藏藥六味石榴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李運(yùn)　周德來(lái)　龍布才讓　張明童

【摘要】目的：建立藏藥六味石榴丸定性定量檢測(cè)方法，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供參考。方法：采用顯微鑒別法，對(duì)制劑中石榴子、肉桂、胡椒及紅花進(jìn)行鑒別。利用薄層色譜（thin layer chromatography，TLC）法，分別對(duì)處方中石榴子、肉豆蔻及胡椒進(jìn)行定性鑒別。HPLC法分別對(duì)鞣花酸和羥基紅花黃色素A的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：顯微鑒別特征明顯；各薄層色譜條帶清晰、分離度良好，且陰性樣品不存在干擾；HPLC含量測(cè)定結(jié)果表明，鞣花酸在0.57～9.05 μg/mL（r=0.9996）、羥基紅花黃色素A在6.72～107.50 μg/mL（r=0.9999）內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率分別為98.14%（RSD=1.50%，n=6）、 99.00%（RSD=1.34%，n=6）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于六味石榴丸的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】藏藥；六味石榴丸；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】R286.0【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2023）19-0019-06

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.19.zgmzmjyyzz202319005

Quality Standard Study on Zang Medicine Liuwei Shiliu PillLI Yun ZHOU Delai LONGBU Cairang ZHANG Mingtong

1.Lanzhou Institute for Food and Drug Control， Lanzhou 730050， China;

2.Pharmacy Collage of Gansu University of Chinese Medicine，Lanzhou 730000， China;

3.Gannan Prefecture Hezuo city Kajiaman Tibetan Medicine Development Co.LTD， Hezuo 747000， China;

4.Gansu Institute for Drug Control， Lanzhou 730070， ChinaAbstract：Objective To establish the qualitative and quantitative methods for the determination of Tibetan medicine Liuwei Shiliu pill， and to provide the basis for controlling its quality standard. Methods The microscopic identification method was used to identify Granati fructus， Cinnamomi Cortex， Piperis fructus and Carthami flos in the preparation. Thin layer chromatography（TLC） was used for qualitative identification of Granati fructus， Myristiicae semenn， Piperis fructus and Carthami flos in the preparation. The contents of ellagic acid and Hydroxysafflor yellow A were determined by HPLC. Results The micro character and TLC were clear，and separating degree was perfect with no disturbance of negative sample. According to the HPLC analysis， the line range for ellagic acid and Hydroxysafflor yellow A were 0.57-9.05 μg/mL（r=0.9996），6.72-107.50 μg/mL（r=0.9999）， respectively. And the average recoveries were 98.14%（RSD=1.50%，n=6）、 99.00%（RSD=1.34%，n=6），respectively. Conlution This quality standards were simple and accurate，and can be used for quality control of Liuwei Shiliu pill.

Keywords：Zang Medicine; Liuwei Shiliu Pill; Quality Standards; HPLC

六味石榴丸源于《四部醫(yī)典》，藏文名“賽知周巴”，由石榴子100g、肉桂50g、肉豆蔻50g、胡椒50g、紅花50g、大托葉云實(shí)50g等六味藥材組成［1］。方中石榴子治一切胃病，能提升胃陽(yáng)，并且可治療培根寒證；肉桂散熱止痛、溫通筋脈；肉豆蔻溫中行氣；胡椒溫中散寒；紅花活血通經(jīng)、散瘀止痛；大托葉云實(shí)溫腎，逐寒等，諸藥共奏調(diào)節(jié)三因紊亂，溫腎、暖腰膝之功效。臨床常用于婦女白帶病。該方始源于人們實(shí)踐的直接經(jīng)驗(yàn)，有較牢靠的經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)，在指導(dǎo)數(shù)千年醫(yī)療實(shí)踐活動(dòng)中，得到不斷創(chuàng)新完善。為了提高藥效的持久性，減少吸潮，便于貯存，并增加服用及攜帶的便利性，以六味石榴散為基礎(chǔ)，將其劑型改變提升為丸劑（水丸），并建立較完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以保障藥品質(zhì)量。課題組在前期工作的基礎(chǔ)上，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)［2-9］研究，建立了處方中主要原料的顯微鑒別、薄層鑒別方法，并采用 HPLC 法分別對(duì)制劑中石榴子所含鞣花酸、紅花中羥基紅花黃色素A的含量進(jìn)行測(cè)定，從而更加有效、系統(tǒng)地控制藏藥六味石榴丸的質(zhì)量，確保臨床用藥安全、有效。

