lncRNA MALAT1調(diào)節(jié)miR-106b-5p/TLR4軸對慢性阻塞性肺疾病大鼠肺組織炎性損傷的影響

任 丹,張 田,李 杰

(1.咸陽市第一人民醫(yī)院 a老年病科二病區(qū);b呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科,陜西 咸陽712000;2.湖北省第三人民醫(yī)院 腫瘤科,湖北 武漢430030)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)可引發(fā)肺組織炎癥損傷和肺功能衰退,造成患者呼吸能力嚴(yán)重受損[1-2]。長非編碼RNA轉(zhuǎn)移相關(guān)肺腺癌轉(zhuǎn)錄本1(lncRNA MALAT1)可通過誘導(dǎo)并促進(jìn)炎癥參與動脈粥樣硬化、COPD等炎性疾病的發(fā)病,lncRNA MALAT1缺失可抑制巨噬細(xì)胞衍生泡沫細(xì)胞的形成[3]。研究顯示MALAT1在COPD肺組織標(biāo)本中高表達(dá),敲除lncRNA MALAT1可抑制轉(zhuǎn)化生長因子-β處理的人肺成纖維細(xì)胞纖維化[4]。lncRNA MALAT1可通過調(diào)控微小RNA表達(dá)介導(dǎo)細(xì)胞增殖、凋亡及炎癥[3],miR-106b-5p是其中一個調(diào)控靶點,被lncRNA MALAT1結(jié)合后表達(dá)降低,促進(jìn)大腸癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[5]。另外miR-106b-5p可作為COPD的生物標(biāo)志物,通過上調(diào)miR-106b-5p可抑制炎癥反應(yīng),減輕COPD的嚴(yán)重程度[6-7],還可通過下調(diào)Toll樣受體4(TLR4)抑制氧化低密度脂蛋白引起的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激損傷[8],而TLR4是COPD炎癥過程的重要調(diào)控因子[9]。本研究通過構(gòu)建COPD大鼠模型,探討lncRNA MALAT1是否能通過調(diào)節(jié)miR-106b-5p/TLR4軸影響COPD大鼠肺組織炎性損傷,報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1實驗動物 SD大鼠,購自陜西中醫(yī)藥大學(xué),許可證號SCXK(陜)2021-001,SPF級,雄性,體質(zhì)量200～230 g,分籠飼養(yǎng)(4只/籠),飼養(yǎng)溫度設(shè)為23～25℃,飼養(yǎng)相對濕度設(shè)為50%～60%,光照以明暗各12 h進(jìn)行循環(huán)。

1.1.2主要試劑與儀器 大鼠肺泡上皮細(xì)胞L2(貨號JH-R3019)、RPMI-1640培養(yǎng)基(貨號SH30809.01B),上海繼和生物科技有限公司;脂多糖(純度:≥98%,貨號L8880)、姬姆薩染色液(10×原液,貨號G1015)、HE染色試劑盒(貨號G1120)、大鼠白細(xì)胞介素-10(IL-10)酶聯(lián)免疫吸附測定(ELASA)試劑盒(貨號SEKR-0006)、大鼠腫瘤壞死因子-α(TNF-α)ELASA試劑盒(貨號SEKR-0009)、大鼠前列腺素E2(PGE2)ELASA試劑盒(貨號SEKR-0053)、雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒(貨號D0010),北京索萊寶科技有限公司;Trizol試劑(貨號B610409)、lncRNA MALAT1 siRNA質(zhì)粒、miR-106b-5p antagomir、miR-106b-5p antagomir陰性對照、空載質(zhì)粒,生工生物工程(上海)股份有限公司;一步法反轉(zhuǎn)錄實時熒光定量PCR試劑盒(貨號D7277M),上海碧云天生物技術(shù)有限公司等。

SCIREQ小動物肺功能檢測儀,北京廣源達(dá)科技發(fā)展有限公司;LEIA-X4實時熒光定量pcr儀,濟(jì)南歐萊博技術(shù)有限公司;FK-SY96S多功能酶標(biāo)分析儀,山東方科儀器有限公司;TC-150Z型智能全封閉生物組織脫水機(jī)、R139型輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機(jī),湖北泰維科技實業(yè)股份有限公司;XSP-13CA研究級生物顯微鏡,上海光學(xué)儀器一廠。

