PECAM-1、GFAP、sTLT-1在急性腦梗死患者中的表達(dá)及相關(guān)性研究

袁亞春

常州市新北區(qū)春江人民醫(yī)院檢驗科 (江蘇 常州 213014)

ACI是因血管閉塞而出現(xiàn)的供血部位梗死、病變，其具有發(fā)病快、病死率高、致殘率高等特點[1]。PECAM-1能抑制血小板聚集，對于血栓的形成有負(fù)調(diào)控作用[2-3]。GFAP在正常情況下可對神經(jīng)元起到保護(hù)、支持的作用，同時可以促進(jìn)神經(jīng)因子形成，具有穩(wěn)定缺血組織的作用[4]。在動脈粥樣硬化形成過程中，sTLT-1是一個可溶性促炎因子，相關(guān)報道指出，sTLT-1在動脈粥樣硬化性血栓的形成中有著重要作用[5]。目前臨床中關(guān)于PECAM-1、GFAP、sTLT-1三者聯(lián)合在ACI中的相關(guān)研究較少，本文旨在研究PECAM-1、GFAP、sTLT-1在ACI患者中的表達(dá)及相關(guān)性，為臨床診斷ACI提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象本文選取2019年5月-2020年10月我院收治的ACI患者77例作為實驗組，男41例，女36例，年齡45～80歲，平均年齡(59.38±13.50)歲，其中包括輕度患者36例，中度患者25例，重度患者16例；SI 38例，MI 26例，LI 13例。同時選取在我院同一時間點進(jìn)行健康體檢的健康人員77例作為正常組，男39例，女38例，年齡44～80歲，平均年齡(58.90±14.00)歲。兩組研究對象在平均年齡、性別的一般資料中對比，無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：77例患者均符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2018》中ACI的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；經(jīng)頭部CT或MRI檢查證實；發(fā)病時間在6h內(nèi)入院，未接受治療者；無原發(fā)性精神障礙及癡呆疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：有感染性疾病或肝腎功能不全的患者；伴隨帕金森病、腦血管畸形等腦部疾病的患者；接受過其他藥物治療的患者；其他不應(yīng)納入本研究患者。

1.2 方法

1.2.1 不同NIHSS評分的PECAM-1、GFAP、sTLT-1水平比較 采用NIHSS評分量表檢測患者神經(jīng)功能缺損情況。NIHSS評分量表包括意識水平、凝視、視野、面癱、上肢運動、下肢運動、共濟(jì)失調(diào)、感覺、語言、構(gòu)音障礙、忽視癥11項選擇題，每題3～6個選項，每個選項題0～9分。輕度0～4分，中度4～15分，重度>15分。1.2.2 不同梗死面積的PECAM-1、GFAP、sTLT-1水平比較 所有患者均進(jìn)行MRI，檢查前去除身上所帶的手機(jī)、手表、磁卡、硬幣、鑰匙、打火機(jī)、金屬項鏈等金屬飾品或電子物品，采用EDUMR影像醫(yī)學(xué)磁共振成像實驗儀(蘇州紐邁分析儀器股份有限公司)，患者取仰臥位固定頭部，隨后選擇正交線圈進(jìn)行掃描，設(shè)置參數(shù)為層厚6mm、層間距7.8mm、FOV23cm×18cm。掃描參數(shù)：T1W1參數(shù)，射頻脈沖重復(fù)時間400ms，回波時間11ms；T2WI序列參數(shù)，射頻脈沖重復(fù)時間5000ms,回波時間108ms；FLAIR參數(shù)，射頻脈沖重復(fù)時間8000ms,回波時間96ms。根據(jù)梗死面積將患者分為三種類型：直徑<1.5cm為SI，1.5≤直徑<3cm為MI，直徑≥3cm為LI[7]。

1.2.3 兩組患者PECAM-1、GFAP、sTLT-1水平比較 患者入院后，抽取患者空腹靜脈血4mL，離心處理。分離上血清并保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法對PECAM-1、GFAP、sTLT-1進(jìn)行檢測，選擇酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，檢測血清中PECAM-1、GFAP、sTLT-1水平。操作步驟：(1)完全解凍被凍存的血清標(biāo)本。(2)將0.3mL標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品分別加入在每孔中，待反應(yīng)板充分混勻后置37℃1.5～3小時。(3)用洗滌液將反應(yīng)版充分洗滌5-6次，每次六分鐘。(4)將0.3ml用稀釋緩沖液稀釋的酶標(biāo)記特異性抗體溶液分別加入在每孔中，1.5～作用3小時。(5)用洗滌液將反應(yīng)版充分洗滌5～6次，每次六分鐘。(6)將0.3mL用稀釋緩沖液稀釋的酶標(biāo)記特異性抗體溶液分別加入在每孔中，置37℃ 30分鐘，并做一空白對照組，加入0.2mL終止劑。(7)分別在每孔中加入0.06mL的終止劑(2M H2SO4)。(8)用酶標(biāo)比色計測定(OPD用492nm)OD值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析處理，計量資料采用(±s)進(jìn)行描述，多組間比較采用F值檢驗，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，P<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者PECAM-1、GFAP、sTLT-1水平比較如表1所示，與正常組相比，實驗組PECAM-1、GFAP、sTLT-1顯著升高，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。

