復(fù)合富硒植物固體飲料的制備及其生物活性研究

鄭貴娟，羅建群，南占東，楊 敏，何美軍,4,*，姚廣民,2,*

（1.華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，湖北武漢 430030；2.恩施硒禾生物科技有限公司，湖北恩施 445000；3.恩施硒司令生態(tài)農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司，湖北恩施 445000；4.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院中藥材研究所，湖北恩施 445000）

硒（Selenium，Se）是一種稀散的元素[1]，在自然界中的含量及其稀少。世界衛(wèi)生組織和國內(nèi)營養(yǎng)組織認(rèn)定硒是人體必需的微量元素之一[2]，缺硒會嚴(yán)重影響人體健康，如克山病、大骨節(jié)病、免疫缺陷和甲狀腺疾病等[3-5]。硒元素在自然界中存在有機硒和無機硒兩種方式，其中有機硒包括硒蛋白、硒代氨基酸及硒多糖等，它們?nèi)菀妆蝗梭w吸收，但其物質(zhì)成本高且成分復(fù)雜[6]。人體硒的主要來源是通過食物攝入，其中富硒農(nóng)作物是人體獲取有機硒的重要途徑之一[7-8]。恩施州，譽有“世界硒都，中國硒谷”的美稱，擁有不可替代的世界級硒資源，具有發(fā)展天然富硒特色農(nóng)業(yè)和硒精深加工產(chǎn)業(yè)的頂級資源優(yōu)勢[9]。

西蘭花富含抗壞血酸、硫代葡萄糖苷等活性成分[10]，聚硒能力強[11]，具有抗衰老、防癌抗癌、增強機體免疫力等作用。葛根富含葛根素及異黃酮類物質(zhì)，具有抗氧化、解酒護肝、預(yù)防骨質(zhì)疏松等功效[12]。藤茶中富含多酚類物質(zhì)以及兒茶素的氧化聚合成分，具有抗炎、降血壓、降血脂等作用[13-14]。黃精富含甾體皂苷、黃精多糖和黃精低聚糖，能補氣養(yǎng)陰，健脾潤肺，具有增強免疫功能、抗衰老、耐缺氧、抗疲勞等作用。木瓜性溫味酸，平肝和胃，具有抗氧化、增強人體免疫力等作用。西紅柿富含胡蘿卜素和番茄紅素，對抗衰老、預(yù)防癌癥、降低心血管疾病等具有積極作用[15]。恩施地區(qū)豐富的藥食同源植物因富含硒元素而具有更高的營養(yǎng)價值[16]，是發(fā)展有機硒產(chǎn)業(yè)的資源寶庫。

近年來，隨著生活水平的提高，人們醫(yī)療消費觀念也從治已病轉(zhuǎn)向“預(yù)防和保健”[17]。保健飲料越來越受到消費者青睞，具有廣闊的市場需求和發(fā)展前景。目前市售富硒固體飲料包括富硒葛桑飲、富硒黑木耳固體飲料、富硒姬松茸固體飲料、富硒麥芽粉固體飲料、富硒蛋白粉固體飲料等，配制原料通常為一種或兩種，配伍簡單，成分相對單一，且未見相關(guān)功能性研究的報道。本研究以藥食同源植物材料富硒西蘭花、葛根、藤茶、黃精、木瓜和西紅柿等六種原料合理配伍，開發(fā)一款復(fù)合富硒植物功能性固體飲料，營養(yǎng)成分豐富。本研究對其開展多種功能活性評價，包括抗腫瘤細(xì)胞增殖活性、抗氧化活性和鎮(zhèn)痛活性等，并首次報道對該類固體飲料的抗腫瘤活性和鎮(zhèn)痛活性研究。該富硒固體飲料的開發(fā)對于預(yù)防疾病、強身保健具有重要現(xiàn)實意義。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