1.2 方法

1.2.1建立COPD大鼠模型并分組處理 參照文獻(xiàn)[10],以氣管滴注脂多糖溶液并聯(lián)合煙熏法構(gòu)建COPD模型大鼠:以生理鹽水溶解脂多糖,混勻制為2 mg/mL的脂多糖溶液,于實驗第1天和第14天向大鼠氣管內(nèi)分別滴注上述脂多糖溶液各1 mL,并于實驗第2天到第28天(第14天不煙熏)將SD大鼠放入自制煙熏箱中進(jìn)行煙熏,每天30 min(1支香煙/只),于實驗第29天觀察大鼠,若其出現(xiàn)精神萎靡、呼吸困難、咳嗽喘息等癥狀,即可表明COPD大鼠模型構(gòu)建成功,共得到成功建模大鼠60只,隨機(jī)分成模型組、lncRNA MALAT1敲低組、miR-106b-5p antagomir組、陰性對照組、lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir組,每組12只,選12只正常大鼠于實驗第1天和第14天向氣管內(nèi)滴注與造模大鼠等劑量的生理鹽水,且不進(jìn)行煙熏,設(shè)為對照組。

以生理鹽水分別溶解lncRNA MALAT1 siRNA質(zhì)粒、miR-106b-5p antagomir、miR-106b-5p antagomir陰性對照、空載質(zhì)粒,lncRNA MALAT1敲低組大鼠尾靜脈注射200 nmoL lncRNA MALAT1 siRNA質(zhì)粒,miR-106b-5p antagomir大鼠尾靜脈注射200 nmoL miR-106b-5p antagomir,陰性對照組大鼠尾靜脈注射200 nmoL miR-106b-5p antagomir陰性對照和200 nmoL空載質(zhì)粒,lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir組大鼠尾靜脈注射200 nmoL lncRNA MALAT1 siRNA質(zhì)粒和200 nmoL miR-106b-5p antagomir,模型組和對照組大鼠尾靜脈注射與lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir組等劑量的生理鹽水,各組大鼠均每周注射2次,共注射2周。

1.2.2檢測肺功能 各組大鼠分組處理2周結(jié)束后24 h,采用小動物肺功能檢測儀測定大鼠用力肺活量(FVC)、呼氣峰流值(PEF)、吸氣阻力(Ri)、潮氣量(VT),每只大鼠測3次,取平均值。

1.2.3實時熒光定量PCR實驗檢測肺組織lncRNA MALAT1、miR-106b-5p、TLR4 mRNA表達(dá)及采集標(biāo)本 各組大鼠肺功能檢測結(jié)束后,吸入乙醚進(jìn)行麻醉,剪開頸部找到頸總動脈,采集其中血液離心(3 000 r/min,4℃,15 min)獲得血清,保存-80℃冰箱中備用;游離大鼠氣管,于其下段剪1小口,插入并結(jié)扎固定1個注射器針頭,連接注射器向大鼠肺部緩慢注入1 mL生理鹽水灌洗,回抽后再次注入,灌洗3次后得到肺泡灌洗液(BALF)離心(1 500 r/min,4℃,5 min),獲得細(xì)胞沉淀和上清,細(xì)胞沉淀加入1 mL生理鹽水混勻后用于白細(xì)胞計數(shù),BALF上清保存-80℃冰箱中備用;于大鼠尾靜脈中注入25%氯化鉀溶液0.6 mL處死大鼠,開胸取出雙肺,剪下左肺洗滌后常規(guī)固定、脫水、透明,以熱石蠟包埋后固定在切片機(jī)中切片備用;剪下0.5 g右肺組織,剪碎后加入Trizol試劑研磨提取總RNA,測出其濃度后采用一步法反轉(zhuǎn)錄實時熒光定量PCR試劑盒逆轉(zhuǎn)錄后做PCR擴(kuò)增,lncRNA MALAT1及TLR4以GAPDH做內(nèi)參對照,miR-106b-5p以U6做內(nèi)參對照,各基因Ct值通過2-ΔΔCt算法分析量化其各組相對表達(dá),基因引物序列見表1。

表1 引物序列

1.2.4Giemsa染色對BALF中白細(xì)胞計數(shù) 取1.2.3中經(jīng)生理鹽水重懸混勻后的BALF細(xì)胞沉淀,吸出20 μL滴入細(xì)胞計數(shù)板,風(fēng)干、固定、姬姆薩染色,在顯微鏡下觀察并對著色的白細(xì)胞計數(shù)。

1.2.5大鼠肺組織病理形態(tài)檢測 取1.2.3中的肺組織切片,二甲苯脫蠟后水化,加入HE染色液浸沒切片,按照HE染色試劑盒說明書指導(dǎo)做染色后脫水、透明、鋪片、封片,在顯微鏡下觀察并任選5個視野拍照,觀察肺組織大量炎性細(xì)胞浸潤,肺泡結(jié)構(gòu)受損、融合、數(shù)目減少,氣管黏膜充血、水腫等炎性損傷癥狀,根據(jù)如下標(biāo)準(zhǔn)做Holfbauer評分[11]:肺組織無炎性損傷癥狀,評0分;25%視野中肺組織出現(xiàn)炎性損傷癥狀,評1分;50%視野中肺組織出現(xiàn)炎性損傷癥狀,評2分;75%視野中肺組織出現(xiàn)炎性損傷癥狀,評3分;100%視野中肺組織出現(xiàn)炎性損傷癥狀,評4分。

