周文玥,楊金易,張詠儀,李然,王弘,徐振林,田元新 ,沈玉棟
1(華南農業(yè)大學食品學院,廣東省食品質量安全重點實驗室,廣州 5106422)2(南方醫(yī)科大學藥學院,廣東省新藥篩選重點實驗室,廣州 510515)
取豬肉樣品,分別添加已知濃度的氟苯尼考和氟苯尼考胺標準品,進行前處理并凈化后采用icELISA 方法與HPLC-MS/MS 方法同時測定,進行結果比對。
色譜柱:Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,2.7 μm);流速:0.5 mL/min;柱溫:40℃;進樣量:10 μL;流動相:A 為水溶液,B 為乙腈溶液;梯度洗脫程序:0~7.5 min,35%~95% B;7.5~9.5 min,95% B;9.5~9.6 min,95 %~35% B;9.6~12 min,35% B。
質譜條件:電噴霧電離(ESI);掃描方式:ESI 負模式(0 min~6 min)和ESI 正模式(6 min~12 min);監(jiān)測模式:多反應監(jiān)測(MRM);霧化氣、氣簾氣、輔助氣、碰撞氣均為高純氮氣;氟苯尼考和氟苯尼考胺定量離子對、定性離子對、去簇電壓、碰撞氣能量等參數如下表:
表S1 HPLC-MS/MS方法檢測條件Table S1 The detection conditions of HPLC-MS/MS
以HPLC-MS/MS 所測得的氟苯尼考及氟苯尼考胺濃度為Y 軸,以icELISA 測得的氟苯尼考及氟苯尼考胺濃度為X 軸,繪制散點圖。對兩種方法的測定結果進行線性回歸分析,結果表明如下圖所示?;貧w方程為:y=0.99x-1.68,R2為0.99,說明建立的icELISA 方法的測定結果準確可靠。
圖S1 icELISA 與HPLC-MS/MS 方法檢測結果準確度的相關性Fig S1 The correlation between the accuracy of detection results using icELISA and HPLC-MS/MS methods
采用辛酸-硫酸銨沉淀法純化兔血清后,經SDS-PAGE 電泳圖分析(圖 S2),純化前的兔血清雜帶較多,純化后雜帶減少且在55KD 和25KD 處清晰可見抗體重鏈和輕鏈。
圖 S2 多克隆抗體純化SDS-PAGE 電泳鑒定Fig.S2 SDS-PAGE analysis of purification of polyclonal antibody
表S2 icELISA方法對氟苯尼考、氟苯尼考胺及其結構類似物的交叉反應率Table S2 CRs of Florfenicol, Florfenicol amine and its analogs by icELISA method