恢復(fù)的動物能夠抵抗再感染。然而，最近在中東和非洲之角暴發(fā)牛結(jié)節(jié)性皮膚病的現(xiàn)場經(jīng)驗(yàn)表明，這種交叉保護(hù)只是部分的[10]。

2 流行病學(xué)

2.1 國內(nèi)外流行情況

LSDV起源于非洲，自2012年以來，該疾病迅速而廣泛地傳播到中東和巴爾干地區(qū)、南部高加索地區(qū)和俄羅斯聯(lián)邦的部分地區(qū)。牛結(jié)節(jié)性皮膚病是一種死亡率低的牛類疾病，在非洲，這種疾病的平均發(fā)病率為10%，患病牛群的死亡率為1%。在疫苗接種充分發(fā)揮作用之前，該疾病迅速從一個地區(qū)傳播到另一個地區(qū)[12]。2015年，牛結(jié)節(jié)性皮膚病蔓延到希臘，2016年，歐洲東南部7個國家，即希臘、保加利亞、北馬其頓、塞爾維亞、科索沃、阿爾巴尼亞和黑山，還有沙特阿拉伯、俄羅斯、亞美尼亞、格魯吉亞和哈薩克斯坦也報(bào)告了疫情[12]。2018年，該病蔓延到東歐國家。

2019年該病傳入我國新疆地區(qū)并首次確診[13]，截至目前，中國7個省共報(bào)告了8例LSD暴發(fā)。8次暴發(fā)的總發(fā)病率和死亡率分別為19.5%(156/801)和0.9%(7/801)。每一次單獨(dú)暴發(fā)的發(fā)病率和死亡率分別為6.6%～100%和0～16.7%。在1年之內(nèi)，LSDV在中國最西部和最東部的省份先后被確定，甚至到達(dá)了中國大陸以外的臺灣島。福建、山東、四川、寧夏等各省份(自治區(qū))牛結(jié)節(jié)性皮膚病疫情均是由外購牛引起。截至2021年9月，國內(nèi)共17個省(自治區(qū)、直轄市)陸續(xù)公布了牛結(jié)節(jié)性皮膚病疫情[14](如表1)。這無疑是對中國牛養(yǎng)殖行業(yè)的重大威脅，為了保證相關(guān)貿(mào)易的安全進(jìn)行，我國在實(shí)驗(yàn)室診斷、支持治療、場所消毒和疫苗接種等方面的投入是巨大的[11]。

2.2 傳播途徑

研究表明，在沒有合適昆蟲的情況下，動物間沒有發(fā)生疾病傳播，未表現(xiàn)臨床癥狀，動物的口腔、鼻腔或結(jié)膜中也沒有檢測到病毒[15]。在大多數(shù)情況下，LSDV的長途傳播與動物的運(yùn)動有關(guān)，但明顯的季節(jié)性模式表明，節(jié)肢動物很可能是疾病迅速傳播和短期傳播的主要原因。到目前為止，LSDV傳播最有可能的媒介是吸血節(jié)肢動物，如穩(wěn)定蠅(枸櫞酸蠅)、蚊子(埃及伊蚊)和硬蜱(頭蠅和鈍蟲)[12]。節(jié)肢動物可以通過結(jié)膜、皮內(nèi)和靜脈傳播LSDV。有研究顯示，與皮內(nèi)接種相比，靜脈接種LSDV會對宿主產(chǎn)生更明顯的臨床癥狀[15]。從長期受感染動物的精液中可以分離出LSDV，表明LSDV也可通過精液傳播。

2.3 易感動物

LSDV感染反芻動物，對人類沒有感染性。它是一種影響牛以及水牛的病毒性疾病，某些品種的牛比其他品種更容易感染，特別是薄皮的牛，如澤西島和根西島的牛品種和埃塞俄比亞的福格拉牛[2]，以及非洲桑加牛。也有研究表明LSDV可以感染一些非洲的其他野生動物[5]，已經(jīng)證明LSDV可以通過實(shí)驗(yàn)感染長頸鹿、黑斑羚和阿拉伯牛津魚[16]。然而，尚未見報(bào)道有任何野生動物的LSD暴發(fā)。這些研究表明，野生動物在LSDV的傳播中沒有發(fā)揮重要作用。然而，由于受感染動物的死亡和被捕食，可能會導(dǎo)致其余種群中存在少量的血清陽性，這種潛在的危害尚不清楚[2]。像SPPV和GTPV一樣，LSDV對上皮細(xì)胞具有易感性。