1.2.6ELASA法測定BALF和血清中TNF-α、PGE2、IL-10水平 取1.2.3中保存在-80℃冰箱中的BALF上清和血清,放在冰水浴中慢慢解凍,采用ELISA法測定兩者中TNF-α、PGE2、IL-10水平,具體步驟按照各自試劑盒說明書指導(dǎo)操作。

1.2.7檢測L2細(xì)胞中l(wèi)ncRNA MALAT1對miR-106b-5p、miR-106b-5p對TLR4 的靶向調(diào)控 取購買的L2細(xì)胞解凍復(fù)蘇,接種在25 mm2培養(yǎng)瓶培養(yǎng),傳代后接種在無菌12孔板培養(yǎng)24 h,隨機(jī)分為野生miR-106b-5p+空載組(轉(zhuǎn)染野生型miR-106b-5p報告質(zhì)粒和空載質(zhì)粒)、野生miR-106b-5p+lncRNA MALAT1過表達(dá)組(轉(zhuǎn)染野生型miR-106b-5p報告質(zhì)粒和lncRNA MALAT1過表達(dá)質(zhì)粒)、突變miR-106b-5p+空載組(轉(zhuǎn)染突變型miR-106b-5p報告質(zhì)粒和空載質(zhì)粒)、突變miR-106b-5p+lncRNA MALAT1過表達(dá)組(轉(zhuǎn)染突變型miR-106b-5p報告質(zhì)粒和lncRNA MALAT1過表達(dá)質(zhì)粒),使用脂質(zhì)體分組轉(zhuǎn)染24 h后收集各組細(xì)胞,采用雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒測定其雙熒光素酶相對活性。

L2細(xì)胞傳代后接種在無菌12孔板培養(yǎng)24 h,隨機(jī)分為野生TLR4+miR-106b-5p mimics陰性對照組(轉(zhuǎn)染野生型TLR4 3′-UTR報告質(zhì)粒和miR-106b-5p mimics陰性對照)、野生TLR4 +miR-106b-5p mimics組(轉(zhuǎn)染野生型TLR4 3′-UTR報告質(zhì)粒和miR-106b-5p mimics)、突變TLR4+miR-106b-5p mimics陰性對照組(轉(zhuǎn)染突變型TLR4 3′-UTR報告質(zhì)粒和miR-106b-5p mimics陰性對照)、突變TLR4 +miR-106b-5p mimics組(轉(zhuǎn)染突變型TLR4 3′-UTR報告質(zhì)粒和miR-106b-5p mimics),以脂質(zhì)體分組轉(zhuǎn)染24 h后收集各組細(xì)胞,采用雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒測定其雙熒光素酶相對活性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠肺功能檢測結(jié)果

與對照組比較,模型組大鼠FVC、PEF降低(P<0.05),Ri、VT升高(P<0.05)。與模型組比較,lncRNA MALAT1敲低組大鼠FVC、PEF升高(P<0.05),Ri、VT降低(P<0.05);miR-106b-5p antagomir組大鼠FVC、PEF降低(P<0.05),Ri、VT升高(P<0.05);陰性對照組大鼠FVC、PEF、Ri、VT無顯著差異(P>0.05)。與lncRNA MALAT1敲低組比較,lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir組大鼠FVC、PEF降低(P<0.05),Ri、VT升高(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠肺功能指標(biāo)

2.2 各組大鼠肺組織lncRNA MALAT1、miR-106b-5p及TLR4 mRNA表達(dá)檢測結(jié)果

與對照組比較,模型組大鼠肺組織lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表達(dá)升高(P<0.05),miR-106b-5p表達(dá)降低(P<0.05)。與模型組比較,lncRNA MALAT1敲低組大鼠肺組織lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表達(dá)降低(P<0.05),miR-106b-5p表達(dá)升高(P<0.05);miR-106b-5p antagomir組大鼠肺組織lncRNA MALAT1表達(dá)無顯著差異(P>0.05),TLR4 mRNA表達(dá)升高(P<0.05),miR-106b-5p表達(dá)降低(P<0.05);陰性對照組大鼠肺組織lncRNA MALAT1、miR-106b-5p及TLR4 mRNA表達(dá)無顯著差異(P>0.05)。與lncRNA MALAT1敲低組比較,lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir組大鼠肺組織lncRNA MALAT1表達(dá)無顯著差異(P>0.05),TLR4 mRNA表達(dá)升高(P<0.05),miR-106b-5p表達(dá)降低(P<0.05)。見表3。