富硒西蘭花、葛根、藤茶、黃精、木瓜、西紅柿等新鮮材料 恩施硒禾生物科技有限公司；硒標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000 μg/mL） 國家有色金屬及電子材料分析檢測中心；3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-5（3-carboxymethoxyphenyl）-2-（4-sulfopheny）-2H-tetrazolium（MTS）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、N-乙酰半胱氨酸（NAC）、2',7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯（DCFHDA）、順鉑（DDP）、紫杉醇（Taxol）和維生素C 等Sigma 試劑公司；Biosharp 胎牛血清、DMEM 細(xì)胞培養(yǎng)液、RMPI-1640 細(xì)胞培養(yǎng)液、PBS 緩沖鹽溶液、細(xì)胞裂解液、H2O2、DMSO、HNO3、生理鹽水和瓊脂培養(yǎng)基等 迪米特（武漢）生物試劑有限公司；無水乙醇、冰醋酸 分析純，國藥集團有限公司；大腸桿菌CICC10389、沙門氏菌CICC21513、志賀氏菌CICC21680 和金黃色葡萄球菌CICC21600 等微生物標(biāo)準(zhǔn)菌液 中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心；肺癌細(xì)胞A549、肝癌細(xì)胞SMMC-7721、乳腺癌細(xì)胞MCF-7、結(jié)腸癌細(xì)胞SW480、人肺上皮細(xì)胞BEAS-2B、人肝癌LO2 細(xì)胞等細(xì)胞 實驗室自存細(xì)胞株；昆明KM 小鼠 80 只，雌雄各半，體重約18～22 g，華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院實驗動物中心，實驗動物使用許可證號SCXK（湖北）2021-0057，生產(chǎn)許可證號SCXK（湖北）2020-0018。

DHG-9240A 鼓風(fēng)干燥箱 上海超鴻儀器設(shè)備有限公司；PSD 型離心機 張家港市恒安機械制造有限公司；HZ-TNG 多功能提取濃縮機組 上海輝展實驗設(shè)備有限公司；XDW-6 系列超微粉碎機 濟南達(dá)微機械有限公司；GMS 紅外干燥滅菌烘箱 常州市龍杰干燥機械有限公司；AFS-820 原子熒光光度計 北京吉天儀器有限公司；TE2000-S 熒光倒置顯微鏡 日本尼康公司；Bio-Rad680 多功能酶標(biāo)儀北京東迅天地醫(yī)療儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 復(fù)合富硒植物固體飲料的研制 操作要點：

a.分選、去雜和漂洗：選取基地種植的富硒西蘭花、葛根、藤茶、黃精、木瓜和西紅柿等原料，其中干燥后的植物原料中硒含量均不低于150 μg/kg[18]。將泥土、雜質(zhì)去除，原材料清洗干凈、瀝水。

b.預(yù)處理：根據(jù)物料特性將原料剪切和破碎等均勻處理。

c.干燥：將剪切后的西蘭花、黃精、藤茶、葛根、木瓜和西紅柿用鼓風(fēng)干燥箱進(jìn)行干燥，溫度不高于60 ℃，烘干后含水率3%～8%。

d.加熱浸提：按干燥后重量將西蘭花、葛根、藤茶、黃精、木瓜、西紅柿按照3:4:2:2:2:2 配伍，加入蒸餾水在60 ℃浸提2 h，料液比為10:1。

e.過濾、脫色：用100 目網(wǎng)篩的濾袋裝離心機過濾，除去廢渣、顆粒性物質(zhì)以及沉淀的淀粉等，得到濾液I。將濾液I 用活性碳柱進(jìn)行脫色處理，得到濾液II。

f.濃縮：將濾液II 真空濃縮，溫度60 ℃，真空度-0.06 Mpa，濃縮至相對密度為1.08～1.22，放置室溫?zé)o菌狀態(tài)下冷卻，得到提取物干膏。