3 臨床癥狀

LSD的發(fā)病率差異很大，在3%～85%之間。在流行地區(qū)，發(fā)病率約為10%。LSD的死亡率在1%～3%之間，但在嚴(yán)重的暴發(fā)情況下高達(dá)40%。這些發(fā)病率和死亡率的不同很可能和牛的品種、健康狀況、病毒分離毒株和參與傳播的昆蟲媒介的不同有關(guān)。感染LSDV后死亡的具體原因目前尚不清楚，但與許多因素有關(guān)，包括牛的品種、病毒毒株、繼發(fā)性細(xì)菌感染、動物的健康狀況以及參與傳播的昆蟲媒介的類型；另一個因素是由副痘病毒引起的偽牛痘和牛結(jié)節(jié)性皮膚病的混淆[17]。

LSD會出現(xiàn)至少5處典型病變，特征是發(fā)熱、淋巴結(jié)病、皮膚結(jié)節(jié)和眼鼻分泌物黏稠增多，皮膚損傷通常表現(xiàn)為乳頭上的痘損傷，也可能在其他部位引起皮膚損傷，此外全身出現(xiàn)0.5～5.0 cm大小的堅(jiān)實(shí)平頂丘疹和結(jié)節(jié)，如會陰、大腿、頸部、臀部、陰囊、頰黏膜和頭部內(nèi)側(cè)[12]。如果該癥狀伴有發(fā)熱(高于39.5 ℃)或產(chǎn)奶量減少20%，則定義為嚴(yán)重病例。LSD最明顯的臨床癥狀是形成全身的皮膚病變，這些皮膚損傷愈合后會留下永久損傷的疤痕。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室方法

雖然LSDV會引起明顯的皮膚和內(nèi)臟病變，但仍需要實(shí)驗(yàn)室確診。經(jīng)典的方法如電子顯微鏡，可以用來識別皮膚病變中的痘病毒，然而除非應(yīng)用特異性抗體免疫染色方法，電子顯微鏡并不能區(qū)分SPPV、GTPV和LSDV這3種毒株。

通過病毒的分離盲傳可以在細(xì)胞或雞胚上觀察到病變從而進(jìn)行診斷。皮膚結(jié)痂以及鼻腔和口腔拭子是病毒分離最有效的樣本[27]。牛結(jié)節(jié)性皮膚病的病毒分離一般有2種方式：一是利用雞胚培養(yǎng)，病毒可在雞胚絨毛尿囊膜上增殖，但雞胚不死亡，接種5日齡的雞胚隨后置33.5℃孵育，6 d后收毒；另一個比較常用的方式是利用細(xì)胞分離。目前，初級羊腎或原羊睪丸細(xì)胞是最常用的分離細(xì)胞，然而，原代細(xì)胞最明顯的缺點(diǎn)是需要不斷地建立新的培養(yǎng)物來避免細(xì)胞批次變異和外來物質(zhì)的污染。因此，相應(yīng)的細(xì)胞系是更為方便的選擇。目前幼羔羊睪丸細(xì)胞系(OA3.Ts)[28]和牛腎細(xì)胞(MDBK)[29]已被評估為原代細(xì)胞的替代品。有研究顯示該病毒可以在許多其他細(xì)胞培養(yǎng)物上生長，如犢牛和羔羊的腎上腺和甲狀腺等原代細(xì)胞，以及倉鼠腎細(xì)胞(BHK-21)和非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero)[30]等。LSDV的細(xì)胞病變產(chǎn)生較慢，通常在10 d后才能看到細(xì)胞病變，盲傳5代后可以用特異的熒光抗體觀察到細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)胞漿內(nèi)包涵體。已經(jīng)適應(yīng)于細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)生長的病毒，可在接種后24～48 h內(nèi)使細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)出現(xiàn)長梭形細(xì)胞，并且細(xì)胞聚集生長并且成團(tuán)，經(jīng)過反復(fù)凍融離心后可收毒。然而，這種方法耗時長，需要一定的實(shí)驗(yàn)條件和專業(yè)人員，且并不能對病毒做出鑒別診斷，因此難以推廣。

4.2 免疫學(xué)方法

通過誘導(dǎo)不同細(xì)胞斑塊的形成，抗山羊痘病毒血清免疫染色可診斷出山羊痘病毒，其具有以細(xì)胞拉長為特征的細(xì)胞病變效應(yīng)，但不能區(qū)分LSDV、SPPV和GTPV這3種病毒。目前測定山羊痘病毒抗體的金標(biāo)準(zhǔn)是病毒中和試驗(yàn)，然而這種方法雖然能有效檢測病毒抗體，但它速度慢，耗人力且需要活的病毒，這在無病原國家通常是不合適的。在擁有特異性抗體的情況下，免疫印跡方法(Western blot)具更高的特異性和敏感性，然而這種方法需要熟練的抗體制備技術(shù)，在基層無法推廣。使用滅活山羊痘病毒可以作為ELISA抗原，但是在常規(guī)診斷實(shí)驗(yàn)室是不切實(shí)際的，因?yàn)椴《九囵B(yǎng)需要嚴(yán)格的生物控制設(shè)施。

