大田栽培羊肚菌液體菌種技術(shù)應(yīng)用初探

李俊明 李 婕

（漢中潤泰來生物科技有限公司，陜西 城固 723212）

羊肚菌Morchellaspp.是羊肚菌科、羊肚菌屬真菌[1]，目前我國常用來人工仿野生大田栽培的品種，根據(jù)分子分類的系統(tǒng)發(fā)育學(xué)地位而定主要有三個種系：六妹、七妹、梯凌，其中，國內(nèi)各地分布的這三個品系均為黑色尖頂小羊肚菌，也是目前出口比較認(rèn)可的羊肚菌品系。

目前，國內(nèi)栽培羊肚菌主要以黑麥、小麥等基質(zhì)培養(yǎng)固體菌種，液體菌種還處于研究階段，大田生產(chǎn)的實際應(yīng)用未見報道。羊肚菌菌絲體喜濕，好氧，液體菌種具有活力強(qiáng)、培養(yǎng)周期短、播種方便均勻、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點。

以小麥為主要基質(zhì)栽培羊肚菌固體菌種，要消耗大量小麥，形成羊肚菌生產(chǎn)與人競糧的局面，不利于羊肚菌生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展。為此筆者進(jìn)行羊肚菌液體菌種應(yīng)用試驗，現(xiàn)將試驗結(jié)果總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）供試菌株：供試菌株為G10，屬于發(fā)育學(xué)分類的第七個黑色羊肚菌類群種Morchella eximia[2]，其子囊果尖頂、個大、肉厚、菌柄基部較細(xì)，幼菇色黑，成菇柄白、個大、頂尖。

為了使G10菌株適應(yīng)漢中地區(qū)，采用80 W 紫外光干涉誘變，藍(lán)光、冷熱刺激菌核再分離技術(shù)馴化，經(jīng)馴化后G10在平板和試管培養(yǎng)基上菌核更加密集和旺盛（圖1），避免了基因缺失造成減產(chǎn)和同核體扭結(jié)，對環(huán)境的適應(yīng)性和抗逆性大大提高，對液體菌種的適應(yīng)性也更強(qiáng)（誘變方法另文介紹）。

圖1 誘變后G10菌株菌核爬壁力增強(qiáng)

（2）培養(yǎng)基配方：固體麥粒菌種配方為小麥65%，雜木屑17%，谷殼10%，玉米粉5%，石灰2%，石膏1%。液體發(fā)酵液配方（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）為玉米粉10%，麩皮5%，磷酸二氫鉀0.2%，加水1 L。底料配方為谷殼90%，雜木屑10%，石灰2%。加水?dāng)嚢瑁琢虾?0%，pH 10。營養(yǎng)袋的配方為小麥65%，谷殼10%，青鋼木木屑20%，玉米粉2%，棉籽殼1%，石灰2%。

（3）使用設(shè)備：全自動多工位磁動力發(fā)酵器，一檔速度，約220 r/min，最大通氣量，磁場800 KA/m。磁化率300 KA/m。不設(shè)靜置全程攪拌108 h。

負(fù)壓全自動滅菌柜，壓力0.07～0.010 MPa，設(shè)定時長8 h自動關(guān)機(jī)、冷卻，料出鍋。

1.2 試驗方法

1.2.1 制備菌種

1.2.1.1 固體麥粒菌種制備

小麥提前浸水泡脹，自然氣溫浸泡24 h，將木屑、谷殼、玉米粉、石灰、石膏干料倒入拌料機(jī)中先攪拌5 min，然后加水調(diào)至培養(yǎng)料含水量65%，再將浸泡好的小麥倒入拌好的粉末料中攪拌均勻，此時培養(yǎng)料的含水量因浸泡的小麥水分高，會提高至75%～80%，握料于掌心使勁捏可見有水滴下，此水分為最佳。采用15 cm×30 cm 的塑料袋裝料滅菌，常壓滅菌鍋滅菌12 h，高壓鍋滅菌3 h，試驗采用負(fù)壓滅菌柜殺菌8 h，確保麥粒養(yǎng)分不被破壞。然后，料袋出鍋冷卻，接種。培養(yǎng)7 d 羊肚菌菌絲體即長滿袋，此時一定注意培養(yǎng)室通風(fēng)低溫，待菌種袋上層菌絲體開始轉(zhuǎn)變?yōu)楹稚珪r即可，確保固體菌種菌齡在15 d內(nèi)（最具活力時）播種。

