某集團(tuán)使用新型豬藍(lán)耳滅活疫苗控制豬藍(lán)耳病類NADC30 和類NADC34毒株混合感染案例

賴慶光 ，楊茂春 ，歐偉業(yè) ，衛(wèi)秀余

（1.浙江美保龍生物技術(shù)有限公司，浙江 金華 321016；2.上海市奉賢區(qū)獸醫(yī)研究所，上海 201400）

1 豬場背景

某養(yǎng)豬集團(tuán)公司在2021年10—12月期間，有四個(gè)生產(chǎn)基地出現(xiàn)母豬流產(chǎn)、死胎增加的現(xiàn)象，保育豬死淘率升高，部分批次可達(dá)40%，送檢病料檢測到豬藍(lán)耳病病毒核酸陽性。豬藍(lán)耳病暴發(fā)前一直使用某進(jìn)口豬藍(lán)耳病經(jīng)典株活疫苗，由于生產(chǎn)不穩(wěn)定，2021年11月增加了自家組織滅活疫苗和定制五聯(lián)苗（豬藍(lán)耳、豬圓環(huán)病毒病、支原體、鏈球菌、副豬嗜血桿菌滅活疫苗）免疫母豬和仔豬，效果不理想。

美保龍技術(shù)服務(wù)團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)約在2021年12月20日過去交流，建議采樣檢測摸底評估和初步確定藍(lán)耳滅活疫苗免疫方案，隨后隔離開展駐場服務(wù)。

2 現(xiàn)場臨床和解剖情況

2022年1月6日-20日，美保龍技術(shù)服務(wù)團(tuán)隊(duì)進(jìn)入HMX 和HMD場，母豬流產(chǎn)、死胎有一定比例。發(fā)現(xiàn)保育豬傷亡嚴(yán)重，保育期死淘高達(dá)20%。臨床表現(xiàn)為：部分仔豬突然倒地、神經(jīng)癥狀、四肢劃水；部分皮膚發(fā)紅，這類豬解剖多數(shù)有心內(nèi)膜炎、心瓣膜和心耳處有大量白色血栓或者混色血栓堵塞，心外膜血管怒張，造成血液循環(huán)障礙，肺主要表現(xiàn)間質(zhì)性肺炎、有的實(shí)變嚴(yán)重，有出血點(diǎn)，肺門淋巴結(jié)和縱隔淋巴結(jié)腫大出血，個(gè)別脾臟腫大；部分仔豬嚴(yán)重消瘦、腹式呼吸、關(guān)節(jié)腫大，解剖主要是漿膜炎，心包炎、腹膜炎纖維素性滲出，關(guān)節(jié)有黃色膿性滲出物或者軟組織水腫；有不少豬死后尸僵不全、蒼白、皮下黃染，解剖發(fā)現(xiàn)，有的呈現(xiàn)血液凝固不良、皮下脂肪黃染、腹部肌肉滲出血水嚴(yán)重、系水力明顯下降；個(gè)別仔豬外表看有胃腸鼓氣的，一般皮膚蒼白，解剖結(jié)腸、回腸腸道出血嚴(yán)重，腸胃脹氣嚴(yán)重，肝脾有腫大。當(dāng)時(shí)初步判斷有梭菌和附紅細(xì)胞體感染，梭菌造成死后快速脹氣，腸道出血，皮膚蒼白，附紅細(xì)胞體造成血液凝固不良，尸僵不全，皮下黃疸。部分剖解圖片如下圖（圖1）。

圖1 保育豬解剖圖

2021年12月20日交流后提出檢測方案和初步免疫建議。了解目前豬藍(lán)耳病感染壓力和感染節(jié)點(diǎn)。采樣方案如下：采集流產(chǎn)胎兒肺組織，出生仔豬的臍帶血、睪丸液，產(chǎn)房和保育弱死仔豬病料淋巴結(jié)、肝脾肺等，20、40、60日齡仔豬血液，檢測藍(lán)耳抗原和抗體。同時(shí)對保育豬病料進(jìn)行分離細(xì)菌，血液涂片是否有附紅細(xì)胞體。