g.干膏粉碎：將提取物干膏粉碎，過100 目篩，得到固體粉末，即為富硒固體復(fù)合固體飲料。

h.檢驗：對產(chǎn)品感官品質(zhì)、微生物限度以及硒含量等進(jìn)行檢驗。

1.2.2 復(fù)合富硒植物固體飲料感官評價指標(biāo)測定稱取5 g 樣品于潔凈玻璃杯中，在室溫、自然光環(huán)境下用肉眼觀察其色澤和外觀形態(tài)。稱取一定量樣品按照比例在無色玻璃杯中沖溶稀釋后，立即嗅其香氣，辨其滋味，靜置2 min 后，觀察燒杯底部有無沉淀。選擇10 名有經(jīng)驗的專業(yè)人員（男6 名，女4 名），年齡在20～35 之間的成員組成的品評小組，分別從色澤（25 分）、滋味（25 分）、香氣（25 分）和組織形態(tài)（25 分）等方面綜合評定復(fù)合富硒植物固體飲料的品質(zhì)[14]，滿分100 分。品評指標(biāo)見下表1。

1.2.3 微生物指標(biāo)測定 參考國家標(biāo)準(zhǔn)GB 4789.2-2016[19]、 GB 4789.3-2016[20]和 GB 4789.4-2016[21]測定復(fù)合富硒植物復(fù)合固體飲料中菌落總數(shù)、大腸桿菌數(shù)和致病菌數(shù)。取10 g 富硒復(fù)合固體飲料裝入有100 mL 生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，制成1:10 的樣品溶液；取1:10 的樣品溶液1 mL，沿管壁緩慢注入裝有9 mL 生理鹽水的無菌試管中，注意吸管不要觸碰稀釋液面，振搖試管混合均勻，制成1:100 的樣品溶液；取1:100 的樣品溶液1 mL，沿管壁緩慢注入裝有9 mL 生理鹽水的無菌試管中，振搖試管混合均勻，制成1:1000 的樣品溶液。根據(jù)每個活的細(xì)菌能長出一個菌落的原理設(shè)計，分別吸取1 mL 的1:10、1:100、1:1000 的樣品溶液于無菌平板中，每個濃度平行做3 個平板。同時，吸取1 mL 的空白稀釋液加入3 個無菌平板中作為空白對照，吸取1 mL標(biāo)準(zhǔn)菌液加入3 個無菌平板中作為陽性對照。加入瓊脂培養(yǎng)基，并混合均勻，在37 ℃下培養(yǎng)48 h，根據(jù)培養(yǎng)出的菌落數(shù)，計算活菌數(shù)。

1.2.4 復(fù)合富硒植物固體飲料硒含量的測定 采用熒光光度法測定復(fù)合富硒植物固體飲料中的硒含量[22]。使用體積分?jǐn)?shù)為5% HNO3溶液，將硒標(biāo)準(zhǔn)儲備液逐級稀釋，配制系列濃度0、0.5、1、5、10、20、40 和80 μg/L，制備硒標(biāo)準(zhǔn)溶液。

稱取復(fù)合富硒固體飲料粉末0.5 g 置于石英試管中，加入5% HNO3溶液10 mL，H2O2溶液5 mL，浸泡12 h，放入微波消解儀中消解10 min（功率1000 W，溫度130 ℃）。冷卻后超聲脫氣5 min，定容至25 mL，搖勻，待測定硒含量，平行測定3 次，同時做空白實驗。

1.2.5 復(fù)合富硒植物固體飲料抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性測定 采用MTS 法[23-26]評價該固體飲料對4 株腫瘤細(xì)胞（肺癌A549、肝癌SMMC-7721、乳腺癌MCF-7 和結(jié)腸癌SW480）和1 株正常肺上皮細(xì)胞（BEAS-2B）的細(xì)胞增殖活性的影響。設(shè)定順鉑（DDP）和紫杉醇（Taxol）為2 組陽性對照，添加劑DMSO 為陰性對照。

