長(zhǎng)鏈非編碼RNA LINC00958在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌的表達(dá)和初步研究

吉 幻,李 萌,姚恩惠,鐘 旖,張雨垚,武和明,李 斌

頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)是頭頸部最常見(jiàn)的惡性腫瘤,每年發(fā)生超過(guò)60萬(wàn)例,其5年生存率僅有50%～60%。主要由于大多數(shù)患者確診時(shí)已經(jīng)是中晚期,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高[1-2]。因此,尋找與HNSCC發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的因子,對(duì)HNSCC的早期診斷、早期干預(yù)以及早期治療極為重要。

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)HNSCC的發(fā)生發(fā)展與長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNAs,LncRNA)密切相關(guān)[3]。LncRNA是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一類長(zhǎng)度超過(guò)200 bp的RNA,其主要功能是通過(guò)調(diào)控基因或競(jìng)爭(zhēng)性靶向miRNA調(diào)控腫瘤的生物學(xué)過(guò)程,可間接或直接發(fā)揮抑癌或促癌作用,抑制或加速腫瘤的發(fā)生發(fā)展[4]。LINC00958在肝癌、肺癌、口腔癌等多種腫瘤中表達(dá)上升并調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生發(fā)展,然而目前LINC00958在HNSCC中的表達(dá)及其對(duì)增殖和遷移的影響鮮見(jiàn)報(bào)道[5-7]。

本研究旨在探索LINC00958在HNSCC中表達(dá)及其與腫瘤預(yù)后的相關(guān)性,以及其對(duì)HNSCC細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的影響,并驗(yàn)證LINC00958是否可通過(guò)調(diào)控miR-877-3p影響HNSCC的增殖和轉(zhuǎn)移能力,從而為HNSCC的診斷和臨床治療提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 數(shù)據(jù)庫(kù)、組織樣本及相關(guān)細(xì)胞系 基于基因表達(dá)水平值的交互式分析平臺(tái)(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA),簡(jiǎn)稱GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù),可利用癌癥基因譜圖譜庫(kù)(The Cancer Genome Atlas,TCGA)的RNA表達(dá)譜數(shù)據(jù),行差異基因分析、生存曲線分析,或根據(jù)病理及癌癥分型分析等。收集15對(duì)2021年1月至2021年12月于南京醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院就診的HNSCC患者的癌及癌旁正常組織樣本?；颊呔橥?本研究經(jīng)南京醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(PJ2020-116-001)。CAL27、HN4和HN6細(xì)胞系為HNSCC細(xì)胞系,HOK為人正?？谇火つど掀ぜ?xì)胞系,均購(gòu)買于上海細(xì)胞系庫(kù)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器 CCK-8試劑盒(APExBIO,美國(guó));PCR引物(銳博,中國(guó)廣州);PCR試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Takara,日本);小干擾RNA(吉瑪,中國(guó)上海);miR-877-3p mimics(吉瑪,中國(guó)上海);Dual-Glo Luciferase Reporter Assay(Promega,美國(guó));miRNA PCR引物(銳博,中國(guó)廣州);GAPDH抗體(Proteintech,中國(guó)武漢);E-cadherin抗體、N-cadherin抗體、Vimentin抗體(Cell Signaling Technology,美國(guó))。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染 CAL27和HOK使用DMEM高糖培養(yǎng),HN4和HN6使用DMEM/F12培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)箱條件為37 ℃、5% CO2濃度。根據(jù)LipofectamineTM2000說(shuō)明書(shū)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。每孔5 μL脂質(zhì)體,與250 μL培養(yǎng)基輕輕混勻,靜置5 min;分別取100 pmol的si-LINC00958、si-NC、miR-877-3p mimic或mimics NC稀釋于250 μL OPTI-MEMI中,將兩種溶液輕吹混合,靜置20 min,轉(zhuǎn)染至六孔板內(nèi)細(xì)胞中,輕振混勻,轉(zhuǎn)染6～8 h后,換成含血清的培養(yǎng)液,按要求培養(yǎng)細(xì)胞。