4.3 分子學(xué)方法

聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和實(shí)時PCR檢測(qPCR)是檢測山羊痘病毒基因組快速而敏感的診斷技術(shù)。實(shí)驗(yàn)室可以從結(jié)痂組織均質(zhì)上清液、抗凝血液或冷凍牛精液中提取基因組DNA(有研究發(fā)現(xiàn)在患病牛鼻沖洗液中也出現(xiàn)了少量病毒[18])，裂解后用洗脫緩沖液洗脫，紫外分光光度計(jì)檢查DNA濃度，并將DNA儲存在-20 ℃中備用。

PCR檢測方法比抗原捕獲ELISA方法具有更高的敏感性，且不需要特異性抗體，降低了經(jīng)濟(jì)成本。早在1998年Ireland就通過包膜蛋白(LSDV074)的引物成功檢測到了病毒[19]，之后該方法成為多種檢測方法的衡量標(biāo)準(zhǔn)。然而山羊痘病毒屬的3種病毒相似度太高，無法通過普通PCR方法進(jìn)行區(qū)分。

qPCR的優(yōu)點(diǎn)在于更敏感并允許量化，還避免了在識別LSDV基因組時出現(xiàn)交叉污染的風(fēng)險，降低了假陽性的概率[18]。RPO30 (RNA聚合酶亞基)[20]、P32和GPCR 在山羊痘病毒屬中高度保守，可以用來識別山羊痘病毒分離株。P32抗原是一種存在于所有山羊痘病毒中的結(jié)構(gòu)蛋白，含有主要的抗原決定簇，其編碼的包膜蛋白與牛痘病毒H3L基因編碼的P35蛋白同源，并定位于成熟的細(xì)胞內(nèi)病毒顆粒的膜表面。GPCR基因編碼1個與G蛋白偶聯(lián)趨化因子受體亞家族相關(guān)的蛋白。該蛋白具有G蛋白偶聯(lián)趨化因子受體超家族的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)特征，如7個疏水區(qū)域和第一、第二細(xì)胞外環(huán)中的半胱氨酸殘基。由于疫苗LSDV株中存在一個27 bp的缺失(LSDV126)[21]，可用于野生型LSDV的特異性檢測[22]，而SPPV和GTPV在其同源EEV序列中也出現(xiàn)了這27 bp的缺失，所以該區(qū)域也可以用于針對綿羊、山羊或牛病毒分離株的特異性分析[23]。

其他常用的生化檢測方法還包括基因測序、變性高效液相色譜技術(shù)(HRM)和環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)(LAMP)。通過LSDV中保守序列測序，進(jìn)行基因比對和系統(tǒng)進(jìn)化樹分析，可以找到病毒來源和相似性，為流行病學(xué)調(diào)查提供指導(dǎo)和方向[24]。HRM指可以采用高分辨率熔化分析DNA片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以檢測病毒[25]，目前這項(xiàng)技術(shù)還沒有用于LSDV檢測。由于高度依賴DNA的質(zhì)量和濃度，該方法無法在常規(guī)診斷中使用。LAMP是一種簡單、特異性和成本效益高的方法，其診斷精度與PCR相似[26]。

5 疫苗研發(fā)

目前的疫苗開發(fā)主要側(cè)重于減毒活疫苗的生產(chǎn)。減毒活疫苗主要可分為異源減毒活疫苗和同源減毒活疫苗。由于SPPV、GTPV和LSDV同屬于山羊痘病毒屬，且有交叉保護(hù)性[31]，所以山羊痘疫苗和綿羊痘疫苗都能用來預(yù)防控制牛結(jié)節(jié)性皮膚病的傳播。山羊痘減毒活疫苗屬于LSD的異源減毒活疫苗，對于LSD的免疫接種，目前我國推薦使用5倍劑量的山羊痘疫苗用于預(yù)防 LSD[32]。在非洲和中東，有幾種異源減毒活疫苗目前被用于牛和小反芻動物接種，如羅馬尼亞(Romania)和南斯拉夫RM-65毒株(SPPV)以及Gorgan和Mysore毒株(GTPV)，雖然在一定程度上避免了在牛上產(chǎn)生的副作用，但卻只能提供部分交叉保護(hù)[33]。

