大蒜素通過JAK2/STAT3 信號通路改善高糖誘導(dǎo)的人腹膜間皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化

甘林望李乾程高利超劉 琦李 瑩王玉潔歐三桃*

(1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院腎病內(nèi)科/四川省腎臟疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心,四川 瀘州 646000;2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科,四川 瀘州 646000)

慢性腎病(chronic kidney disease,CKD)是影響人們健康的重要疾病,據(jù)統(tǒng)計(jì)我國成人患CKD 的比例已超過10%,其中終末期腎病(end-stage renal disease,ESRD) 患 者 約 為300 萬[1]。 腹 膜 透 析(peritoneal dialysis,PD)具有保護(hù)腎功能、維持血流動力學(xué)穩(wěn)定、改善貧血等優(yōu)點(diǎn),已成為治療ESRD 的主要方式之一。 而當(dāng)腹膜長期處于生物不相容性的高糖透析液時(shí)其組織結(jié)構(gòu)容易損傷而引起結(jié)構(gòu)重塑,使腹膜纖維化(peritoneal fibrosis,PF)透析效能下降,超濾衰竭發(fā)生從而制約腹膜透析技術(shù)在臨床上的應(yīng)用[2]。 人腹膜間皮細(xì)胞的上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化是長期處于腹膜透析患者的腹膜組織中很常見的病理特征,是導(dǎo)致腹膜纖維化始動使腹膜超濾衰竭的主要原因之一[3]。 EMT 表現(xiàn)為上皮細(xì)胞表型逐漸消失,成纖維細(xì)胞的標(biāo)志物增加,合成細(xì)胞外基質(zhì)的能力提升等特征,其病理過程復(fù)雜,與多種細(xì)胞因子和信號通路密切相關(guān)[4]。 截至目前,對于EMT 在纖維化的作用被廣泛研究,但腹膜間皮細(xì)胞發(fā)生EMT 的分子機(jī)制尚未清楚。

大蒜素(allicin,AL)是大蒜由水蒸氣蒸餾而得到的一種揮發(fā)油,是大蒜主要的有效成分[5]。 研究發(fā)現(xiàn)大蒜素在抗氧化、抗腫瘤、降血脂、提升機(jī)體免疫力等方面發(fā)揮作用[6]。 大蒜素的抗纖維化作用是近年來新發(fā)現(xiàn)的藥理作用之一。 研究表明大蒜素可抑制胃癌、卵巢癌等多種癌癥的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,抑制癌癥遷移和侵襲[7-8]。 許寧寧[9]的研究結(jié)果表明大蒜素可通過抑制炎癥反應(yīng)和腎組織纖維化保護(hù)慢性腎功能衰竭的大鼠。 因此,大蒜素影響部分組織纖維化的過程,但目前其對于腹膜纖維化的影響尚不清楚。 本研究通過分析D-葡萄糖(Dglucose,DG)對細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞增殖、EMT 發(fā)生及JAK2/STAT3 信號通路的影響,闡明其介導(dǎo)EMT 發(fā)生的分子機(jī)制;同時(shí),通過分析高糖誘導(dǎo)后進(jìn)行大蒜素處理是否能改善EMT 和炎癥,為減少腹膜間皮細(xì)胞的損傷及改善腹膜透析相關(guān)性腹膜炎癥的預(yù)后提供理論依據(jù),為大蒜素在臨床上的應(yīng)用提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞

人腹膜間皮細(xì)胞株HMrSV5,購自Procell 公司,貨號:CP-H180。

1.2 主要試劑與儀器

葡萄糖(Solarbio,貨號:G8150,規(guī)格:250 g);大蒜素(Solarbio,貨號:SA8720,規(guī)格:20 mg)。 ELISA檢測試劑盒(上海茁彩生物科技有限公司,貨號:ZC-32420,ZC-32446,ZC-35733);肌動蛋白(β -actin)、酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)、磷酸化的酪氨酸蛋白激酶2(p-JAK2)、磷酸化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(p-STAT3)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT3)、E-鈣粘蛋白(E-cadherin)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、E-鈣粘蛋白(N-cadherin)、p65、pp65、波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌動蛋白抗體(α-SMA)(abclonal,貨號:AC026,A19629,AP0531,AP0705,A19566,A20798,A7277,A19083,A19653,AP0123,A19607,A17910);生物素化山羊抗兔IgG(abcam,貨號:ab6721);人腹膜間皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基(Procell,貨號:CM-H180);胰酶(Hyclone,貨號:SH30042.01);胎牛血清(TRAN,貨號:P20522);雙抗(Basalmedia, 貨 號: S110JV); CCK-8 試 劑 盒(Biosharp, 貨 號: BS350A); 無 菌 PBS 溶 液(Servicebio, 貨 號: G4202)。 倒 置 生 物 顯 微 鏡(LEICA,型號DMI1);臺式低速離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司,型號TDZ4-WS);CO2培養(yǎng)箱(三洋電機(jī)國際貿(mào)易有限公司,型號:MCO-15AC);掌上離心機(jī)(賽洛捷克,型號:S1010E);酶標(biāo)儀(Molecular Devices,型號:spectra max PLUS 384);垂直電泳槽(北京君意東方電泳設(shè)備有限公司,型號:JY-SCZ4+);電泳儀(北京君意東方電泳設(shè)備有限公司,型號:JY200C);水平脫色搖床(江蘇科析儀器有限公司,型號:TY-80A);化學(xué)發(fā)光凝膠成像儀5200(上海天能科技有限公司);電子恒溫水浴鍋(北京中興偉業(yè)儀器有限公司生產(chǎn),型號:DZKW-4)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)

將人腹膜間皮細(xì)胞HMrSV5 解凍離心后,用含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞在培養(yǎng)皿中進(jìn)行接種,于37℃、5% CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)。

1.3.2 細(xì)胞分組及處理

分組1:培養(yǎng)人腹膜間皮細(xì)胞后將其隨機(jī)分為5組:①對照組;②8.5 mmol/L DG 組:8.5 mmol/L D-葡萄糖誘導(dǎo)組;③17 mmol/L DG 組:17 mmol/L D-葡萄糖誘導(dǎo)組;④34 mmol/L DG 組:34 mmol/L D-葡萄糖誘導(dǎo)組;⑤68 mmol/L DG 組:68 mmol/L D-葡萄糖誘導(dǎo)組。 除對照組外,其余各分別用8.5、17、34、68 mmol/L 的D-葡萄糖誘導(dǎo)48 h。 分組2:培養(yǎng)人腹膜間皮細(xì)胞后將其隨機(jī)分為6 組:①對照組;②HG 組:34 mmol/L D-葡萄糖誘導(dǎo)組;③AL-L組:34 mmol/L D-葡萄糖+低劑量大蒜素誘導(dǎo)組;④AL-M 組:34 mmol/L D-葡萄糖+中劑量大蒜素誘導(dǎo)組;⑤AL-H 組:34 mmol/L-葡萄糖+高劑量大蒜素誘導(dǎo)組;⑥JAK2 組:34 mmol/L D-葡萄糖+JAK2 抑制劑誘導(dǎo)組。 對照組不做任何處理,HG 組用34 mmol/L 的D-葡萄糖誘導(dǎo)48 h,AL-L 組、AL-M 組、AL-H 組用34 mmol/L 的D-葡萄糖預(yù)處理6 h 后分別用10、20 和40 ng/mL 大蒜素誘導(dǎo)48 h,JAK2 組加入1 μmol/L AG490 預(yù)處理6 h 后用34 mmol/L的D-葡萄糖誘導(dǎo)48 h。