1.2.2 組織總RNA提取 使用微量勻漿器充分研磨癌組織樣本及相應(yīng)癌旁正常組織樣本。加入適量預(yù)冷Trizol,混勻,孵育10 min,然后4 ℃,12 000 r/min離心10 min,除去不溶解物質(zhì)。加入適量氯仿溶液,振蕩器15～30 s混勻,室溫孵育5 min。4 ℃,12 000 r/min離心10 min。上層水相移入無(wú)RNA酶的EP管,加入等量異丙醇,混勻,常溫放置20 min。4 ℃,12 000 r/min,離心10 min。留沉淀,預(yù)冷75%乙醇,加入約1 mL乙醇,混勻。4 ℃,7 500 r/min離心5 min。棄上清液,沉淀內(nèi)加入預(yù)冷的DEPC水,混勻。定量RNA濃度和純度。

1.2.3 細(xì)胞總RNA提取 收集細(xì)胞沉淀,沉淀內(nèi)加入適量Trizol,吹打細(xì)胞,孵育10 min。余步驟同1.2.2步驟提取。

1.2.4 實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng) 取1.2.2和1.2.3步驟獲取的RNA,用反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA,用PCR試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR,LINC00958和miR-877-3p分別以GAPDH和U6作為內(nèi)參基因,用2-ΔΔCt對(duì)目的基因表達(dá)進(jìn)行定量分析。引物序列見(jiàn)表1。

表1 引物序列

1.2.5 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖 轉(zhuǎn)染細(xì)胞,培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,收集細(xì)胞。1 mL培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,計(jì)數(shù),接種于96孔板中,每孔3×103個(gè)細(xì)胞。于0、24、48、72、96、120 h分別檢測(cè)。用培養(yǎng)基配制10% CCK-8混合液,每孔100 μL。37 ℃避光孵育2 h,在450 nm處測(cè)定吸光度。

1.2.6 Transwell實(shí)驗(yàn) 包括細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn):取24孔板,放入小室,小室下方加600 μL含10% FBS的培養(yǎng)液,小室內(nèi)加入200 μL細(xì)胞懸液,將細(xì)胞在37 ℃下培養(yǎng)24 h,固定細(xì)胞,結(jié)晶紫染色, 清洗小室, 自然晾干。 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn):預(yù)先用無(wú)血清的培養(yǎng)液按1∶8稀釋Matrigel膠,取60 μL稀釋膠加到上室中,37 ℃孵育至少30 min,其余步驟同細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)。正置顯微鏡選擇適當(dāng)放大倍數(shù)拍照,用ImageJ軟件分析。

1.2.7 生物信息學(xué)分析 采用以下2個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)LINC00958下游miRNA:DIANA TOOLS(http://diana.imis.athena-innovation.gr)和RegRNA 2.0(http://regrna2.mbc.nctu.edu.tw)。

1.2.8 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn) 預(yù)測(cè)LINC00958和miR-877-3p的結(jié)合位點(diǎn)。構(gòu)建包含LINC00958的野生型(WT)序列和突變(MUT)序列,分別插入GP-miRGLO載體,由上海吉瑪公司合成,命名為GP-miRGLO-LINC00958-WT和GP-miRGLO-LINC00958-MUT。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期并狀態(tài)良好的CAL27和HN6細(xì)胞,接種到24孔板中。按照LipofectamineTM2000試劑說(shuō)明轉(zhuǎn)染,將2 μg GP-miRGLO-LINC00958-WT或GP-miRGLO-LINC00958-MUT,50 nmol miR-877-3p mimics或mimics NC,與2 μL脂質(zhì)體混合,室溫孵育20 min。共轉(zhuǎn)染48 h后,使用Promega公司的Dual-Glo Luciferase Reporter Assay試劑盒檢測(cè)。

1.2.9 免疫蛋白質(zhì)印跡(Western Blot) 提取總蛋白,用BCA試劑盒測(cè)定蛋白濃度,蛋白進(jìn)行10%聚丙烯酰胺凝膠電泳,轉(zhuǎn)至PVDF上,用5%脫脂奶粉室溫封閉后分別加入一抗4 ℃過(guò)夜,洗膜后加入二抗,室溫孵育1 h,用ECL化學(xué)發(fā)光液顯色。