國外常用的疫苗是同源減毒株，如KSGPO-180、KSGPO-240和南非Neethling毒株 (LSDV)[34]，其中Neething毒株已成功使用幾十年，但在俄羅斯發(fā)現(xiàn)幾種類似疫苗的重組菌株后，它們的安全性最近受到了質(zhì)疑。2016年哈薩克斯坦暴發(fā)LSD，該國大規(guī)模地實(shí)施Lumpivax疫苗接種，此疫苗后來被發(fā)現(xiàn)是由3種不同毒株重組而成[33]，對其他國家如中國、越南的致病毒株出現(xiàn)埋下了隱患。世界動物衛(wèi)生組織(WOAH)建議在引入一種通常不用于牛的疫苗株之前，需要使用最敏感的品種(山羊或綿羊)進(jìn)行對照試驗(yàn)，因?yàn)樯窖蚨粚俨《疽呙缰昕稍谝恍┡５慕臃N部位產(chǎn)生較大的局部反應(yīng)，除此之外LSDV疫苗接種提供的保護(hù)持續(xù)時間尚不清楚。由于這些因素的不確定性，導(dǎo)致一些畜主不愿意冒險打疫苗，從而阻礙了疫苗的推廣使用，然而LSD暴發(fā)會導(dǎo)致嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，所以更為安全有效的疫苗研發(fā)是十分必要的。

基因改造減毒活疫苗是未來應(yīng)對疫病暴發(fā)的重要方向。與其他痘病毒一樣，LSDV 基因組編碼大量的免疫調(diào)節(jié)基因，通過基因工程方法刪除或插入這些基因可構(gòu)建減毒活疫苗毒株[31]。

LSDV基因組中存在9個在SPPV和GTPV中不存在的基因，這是SPPV和GTPV因進(jìn)化而丟失的基因，可能是LSDV感染牛的原因之一。這9個基因分別是LSDV特異性基因(LSDV132)、IL-1受體(IL-1R)(LSDV013)、LSDV002、LSDV155、LSDV004、LSDV153、LSDV009、LSDV026和LSDV136。這9個基因里有2個已經(jīng)預(yù)測了其功能，第一個是位于ORF_013的IL-1樣受體，其作用是作為IL-1受體的誘餌來發(fā)生免疫逃避；第二個是位于ORF_026的F11L，已有研究證明其可以通過抑制Rho信號和破壞皮層肌動蛋白層在促進(jìn)病毒逃逸中發(fā)揮作用[35]。除此之外的7個基因目前已經(jīng)有人在進(jìn)行相關(guān)研究。聶福平[6]已對ORF132進(jìn)行功能預(yù)測并成功構(gòu)建表達(dá)載體，為新型疫苗的研制奠定基礎(chǔ)。當(dāng)黏液瘤病毒(也缺乏F11L同源物)被插入痘苗病毒中的F11L時，病毒的繁殖和體內(nèi)外的傳播能力均得到增強(qiáng)[36]。ORF_009類似于痘苗病毒N2L的C末端結(jié)構(gòu)域(25%～30%蛋白質(zhì)序列標(biāo)識)，這是一種可以編碼IRF3抑制劑的基因[37]。目前對于這些毒力基因的研究還不透徹，需要進(jìn)一步研究。

LSDV中的保守基因可以作為基因突變?nèi)笔У哪繕?biāo)位點(diǎn)。胸苷激酶(TK)基因是山羊痘病毒屬病毒復(fù)制的非必需基因，缺失TK基因的GTPV突變株在神經(jīng)細(xì)胞中的復(fù)制能力大為減弱，使疫苗株更加安全[38]。對LSDV的TK基因研究表明，與許多痘病毒一樣，TK活性對LSDV的生長很重要，該基因可以用作重組疫苗的插入位點(diǎn)[39]。由于痘病毒基因組大，減毒的LSDV還可以作為重組疫苗載體，與其他病毒疫苗形成二聯(lián)苗。

在LSDV基因組中還存在一些疫苗相關(guān)突變基因位點(diǎn)，如ORF_134，ORF_144，ORF_145和RF_019。其中ORF_134基因編碼的蛋白質(zhì)與B22R(變異體)超家族C端有32%的相似性，而猴痘病毒B22R超家族中的MPXV197蛋白可抑制T細(xì)胞反應(yīng)，增加病毒毒力[40]。ORF_144可能是牛痘病毒VV-Cop-A55R的同源物，編碼BTB/POZ結(jié)構(gòu)域，cullin結(jié)合位點(diǎn)和4個C端kelch重復(fù)。有研究顯示所有的LDSV疫苗株的ORF_144位點(diǎn)上都存在+1的移碼突變(在S256處的T2至T3處)[5]。ORF_145則很可能是VV-Cop-B4R的同源物，編碼4個錨蛋白重復(fù)序列和1個C端PRANC/F盒結(jié)構(gòu)域。這些牛痘病毒基因通常是通過kelch和錨蛋白介導(dǎo)的相互作用來促進(jìn)病毒和宿主蛋白的泛素化和降解[41]。ORF_019可以編碼第二個類似于ORF_144的BTB/kelch蛋白，可能是VV-Cop-F3L的同源物，在有些LSDV疫苗中也觀察到了ORF_019的失活。