1.3.3 CCK-8 分析

取對數(shù)生長期的HMrSV5 細(xì)胞,PBS 洗滌,胰蛋白酶消化后收集,250 r/min 離心5 min,吸除上清液,加入適量培養(yǎng)基使其成為單細(xì)胞懸液;細(xì)胞計(jì)數(shù)后調(diào)節(jié)細(xì)胞密度為4×104/mL,每孔100 μL 接種于96 孔板中,37℃、5% CO2恒溫培養(yǎng)。 待細(xì)胞貼壁后,根據(jù)1.3.2 進(jìn)行分組并處理,用無血清培養(yǎng)基1 ∶10 稀釋CCK-8 試劑,加入已稀釋CCK-8 工作液每孔110 μL;并輕輕晃動培養(yǎng)板數(shù)次,37℃、5% CO2恒溫繼續(xù)培養(yǎng)2 h。 使用酶標(biāo)儀在450 nm 波長處測定各孔的吸光值,根據(jù)公式細(xì)胞相對存活率=(各組OD 值/對照組平均OD 值)×100%,細(xì)胞抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組平均OD/對照組平均OD)×100%計(jì)算相應(yīng)的細(xì)胞存活率及抑制率,并在光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)并拍照。

Grange 葛蘭許：又叫 Bin 95，俗稱澳洲酒王，為Penfolds旗下常規(guī)酒款中的最頂級，首個(gè)年份為1951。

1.3.4 ELISA 試劑盒檢測

根據(jù)ELISA 試劑盒說明書檢測各組細(xì)胞上清中白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)的含量。

1.3.5 蛋白免疫印跡(Western blot)

使用總蛋白提取試劑盒提取各組人腹膜間皮細(xì)胞的總蛋白,并用BCA 法進(jìn)行定量。 各組取等量蛋白質(zhì)用的SDS-PAGE 進(jìn)行分離,分離后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF 膜上,用5%的脫脂奶粉封閉1 h 后,加入β-actin、JAK2、 p-JAK2、 STAT3、 p-STAT3、 Ecadherin、MCP-1、N-cadherin、p65、p-p65、Vimentin、α-SMA 抗體,4℃孵育過夜后TBST 清洗,然后二抗孵育,TBST 清洗,ECL 暗室顯色。 顯色后的蛋白使用Bio-Rad 全功能成像系統(tǒng)采集圖像,Image-Pro Plus 軟件分析光密度,以β-actin 為內(nèi)參,計(jì)算各組蛋白質(zhì)的相對表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。 對于各組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA),對于組間均數(shù)的比較采用最小顯著差數(shù)(LSD)法,以P＜0.05 作為評定差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 HG 誘導(dǎo)對HPMCs 及JAK2/STAT3 信號通路的影響

2.1.1 HG 誘導(dǎo)對HPMCs 增殖的影響

與對照組相比,4 種濃度的葡萄糖都能不同程度地抑制HPMCs 的增殖。 其中8.5 mmol/L D-葡萄糖誘導(dǎo)組具有顯著性的統(tǒng)計(jì)意義(P＜0.05),其余3 組有極顯著性的統(tǒng)計(jì)意義(P＜0.01)。 34 mmol/L D-葡萄糖誘導(dǎo)組細(xì)胞的相對存活率是對照組的一半,其可以明顯抑制HPMCs 增殖,但不會過度抑制,所以選擇34 mmol/L D-葡萄糖為后續(xù)高糖誘導(dǎo)模型的濃度(見圖1)。

注:與對照組比較, *P＜0.05, **P＜0.01。圖1 高糖誘導(dǎo)對人腹膜間皮細(xì)胞增殖的影響Note.Compared with control group, *P＜0.05, **P＜0.01.Figure 1 Effects of hyperglycemia on proliferation of human peritoneal mesothelial cells

2.1.2 HG 誘導(dǎo)對HPMCs 形態(tài)學(xué)變化的影響

注:異常梭形細(xì)胞(?)。圖2 高糖誘導(dǎo)對人腹膜間皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化的影響Note.Abnormal spindle cells(?).Figure 2 Effects of high glucose induction on morphological changes of human peritoneal mesothelial cells

