雞源大腸埃希氏菌流行病學調查及耐藥性分析

劉 科，周 迪，李海忠，陳細浩，余慧雯，王春蘭，劉 康，黃 磊

（1. 韶關市畜牧研究所，廣東 韶關 512026；2. 韶關學院，廣東 韶關 512023）

雞大腸桿菌病是養(yǎng)雞生產(chǎn)中常見和高發(fā)病，病原菌為大腸埃希氏菌，該菌為條件性致病菌，常存在于雞的呼吸道和消化道。該病臨床病型多樣，包括臍帶炎、急性敗血癥、眼炎、氣囊炎、肉芽腫、腦膜炎、滑膜炎、關節(jié)炎等，這些病型在臨床上或單獨發(fā)生或與其他疾病混合感染。該病不僅可以通過呼吸道、消化道傳播，還可以經(jīng)卵垂直傳播，可以感染不同日齡的雞，雛雞和青年雞易感性較高，季節(jié)性不明顯，帶菌雞是本病的主要傳染源，雞糞以及被雞糞污染的欄舍、雞籠、墊料、飼料、飲水、鞋子、服裝等均能傳播本病。天氣寒冷、悶熱、禽舍通風不良等惡劣環(huán)境導致雞的免疫力下降，進而引起雞發(fā)病。大腸埃希氏菌能造成消化道代謝紊亂，引起雞拉稀，造成雞群均勻度差，生長受阻，料肉比高，發(fā)病率和死亡率上升，死淘率增加，嚴重影響雞群的生產(chǎn)性能和經(jīng)濟效益，給養(yǎng)雞業(yè)造成很大的危害。

雞大腸埃希氏菌血清型眾多，且不同血清型之間的菌株缺乏交叉免疫保護，不同地區(qū)流行的優(yōu)勢血清型不同，雞群無法通過接種疫苗的方式來獲得保護?？咕幬锸钱斍胺乐坞u大腸埃希氏菌病的重要手段之一，但很多養(yǎng)殖場沒有對病原菌做藥物敏感性試驗，一直在盲目使用抗生素，致使大腸桿菌耐藥性日益嚴重，耐藥機理改變，呈現(xiàn)多重耐藥和交叉耐藥?？股氐膩y用和濫用還會導致肉食品中的藥物殘留超標，殘留于動物體內的抗生素，通過食物的形式進入人體，導致人體出現(xiàn)泛發(fā)性瘙癢、紅疹、頭疼等過敏反應，嚴重威脅著人類的健康，成為公共衛(wèi)生問題。

為有效控制動物細菌感染性疾病的發(fā)生與流行，防止抗生素的盲目使用和濫用，韶關市專門立項對本區(qū)域內動物細菌感染性疾病進行病原學調查及病原菌耐藥性監(jiān)測研究，對雞源大腸埃希氏菌藥物耐藥性監(jiān)測是該項研究內容之一。本研究通過2022 年度采集的廣東韶關地區(qū)養(yǎng)雞場雞咽喉部、泄殖腔拭子和病死雞剖檢病料進行細菌分離鑒定和藥敏試驗，研究廣東韶關地區(qū)雞大腸埃希氏菌流行規(guī)律及其耐藥性，為臨床合理用藥和防治雞大腸埃希氏菌病提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品來源737 份樣品來自廣東韶關地區(qū)41個規(guī)模養(yǎng)雞場和28 個土雞散養(yǎng)場，用獨立包裝滅菌的棉拭子采集雞喉頭和肛門糞便樣本700 份，病死雞肝臟、心血、脾、腸道內容物病料37 羽份。采集的所有樣本、病料放在保溫箱中低溫保存，2 h 內運回實驗室。

1.2 主要實驗材料麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、HM 瓊脂培養(yǎng)基購自廣東省環(huán)凱生物科技有限公司，細菌生化鑒定微量反應管和藥敏紙片購自杭州濱和微生物試劑有限公司。

1.3 細菌分離、鑒定與純培養(yǎng)每份樣品劃線接種于麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基，置于37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察菌落生長情況，挑取表面光滑濕潤、邊緣整齊、圓形、稍隆起的粉紅色單個典型菌落在麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基劃線純培養(yǎng)，獲得純培養(yǎng)物后進行革蘭氏染色鏡檢，并參照《伯杰氏細菌鑒定手冊》方法進行生化反應鑒定。鏡檢顯示兩端鈍圓，散在或成對存在的革蘭氏陰性短桿菌，生化反應符合靛基質試驗陽性、MR 試驗陽性、V-P 試驗陰性、枸櫞酸鹽利用試驗陰性、氧化酶試驗陰性、硫化氫產(chǎn)生陰性、山梨醇發(fā)酵陰性、賴氨酸脫羧酶陽性、鳥氨酸脫羧酶陽性、棉子糖發(fā)酵陽性和衛(wèi)矛醇發(fā)酵陽性者，鑒定為埃希氏大腸桿菌。

1.4 分離菌的藥物敏感性試驗按照細菌藥敏試紙使用說明書，根據(jù)K-B (Kirby-Bauer)紙片擴散法對分離菌株進行常用藥物的敏感性測定，統(tǒng)計試驗結果，分析其耐藥性。藥敏紙片包括青霉素、氨芐西林、阿莫西林、阿奇霉素、諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、慶大霉素、鏈霉素、阿米卡星（丁胺卡那）、卡那霉素、四環(huán)素、頭孢噻肟、新霉素、紅霉素、強力霉素（多西環(huán)素）、壯觀霉素、頭孢氨芐、氟苯尼考、泰樂菌素、頭孢噻吩、林可霉素、克林霉素共24 種藥物（見表1）。