用含10%胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液（DMEM 或RMPI-1640）配成單細(xì)胞懸液種于96 孔板（1×104個/孔），每孔體積100 μL，培養(yǎng)24 h 后加入待測定樣品溶液。植物硒固體飲料的粉末用DMSO 溶解，以100 μg/mL 濃度初篩，每孔終體積為200 μL，每種處理均設(shè)3 個復(fù)孔。在細(xì)胞培養(yǎng)箱中37 ℃，5% CO2培養(yǎng)48 h 后，吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加20 μL MTS溶液和100 μL 培養(yǎng)液，繼續(xù)孵育2～4 h。使用多功能酶標(biāo)儀讀取492 nm 波長下各孔光吸收值，記錄結(jié)果，處理數(shù)據(jù)。

1.2.6 復(fù)合富硒植物固體飲料抗氧化活性測定

1.2.6.1 復(fù)合富硒植物固體飲料DPPH 自由基清除力的測定 精確稱取復(fù)合富硒植物固體飲料的粉末樣品，用無水乙醇配置成濃度梯度的溶液（50、100、200、500、1000 和2000 μg/mL），取100 μL 樣品溶液，加入100 μL 0.2 mol/L DPPH 溶液、立即混勻，每種處理均設(shè)3 個復(fù)孔。室溫避光放置30 min，使用多功能酶標(biāo)儀讀取517 nm 波長下各孔光吸收值[27-28]。設(shè)定維生素C 為陽性對照，無水乙醇為陰性對照組，按如下公式計算清除率。

式中：AS為DPPH 溶液加入樣品后的吸光度值；Asb為樣品本身的吸光度值（不加DPPH 溶液）；Ab為空白組吸光度值。

1.2.6.2 復(fù)合富硒植物固體飲料對H2O2誘導(dǎo)LO2細(xì)胞形態(tài)的影響 實驗分組：空白對照組、H2O2造模組、N-乙酰半胱氨酸（NAC）陽性藥組和待測定樣品組，每組均設(shè)定3 個復(fù)孔。設(shè)定復(fù)合固體飲料粉末濃度梯度為5、10、15、20、30 和50 μg/mL。

實驗步驟參照文獻(xiàn)[29]，取處于對數(shù)生長期且生長狀態(tài)良好的LO2 細(xì)胞，消化計數(shù)后接種于24 孔板（4×104個/孔），每孔體積500 μL，培養(yǎng)24 h 后加入待測定樣品。用培養(yǎng)基稀釋樣品儲備液至待測定樣品的濃度，每孔加入500 μL 樣品，其中空白對照組、H2O2造模組只加入培養(yǎng)基，NAC 陽性對照組加入4 mmol/L NAC，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。吸棄孔內(nèi)液體，用PBS 潤洗兩次，所有組加入H2O2（1 mmol/L）作用30 min。吸除H2O2，PBS 潤洗兩次，每孔加10 μmol/L DCFH-DA 染色30 min，室溫下避光。每孔用PBS 潤洗兩次，吸除PBS 后在熒光顯微鏡下拍照（放大200 倍），觀察各組LO2 細(xì)胞形態(tài)。

1.2.6.3 復(fù)合富硒植物固體飲料對H2O2誘導(dǎo)LO2細(xì)胞內(nèi)活性氧的影響 利用DCFH-DA 熒光探針法[30-31]評價該固體飲料對H2O2誘導(dǎo)LO2 細(xì)胞內(nèi)活性氧影響。

實驗分組和細(xì)胞培養(yǎng)步驟同上述1.2.6.2，設(shè)定復(fù)合固體飲料粉末濃度梯度為5、10、15 和20 μg/mL。每組細(xì)胞加入H2O2誘導(dǎo)后，每孔加入400 μL 裂解液，室溫下避光搖床孵育10 min，將24 孔板中的裂解液分別加至黑框透明底的96 孔板的3 個孔中（100 μL/孔）。采用熒光酶標(biāo)儀檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧熒光強度，激發(fā)光波長488 nm，發(fā)射光波長520 nm。