2.1.3 HG 誘導(dǎo)對HPMCs 發(fā)生EMT 的影響

通過Western blot 檢測不同濃度的D-葡萄糖對EMT 相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。 與對照組比,34 mmol/L D-葡萄糖誘導(dǎo)組顯著下調(diào)E-cadherin 的表達(dá)(P＜0.05),68 mmol/L D-葡萄糖誘導(dǎo)組明顯下調(diào)Ecadherin 和 上調(diào)N-cadherin 的 表 達(dá)(P＜0.01);34 mmol/L D-葡萄糖和68 mmol/L D-葡萄糖誘導(dǎo)組明顯上調(diào)Vimentin 的表達(dá),17 mmol/L D-葡萄糖、34 mmol/L D-葡萄糖和68 mmol/L D-葡萄糖誘導(dǎo)組均明顯上調(diào)α-SMA 的表達(dá)(P＜0.01)(見圖3)。

注:與對照組比較, *P＜0.05, **P＜0.01。圖3 高糖誘導(dǎo)對EMT 發(fā)生標(biāo)志蛋白表達(dá)的影響Note.Compared with control group, * P＜0.05, * *P＜0.01.Figure 3 Effects of high glucose induction on the expression of EMT marker protein

2.1.4 HG 誘導(dǎo)對HPMCs 中JAK2/STAT3 信號通路的影響

結(jié)果見圖4,與對照組比較,34 mmol/L D-葡萄糖誘導(dǎo)組顯著上調(diào)p-JAK2的表達(dá)(P＜0.05),68 mmol/L D-葡萄糖誘導(dǎo)組明顯上調(diào)p-JAK2 和p-STAT3 的表達(dá)(P＜0.01);JAK2 和STAT3 蛋白表達(dá)在對照組與四種不同濃度的D-葡萄糖誘導(dǎo)組間無顯著性差異(P＞0.05)。

注:與對照組比較, *P＜0.05, **P＜0.01。圖4 高糖誘導(dǎo)對JAK2/STAT3 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Note.Compared with control group, *P＜0.05, **P＜0.01.Figure 4 Effects of high glucose induction on the expression of JAK2/STAT3 signaling pathway related proteins

2.2 大蒜素對HG 誘導(dǎo)的EMT 及其引起的炎癥的影響

2.2.1 大蒜素對HG 誘導(dǎo)的EMT 中HPMCs 增殖的影響照組和34 mmol/L D-葡萄糖+JAK2 抑制劑誘導(dǎo)組(見圖5)。

注:與對照組比較, **P＜0.01;與HG 組比較, ##P＜0.01。圖5 大蒜素對高糖誘導(dǎo)的EMT 中人腹膜間皮細(xì)胞增殖的影響Note.Compared with control group, **P＜0.01.Compared with HG group, ##P＜0.01.Figure 5 Effects of allicin on proliferation of human peritoneal mesothelial cells in EMT induced by high glucose

2.2.2 大蒜素對HG 誘導(dǎo)的EMT 中HPMCs 形態(tài)學(xué)變化的影響

通過CCK-8 檢測不同濃度的大蒜素對HPMCs增殖的影響,結(jié)果表明HG 的誘導(dǎo)明顯下調(diào)HPMCs的相對存活率。 相比于HG 誘導(dǎo)組,實(shí)驗(yàn)中設(shè)置的不同濃度的大蒜素及均能明顯上調(diào)HPMCs 的相對存活率(P＜0.01)。 其中34 mmol/L D-葡萄糖+高劑量大蒜素誘導(dǎo)組的促增殖作用最佳并接近于對觀察HPMCs 形態(tài)學(xué)變化發(fā)現(xiàn)HG 的誘導(dǎo)后異常梭形的HPMCs 比例增多。 而與HG 誘導(dǎo)組相比,3 種濃度的大蒜素均能使異常的HPMCs 減少,并且大蒜素的濃度越高,異常形態(tài)細(xì)胞的比例就越少,其中34 mmol/L D-葡萄糖+高劑量大蒜素誘導(dǎo)組的細(xì)胞形態(tài)與對照組更接近(見圖6)。