3 豬場現(xiàn)場采樣檢測情況

2021年12月26日到2021年12月29日期間四個(gè)豬場隨機(jī)采樣檢測，送到華南某第三方檢測機(jī)構(gòu)檢測結(jié)果如表1。

表1 樣品PRRSV、PCV2 核酸檢測結(jié)果（qPCR）

表1 中H M D、H M X、X L、TE 四個(gè)豬場的病原檢測報(bào)告，臍帶血、睪丸液、20日齡、40日齡、60日齡、死胎、病豬解剖病料組織基本上藍(lán)耳核酸檢測陽性，CT 值非常低。同時(shí)HMX 場和TE 場40日齡仔豬血液檢測到PCV2 抗原陽性。

圖2 為XL 場血液檢測豬藍(lán)耳N 蛋白抗體結(jié)果。

圖2 XL 場藍(lán)耳N 蛋白ELISA抗體檢測結(jié)果

圖2 是XL 場豬藍(lán)耳N 蛋白抗體檢測結(jié)果，60日齡抗體全部陰性。整體N 蛋白抗體水平不高，大部分低于1.5，母豬陽性率比較高。反觀表1 XL 場豬藍(lán)耳核酸檢測結(jié)果：睪丸液豬藍(lán)耳抗原陽性率20%、產(chǎn)房斷奶前弱豬藍(lán)耳抗原檢測率30%，CT 值分別最低為33.19和32.24，仔豬20日齡血液藍(lán)耳核酸陽性率33.3%，CT 值為31.3，此時(shí)N 蛋白抗體也不高，S/P 值為0.47，陽性率50%；60日齡血液抗原陽性率為40%，CT 值最低為30.5，但是N 蛋白抗體基本上是陰性，低于0.4，表現(xiàn)出抗原陽性、抗體陰性的結(jié)果。但是，當(dāng)時(shí)臨床上4 ～8 周齡保育豬主要是呼吸道相對較多、咳嗽、打噴嚏、個(gè)別皮膚發(fā)紅，倒地神經(jīng)癥狀死亡，有些是消瘦、漿膜炎，死淘在12%左右。說明60日齡仔豬目前正在處于感染期，目前N 蛋白抗體陰性，處于感染早期，N 蛋白抗體還不足于檢測到陽性。

TE 場血液抗體檢測結(jié)果見圖3。

圖3 TE 場豬藍(lán)耳N 蛋白ELISA 抗體檢測結(jié)果

圖3 是TE 豬場豬藍(lán)耳N 蛋白抗體S/P 值分析。21、40、60日齡陽性率（S/P 值大于0.4）只有10%～30%，21、40、60日齡豬N蛋白抗體陽性率很低，只有10%、10%、30%， 均值為0.26、0.26、0.33，大部分均為陰性，但是離散度非常高，高達(dá)80%以上。母豬群體離散度較小，S/P 值大部分在1.12 ～1.35。對應(yīng)表1 來看，TE場20日齡仔豬抗原陽率為13.3%，CT 值最低是35.2，40日齡仔豬抗原陽性率為73.3%，CT 值最低為28.3，60日齡仔豬抗原陽性率為100%，CT 值最低為30.5。反觀這個(gè)時(shí)候豬場非常不穩(wěn)定，斷奶仔豬在30日齡開始出現(xiàn)發(fā)病，皮膚發(fā)紅、發(fā)熱、神經(jīng)癥狀、突然倒地劃水死亡，或者厭食消瘦，關(guān)節(jié)炎和漿膜炎嚴(yán)重，死淘高。產(chǎn)房母豬分娩仔豬睪丸液陽性率100%，CT值最低為30.1，病弱豬抗原陽性率100%，CT 值最低為26.7，母豬臨床表現(xiàn)為死胎多。說明這些豬采樣時(shí)，N 蛋白抗體水平很低，很多陰性，但是核酸檢測卻是陽性，表明這些20 ～60日齡豬剛剛發(fā)病，處于病毒血癥，N 蛋白抗體還沒有產(chǎn)生足夠高，很多還是陰性。