1.2.10 細(xì)胞核質(zhì)分離實(shí)驗(yàn) 采用Paris Kit試劑盒。收集所需細(xì)胞,向細(xì)胞沉淀中加入細(xì)胞分離液,吹打重懸細(xì)胞,放置冰上裂解,離心。離心后上清液即是細(xì)胞質(zhì),沉淀為細(xì)胞核。取上清液至新的EP管,向沉淀加細(xì)胞裂解液,渦旋混勻。管內(nèi)加入適量的2×lysis/Binding Buffer用于裂解細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中,將無(wú)水乙醇分別加入細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì),混勻。標(biāo)記吸附管,將混合液移入相應(yīng)的管內(nèi),加入Wash Solution 1,離心,加入洗滌液,離心。向吸附管內(nèi)加入預(yù)熱的洗脫液,離心。定量檢測(cè)RNA濃度,置-80 ℃保存。用于后續(xù)細(xì)胞核質(zhì)RNA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本研究實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差顯示,采用SPSS 22.0分析數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)3次。兩組間比較采用t檢驗(yàn)分析,多組比較采用one-way ANOVA單因素方差分析,多組間兩兩比較采用Dunnett檢驗(yàn)。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中LIN00958在HNSCC組織中的表達(dá)和臨床意義

分析GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)中519例HNSCC組織和44例癌旁正常組織中LINC00958表達(dá)發(fā)現(xiàn),與癌旁正常組織相比,LINC00958在HNSCC組織中的表達(dá)明顯升高(圖1A),生存曲線分析發(fā)現(xiàn)HNSCC患者組織中LINC00958表達(dá)越高,其預(yù)后越差(圖1B)。

A:組織中LINC00958表達(dá);B:生存曲線分析;*:P<0.05

2.2 LIN00958在HNSCC組織和細(xì)胞中的表達(dá)

實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,相較于癌旁正常組織,LINC00958在HNSCC組織中的表達(dá)明顯升高(圖2A)。在HNSCC細(xì)胞系CAL27、HN4和HN6中,LINC00958的表達(dá)水平明顯高于人正?？谇火つぜ?xì)胞系HOK(圖2B)。此外,通過(guò)檢測(cè)CAL27和HN6細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中RNA發(fā)現(xiàn),LINC00958主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中(圖2C、D)。

A:組織中LINC00958表達(dá);B:細(xì)胞中LINC00958表達(dá);C、D:LINC00958在CAL27和HN6細(xì)胞中分布;**:P<0.01;***:P<0.001

2.3 LINC00958對(duì)CAL27和HN6細(xì)胞增殖能力的影響

結(jié)果顯示,將si-LINC00958轉(zhuǎn)染到CAL27和HN6細(xì)胞后,CAL27和HN6細(xì)胞中LINC00958表達(dá)明顯降低(圖3A)。CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LINC00958對(duì)HNSCC細(xì)胞系CAL27、HN6生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明,與轉(zhuǎn)染si-NC組相比,轉(zhuǎn)染si-LINC00958組的CAL27和HN6細(xì)胞吸光度值明顯降低(圖3B、C)。

A:si-LINC00958轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證;B:CAL27細(xì)胞增殖曲線;C:HN6細(xì)胞增殖曲線;**:P<0.01;***:P<0.001

2.4 LINC00958對(duì)CAL27和HN6細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響

細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與轉(zhuǎn)染si-NC組相比,轉(zhuǎn)染si-LINC00958組的CAL27和HN6細(xì)胞在顯微鏡下穿過(guò)小室的細(xì)胞數(shù)量減少,表現(xiàn)出較弱的遷移和侵襲能力(圖4A、B)。

2.5 LINC00958對(duì)EMT通路相關(guān)蛋白的影響

Western Blot曝光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,敲低LINC00958后,N-cadherin、Vimentin(間充質(zhì)標(biāo)志物)蛋白表達(dá)水平下降,E-cadherin(上皮標(biāo)志物)蛋白表達(dá)增高(圖5A、B)。

A:CAL27細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)情況;B:HN6細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)情況

2.6 miR-877-3p在HNSCC組織和細(xì)胞中的表達(dá)

實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,相較于癌旁正常組織,miR-877-3p在HNSCC組織中的表達(dá)含量明顯降低(圖6A)。在HNSCC細(xì)胞系CAL27、HN4和HN6中,miR-877-3p的表達(dá)水平明顯低于人正?？谇火つぜ?xì)胞系HOK(圖6B)。

