干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)在結(jié)核病臨床診斷中的應(yīng)用

王珍，王志遠，肖婷婷

聊城市第四人民醫(yī)院檢驗科，山東聊城 252000

我國肺結(jié)核發(fā)病率高，嚴重危害人民群眾的生活，故及時診治是肺結(jié)核防治的重要環(huán)節(jié)。目前，肺結(jié)核是一種在全球范圍內(nèi)普遍存在的、不可忽略的公共健康問題[1]。肺結(jié)核的臨床癥狀多種多樣，且隨病情進展可影響到全身系統(tǒng)，從而危及到患者的健康，故應(yīng)盡早確診，并針對病情進行有針對性的治療，以提高患者的預(yù)后。痰培養(yǎng)是對結(jié)核病臨床診斷的“金標準”。但是，對分枝桿菌進行培養(yǎng)，耗時長、效率低、陽性檢出率不理想等問題[2-3]。因此，如何找到一種能更好地提高肺結(jié)核患者的預(yù)后，就成了醫(yī)學領(lǐng)域的重要課題。干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)是以酶聯(lián)免疫檢測法為基礎(chǔ)，逐步發(fā)展而來的一種新方法，是用對抗原或抗體展開檢測，在獲取患者血清后，對酶復合物進行常規(guī)稀釋，并與說明書的內(nèi)容相結(jié)合，以區(qū)分診斷檢驗中的陰性或陽性結(jié)果，從而對患者的疾病狀況進行判斷，干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)在診斷效率和精度上都有顯著的提升，在結(jié)核病的臨床診斷中發(fā)揮重要價值[4]。為探究結(jié)核病臨床診斷中，采用干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)的有效性，本次研究選取2022 年2 月—2023 年2 月聊城市第四人民醫(yī)院檢驗科98 例疑似結(jié)核病患者開展調(diào)研?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院檢驗科就診的98 例疑似結(jié)核病患者為研究對象，女38 例，男60 例；年齡18~82 歲，平均（50.12±6.08）歲；體質(zhì)指數(shù)18~25 kg/m2，平均（21.26±0.89）kg/m2。本研究經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準同意。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①具有良好的溝通和表達能力；②自愿入組研究，簽署知情同意書。

排除標準：①神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者；②近期接受免疫抑制劑治療或糖皮質(zhì)激素治療的患者；③合并支氣管哮喘患者；④肝腎功能異?；颊?。

1.3 方法

結(jié)核菌素皮膚過敏試驗。采用皮內(nèi)注射法，將0.1 mL 純蛋白衍生物原液作為備用，再將0.2 mL 純蛋白衍生物原液與0.9%氯化鈉注射液混合，將其稀釋到0.4 mL。純蛋白衍生物的劑量：第1 次測試溶液為0.000 1 mg/0.1 mL。采用傳統(tǒng)的滅菌方法，將0.1 mL 的純蛋白衍生物注入上肢前臂區(qū)，2~3 d后進行試驗，并對結(jié)果進行分析。對病灶周圍及周圍組織進行有無硬結(jié)，同時對病灶周圍組織進行檢查，同時對病灶周圍組織進行測量，并對病灶周圍組織進行測量，以平均≥5 mm 病灶為陽性，<5mm 的病灶為陰性。

干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)。采用酶聯(lián)免疫斑點試劑，收集被試患者靜脈血10 mL，用乙二胺四乙酸抗凝，2 h 后內(nèi)將被單核細胞洗滌兩次，并在酶聯(lián)免疫斑點培養(yǎng)板前用抗干擾素-γ 抗體包裹，加入100 μL 細胞懸浮液，每孔2×105 個細胞。在陽性對照組的孔隙中，添加5 μg/mL 濃度的植物血凝素；禁止將刺激物加入到陰性對照組的每個孔隙中。在實驗孔中添加具有5 μg/mL 濃度的特異抗原刺激劑，如PoolB、ESAT-6、PoolA。將該培養(yǎng)板置于含有5% CO2且溫度37℃的培養(yǎng)箱中，繼續(xù)進行16~24 h 培養(yǎng)。2 h 后清洗該板，添加生物素抗體干擾素-γ，溫育1 h。以親和素作標記二抗體，繼續(xù)培養(yǎng)1 h 后加入基質(zhì)溶液，進行顯色。用自來水沖洗后，用酶聯(lián)免疫斑點測定儀檢測斑塊數(shù)目。檢驗結(jié)果（每個孔洞的斑塊數(shù)目不包括陰性孔洞的斑塊數(shù)目）≥30 為陽性；如果PoolB、ESAT-6、PoolA 中至少有1 種抗原呈陽性，該檢測結(jié)果為陽性；3 項抗原檢測均為陰性時，檢測結(jié)果為陰性。

1.4 觀察指標

將痰培養(yǎng)結(jié)果作為診斷的金標準。對比結(jié)核菌素皮膚過敏試驗、干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)診斷的陽性檢出率。