1儀器與材料

1.1儀器BX53+DP73正置熒光生物顯微鏡（日本奧林巴斯株式會(huì)社）；薄層色譜成像系統(tǒng)（瑞士CAMAG公司）；Waters e2695高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）；XSE205DU型分析天平（瑞士Mettle Toledo公司）；SB-800DT型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝產(chǎn)品）。

1.2材料石榴子對(duì)照藥材（批號(hào)：121431-201002）、肉豆蔻對(duì)照藥材（批號(hào)：120926-201608）、紅花對(duì)照藥材（批號(hào)：120907-201713）、胡椒堿對(duì)照品（批號(hào)：110775-202107，純度：98.2%）、鞣花酸對(duì)照品（批號(hào)：111959-201903，純度：88.8%）、羥基紅花黃色素A對(duì)照品（批號(hào)111637-202111，純度：96.8%）均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。六味石榴丸（批號(hào)：210801、210802、210803）由甘南州合作市卡加曼藏藥開發(fā)有限公司生產(chǎn)，陰性樣品由實(shí)驗(yàn)室模擬制得；硅膠G、硅膠GF254、硅膠H薄層板（規(guī)格：10 cm×10 cm，默克公司）；甲醇、乙腈（色譜純），水為Milli-Q超純水，其他試劑為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1顯微鑒別取六味石榴丸粉末適量，進(jìn)行顯微制片（3～5張），置鏡下觀察可見：石細(xì)胞無(wú)色，橢圓形或類圓形，壁厚，孔溝細(xì)密（石榴子）。石細(xì)胞呈類圓形或類長(zhǎng)方形，直徑約32～80 μm，一面壁菲?。ㄈ夤穑?，10］。石細(xì)胞淡黃色，成群或散在，呈類圓形或多角形，直徑20～35 μm，胞腔大，壁厚，木化，孔溝明顯（胡椒）?；ǚ哿A球形或橢圓形，直徑約60 μm，外壁有刺，具三個(gè)萌發(fā)孔（紅花）。結(jié)果如圖1。

2.2.1石榴子的薄層色譜鑒別取六味石榴丸粉末約1.0g，置離心管中，加入乙醇溶液10 mL，超聲提取30 min，取其上清液作為供試品溶液；另取石榴子對(duì)照藥材1.0 g，按上述方法制備對(duì)照藥材溶液。依據(jù)處方配比及制備方法，完成缺石榴子陰性對(duì)照樣品的制備，照供試品溶液的制備方法，同法制成陰性對(duì)照溶液。吸取上述供試品及陰性對(duì)照溶液各5 μL，對(duì)照藥材溶液4 μL，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（9∶1）作為薄層展開系統(tǒng)，展開，取出，晾干，置紫外燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的熒光猝滅斑點(diǎn)，且與陰性對(duì)照樣品中不存在干擾［11］，如圖2所示。

2.2.2肉豆蔻的薄層色譜鑒別取六味石榴丸粉末約1.0 g，置離心管中，加入石油醚（60～90 ℃）10 mL，超聲提取30 min，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取肉豆蔻對(duì)照藥材1.0 g，按上述方法制備對(duì)照藥材溶液。依據(jù)處方配比及制備方法，完成缺肉豆蔻陰性對(duì)照樣品的制備，照供試品溶液的制備方法，同法制成陰性樣品溶液。吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一高效硅膠G預(yù)制薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（9∶1）作為薄層展開系統(tǒng)，經(jīng)預(yù)飽和后，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照樣品中不存在干擾［11］，如圖3所示。