注:異常梭形細(xì)胞(■)。圖6 大蒜素對高糖誘導(dǎo)的EMT 中人腹膜間皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化的影響Note.Abnormal spindle cells(■).Figure 6 Effects of allicin on morphological changes of human peritoneal mesothelial cells in EMT induced by high glucose

2.2.3 大蒜素對HG 誘導(dǎo)的EMT 發(fā)生的影響

HG 誘導(dǎo)后E-cadherin 蛋白表達(dá)明顯下調(diào),Ncadherin、Vimentin 和α-SMA 蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.01),而經(jīng)3種濃度的大蒜素處理后,E-cadherin蛋白表達(dá)上調(diào),N-cadherin、Vimentin 和α-SMA 蛋白表達(dá)下調(diào)。 其中34 mmol/L D-葡萄糖+中劑量大蒜素誘導(dǎo)組的E-cadherin、Vimentin 和α-SMA 蛋白表達(dá)與HG 誘導(dǎo)組有顯著性差異(P＜0.05),34 mmol/L D-葡萄糖+高劑量大蒜素誘導(dǎo)組、34 mmol/L D-葡萄糖+JAK2 誘導(dǎo)組的EMT 發(fā)生相關(guān)蛋白表達(dá)與HG 誘導(dǎo)組有極顯著差異(P＜0.01)。 34 mmol/L D-葡萄糖+高劑量大蒜素誘導(dǎo)組的EMT 發(fā)生相關(guān)蛋白的水平與對照組更接近(見圖7)。

2.2.4 大蒜素對HG 誘導(dǎo)的EMT 引起的炎癥的影響

如圖8 所示,HG 誘導(dǎo)后IL-1β、IL-6 和TNF-α的含量明顯升高(P＜0.01),而用3 種濃度的大蒜素及JAK2抑制劑處理后含量明顯降低(P＜0.01)。其中34 mmol/L D-葡萄糖+高劑量大蒜素誘導(dǎo)組的IL-1β、IL-6 和TNF-α 水平與對照組更接近。 HG 誘導(dǎo)后MCP-1 和p-p65 蛋白的表達(dá)明顯上調(diào),經(jīng)不同濃度的大蒜素及JAK2 抑制劑處理后MCP-1 蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.01),34 mmol/L D-葡萄糖+低劑量大蒜素誘導(dǎo)組p-p65 蛋白的表達(dá)顯著下調(diào)(P＜0.05),34 mmol/L D-葡萄糖+中劑量大蒜素誘導(dǎo)組、34 mmol/L D-葡萄糖+高劑量大蒜素誘導(dǎo)組和34 mmol/L D-葡萄糖+JAK2 抑制劑誘導(dǎo)組p-p65 蛋白的表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.01)。 p65 蛋白的表達(dá)在不同組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 34 mmol/L D-葡萄糖+高劑量大蒜素誘導(dǎo)組的炎性信號蛋白的水平與對照組更接近。

注:與對照組比較, **P＜0.01;與HG 組比較, #P＜0.05, ##P＜0.01。圖8 大蒜素處理對炎性因子含量及炎性信號蛋白表達(dá)的影響Note.Compared with control group, **P＜0.01.Compared with HG group, #P＜0.05, ##P＜0.01.Figure 8 Effects of allicin treatment on the content of inflammatory factors and expression of inflammatory signaling proteins