1.2.1.2 液體菌種培養(yǎng)

球磨機(jī)打碎玉米粉、麩皮，按配方稱取物料倒入發(fā)酵罐，再倒入水，通常20 L 的發(fā)酵罐加入2 kg玉米粉，1 kg 的麩皮粉末，0.04 kg 的磷酸二氫鉀，加水20 L，滅菌備用。無菌條件下直接接入4 cm 長試管斜面菌種（無需接入發(fā)酵種子液或搖瓶液，因為羊肚菌的菌絲體活力極強(qiáng)，在發(fā)酵液液面靜置培養(yǎng)8 h 可以長1.5 cm 直徑的一塊菌絲團(tuán)），開始攪拌培養(yǎng)，36 h 后當(dāng)發(fā)酵罐內(nèi)出現(xiàn)大量絮狀物時，降溫至13 ℃，低溫活化培養(yǎng)，108 h 后大量碎米狀菌絲球形成時，則可播種（圖2）。

圖2 發(fā)酵6 d成熟的20 L液體菌種

1.2.2 大田整畦、施肥

試驗選擇沙壤土質(zhì)的撂荒地，地中有約600 hm2，試驗田0.27 hm2，液體菌種、固體麥粒菌種各播種50%面積。11 月15 日開始犁地耙田，開畦寬1.2 m，長20 m，每畦開30 cm 寬，15 cm 深的溝，兩畦邊上插竹竿，搭設(shè)遮陽網(wǎng)，整個試驗播種地搭建平棚（簡易棚）遮陽。整畦后撒史丹利復(fù)合肥25 kg/667 m2，有機(jī)肥50 kg/667 m2。然后淺翻畦土，整平播種。

1.2.3 播種

1.2.3.1 撒底料及噴灑液體菌種

先在畦上用釘耙開三條10 cm 寬，5 cm 深的淺槽（圖4），然后均勻撒一層底料在淺槽中作為液體菌種的黏著劑、保濕劑，再將液體菌種倒入農(nóng)用噴霧器內(nèi)（圖3），均勻噴灑在整個畦面（圖4），再用釘耙耙土覆蓋底料，土層要薄，以能看到少許底料為宜。液體菌種用量為48 m2播20 L。最后蓋黑膜，再立小拱棚，蓋白膜，保濕保溫發(fā)菌。

圖3 液體菌種倒入農(nóng)用噴霧器

圖4 底料上噴播液體菌種

圖5 播種液體菌種的畦面成熟羊肚菌子實體

圖6 播種液體菌種羊肚菌出菇狀態(tài)

1.2.3.2 播種固體菌種

同樣用釘耙在畦面開三條溝。在平整的地邊用篷布鋪地，將固體麥粒菌種置于其上揉碎，然后，按125 kg/667 m2用種量，拌灑2%的磷酸二氫鉀水溶液，將揉碎的菌種拌濕拌勻后撒播于畦面的三條淺溝內(nèi)，用釘耙刨平畦面，土淺蓋菌種，再澆水保濕，蓋上打孔的黑色地膜，最后立弓棚，蓋白色地膜保溫發(fā)菌。兩種用種方式后續(xù)管理同步同法。

1.2.4 擺放外源營養(yǎng)袋

營養(yǎng)袋滅菌后，在袋側(cè)開6 cm×4 cm 的長方形口，將開口對準(zhǔn)撒播底料的畦面，一畦放三排，每隔20 cm放置一袋。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩種菌種播種后菌絲生長觀察結(jié)果