1.2.7 復(fù)合富硒植物固體飲料鎮(zhèn)痛活性的測定 昆明KM 小鼠，體重約18～22 g，為避免由于性別差異造成的實驗誤差，小鼠雌雄各半分成八組，每組10只。動物實驗經(jīng)華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院實驗動物倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)文號2021-S748），實驗人員嚴(yán)格遵守動物倫理準(zhǔn)則。

設(shè)模型組（0.9% NaCl 溶液），陽性對照組（嗎啡溶液5、1、0.2 和0.04 mg/kg）[32-35]和復(fù)合植物固體飲料的高中低三個劑量組（250、50 和10 mg/kg[36-37]，標(biāo)記為A1、A2 和A3）。

小鼠在醋酸誘導(dǎo)疼痛模型下會表現(xiàn)出比較明顯的扭體反應(yīng)，而具有鎮(zhèn)痛效果的活性成分則會減少扭體次數(shù)[32-35]。小鼠出現(xiàn)腹部內(nèi)凹，軀干與后肢伸張，臀部高起等行為[37]，稱為一次完整的扭體反應(yīng)。實驗前小鼠禁食不禁水12 h，各組小鼠稱重。將每只小鼠單獨放在鐵網(wǎng)籠里獨立觀察，腹腔注射不同劑量的待測定樣品溶液30 分鐘后，腹腔注射0.8% V/V 的醋酸溶液（0.1 mL/10 g），記錄每只小鼠30 min 內(nèi)的扭體次數(shù)。

鎮(zhèn)痛抑制率（%）= [（模型組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù)）/模型組扭體次數(shù)]×100

1.3 數(shù)據(jù)處理

各組實驗數(shù)據(jù)均以平均值±方差表示，采用統(tǒng)計軟件GraphPad Prism 8.0 進(jìn)行統(tǒng)計分析并繪圖，兩組數(shù)據(jù)間比較采用t檢驗法，*P＜0.05、**P＜0.01 和***P＜0.001 表示具有顯著性差異，ns 表示無顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 感官指標(biāo)

分別從色澤、滋味、香氣和組織等四方面綜合評定復(fù)合富硒植物固體飲料的感官品質(zhì)，四個評定項目的權(quán)重相同，綜合品評小組10 人的打分，該樣品感官指標(biāo)得分均值為92.15 分。該復(fù)合富硒植物固體飲料溶解后呈淺黃色，色澤均一；口感好，酸甜可口，后味綿長；澄清透明，組織細(xì)膩；香氣濃郁協(xié)調(diào)。

2.2 微生物指標(biāo)

固體飲料中微生物指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)值為菌落總數(shù)≤30000 CFU/g，大腸桿菌≤900 MPN/kg，不得檢出沙門氏、志賀氏菌和金黃色葡萄球菌等致病菌。按照微生物檢測方法測得該復(fù)合富硒植物固體飲料中的菌落數(shù)≤1000 CFU/g，大腸桿菌≤40 MPN/kg，且未檢測出相關(guān)致病菌，符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求（GB 4789.2-2016、GB 4789.3-2016 和GB 4789.4-2016）。

2.3 復(fù)合富硒植物固體飲料中硒含量測定

以質(zhì)量濃度（μg/L）為橫坐標(biāo)，熒光強度值為縱坐標(biāo)，繪制硒溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線。硒含量在0～80 μg/L 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.9999，回歸方程為Y=112.50X-5.82（圖1）。根據(jù)湖北省制定的《富有機硒食品硒含量要求》中規(guī)定食品中的總硒含量達(dá)到150 μg/kg（固體）或75 μg/L（液體），即可稱“富含硒”或“富硒”食品。通過對復(fù)合富硒固體飲料的樣品進(jìn)行硒含量檢測，其總硒含量為540±30.12 μg/kg，符合富硒要求。