圖4 是HMD 和HMX 兩個(gè)豬場的豬藍(lán)耳N 蛋白抗體檢測分析。僅僅從N 蛋白抗體S/P 值來看，抗體水平不高，大部分低于1.5 以下，離散度最大的是哺乳母豬和20日齡仔豬。這兩個(gè)豬場實(shí)際上在同一個(gè)地方兩條獨(dú)立生產(chǎn)線。母豬免疫時(shí)間和程序一樣，仔豬免疫程序也是一樣。整體看兩個(gè)豬場40日齡仔豬抗體水平不一樣，一個(gè)陽性率是90%，但是另外一個(gè)是0，全部陰性，S/P 值為1.04 和0.1。哺乳母豬陽性率也是相差很大，陽性率一個(gè)是90%，另一個(gè)是10%。S/P 均值為0.86和0.09.均相差如此大。

圖4 HMD 和HMX 場豬藍(lán)耳N 蛋白ELISA 抗體檢測結(jié)果

2022年1月2日根據(jù)核酸檢測結(jié)果進(jìn)行測序，測序結(jié)果如下，HMD、HMX 測序見圖5 和圖6。

圖5 HMD 和HMX 兩個(gè)場PRRSV ORF5 核苷酸遺傳進(jìn)化樹分析

圖6 HMD 和HMX 兩個(gè)場PRRSV ORF5 基因核苷酸同源性分析

HMD 和HMX 兩個(gè)場PRRSV ORF5 核苷酸遺傳進(jìn)化樹分析，測序毒株命名為：HAIMENCHANG、H A I M E N C H A N G 2 、HAIMENCHANG3。

2022年1月2日HMD 和HMX 場測序結(jié)果，表明是場內(nèi)感染豬藍(lán)耳類NADC34 毒株。

2022年1月同時(shí)對XL 場進(jìn)行PRRSV ORF5 核苷酸測序，結(jié)果見圖7 和圖8：對XL 場PRRSV ORF5核苷酸遺傳進(jìn)化樹分析結(jié)果，測序毒株命名為：XINGLINGCHANG。

圖7 XL 場PRRSVORF5 核苷酸遺傳進(jìn)化樹分析

圖8 XL 場PRRSVORF5 核苷酸同源性對比

這是XL 場測序結(jié)果表明該場也是類NADC34 毒株感染，三個(gè)場均為2022年1月2日測序結(jié)果，表明該集團(tuán)公司主要感染類NADC34毒株。

2022年1月中旬，采HMD、HMX、TE 場對應(yīng)90—120日齡育成豬血樣檢測，豬群血樣可以同時(shí)檢測到NADC34 和類NADC30 毒株混合感染。對應(yīng)毒株名稱為粉色線條，見圖9。

圖9 PRRSV ORF5 核苷酸遺傳進(jìn)化樹分析

采血液涂片檢測附紅細(xì)胞體陽性，采取發(fā)病仔豬的淋巴結(jié)、肺、腎、關(guān)節(jié)液到內(nèi)部實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離到鏈球菌和副豬嗜血桿菌，藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果如圖10。

圖10 副豬嗜血桿菌革蘭氏染色圖片

圖11 為副豬嗜血桿菌的PCR鑒定圖片（其目標(biāo)條帶為821 bp）。

圖11 副豬嗜血桿菌PCR 鑒定圖片

圖12 為鏈球菌革蘭氏染色圖片。

圖12 鏈球菌革蘭氏染色圖片

分離鏈球菌進(jìn)行12 種抗菌藥物的最小抑菌圈，見表2。

表2 分離鏈球菌藥物敏感試驗(yàn)