表1 兩組患者PECAM-1、GFAP、sTLT-1水平比較

2.2 不同嚴(yán)重程度的PECAM-1、GFAP、sTLT-1水平比較如表2所示，與輕度組相比，中度組和重度組水平顯著升高，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。與中度組相比，重度組水平顯著升高，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。

表2 不同嚴(yán)重程度的PECAM-1、GFAP、sTLT-1水平比較

2.3 不同梗死面積的PECAM-1、GFAP、sTLT-1水平比較如表3所示，與SI相比，MI和LI水平升高，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。與MI相比，LI水平顯著升高，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。

表3 不同梗死面積的PECAM-1、GFAP、sTLT-1水平比較

2.4 PECAM-1、GFAP、sTLT-1之間的相關(guān)性研究如圖1所示，PECAM-1、GFAP呈正相關(guān)(r =0.706，P=0.001)；PECAM-1、sTLT-1呈正相關(guān)(r =0.789，P=0.001)；GFAP、sTLT-1呈正相關(guān)，(r =0.774，P=0.001)。

圖1 PECAM-1、GFAP、sTLT-1之間的相關(guān)性研究

3 討 論

在腦血管疾病中，ACI最為常見，是由血管發(fā)生閉塞引起的腦組織缺氧、缺血，導(dǎo)致局部組織壞死，伴隨神經(jīng)功能損傷，主要表現(xiàn)為語言、軀體等障礙[8]。好發(fā)于高脂血癥和喜愛吸煙、飲酒等群體中，往往在患者休息或睡眠時突然發(fā)病，嚴(yán)重時會造成患者昏迷不醒[9]?；颊咴诎l(fā)病后的一月內(nèi)病死率約有2.2%～3.5%[10]。若ACI患者未能得到及時的治療，將會誘發(fā)患者一些并發(fā)癥的發(fā)生，例如：認(rèn)知功能障礙、腦卒中后抑郁等[11]。因此，找到ACI的早期診斷標(biāo)志物，對及時識別病因、個體化臨床治療具有重要的意義及價值。

PECAM-1是免疫球蛋白超家族的成員之一[12]。在中性粒細(xì)胞、血小板、單核細(xì)胞以及內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接處，都有PECAM-1的存在[13]。PECAM-1分子在血小板中的表達(dá)對血小板的黏附聚集起負(fù)調(diào)節(jié)作用[14]。PECAM-1的機(jī)制可能與抑制膠原、CVX和凝血酶刺激的血小板酪氨酸蛋白磷酸化及抑制細(xì)胞內(nèi)鈣庫的釋放有關(guān)[15]。PECAM-1和血小板的相互作用控制著血栓的發(fā)展，且PECAM-1可通過傳遞抑制細(xì)胞凋亡的信號而實現(xiàn)細(xì)胞保護(hù)的作用[16]。本文研究發(fā)現(xiàn)，PECAM-1水平與ACI患者嚴(yán)重程度、梗死面積有關(guān)。

GFAP屬于膠質(zhì)纖維酸性蛋白，GFAP是以單元存在的一種Ⅲ型中間絲狀蛋白，由9個外顯子和8個內(nèi)含子組成，在腦容量中，其數(shù)量占50%左右[17]。有研究稱，ACI患者腦脊液中GFAP的濃度與其梗死面積和病情有著密切聯(lián)系，GFAP正常情況下可對神經(jīng)元起到保護(hù)、支持、營養(yǎng)的作用，而膠質(zhì)細(xì)胞形成膠質(zhì)瘢痕對神經(jīng)元軸突再生具有的阻礙作用可間接反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷程度及可塑性改變[18]。當(dāng)機(jī)體內(nèi)中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損時，GFAP含量明顯增加，對其穩(wěn)定細(xì)胞外流體和離子的平衡有著促進(jìn)作用，而GFAP過度的增生會加速軸突再生抑制性因子的分泌，軸突再生抑制性因子會影響神經(jīng)纖維的傳導(dǎo)和突觸的構(gòu)建[19-20]。本文研究顯示，隨著GFAP水平的增高，ACI患者嚴(yán)重程度、腦梗死面積不斷增加，說明GFAP水平與患者嚴(yán)重程度、梗死面積有一定關(guān)系。

sTLT-1是一種可溶性蛋白，由血小板表面的TLT-1發(fā)生裂解而生成。sTLT-1的表達(dá)水平的明顯增高反應(yīng)機(jī)體內(nèi)出現(xiàn)炎癥性疾病，并且sTLT-1能促進(jìn)肌動蛋白的聚合，促使血小板黏附在內(nèi)皮細(xì)胞上，是動脈粥樣硬化形成過程中的重要促進(jìn)因子[21]。在本文研究中，重度患者、LI患者sTLT-1水平水平較高，說明sTLT-1水平隨患者病情嚴(yán)重程度升高、梗死面積增加，其表達(dá)也不斷升高。PECAM-1、GFAP、sTLT-1三者之間呈正相關(guān)，隨著患者病情不斷發(fā)展，其水平不斷升高，三者在ACI發(fā)病中具有重要作用。

綜上所述，PECAM-1、GFAP、sTLT-1在ACI患者血清中表現(xiàn)異常，隨著PECAM-1、GFAP、sTLT-1水平的升高，ACI患者嚴(yán)重程度和腦梗死面積隨之增加，可能影響了ACI的發(fā)生發(fā)展，提示PECAM-1、GFAP、sTLT-1在ACI的臨床診斷中具有一定作用。