圖1 硒含量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of selenium content

2.4 復(fù)合富硒植物固體飲料抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用

以細(xì)胞抑制率為縱坐標(biāo)，順鉑（DDP）和紫杉醇（Taxol）的濃度為橫坐標(biāo)，繪制細(xì)胞的存活率圖（圖2），應(yīng)用Reed-Muench 公式計算陽性藥的IC50值（表2），表明此研究模型成立。

圖2 順鉑（DDP）和紫杉醇（Taxol）對腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞的活力影響Fig.2 Effects of cis-platin and taxol on the viability of cancer cell and normal cell lines

結(jié)合植物硒固體飲料組數(shù)據(jù)可見（圖3），復(fù)方富硒固體飲料在100 μg/mL 濃度下，能夠促進(jìn)人正常肺上皮細(xì)胞BEAS-2B 的增殖，增長率為12.56%±1.85%。同時，該復(fù)方富硒固體飲料能夠一定程度的抑制肺癌細(xì)胞A-549，肝癌細(xì)胞SMMC-7721，乳腺癌細(xì)胞MCF-7 和結(jié)腸癌細(xì)胞SW480 的增殖，抑制率分別為4.09%±1.36%，19.48%±3.18%，30.75%±1.45%和18.20%±1.12%，說明該復(fù)合富硒固體飲料能一定程度的體外抑制癌細(xì)胞增殖且對正常細(xì)胞沒有破壞作用。本研究結(jié)果表明該類復(fù)合固體飲料具有體外的抗腫瘤細(xì)胞增殖活性。

圖3 復(fù)合富硒植物固體飲料對癌細(xì)胞和正常細(xì)胞的活力影響Fig.3 Effects of compound selenium-enriched plant solid beverage on the viability of cancer cell and normal cell lines

2.5 復(fù)合富硒植物固體飲料抗氧化作用

2.5.1 復(fù)合富硒植物固體飲料DPPH 自由基清除活性 由圖4 可知，植物硒固體飲料在50 μg/mL 濃度下DPPH 自由基清除率為32.28%；在50～1000 μg/mL濃度范圍時，DPPH 自由基清除率隨著樣品濃度的升高而升高；在1000～2000 μg/mL 間，DPPH 自由基清除率穩(wěn)定在90%以上，其IC50為435.6±27.2 μg/mL。該實驗結(jié)果表明該富硒復(fù)合固體飲料樣品有一定的DPPH 自由基清除能力，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，說明該富硒復(fù)合固體飲料具有抗氧化作用。

圖4 復(fù)合富硒植物固體飲料的DPPH 自由基清除能力Fig.4 DPPH radical scavenging ability of the compound selenium-enriched plant solid beverage

2.5.2 復(fù)合富硒植物固體飲料對H2O2誘導(dǎo)LO2 細(xì)胞形態(tài)影響 LO2 細(xì)胞用H2O2造模處理30 min，H2O2造模組的熒光強度明顯強于空白對照組，說明LO2 細(xì)胞氧化損傷模型造模成功。圖5 為復(fù)合富硒固體飲料對H2O2誘導(dǎo)的LO2 細(xì)胞形態(tài)圖。植物硒固體飲料樣品組的熒光強度均明顯低于造模組，且與空白對照組和NAC 陽性藥組的熒光強度接近，樣品組各濃度之間熒光強度無明顯差異，說明該復(fù)合富硒植物固體飲料具有顯著的抗氧化活性。

圖5 復(fù)合富硒植物固體飲料對H2O2 誘導(dǎo)的LO2細(xì)胞形態(tài)的影響Fig.5 Effects of the compound selenium-enriched plant solid beverage on morphology of H2O2-induced LO2 cells