分離的鏈球菌藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果，提示阿莫西林、頭孢、青霉素鈉敏感。

對HM 兩個(gè)場分離的副豬嗜血桿菌做11 中抗菌藥物的最小抑菌圈，結(jié)果如下見表3。

表3 分離副豬嗜血桿菌藥物敏感試驗(yàn)

分離的四株副豬嗜血桿菌，提示對氟苯尼考高度敏感，對泰妙菌素、多西環(huán)素中度敏感。

根據(jù)上述情況匯總，基本確診該農(nóng)場為豬藍(lán)耳感染后，繼發(fā)鏈球菌、副豬嗜血桿菌，個(gè)別豬腸道菌群失調(diào)造成豬梭菌發(fā)作。

4 防控方案建議

建議該集團(tuán)兩大片區(qū)六個(gè)豬場的種豬全部接種一次豬藍(lán)耳滅活疫苗2 mL，連續(xù)兩次，間隔10 ～14 d。后續(xù)間隔三個(gè)月一次。產(chǎn)房仔豬1—10日齡接種0.5 mL 豬藍(lán)耳滅活疫苗，10日齡以上產(chǎn)房仔豬接種1 mL 滅活疫苗，保育豬接種一次1 mL。這樣普免以后，下一批出生仔豬改為10—14日齡先接種豬藍(lán)耳活疫苗，28 ～30日齡注射豬藍(lán)耳滅活疫苗、46 ～49日齡保育豬進(jìn)行第二次豬藍(lán)耳滅活疫苗接種。后備母豬入群前全部接種兩次豬藍(lán)耳滅活疫苗，每次2 mL，間隔10 ～15 d，經(jīng)過連續(xù)兩次采血和唾液核酸檢測豬藍(lán)耳抗原，確?？乖幮赃M(jìn)入基礎(chǔ)群母豬舍。

根據(jù)細(xì)菌分離和藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果，優(yōu)化給藥方式。5 ～6 周齡保育豬飲水添加阿莫西林和泰妙菌素飲水，同時(shí)在飼料添加多西環(huán)素和七星敗毒顆粒。10—12 周育成豬添加阿莫西林、泰妙菌素和七星敗毒顆粒飲水，分開添加到水中進(jìn)行飲水。同時(shí)在斷奶仔豬飼料中適量添加乳清粉、脂肪粉，改善適口性和增加能量攝入量，減少斷奶由于采食量不足造成仔豬營養(yǎng)不足和應(yīng)激。

加強(qiáng)洗消，降低環(huán)境中病毒載量。使用二氧化氯加強(qiáng)水簾消毒、環(huán)境帶豬霧化消毒、及時(shí)排放豬欄中的水泡糞，減少環(huán)境帶毒；空欄期間產(chǎn)房、保育房熏蒸消毒，空欄洗消后使用高錳酸鉀+甲醛熏蒸消毒，目的是降低環(huán)境中有害微生物數(shù)量。

優(yōu)化豬群流動(dòng)和混群，及時(shí)處理病弱豬，對閹割小公豬建議斷奶后銷售，降低肥豬和保育豬密度，改善通風(fēng)量。及時(shí)跟蹤晚上保育舍和肥豬舍氨氣濃度和氧氣含量，減少由于大欄缺氧造成下半夜死亡多的現(xiàn)象。

5 后續(xù)生產(chǎn)和檢測結(jié)果跟蹤情況

這四個(gè)豬場按照上述方案接種，母豬流產(chǎn)問題逐漸穩(wěn)定，產(chǎn)房仔豬生產(chǎn)恢復(fù)正常，生產(chǎn)成績好轉(zhuǎn)，保育豬死淘率快速下降。豬群在1月22日，該集團(tuán)獸醫(yī)主管和各個(gè)豬場報(bào)上來的數(shù)據(jù)分析，斷奶仔豬健康度非常好，整個(gè)豬群健康度目前恢復(fù)很快，死亡率大大降低，母豬不再流產(chǎn)，弱仔胎控制在正常范圍。