3 討論

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化是一種有助于傷口愈合的現(xiàn)象,但其會造成一些纖維化的疾病,比如腹膜纖維化[10]。 在PD 患者中,防止EMT 的發(fā)生可以改善腹膜纖維化,保護(hù)腹膜的功能[11]。 人腹膜間皮細(xì)胞是導(dǎo)致腹膜纖維化的主動參與者,其通過EMT 轉(zhuǎn)變?yōu)槌衫w維細(xì)胞,對腹膜纖維化起到了重要作用[12]。 發(fā)生EMT 時(shí),腹膜間皮細(xì)胞喪失黏附性及細(xì)胞間的緊密連接,獲得侵襲及遷移的能力,進(jìn)而侵入腹膜間皮下緊密帶,并合成致炎因子、致血管生成因子和細(xì)胞外基質(zhì)[3,13]。 本研究中用D-葡萄糖誘導(dǎo)后明顯抑制了HPMCs 的增殖,并使其細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)異常的梭形,同時(shí),與EMT 的發(fā)生相關(guān)的上皮細(xì)胞標(biāo)志E-cadherin 表達(dá)下調(diào),間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志α-SMA、N-cadherin 和 Vimentin 表達(dá)上調(diào),這與Liu 等[14]和趙星旭等[15]研究結(jié)果一致,揭示此時(shí)HPMCs 發(fā)生了上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化;而經(jīng)大蒜素處理后,HPMCs 增殖明顯提高,異常形態(tài)細(xì)胞比例減少,促進(jìn)EMT 發(fā)生的間充質(zhì)細(xì)胞蛋白表達(dá)顯著降低,抑制EMT 發(fā)生的上皮細(xì)胞蛋白表達(dá)顯著升高,揭示大蒜素能通過影響HPMCs 的增殖及形態(tài)和調(diào)節(jié)EMT 發(fā)生蛋白的平衡可以顯著改善EMT。

JAK/STAT 信號通路是介導(dǎo)細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵通路,其通過參與調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞間的黏附影響上皮細(xì)胞癌惡性病變中細(xì)胞EMT 的發(fā)生[16]。 阻斷JAK2/STAT3 信號通路時(shí)腹膜間皮細(xì)胞EMT 的發(fā)生被抑制[17]。 磷酸化的STAT3 形成二聚體后進(jìn)入細(xì)胞核,促進(jìn)纖維化和與促炎癥因子相關(guān)的靶基因的表達(dá)[18]。 本研究中經(jīng)D-葡萄糖誘導(dǎo)后,磷酸化的JAK2 和STAT3 的表達(dá)明顯上調(diào),揭示高糖誘導(dǎo)激活了JAK2/STAT3 信號通路促進(jìn)了HPMCs 的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化。

炎癥是腹膜纖維化的關(guān)鍵因素,其與纖維化相互誘導(dǎo)、相互促進(jìn)[19-20]。 研究表明由免疫性細(xì)胞分泌的IL-1、IL-6、TNF-α 等促炎因子和IL-4、IFN-β、TGF-β 等抗炎因子在免疫反應(yīng)和慢性炎癥中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用[21]。 細(xì)胞核因子-κB(NF-κB)信號通路被激活后會使IL-1β、IL-6 和TNF-α 等細(xì)胞炎癥因子表達(dá)上調(diào)從而加劇炎癥反應(yīng)[22]。 而NF-κB 是由p50 和p65 亞基組成的異源性二聚體,是一種重要的胞漿內(nèi)表達(dá)的多功能核轉(zhuǎn)錄因子,其激活后參與機(jī)體的慢性炎癥、免疫反應(yīng)等過程[23]。 MCP1 是機(jī)體內(nèi)炎癥級聯(lián)的起始細(xì)胞因子,其分泌受到IL-1、TNF-α 等信號分子的誘導(dǎo)[24]。 本研究中用高糖誘導(dǎo)后HPMCs 的促炎癥因子IL-1β、IL-6 和TNF-α 明顯升高,磷酸化的p50 比例升高,MCP1 表達(dá)明顯上調(diào),揭示此時(shí)HPMCs 的炎癥加重,而大蒜素明顯緩解了HPMCs 的炎癥反應(yīng)。

綜上所述,高糖能使EMT 發(fā)生蛋白、炎癥相關(guān)蛋白及細(xì)胞因子的表達(dá)異常,激活JAK2/STAT3 信號通路從而促進(jìn)EMT 的發(fā)生,而大蒜素能通過恢復(fù)HPMCs 形態(tài)及增殖異常、調(diào)節(jié)與EMT 發(fā)生及炎癥相關(guān)的蛋白及因子的水平使其逐漸恢復(fù)正常從而改善HPMCs 的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化及炎癥。