2.5.3 復(fù)合富硒植物固體飲料對H2O2誘導(dǎo)LO2 細(xì)胞內(nèi)活性氧的作用 DCFH-DA 在細(xì)胞內(nèi)被水解為2',7'-二氯二氫熒光素（DCFH），DCFH 在細(xì)胞內(nèi)與活性氧反應(yīng)生成有熒光的2',7'-二氯熒光素（DCF），由此DCFH-DA 熒光強度可反映細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。如圖6 所示，植物硒固體飲料實驗組在5、10、15 和20 μg/mL 的濃度下，氧化損傷的LO2 細(xì)胞內(nèi)熒光強度依次減弱，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平依次降低。該固體飲料能逆轉(zhuǎn)H2O2誘導(dǎo)LO2 細(xì)胞內(nèi)活性氧水平升高，具有抗氧化活性。植物硒固體飲料在20 μg/mL 濃度下，其抗氧化活性與陽性藥N-乙酰半胱氨酸（NAC，4 mmol/L）活性相當(dāng)。實驗結(jié)果表明該復(fù)合富硒固體飲料具有明顯的抗氧化活性。

圖6 復(fù)合富硒植物固體飲料的活性氧熒光強度Fig.6 Active oxygen fluorescence intensity of the compound selenium-enriched plant solid beverage

2.6 復(fù)合富硒植物硒固體飲料鎮(zhèn)痛作用的研究結(jié)果

小鼠在醋酸誘導(dǎo)疼痛模型下會表現(xiàn)出比較明顯的扭體反應(yīng)。統(tǒng)計各實驗組數(shù)據(jù)，復(fù)合富硒固體飲料鎮(zhèn)痛作用結(jié)果如圖7 所示，在醋酸誘導(dǎo)的小鼠扭體實驗中，與模型組相比較，該復(fù)合富硒固體飲料各劑量組（A1：250 mg/kg；A2：50 mg/kg；A3：10 mg/kg）均具有顯著的鎮(zhèn)痛作用（P＜0.01），其鎮(zhèn)痛抑制率分別為92.3%、75.6%和67.5%。其中該復(fù)方固體飲料的高劑量組（250 mg/kg）的效果與陽性藥組嗎啡（5 mg/kg）的效果相當(dāng)。本研究首次報道該類復(fù)合固體飲料的鎮(zhèn)痛活性，研究結(jié)果表明該植物硒固體飲料具有顯著的鎮(zhèn)痛作用。

圖7 復(fù)合富硒植物固體飲料在醋酸扭體模型中的鎮(zhèn)痛作用Fig.7 Analgesic activities of the compound selenium-enriched plant solid beverage in the writhing model

3 結(jié)論

本研究以藥食同源富硒西蘭花、葛根、藤茶、黃精、木瓜和西紅柿為原料，開發(fā)一款功能性的復(fù)合植物硒固體飲料，其總硒含量為540±30.12 μg/kg。該復(fù)合植物固體飲料不僅保留了植物原料的香氣，無添加劑，食用安全，而且體積小，攜帶方便，符合現(xiàn)代人群的快節(jié)奏生活需求。本研究首次對固體飲料類產(chǎn)品的抗腫瘤活性和鎮(zhèn)痛活性進(jìn)行研究，結(jié)果表明此款復(fù)合植物硒固體飲料具有一定的體外抗腫瘤活性，在100 μg/mL 濃度下對四種腫瘤細(xì)胞株（A549、SMMC-7721、MCF-7 和SW480）的 抑 制 率 范 圍4.09%～30.75%。該固體飲料在高劑量組（250 mg/kg）具有顯著的鎮(zhèn)痛作用（P＜0.001），其鎮(zhèn)痛抑制率為92.3%，其鎮(zhèn)痛效果與陽性藥嗎啡（5 mg/kg）的效果相當(dāng)。因此，該復(fù)合植物硒固體飲料具有廣闊的應(yīng)用價值，本研究結(jié)果可為復(fù)合富硒植物固體飲料進(jìn)一步開發(fā)奠定基礎(chǔ)，為恩施地區(qū)藥食同源植物資源的綜合利用提供了理論依據(jù)。但本實驗所得數(shù)據(jù)尚不充分，還需要更多不同的活性評價模型來開展深入研究，且該復(fù)合固體飲料的活性機制尚不明確，故對該復(fù)合固體飲料的認(rèn)識還需更充分細(xì)致的研究。