2022年2月5日四個(gè)豬場開始采樣，每個(gè)場采集臍帶血五窩，睪丸液五窩，不同日齡斷奶仔豬血液10 頭，熒光定量PCR 檢測豬藍(lán)耳核酸。

2022年2月7日檢測結(jié)果見表4。

表4 各牧場豬藍(lán)耳核酸檢測結(jié)果（qPCR）

核酸檢測結(jié)果分析：HMD 場，25 個(gè)樣品8 個(gè)混樣檢測，均為陰性；TE 場，17 份樣本，6 個(gè)混樣后檢測，發(fā)現(xiàn)臍帶血還有陽性，CT 值為34.68，睪丸液和斷奶仔豬血液全部陰性；XL 場20 個(gè)樣本8 個(gè)混樣，睪丸液、臍帶血、血清核酸檢測全部陰性；HMX 場20 個(gè)樣本8 個(gè)混樣，發(fā)現(xiàn)睪丸液、臍帶血全部核酸陰性，但是斷奶仔豬血液還有陽性，一個(gè)樣本CT 值為21.55。分析原因，HMX 豬場臍帶血和睪丸液混樣檢測均為核酸陰性，但是斷奶仔豬檢測核酸陽性，說明在保育豬欄內(nèi)還有豬群攜帶病毒，或者產(chǎn)房和保育房環(huán)境帶毒污染導(dǎo)致，也有可能是HMX 豬場接種了活疫苗后采樣的。截止到2022年2月17日，四個(gè)豬場反饋，穩(wěn)定生產(chǎn)，尤其是母豬和產(chǎn)房，非常健康，產(chǎn)仔數(shù)和斷奶體重，PSY 均超越以前同期水平。TE場和XL 場出來的保育豬非常健康，68日齡平均體重可以達(dá)到27.8 kg，死淘率只有5%。HMD 和HMX 兩個(gè)豬場產(chǎn)房死亡率從14.2%下降到6.35%，保育豬死淘率從29.32%下降到9.2%。母豬生產(chǎn)數(shù)據(jù)情況，兩個(gè)片區(qū)母豬斷奶發(fā)情率從2021年1月的89.4%、79.7% 上升到2022年4月的92.9%，91.5%。115 d 分娩率從84.4%上升到92.2%。母豬分娩障礙明顯下降，窩均健仔提高1.65 頭。

連續(xù)對睪丸液、斷奶仔豬血液、5 ～8 周仔豬唾液，13 周齡、20 周育肥豬血液和唾液檢測豬藍(lán)耳抗原變化，發(fā)現(xiàn)母豬在第二次免疫以后，出生仔豬睪丸液、斷奶仔豬血液豬藍(lán)耳抗原檢測率直線下降，睪丸液檢測豬藍(lán)耳核酸從開始22%～30%陽性率下降到3%，母豬在4月初第三次免疫后，睪丸液和24日齡斷奶仔豬檢測不到豬藍(lán)耳抗原。5 ～8 周仔豬豬藍(lán)耳抗原變化，XL 場、TE 場、HMD 檢出率從陽性率30%～100%，降到10% 以內(nèi)，HMX 從100% 豬藍(lán)耳抗原陽性率下降到18%。

6 防控效果與討論分析

加強(qiáng)后備豬入群管理，豬群合理混群和流動(dòng)。本案例中集團(tuán)公司雖然沒有從外面引入種豬，但是內(nèi)部種豬群調(diào)動(dòng)未遵循嚴(yán)格的檢測規(guī)定，不同區(qū)域調(diào)運(yùn)豬只和混群，由于疫苗免疫程序和個(gè)別疫苗廠家不一樣，加上豬群流動(dòng)和混群不合理，造成豬藍(lán)耳病NADC34 和NADC30混合感染，造成母豬流產(chǎn)等繁殖障礙，保育豬發(fā)病死淘嚴(yán)重。經(jīng)過筆者團(tuán)隊(duì)不斷建議，改善豬群流動(dòng)，及時(shí)銷售閹割公豬，不同來源的斷奶仔豬和保育豬盡量不混群，減少混群帶來的不穩(wěn)定，優(yōu)化豬群流動(dòng)，做好后備豬藍(lán)耳必須抗原陰性入群。

