小鵝瘟、鴨病毒性肝炎卵黃抗體高免蛋免疫程序的研究

陳生雷，王一平，陳欣婷，李鳳艷，舒秀偉

（ 遼寧益康生物股份有限公司，遼寧 遼陽(yáng) 111000 ）

小鵝瘟（GP）是由小鵝瘟病毒（GPV）引起的一種急性或亞急性敗血病，主要病理變化表現(xiàn)為滲出性腸炎。GP主要侵害出殼后4～20 日齡雛鵝，傳染快且病死率可高達(dá)90%～100%，是危害養(yǎng)鵝業(yè)最嚴(yán)重的病毒性傳染病之一[1-4]。近年來(lái)，養(yǎng)鵝業(yè)發(fā)展迅猛，但GP的流行對(duì)養(yǎng)鵝業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。鴨病毒性肝炎（DVH）是由鴨病毒性肝炎病毒（DHV）引起的一種急性、高度傳染性的病毒性疾病，主要感染21日齡以內(nèi)的雛鴨，可引起典型的肝炎癥狀，雛鴨死亡率高達(dá)80%[5-7]。目前對(duì)以上兩種水禽疫病主要防治措施為應(yīng)用卵黃抗體[8-10]。為使卵黃抗體效價(jià)達(dá)到較高水平，本試驗(yàn)將GP、DVH（1型+3型）二聯(lián)滅活疫苗接種不同組別的商品蛋雞，分別在接種后不同時(shí)間檢測(cè)卵黃中的抗體效價(jià)，以篩選最佳高免蛋免疫接種程序。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)動(dòng)物為110 日齡海蘭褐商品蛋雞，由遼寧益康生物股份有限公司提供。

1.1.2 疫苗、陽(yáng)性血清和檢測(cè)用抗原

GP、DVH（1 型+3 型）二聯(lián)滅活疫苗（批號(hào)：GM202101，遼寧益康生物股份有限公司）。GP陽(yáng)性血清、DHV LSE 株陽(yáng)性血清、DHV QZE 株陽(yáng)性血清（自制）；GP瓊擴(kuò)抗原、DHV 1 型LSE 株檢驗(yàn)抗原、DHV 3 型QZE 株檢驗(yàn)抗原均由遼寧益康生物股份有限公司提供。

1.1.3 主要儀器

T25高速剪切機(jī)（IKA公司）、BSC-1304IIA2生物安全柜（北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司）、3k15高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Sigms公司）等。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

隨機(jī)將2 500只產(chǎn)蛋雞分成5組，每組500只雞。A組首次免疫劑量為1.0 mL/只；接種后14 d 進(jìn)行第2 次免疫，劑量為1.0 mL/只；第2次免疫后21 d進(jìn)行第3次免疫，劑量為1.5 mL/只。B組首次免疫劑量為1.0 mL/只；接種后14 d進(jìn)行第2次免疫，劑量為1.5 mL/只；第2次免疫后21 d進(jìn)行第3 次免疫，劑量為1.5 mL/只。C 組首次免疫劑量為1.0 mL/只；接種后21 d進(jìn)行第2次免疫，劑量為1.0 mL/只；第2 次免疫后21 d 進(jìn)行第3 次免疫，劑量為1.5 mL/只。D組首次免疫劑量為1.0 mL/只；接種后21 d進(jìn)行第2次免疫，劑量為1.5 mL/只；第2次免疫后21 d進(jìn)行第3次免疫，劑量為1.5 mL/只。E組不接種作為非免疫對(duì)照組。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 安全性評(píng)價(jià)

免疫后每天觀察雞死亡、精神狀態(tài)、采食等情況至試驗(yàn)結(jié)束，計(jì)算死淘率。每次免疫后14 d隨機(jī)抽取10只雞，觀察疫苗注射部位有無(wú)硬結(jié)、腫脹、潰爛等情況。第3次免疫后21 d，隨機(jī)抽取5只雞剖殺，觀察疫苗吸收情況。

1.3.2 抗體水平

分別于免疫前以及首免、第2 次免疫及第3 次免疫后14、21 d 分別取蛋進(jìn)行GP、DVH 卵黃抗體效價(jià)測(cè)定，測(cè)定方法按照試劑盒說(shuō)明書操作。

1.3.3 產(chǎn)蛋統(tǒng)計(jì)

免疫后每周進(jìn)行產(chǎn)蛋統(tǒng)計(jì)，計(jì)算產(chǎn)蛋率。

2 結(jié)果與分析

2.1 安全性評(píng)價(jià)（見(jiàn)表1）

表1 安全性評(píng)價(jià)Tab.1 Safety evaluation

由表1 可知，免疫后，與不免疫對(duì)照組相比，4 個(gè)注射組雞群的精神狀態(tài)、采食、飲水等情況差異均不明顯。免疫雞檢查注射局部，均無(wú)腫脹、潰爛等異常情況發(fā)生。A 組死淘12 只（死淘率2.4%），B 組死淘15 只（死淘率3.0%），C組死淘14只（死淘率2.8%），D組死淘16只（死淘率3.2%），各組死淘差異不明顯。A 組疫苗已全部吸收，B組有2只雞注射部位可見(jiàn)小顆粒；C組疫苗已全部吸收，D組有1只雞注射部位可見(jiàn)未完全吸收的小顆粒。