2.2.3胡椒的薄層色譜鑒別取六味石榴丸粉末約1.0 g，置離心管中，加入無(wú)水乙醇10 mL，超聲提取30 min，濾過，將續(xù)濾液作為供試品溶液。另取胡椒堿對(duì)照品，置棕色容量瓶中，加無(wú)水乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方比例及制備工藝，制備缺胡椒的陰性對(duì)照樣品，照供試品溶液的制備方法，同法制成陰性對(duì)照樣品溶液。吸取供試品及陰性對(duì)照樣品溶液各4 μL，對(duì)照品溶液2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮（7∶2∶1）作為薄層展開系統(tǒng)，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光和紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照樣品中不存在干擾，如圖4所示。

2.2.4紅花的薄層色譜鑒別取六味石榴丸粉末約1.0 g，置離心管中，加入80%丙酮溶液10 mL，密塞，振搖15 min，靜置后取上清液，作為供試品溶液。另取紅花對(duì)照藥材0.5 g，加入80%丙酮溶液5 mL，同法制成對(duì)照藥材溶液。依據(jù)處方配比及制備方法，完成缺紅花陰性對(duì)照樣品的制備，照上述供試品溶液的制備方法，同法制成陰性對(duì)照樣品溶液。吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（7∶0.4∶2∶3）作為薄層展開系統(tǒng)，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照樣品中不存在干擾，如圖5所示。1.陰性對(duì)照樣品溶液；2～4.供試品溶液；5.對(duì)照品溶液;A.日光下檢視;B.紫外光燈（365 nm）下檢視

2.3六味石榴丸中鞣花酸的HPLC含量測(cè)定

2.3.1對(duì)照品溶液的配置精密稱取鞣花酸對(duì)照品12.74 mg，置于25 mL容量瓶，用甲醇溶解、定容，搖勻。另取1 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻線即得對(duì)照品儲(chǔ)備液，備用。

2.3.2供試品溶液的制備取六味石榴丸適量研細(xì)，另取約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲提取（功率300 W，頻率40 kHz）50 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置后，取上清液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3.3陰性對(duì)照樣品溶液的制備依據(jù)處方配比及制備方法完成不含石榴子藥材的陰性對(duì)照樣品的制備，按照“2.3.2”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照樣品溶液。

2.3.4色譜條件CAPCELL PAK-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：30 ℃；以乙腈-0.7%磷酸溶液（16∶84）為流動(dòng)相；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：252 nm。理論板數(shù)按鞣花酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。

2.3.5專屬性試驗(yàn)取上述對(duì)照品溶液10 μL、供試品溶液和陰性對(duì)照樣品溶液，各20 μL，按照“2.3.4”項(xiàng)下條件檢測(cè)。由圖6可見，目標(biāo)化合物分離度良好；陰性樣品色譜圖中，鞣花酸對(duì)應(yīng)目標(biāo)化合物在相應(yīng)的保留時(shí)間無(wú)色譜峰吸收出現(xiàn)，表明處方中其他共存成分對(duì)含量測(cè)定結(jié)果不存在相互干擾。

2.3.6線性關(guān)系考察［12］分別精密移取“2.3.1”項(xiàng)下備用儲(chǔ)備液0.125 mL、0.25 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL置于10 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取 20 μL，按“2.3.4”項(xiàng)下色譜條件分析，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，并進(jìn)行積分處理。以色譜峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品溶液的質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)線性回歸，得到鞣花酸的回歸方程為Y=3.08×10⁵X-1.09×10⁵（ r=0.9996）；鞣花酸在質(zhì)量濃度 0.57～9.05 μg/mL內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.7精密度考察分別吸取濃度為45.25 μg/mL的鞣花酸對(duì)照品溶液10 μL，按“2.3.4”項(xiàng)下條件重復(fù)測(cè)定6次，以色譜峰面積積分值計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果鞣花酸峰面積的RSD（n=6）為1.60%，表明儀器精密度良好。