表1 藥敏試驗標準

2 結 果

2.1 細菌的分離鑒定結果通過麥康凱培養(yǎng)基對737 份樣品進行細菌分離，革蘭氏染色鏡檢，生化特性鑒定等，結果顯示541 份樣品分離到大腸埃希氏菌，檢出率73.41%。其中37 份病死雞病料大腸埃希氏菌陽性29 份，檢出率78.38%?？傮w泄殖腔大腸埃希氏菌檢出率87.78%(316/360)，咽喉部大腸埃希氏菌檢出率58.24%（198/340）。

2.2 不同規(guī)模飼養(yǎng)場樣品分離菌檢出結果分離菌結果顯示，規(guī)模場大腸埃希氏菌檢出率為73.72%（303/411），散養(yǎng)場大腸埃希氏菌檢出率為73.01%(238/326)，規(guī)模場與散養(yǎng)場差異不大。

2.3 分離菌的藥敏試驗結果分離菌的藥敏試驗結果顯示（見表2），大部分分離菌株表現(xiàn)出多重耐藥性（耐3 種藥物以上）。3 重藥物耐藥菌株比例8/69，占11.60%，4 重藥物耐藥菌株比例3/69，占4.35%，5 重藥物耐藥菌株比例4/69，占5.80%，6 重藥物耐藥菌株比例3/69，占4.35%，7 重藥物耐藥菌株比例6/69，占8.70%，8 重藥物耐藥菌株比例4/69，占5.80%，9 重藥物耐藥菌株比例4/69，占5.80%，10 重藥物耐藥菌株比例6/69，占8.70%，11重藥物耐藥菌株比例3/69，占4.35%,12 重藥物耐藥菌株比例4/69，占5.80%, 13 重藥物耐藥菌株比例5/69，占7.25%,14 重藥物耐藥菌株比例2/69，占2.90%,15 重藥物耐藥菌株比例1/69，占1.45%,16重藥物耐藥菌株比例2/69，占2.90%。分離菌株普遍對阿奇霉素、頭孢噻肟、阿米卡星、氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星敏感，對青霉素、氨芐西林、鏈霉素、卡那霉素、四環(huán)素、阿莫西林、氟苯尼考、泰樂菌素、林可霉素、克林霉素耐藥，最高可達到16 重藥物耐藥，表明韶關地區(qū)大腸埃希氏菌多重耐藥現(xiàn)象比較嚴重，多重藥物耐藥比例高達79.71%(55/69)。

表2 藥敏試驗結果

規(guī)模場分離菌多重藥物耐藥比例為97.56%（40/41），散養(yǎng)場多重藥物耐藥比例為53.57%(15/28)，表明規(guī)模場抗生素使用較散養(yǎng)場頻繁。

3 討 論

雞大腸埃希氏菌耐藥性的產(chǎn)生與平時飼養(yǎng)管理過程中長期不合理使用抗菌藥物密切相關，飼料中長期使用小劑量抗菌素作為動物生長促進劑、細菌性疾病感染時盲目和長期大量使用抗菌素等均導致大腸埃希氏菌很強的耐藥性。細菌的耐藥性與抗生素藥物的選擇壓力有關，由于抗菌藥物的不合理使用，導致大腸埃希氏菌出現(xiàn)大量多重耐藥菌株，相關研究表明養(yǎng)殖業(yè)中常用的阿莫西林、氨芐青霉素、復方新諾明、鏈霉素、四環(huán)素等抗生素出現(xiàn)普遍的耐藥性，其耐藥率甚至達到了100%。本研究分離的雞大腸埃希氏菌菌株普遍對青霉素、氨芐西林、鏈霉素、卡那霉素、四環(huán)素、阿莫西林、氟苯尼考、泰樂菌素、林可霉素、克林霉素耐藥，多重藥物耐藥現(xiàn)象比較嚴重，多重藥物耐藥比例高達79.71%，規(guī)模場分離菌株多重耐藥比例高達97.56%，表明規(guī)模場盲目使用和濫用抗菌素現(xiàn)象非常嚴重。

大腸埃希氏菌為人畜共患病病原體，人感染大腸埃希氏菌可引起腹瀉，新生兒腦膜炎等，大腸埃希氏菌在宿主體內被殺死后所釋放的內毒素可引起多種疾病，大腸埃希氏菌病的有效防控不僅可減少養(yǎng)雞業(yè)的經(jīng)濟損失，對人類公共安全衛(wèi)生也具有重要意義。由于雞大腸桿菌病是環(huán)境條件性疾病，病原菌大腸埃希氏菌血清型眾多, 且不同血清型間缺乏交叉保護力,疫苗免疫接種效果不理想，疫苗免疫接種不作為預防該病的首選方法, 目前該病的防治主要還是通過加強飼養(yǎng)環(huán)境的管理，控制雞群的飼養(yǎng)密度和使用抗菌藥物。大腸埃希氏菌病的防治應該根據(jù)藥敏試驗選擇敏感抗生素，在防治過程中采取聯(lián)合用藥、交叉用藥以及輪換用藥的方式提高治療效果，減少耐藥性的產(chǎn)生，同時可通過加強通風換氣，消毒，控制環(huán)境的溫度和濕度等措施預防大腸埃希氏菌病的發(fā)生與流行，使用益生菌、噬菌體、中藥等制劑防治大腸埃希氏菌病，減少或者替代抗生素的使用，從而減少雞體內抗生素的殘留，保障人類健康。本研究通過對韶關地區(qū)69 個養(yǎng)雞場分離鑒定的大腸埃希氏菌進行藥敏試驗篩選敏感藥物，指導養(yǎng)殖戶科學合理用藥防治大腸埃希氏菌病，減少了抗生素的亂用和濫用，為韶關地區(qū)雞大腸埃希氏病的防控提供了科學依據(jù)。