2.2 抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果（見(jiàn)表2、表3）

表2 GP瓊擴(kuò)抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果Tab.2 Results of GP AGAR amplification antibody monitoring

表3 DVH中和抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果Tab.3 Results of DVH neutralizing antibody monitoring

由表2、表3 可知，首免14 d 后即可產(chǎn)生抗體，GP、DVH 抗體均在3 免后21 d 達(dá)到高峰，GP 瓊擴(kuò)抗體效價(jià)為1∶200～1∶280，DVH 抗體效價(jià)為1∶919.58～1∶1 591.71。B組、D組抗體水平高于A組和C組，說(shuō)明抗體水平隨著免疫劑量增加而升高；A組和C組、B組和D組首免和第2次免疫間隔時(shí)間不同，抗體增長(zhǎng)差異不顯著。

2.3 不同免疫方案對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率的影響（見(jiàn)表4）

表4 不同免疫方案對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率的影響Tab.4 Effects of different immunization regimens on laying rate of laying hens 單位：%

由表4 可知，三免后21 d，免疫組產(chǎn)蛋率為80.00%～83.43%，對(duì)照組的產(chǎn)蛋率為85.43%，提示大劑量和高頻次免疫會(huì)對(duì)產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋性能產(chǎn)生一些應(yīng)激性的影響，臨床表現(xiàn)為產(chǎn)蛋率下降，免疫組比對(duì)照組下降2.34%～6.36%。

3 討論

GP 和DVH 是水禽疫病防控的重點(diǎn)疾病[11-14]，對(duì)其預(yù)防疾病控制的主要方法是應(yīng)用GPV、DHV 制備滅活疫苗免疫商品蛋雞。具體方法是經(jīng)檢測(cè)達(dá)到使用標(biāo)準(zhǔn)的種蛋提取卵黃抗體，制備成凍干或水劑的抗體制劑，對(duì)雛鴨和雛鵝進(jìn)行免疫以達(dá)到保護(hù)作用?？贵w的提取方法很多，如何高效地提取卵黃中的抗體并有效利用抗體，達(dá)到降低成本提升效率是相關(guān)研究的最終目標(biāo)，實(shí)現(xiàn)這一降本增效的目標(biāo)的基本環(huán)節(jié)是雞群免疫和保證抗體持續(xù)期[15]。本研究為優(yōu)化免疫程序，通過(guò)設(shè)置不同劑量和免疫間隔時(shí)間對(duì)試驗(yàn)雞進(jìn)行GP、DVH（1型+3型）二聯(lián)滅活疫苗免疫，在免疫過(guò)程中的不同時(shí)間測(cè)定卵黃GP瓊擴(kuò)抗體、DVH中和抗體水平，同時(shí)對(duì)疫苗免疫后的安全性包括接種部位吸收情況、死淘率和產(chǎn)蛋率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較。結(jié)果表明，疫苗免疫后試驗(yàn)雞局部吸收良好，且死淘率與對(duì)照組相比差異不顯著。產(chǎn)蛋率結(jié)果顯示，免疫組由于經(jīng)過(guò)3次不同劑量的滅活疫苗免疫，產(chǎn)蛋率略低于對(duì)照組，說(shuō)明高劑量免疫會(huì)對(duì)雞群產(chǎn)蛋率產(chǎn)生一定影響。3免后21 d，B組、D組GP瓊擴(kuò)抗體、DVH中和抗體高于A組、C組，說(shuō)明抗體水平隨著免疫劑量增加而增加；各組首免和第2次免疫間隔不同時(shí)間比較，間隔21 d 組雞抗體水平略高于較間隔14 d，且產(chǎn)蛋率也高于間隔14 d。綜上，高劑量和高頻次免疫時(shí)，免疫間隔時(shí)間延長(zhǎng)對(duì)機(jī)體的應(yīng)激恢復(fù)會(huì)有一定的效果。通過(guò)上述試驗(yàn)結(jié)果表明，適當(dāng)增加免疫劑量可提升抗體水平，但同時(shí)也會(huì)對(duì)雞群的產(chǎn)蛋性能產(chǎn)生一定影響，在增加免疫劑量的同時(shí)也要考慮應(yīng)激引起的生產(chǎn)性能下降。因此，應(yīng)綜合考慮優(yōu)化免疫程序，包括劑量、頻次和間隔時(shí)間，以保持較好的抗體水平和生產(chǎn)性能。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果顯示，優(yōu)化最佳免疫程序?yàn)槭状蚊庖邉┝?.0 mL/只，21 d 后進(jìn)行第2 次免疫（劑量為1.5 mL/只），21 d 后進(jìn)行第3 次免疫（劑量為1.5 mL/只），3 免后21 d 可采集種蛋進(jìn)行抗體制備，后期通過(guò)持續(xù)的抗體監(jiān)測(cè)調(diào)整維持免疫的時(shí)間和劑量。