對比結(jié)核菌素皮膚過敏試驗、干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)診斷的診斷效能。包含敏感度、特異度、準確性。靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%；特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%；準確性=（真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù)）/總例數(shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計方法

采用SPSS 23.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以例數(shù)（n）和率（%）表示，進行χ2檢驗。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢查方法陽性檢出率對比

痰培養(yǎng)（金標準）顯示，陽性40 例（檢出率：40.82%）、陰性58 例（檢出率：59.18%）。結(jié)核菌素皮膚過敏試驗檢測，陽性48 例（檢出率：48.98%）、陰性50 例（檢出率：51.02%）。干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)檢測，陽性41 例（檢出率：41.84%）、陰性57 例（檢出率：58.16%）。見表1。

表1 兩種檢查方法陽性檢出率對比（n）

2.2 兩種檢查方法的診斷效能對比

干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)的特異度與準確性均高于結(jié)核菌素皮膚過敏試驗，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；兩種檢驗方法的敏感度比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表2。

表2 兩種檢查方法的診斷效能對比（%）

3 討論

結(jié)核病是由結(jié)核桿菌感染引起的一種慢性傳染病，是全球第二大傳染病，也是僅次于艾滋病的第二疾病。我國是肺結(jié)核高發(fā)的大國，患者人數(shù)位居全球第二，而且其感染人數(shù)持續(xù)增長，已成為影響人民生命和生命的重要因素。當前，結(jié)核分枝桿菌的臨床確診主要依靠臨床癥狀、影像學和病理等綜合方法，但由于其臨床和影像學特征不明確，容易造成漏診，而病理學方法又存在樣本難以獲取等問題[5]。目前，臨床上多以細菌學檢查為主，費時費力且靈敏度不高，難以達到臨床要求。結(jié)核菌素皮膚過敏試驗是目前臨床上使用最多的一項免疫檢查技術(shù)，但是由于其容易受到非結(jié)核分枝桿菌感染和卡介苗的感染而出現(xiàn)假陽性[6-7]。

近年來，以干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)為代表的新型免疫學方法，已經(jīng)在臨床上廣泛使用?，F(xiàn)代研究都表明，干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)對于結(jié)核桿菌的特異性比較高。在獲得疑似結(jié)核病患者血液樣品后，可以對受檢者進行全血檢測，通過識別伽馬干擾素水平變化，從而對患者身體狀況做出詳細判斷，從而判斷是否發(fā)生結(jié)核桿菌感染等情況[8]。干擾素體外釋放檢測可用于檢測抗結(jié)核治療期間人體產(chǎn)生的抗結(jié)核免疫反應(yīng)，其檢測靈敏度和特異性均較高，適用于各種結(jié)核病患者的輔助診斷[9]。干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)與抗結(jié)核治療有效相關(guān)，與患者的臨床癥狀、臨床分型、年齡、性別以及健康狀況等均無相關(guān)性，具有良好的可重復性[10]。

干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)可以迅速地檢測到患者的伽馬干擾素反應(yīng)水平，可以根據(jù)T細胞的介導狀態(tài)做出判定，并根據(jù)這些重要的生化指標來判定患者的病情進展，從而確保其準確性[11]。具本次調(diào)查結(jié)果顯示，干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)的特異度（91.38%）與準確性（90.82%）均高于結(jié)核菌素皮膚過敏試驗（72.41%、75.51%）（P<0.05）。張宏軍等[12]學者研究結(jié)果表明，干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)的特異度（92.00%）與準確性（90.00%）均高于結(jié)核菌素皮膚過敏試驗（72.00%、75.00%）（P<0.05），與本文研究結(jié)果類似。結(jié)核病的確診具有很高的特異度與準確性，從而能夠利用干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)將結(jié)核病進行快速準確地鑒別，因此，在臨床上，利用干擾素的離體酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)，能夠幫助醫(yī)生迅速地做出診斷，特別是對于肺外結(jié)核病有著非常高的敏感性。在臨床上，對于結(jié)核潛伏感染或合并免疫系統(tǒng)疾病的患者，采用干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)仍能維持高的陽性檢出率，干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)已有取代結(jié)核菌素皮膚過敏試驗的趨勢，干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)在結(jié)核病臨床診斷可以滿足結(jié)核病臨床診斷的需要，且操作步驟簡單、結(jié)果精準等優(yōu)勢[13]?？梢詼p少誤診、漏診等現(xiàn)象的發(fā)生率，為結(jié)核病的早期預(yù)防、早期治療奠定堅實的基礎(chǔ)，干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)在結(jié)核病臨床診斷中有著廣泛的應(yīng)用前景[14-15]。

綜上所述，干擾素體外釋放酶聯(lián)免疫檢驗技術(shù)在結(jié)核病臨床診斷中應(yīng)用效能較高，具有廣泛的應(yīng)用價值。