Erster等[42]對LSDV126基因和全病毒基因組序列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，發(fā)現(xiàn)LSDV分離株形成了強(qiáng)毒和疫苗毒兩類。在這項(xiàng)分析中，所有缺乏快速感染牛能力的痘病毒只攜帶1個27 bp片段的拷貝，這表明LSDV126基因在痘病毒感染牛的能力上發(fā)揮著重要作用。研究還發(fā)現(xiàn)LSDV126形成的糖蛋白——VYDLPPND二聚體，被預(yù)測為1個抗原表位，而疫苗株中則沒有。這種表位的缺失可能有助于降低疫苗的傳染性，同時保留其在接種動物中誘導(dǎo)免疫狀態(tài)的能力。目前國內(nèi)已有研究針對LSDV126發(fā)展出特異性探針來進(jìn)行鑒別診斷[22]，但是對于其免疫學(xué)特征還沒有進(jìn)展，這可能是未來疫苗研究的一個方向。

此外，4種LSDV疫苗LW1959、Herbivac、OBP和Cro2016都出現(xiàn)了ORF_087和ORF_131的缺失。在這些分離株中，ORF_087編碼了一種可能由于缺失約50個氨基酸而無明顯作用的蛋白[43]，它可能就是LSDV中晚期表達(dá)基因(VVCOPD10R)的同源基因，可以編碼2種山羊痘病毒屬突變蛋白之一，從而催化mRNA分解。ORF_131可以編碼一種在催化上不具活性的痘病毒過氧化鋅歧化酶的同源物，該蛋白的同源物可以調(diào)節(jié)超氧化物信號，也是影響病毒熱應(yīng)力敏感性的主要病毒衣殼成分[44-45]，已有研究表明SOD同源物可能提高免疫原性并降低毒力[46]。

值得注意的是，LSDV中國毒株(LSDV/China/Xinjiang/2019)被推測為疫苗樣毒株[47]，提示目前在國內(nèi)流行的病毒很有可能是疫苗株與自然毒重組衍生形成的，這種復(fù)雜性不僅給國內(nèi)的牛結(jié)節(jié)性皮膚病疫情防控帶來了難題，也為疫苗的研制帶來了難題，如何有效檢出病毒以及研發(fā)出安全有效的疫苗是目前的研究熱點(diǎn)。

6 小結(jié)

目前，WOAH將牛結(jié)節(jié)性皮膚病列為法定報(bào)告的動物疫病，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部暫時將其作為二類動物疫病管理。牛結(jié)節(jié)性皮膚病的有效防控需要了解其直接或間接的傳播方式以及各種節(jié)肢動物的媒介作用，做好蚊、蠅、蠓、虻、蜱等蟲媒的滅殺工作，并對隔離場所內(nèi)外環(huán)境進(jìn)行嚴(yán)格消毒。必要時采取封鎖、撲殺等措施。按照動物防疫法和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定，對牛結(jié)節(jié)性皮膚病疫情實(shí)行快報(bào)制度。任何單位和個人發(fā)現(xiàn)牛出現(xiàn)疑似牛結(jié)節(jié)性皮膚病癥狀，應(yīng)立即向所在地畜牧獸醫(yī)主管部門、動物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)或動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)報(bào)告，有關(guān)單位接到報(bào)告后應(yīng)立即按規(guī)定通報(bào)信息，按照“可疑疫情—疑似疫情—確診疫情”的程序認(rèn)定疫情。

除此之外，我們還需要開發(fā)出一種快速確認(rèn)的診斷方法，探究當(dāng)前使用的疫苗的有效性，了解疫苗保護(hù)的免疫學(xué)相關(guān)性，開發(fā)出新型、安全、高效和性價比高的動物疫苗，包括滅活疫苗和潛在的重組疫苗，同時加強(qiáng)對各級畜牧獸醫(yī)主管部門、動物疫病預(yù)防控制中心和動物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)工作人員的技術(shù)培訓(xùn)，提高從業(yè)人員防治意識[48]。