基于特異性調(diào)控的氟苯尼考與氟苯尼考胺寬譜免疫分析方法研究

周文玥，楊金易，張?jiān)亙x，李然，王弘，徐振林，田元新 ，沈玉棟

1(華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，廣東省食品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 5106422）2(南方醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣東省新藥篩選重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州 510515）

1 HPLC-MS/MS 方法的建立

取豬肉樣品，分別添加已知濃度的氟苯尼考和氟苯尼考胺標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行前處理并凈化后采用icELISA 方法與HPLC-MS/MS 方法同時(shí)測(cè)定，進(jìn)行結(jié)果比對(duì)。

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm，2.7 μm)；流速：0.5 mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10 μL；流動(dòng)相：A 為水溶液，B 為乙腈溶液；梯度洗脫程序：0~7.5 min，35%~95% B；7.5~9.5 min，95% B；9.5~9.6 min，95 %~35% B；9.6~12 min，35% B。

質(zhì)譜條件：電噴霧電離（ESI）；掃描方式：ESI 負(fù)模式（0 min~6 min）和ESI 正模式（6 min~12 min）；監(jiān)測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；霧化氣、氣簾氣、輔助氣、碰撞氣均為高純氮?dú)?；氟苯尼考和氟苯尼考胺定量離子對(duì)、定性離子對(duì)、去簇電壓、碰撞氣能量等參數(shù)如下表：

表S1 HPLC-MS/MS方法檢測(cè)條件Table S1 The detection conditions of HPLC-MS/MS

2 兩種方法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度的相關(guān)性

以HPLC-MS/MS 所測(cè)得的氟苯尼考及氟苯尼考胺濃度為Y 軸，以icELISA 測(cè)得的氟苯尼考及氟苯尼考胺濃度為X 軸，繪制散點(diǎn)圖。對(duì)兩種方法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行線性回歸分析，結(jié)果表明如下圖所示?；貧w方程為：y=0.99x-1.68，R2為0.99，說明建立的icELISA 方法的測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

圖S1 icELISA 與HPLC-MS/MS 方法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度的相關(guān)性Fig S1 The correlation between the accuracy of detection results using icELISA and HPLC-MS/MS methods

3 抗體性能

3.1 抗體純化

采用辛酸-硫酸銨沉淀法純化兔血清后，經(jīng)SDS-PAGE 電泳圖分析（圖 S2），純化前的兔血清雜帶較多，純化后雜帶減少且在55KD 和25KD 處清晰可見抗體重鏈和輕鏈。

圖 S2 多克隆抗體純化SDS-PAGE 電泳鑒定Fig.S2 SDS-PAGE analysis of purification of polyclonal antibody

3.2 抗體特異性

表S2 icELISA方法對(duì)氟苯尼考、氟苯尼考胺及其結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)率Table S2 CRs of Florfenicol, Florfenicol amine and its analogs by icELISA method

3.3 精密度與穩(wěn)定性