2.3.8重復(fù)性考察分別精密稱取六味石榴丸（批號(hào)：210802）樣品細(xì)粉，6 份，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，得鞣花酸的平均含量和 RSD 分別為79.41 μg/g、1.19%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.3.9穩(wěn)定性試驗(yàn)取“2.3.2”項(xiàng)下同一供試品溶液，置于室溫下，分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h及24 h取樣，進(jìn)樣分析，計(jì)算出鞣花酸峰面積積分值的RSD為 3.00%，提示供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.10加樣回收率實(shí)驗(yàn)取已知含量的六味石榴丸（批號(hào)：210802）樣品細(xì)粉，精密稱定，共6 份，每份 0.5 g，按樣品含量100%分別加入鞣花酸對(duì)照品溶液，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依“2.3.4”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，并進(jìn)行回收率的計(jì)算。測(cè)得鞣花酸的平均加樣回收率為98.14%，RSD值為1.50%。

2.3.1.10樣品測(cè)定精密稱取來(lái)源于不同批號(hào)的各樣品3份，每份1.0 g，按“2.3.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，依“2.3.1.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20 μL，測(cè)定樣品中鞣花酸的含量，結(jié)果見表2。

2.4六味石榴丸中羥基紅花黃色素A的HPLC含量測(cè)定

2.4.1對(duì)照品溶液的配置精密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品 13.88 mg，置于25 mL容量瓶，用25%甲醇溶解、定容至刻線，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液，備用。

2.4.2供試品溶液的制備取六味石榴丸適量研細(xì)，另取約0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率300 W，頻率40 kHz）50 min，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置后，取上清液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4.3陰性對(duì)照樣品溶液的制備按處方配比及制備方法制成不含紅花藥材的陰性對(duì)照樣品，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照樣品溶液。

2.4.4色譜條件CAPCELL PAK-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：25 ℃；以甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26∶2∶72）為流動(dòng)相；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置為403 nm。理論板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算，應(yīng)不得低于4000。

2.4.5專屬性試驗(yàn)分別上述對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，各10 μL，按“2.4.4”項(xiàng)下色譜條件檢測(cè)。由圖7可見，其分離度良好；陰性樣品色譜圖中，羥基紅花黃色素A對(duì)應(yīng)目標(biāo)化合物在相應(yīng)的保留時(shí)間無(wú)色譜峰吸收出現(xiàn)，表明處方中其他共存成分對(duì)含量測(cè)定結(jié)果不存在相互干擾。

2.4.6線性關(guān)系考察分別精密移取“2.4.1”項(xiàng)下備用儲(chǔ)備液0.0626 mL、0.125 mL、0.25 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL置 10 mL容量瓶中，加25%甲醇溶液定容至刻線，搖勻，分別精密吸取10 μL，按“2.4.4”項(xiàng)下色譜條件檢測(cè)，分別進(jìn)樣，記錄各色譜圖。以色譜峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品溶液的質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)線性回歸，結(jié)果羥基紅花黃色素A的回歸方程為Y=3.05×10⁴X-4.91×10⁴（ r=0.9999）；羥基紅花黃色素A在質(zhì)量濃度 6.72～107.50 μg/mL內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4.7精密度考察分別精密吸取濃度為53.75 μg/mL的羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液10 μL，按“2.4.4”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)測(cè)定6次，以色譜峰面積積分值計(jì)算其RSD值，結(jié)果羥基紅花黃色素A峰面積的RSD（n=6）為0.67%，表明儀器精密度良好。

2.4.8重復(fù)性考察分別精密稱取六味石榴丸（批號(hào)：210802）樣品細(xì)粉，6 份，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)得羥基紅花黃色素A的平均含量和 RSD值分別為5.30 mg/g、1.99%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.4.9穩(wěn)定性試驗(yàn)取“2.4.2”項(xiàng)下同一供試品溶液，室溫下放置，分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h取樣，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得羥基紅花黃色素A峰積分面積值的RSD 為0.84%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.10加樣回收率實(shí)驗(yàn)取已知含量的六味石榴丸（批號(hào)：210802）樣品細(xì)粉，精密稱定，供 6 份，每份 0.15 g，按樣品含量100%分別加入羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依“2.4.4”項(xiàng)下條件，分析測(cè)定，并計(jì)算回收率。結(jié)果羥基紅花黃色素A的平均加樣回收率為99.00%，RSD值為1.34%。