利用新型豬藍(lán)耳病滅活疫苗和中藥來降低母豬體內(nèi)豬藍(lán)耳病病毒載量，減少垂直傳播，控制傳染源，這樣可以減少斷奶仔豬和保育豬帶毒，減少群體感染壓力。通過不斷減低母豬垂直傳播，逐步生產(chǎn)出出生仔豬豬藍(lán)耳抗原陰性的群體，減少斷奶仔豬豬藍(lán)耳病攜帶野毒，減少散毒。

另外一方面，該兩個(gè)區(qū)域豬場，由于排污不及時(shí)，水泡糞液面過高，加上濕度大，造成環(huán)境病毒載量高，多次檢測環(huán)境樣本均帶毒嚴(yán)重。通過洗消豬欄、加大水泡糞的排出、加強(qiáng)帶豬空氣消毒和水簾、風(fēng)機(jī)外面氣溶膠消毒，使得豬場周邊氣溶膠傳播減少，加強(qiáng)監(jiān)測，降低環(huán)境病毒載量后，明顯可以降低水平傳播能力和降低豬群循環(huán)感染壓力。

細(xì)菌分離和藥物篩選對控制保育豬細(xì)菌感染是非常有意義的。之前該豬場一直使用替米考星或者泰萬菌素、阿莫西林等效果不理想，后來優(yōu)化藥物濃度和給藥方式，篩選不同企業(yè)生產(chǎn)的阿莫西林，很快減低了細(xì)菌感染造成的死淘。

新型豬藍(lán)耳病滅活疫苗有快速啟動(dòng)細(xì)胞免疫作用，通過自噬小體抑制病毒在體內(nèi)復(fù)制，所以不僅可以快速降低體內(nèi)病毒載量，多次免疫后可以達(dá)到體內(nèi)抗原陰性，同時(shí)由于沒有藍(lán)耳病毒在體內(nèi)復(fù)制，N蛋白抗體水平自然下降，可以通過血液檢測發(fā)現(xiàn)，血液中N 蛋白抗體水平逐步下降，尤其在3 ～5 周齡仔豬可以發(fā)現(xiàn)大量豬藍(lán)耳雙陰仔豬。說明通過新型豬藍(lán)耳滅活疫苗免疫，可以減少豬群傳染源，減少豬藍(lán)耳病毒在豬體內(nèi)復(fù)制，提高易感豬群的感染閾值。本案例也說明新型豬藍(lán)耳滅活疫苗不僅可以有效預(yù)防豬藍(lán)耳病發(fā)生，也可以緊急預(yù)防與治療豬藍(lán)耳病。因?yàn)橹鸩浇档拓i群藍(lán)耳病毒載量，就可以降低感染壓力，進(jìn)一步預(yù)防豬藍(lán)耳病的發(fā)生；在豬群暴發(fā)豬藍(lán)耳病時(shí)，通過快速降低病毒載量，降低豬藍(lán)耳病感染排毒和散毒，可以讓發(fā)病豬群快速穩(wěn)定下來，給臨床防控豬藍(lán)耳病提供了新的思路和方法。

團(tuán)隊(duì)2022年到目前發(fā)稿前，在濰坊、齊齊哈爾、漳州、吉安等多個(gè)集團(tuán)規(guī)模場均類似豬藍(lán)耳2 個(gè)毒株以上混合感染，造成母豬流產(chǎn)，保育豬繼發(fā)細(xì)菌感染造成大量死亡的防控案例，證明確實(shí)有效。