A:miR-877-3p在組織中表達(dá);B:miR-877-3p在細(xì)胞中表達(dá);**:P<0.01;***:P<0.001

2.7 LINC00958負(fù)向調(diào)節(jié)miR-877-3p表達(dá)

PCR結(jié)果顯示,敲低LINC00958后miR-877-3p在CAL27和HN6表達(dá)量增高,并有顯著意義(圖7A)。通過(guò)預(yù)測(cè)miR-877-3p與LINC00958的結(jié)合位點(diǎn),構(gòu)建LINC00958野生型(GP-miRGLO-LINC00958-WT)質(zhì)粒和LINC00958突變型(GP-miRGLO-LINC00958-MUT)質(zhì)粒(圖7B)。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示:只有在CAL27和HN6細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染LINC00958野生型質(zhì)粒(GP-miRGLO-LINC00958-WT)和miR-877-3p mimics,熒光素酶活性才顯著降低(圖7C)。

′A:轉(zhuǎn)染si-LINC00958后細(xì)胞中miR-877-3p的表達(dá);B:LINC00958和miR-877-3p結(jié)合位點(diǎn);C:CAL27和HN6細(xì)胞系熒光素酶活性;*:P<0.05;**:P<0.01;ns:無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2.8 miR-877-3p對(duì)CAL27和HN6細(xì)胞增殖能力的影響

PCR結(jié)果顯示,將miR-877-3p mimics轉(zhuǎn)染到CAL27和HN6細(xì)胞系中后,細(xì)胞系中miR-877-3p表達(dá)明顯升高(圖8A)。CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與轉(zhuǎn)染NC組相比,轉(zhuǎn)染miR-877-3p mimics組的CAL27和HN6細(xì)胞450 nm吸光度值明顯降低(圖8B、C)。

A:miR-877-3p mimics轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證;B:CAL27細(xì)胞增殖曲線;C:HN6細(xì)胞增殖曲線;*:P<0.05;**:P<0.01;***:P<0.001

2.9 miR-877-3p對(duì)CAL27和HN6細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響

細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與轉(zhuǎn)染NC組相比,轉(zhuǎn)染miR-877-3p mimics組的CAL27和HN6細(xì)胞在顯微鏡下穿過(guò)小室的細(xì)胞數(shù)量減少,表現(xiàn)出較弱的遷移和侵襲能力(圖9A、B)。

A:鏡下遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)晶紫染色后小室圖和統(tǒng)計(jì)分析;B:鏡下侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)晶紫染色后小室圖和統(tǒng)計(jì)分析;比例尺=100 μm;**:P<0.01;***:P<0.001

2.10 miR-877-3p對(duì)EMT通路相關(guān)蛋白的影響

Western Blot曝光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染miR-877-3p mimics后,N-cadherin、Vimentin(間充質(zhì)標(biāo)志物)蛋白表達(dá)水平下降,E-cadherin(上皮標(biāo)志物)蛋白表達(dá)增高(圖10)。

A:CAL27細(xì)胞中miR-877-3p對(duì)EMT相關(guān)蛋白的影響;B:HN6細(xì)胞中miR-877-3p對(duì)EMT相關(guān)蛋白的影響

3 討 論

LncRNA屬于一類新發(fā)現(xiàn)的RNA,其轉(zhuǎn)錄本包含200多個(gè)不編碼蛋白質(zhì)的核苷酸[8]。近年來(lái)研究表明LncRNA的失聯(lián)在多種癌癥的發(fā)生和發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。LncRNA可作為致癌因子,通過(guò)與其他RNA的交叉作用和多種基于染色質(zhì)的機(jī)制促進(jìn)多種癌癥的生長(zhǎng)或轉(zhuǎn)移。LncRNA可通過(guò)調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)編碼能力、在轉(zhuǎn)錄水平及轉(zhuǎn)錄后水平改變基因表達(dá)進(jìn)而調(diào)控惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程,影響腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等,有望成為治療惡性腫瘤的靶向分子[4,9]。

研究表明,LINC00958在多種惡性腫瘤中高表達(dá)并與腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)[10]。據(jù)報(bào)道,在肺腺癌中,LINC00958作為miR-625-5p海綿,促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移或侵襲能力[6]。LINC00958可通過(guò)miR-627-5p促進(jìn)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖和遷移[7]。本研究發(fā)現(xiàn),與相鄰的正常組織相比,LINC00958在15個(gè)HNSCC腫瘤組織中表達(dá)量明顯上調(diào)。后續(xù)的研究結(jié)果證實(shí),沉默LINC00958可以顯著抑制HNSCC的細(xì)胞增殖、遷移和侵襲。通過(guò)分析GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù),結(jié)果發(fā)現(xiàn)HNSCC患者的LINC00958表達(dá)升高提示患者預(yù)后不佳。本研究進(jìn)一步驗(yàn)證了LINC00958在HNSCC進(jìn)展中的重要作用。