2.4.11樣品測(cè)定精密稱取來(lái)源于不同批號(hào)的各樣品3份，每份0.3 g，按“2.4.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依“2.4.4”項(xiàng)下色譜條件分析，并測(cè)定樣品中羥基紅花黃色素A的含量，結(jié)果見表4。

3討論

3.1顯微及TLC定性鑒別根據(jù)文獻(xiàn)研究［3-4］，選擇處方藥材粉末中典型顯微特征，如花粉粒的形態(tài)、石細(xì)胞的特征等作為鑒別要點(diǎn)，可快速對(duì)處方投料情況進(jìn)行甄別。同時(shí)，建立石榴子、肉豆蔻、胡椒及紅花的TLC鑒別方法，各薄層色譜色譜條帶清晰、分離度良好。另外，在藏區(qū)走訪調(diào)研中，發(fā)現(xiàn)存在誤將花椒代替胡椒的情況，已建立的TLC方法可進(jìn)行有效鑒別。

3.2HPLC測(cè)定該制劑投料中石榴子占處方組成的28.6%，其主要特征成分為鞣花酸等鞣質(zhì)類物質(zhì)，具有顯著的抗氧化、抗炎等活性［7］，故選擇鞣花酸作為指標(biāo)性成分，對(duì)石榴子的質(zhì)量狀況進(jìn)行考察。將鞣花酸對(duì)照品溶液，進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，確定252 nm為最佳檢測(cè)波長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)考察了乙腈-0.2%磷酸溶液（16∶84）、乙腈-0.2%磷酸溶液（18∶82）、乙腈-0.2%磷酸溶液（10∶90）等流動(dòng)相體系，結(jié)果表明，以乙腈-0.2%磷酸溶液（16∶84）為洗脫系統(tǒng)，分離效果良好。通過對(duì)不同色譜柱溫（25 ℃、30 ℃、35 ℃）的比較，30 ℃時(shí)，目標(biāo)峰峰形良好，基線平穩(wěn)。分別對(duì)提取溶媒（25%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇）、提取方式（熱回流、超聲提?。┘疤崛r(shí)間（10 min、20 min、30 min、40 min、50 min、60 min）進(jìn)行考察，經(jīng)綜合考量最終選擇以甲醇為提取溶劑，超聲提取50 min。

六味石榴丸中紅花，具有活血通經(jīng)、散瘀止痛的功效，其中羥基紅花素A是與功效相關(guān)的主要水溶性成分［13］，且被《中國(guó)藥典》作為紅花的質(zhì)控指標(biāo)，其中所含羥基紅花素A按干燥品計(jì)應(yīng)不得少于1.0%，故選擇羥基紅花素A作為指標(biāo)性成分，對(duì)紅花投料的質(zhì)量狀況進(jìn)行考察。對(duì)羥基紅花素A對(duì)照品溶液，進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，確定403 nm為最佳檢測(cè)波長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)考察了甲醇-0.1%磷酸溶液（35∶65）、乙腈-0.1%磷酸溶液（35∶65）、甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26∶2∶72）等流動(dòng)相體系，結(jié)果表明，以甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26∶2∶72）為最佳洗脫系統(tǒng)。通過對(duì)不同色譜柱溫（25 ℃、30 ℃、35 ℃）的比較，選擇25 ℃，目標(biāo)峰峰形良好，基線平穩(wěn)。分別對(duì)提取溶劑（10%甲醇、25%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇）、提取方式（超聲、熱回流）及提取時(shí)間（20 min、30 min、40 min、60 min）進(jìn)行考察，最終確定以25%甲醇為提取溶劑，超聲提取50 min，進(jìn)行HPLC分析樣品的制備。同時(shí)，按處方中紅花投料比折算，六味石榴丸中羥基紅花素A應(yīng)不少于1.4 mg/g。

綜上所述，本研究從顯微鑒別、TLC鑒別、含量測(cè)定等方面著手，較系統(tǒng)的建立了六味石榴丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，操作方便便、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確可靠，可為該制劑的質(zhì)量控制提供參考。參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2023-01-05編輯：劉斌）