2023年1月10日觀察播種液體菌種開始有菌絲體蔓延生長到割口后的營養(yǎng)袋內(nèi)，但畦面卻看不到菌絲體、菌霜，顯微觀察營養(yǎng)袋料，是羊肚菌菌絲體吃料生長無疑。而播種固體菌種的畦面三條淺溝的覆土表面有生長非常旺盛的菌絲體，且形成大量菌霜，出現(xiàn)兩種不同羊肚菌菌絲生長狀態(tài)。

截至2023年2月19日灑出菇水時，雖然播種液體菌種畦面能見到少量菌絲體，但仍未形成菌霜，然而畦面下6 cm 土層處有大量菌絲體，人行道及兩邊竹竿立柱間的土層下都有菌絲體生長?？梢姴シN液體菌種土層內(nèi)羊肚菌菌絲生長旺盛，但為何畦面不出現(xiàn)菌絲體和菌霜，原因不明。

2.2 出菇結(jié)果

菌絲生長觀察表明，播種液體菌種畦面無菌絲也不產(chǎn)生菌霜，但是，噴出菇水（2023 年2 月19 日）后（3月5日）畦面上出現(xiàn)大量黑芝麻樣物體，放大鏡下（10倍）可以觀察到密集的羊肚菌幼菇頂部，3～5 d即破土長出黑灰色、柄棕灰色的羊肚菌幼菇，有別于常規(guī)羊肚菌生長發(fā)育周期。

2023 年漢中氣候多變，不利羊肚菌生長，當(dāng)年羊肚菌絕收面積很大，試驗采用G10 誘變株無論是播種固體麥粒菌種還是液體菌種卻正常出菇，折算產(chǎn)量為播種固體菌種產(chǎn)量達(dá)600 kg/667 m2，播種液體菌種為400 kg/667 m2，采用固體麥粒菌種產(chǎn)量遠(yuǎn)高于液體菌種，其原因可能為固體麥粒菌種營養(yǎng)豐富。

2.3 用種成本

大田栽培羊肚菌根據(jù)大田的土質(zhì)，固體麥粒菌種一般用菌種量125～150 kg/667 m2，液體菌種用種量280 L/667 m2。固體麥粒菌種的成本4 元/kg，每667 m2用種成本為500～600 元，而液體菌種成本僅為14元/20 L。

2.4 兩種類型菌種栽培羊肚菌效益

試驗結(jié)果采用固體麥粒菌種羊肚菌產(chǎn)量為600 kg/667 m2，鮮菇價格50元/kg計，產(chǎn)值30 000元，采用液體菌種羊肚菌產(chǎn)量400 kg/667 m2，鮮菇價格50 元/kg 計，產(chǎn)值20 000 元。采用兩種菌種栽培羊肚菌的投工、田地租賃費、搭棚材料、塑料薄膜等基本一致，因此，采用固體麥粒菌種生產(chǎn)效益還是高于液體菌種。

3 小結(jié)與討論

試驗結(jié)果表明，大田栽培羊肚菌采用液體菌種能正常出菇，且節(jié)省小麥用量，但其產(chǎn)量顯著低于傳統(tǒng)固體麥粒菌種。

液體菌種具有不怕水、活力強(qiáng)的生物學(xué)特性，對栽培羊肚菌有天然優(yōu)勢。目前，液體菌種大田栽培羊肚菌未見報道，對其研究處于起步階段，栽培模式設(shè)計尚不成熟，且存在一系列未攻克的技術(shù)難點。

試驗為液體菌種應(yīng)用于大田栽培羊肚菌提供了參考。同時存在較多改進(jìn)之處，底料調(diào)配中碳源的添補(bǔ)、底料配方的營養(yǎng)安全以及如何通過調(diào)控土壤碳氮比提高產(chǎn)量等都需進(jìn)一步探索研究。

[本文編輯] 王嘉萱