上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition,EMT)和腫瘤發(fā)生發(fā)展、腫瘤轉(zhuǎn)移等密切相關(guān),其顯著標(biāo)志是上皮標(biāo)志物(如E-cadherin)的下降和間充質(zhì)標(biāo)志物(如N-cadherin、Vimentin)的上升[11-12]。此外,EMT通常和很多轉(zhuǎn)錄因子有關(guān),如snail、slug、ZEB1和TWIST等,這些轉(zhuǎn)錄因子能通過(guò)不同途徑抑制E-cadherin表達(dá),影響EMT[13-14]。據(jù)報(bào)道,LncRNA在調(diào)節(jié)EMT進(jìn)程中具有重要作用,有望成為抑制EMT和腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵分子[15-16]。為了探索LINC00958促進(jìn)HNSCC發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。本研究通過(guò)WB實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),與NC組相比,轉(zhuǎn)染si-LINC00958后,E-cadherin蛋白表達(dá)量顯著上升,而N-cadherin和Vimentin蛋白表達(dá)水平明顯下降,提示LINC00958通過(guò)調(diào)控EMT影響HNSCC細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。

近年來(lái),研究表明LncRNA可以通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)與microRNA結(jié)合而發(fā)揮競(jìng)爭(zhēng)內(nèi)源性RNA(competing endogenous RNAs,ceRNAs)的作用[17]。MicroRNA是22 nt左右的小RNA分子,可以通過(guò)與靶mRNA結(jié)合來(lái)沉默基因和抑制翻譯。MicroRNA在心血管疾病、視網(wǎng)膜疾病、癌癥等多種人類疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[18-19]。此前已有多種研究表明,LINC00958可通過(guò)作用miRNA調(diào)節(jié)癌癥進(jìn)展。如LINC00958通過(guò)浸潤(rùn)miR-625-5p,上調(diào)LRRC8E表達(dá),促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移[20]。LINC00958通過(guò)作用miR-627-5p,調(diào)節(jié)YBX2表達(dá),促進(jìn)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖和遷移[7]。

通過(guò)生物信息學(xué)研究,我們預(yù)測(cè)miR-877-3p可能與LINC00958結(jié)合。通過(guò)qRT-PCR實(shí)驗(yàn)證實(shí),與NC組相比,沉默LINC00958后miR-877-3p在CAL27和HN6細(xì)胞中的表達(dá)明顯上調(diào)。因此我們推測(cè)LINC00958可能負(fù)向調(diào)節(jié)miR-877-3p。通過(guò)功能實(shí)驗(yàn),我們證實(shí)在HNSCC中miR-877-3p是腫瘤抑制因子,抑制HNSCC細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移能力,其對(duì)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的作用與LINC00958相反。接下來(lái)本研究通過(guò)雙重?zé)晒馑孛笀?bào)告基因,驗(yàn)證了LINC00958與miR-877-3p存在直接結(jié)合。根據(jù)這些研究結(jié)果,我們認(rèn)為L(zhǎng)INC00958可結(jié)合miR-877-3p,在HNSCC發(fā)揮致癌基因作用。此外,本研究發(fā)現(xiàn),與NC組相比,過(guò)表達(dá)miR-877-3p后,E-cadherin(上皮標(biāo)志物)表達(dá)量顯著上升,而間充質(zhì)標(biāo)志物(N-cadherin和Vimentin)蛋白表達(dá)水平明顯下降,提示過(guò)表達(dá)miR-877-3p抑制HNSCC細(xì)胞的EMT通路。

綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)LINC00958在HNSCC中高度上調(diào),LINC00958可結(jié)合并負(fù)向調(diào)節(jié)miR-877-3p,通過(guò)調(diào)控EMT促進(jìn)HNSCC的增殖、遷移和侵襲能力;LINC00958可能是HNSCC的新型治療生物標(biāo)志物。然而,在HNSCC中,LINC00958如何通過(guò)海綿作用吸附miR-877-3p來(lái)調(diào)控下游信號(hào)通路的機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。