表3 各組大鼠肺組織lncRNA MALAT1、miR-106b-5p及TLR4 mRNA相對表達(dá)

2.3 各組大鼠肺組織炎性損傷及BALF中白細(xì)胞計數(shù)檢測結(jié)果

對照組肺組織沒有發(fā)生炎性損傷。模型組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)受損且肺泡壁變厚,肺泡融合、數(shù)目減少,氣管黏膜充血、水腫,肺組織發(fā)生大量炎性細(xì)胞浸潤等炎性損傷,與對照組比較,模型組大鼠肺組織Holfbauer評分及BALF中白細(xì)胞計數(shù)升高(P<0.05)。與模型組比較,lncRNA MALAT1敲低組大鼠肺組織肺炎性損傷減輕,Holfbauer評分及BALF中白細(xì)胞計數(shù)降低(P<0.05);miR-106b-5p antagomir組大鼠肺組織肺炎性損傷加重,Holfbauer評分及BALF中白細(xì)胞計數(shù)升高(P<0.05);陰性對照組大鼠肺組織肺炎性損傷無明顯變化,Holfbauer評分及BALF中白細(xì)胞計數(shù)無顯著差異(P>0.05)。與lncRNA MALAT1敲低組比較,lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir組大鼠肺組織肺炎性損傷加重,Holfbauer評分及BALF中白細(xì)胞計數(shù)升高(P<0.05)。見圖1、表4。

圖1 HE染色檢測各組大鼠肺組織炎性損傷(×200)

表4 各組大鼠肺組織Holfbauer評分及BALF中白細(xì)胞計數(shù)

2.4 各組大鼠BALF中炎癥相關(guān)因子TNF-α、PGE2、IL-10水平檢測結(jié)果

與對照組比較,模型組大鼠BALF中IL-10水平降低(P<0.05),TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05)。與模型組比較,lncRNA MALAT1敲低組大鼠BALF中IL-10水平升高(P<0.05),TNF-α、PGE2水平降低(P<0.05);miR-106b-5p antagomir組大鼠BALF中IL-10水平降低(P<0.05),TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05);陰性對照組大鼠BALF中IL-10、TNF-α、PGE2水平無顯著差異(P>0.05)。與lncRNA MALAT1敲低組比較,lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir組大鼠BALF中IL-10水平降低(P<0.05),TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05)。見表5。

表5 各組大鼠BALF中炎癥相關(guān)因子TNF-α、PGE2、IL-10水平

2.5 各組大鼠血清炎癥相關(guān)因子TNF-α、PGE2、IL-10水平檢測結(jié)果

與對照組比較,模型組大鼠血清IL-10水平降低(P<0.05),TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05)。與模型組比較,lncRNA MALAT1敲低組大鼠血清IL-10水平升高(P<0.05),TNF-α、PGE2水平降低(P<0.05);miR-106b-5p antagomir組大鼠血清IL-10水平降低(P<0.05),TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05);陰性對照組大鼠血清IL-10、TNF-α、PGE2水平無顯著差異(P>0.05)。與lncRNA MALAT1敲低組比較,lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir組大鼠血清IL-10水平降低(P<0.05),TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05)。見表6。

表6 各組大鼠血清炎癥相關(guān)因子TNF-α、PGE2、IL-10水平

2.6 各組L2細(xì)胞中l(wèi)ncRNA MALAT1對miR-106b-5p、miR-106b-5p對TLR4的靶向調(diào)節(jié)

通過Starbase數(shù)據(jù)庫查詢到lncRNA MALAT1與miR-106b-5p之間存在結(jié)合位點,見圖2。與野生miR-106b-5p+空載組比較,野生miR-106b-5p+lncRNA MALAT1過表達(dá)組相對熒光素酶活性顯著降低(P<0.05);突變miR-106b-5p+空載組與突變miR-106b-5p+lncRNA MALAT1過表達(dá)組間相對熒光素酶活性無顯著差異(P>0.05)。表7。

圖2 通過Starbase數(shù)據(jù)庫查詢到lncRNA MALAT1與miR-106b-5p之間的結(jié)合位點

表7 各組相對熒光素酶活性值

查詢Starbase數(shù)據(jù)庫得知miR-106b-5p與TLR4之間存在結(jié)合位點,見圖3。與野生TLR4+miR-106b-5p mimics陰性對照組比較,野生TLR4+miR-106b-5p mimics組相對熒光素酶活性顯著降低(P<0.05);突變TLR4+miR-106b-5p mimics陰性對照組與突變TLR4+miR-106b-5p mimics組之間相對熒光素酶活性無顯著差異(P>0.05)。表8。

圖3 通過Starbase數(shù)據(jù)庫查詢到miR-106b-5p與TLR4 之間的結(jié)合位點

表8 各組相對熒光素酶活性值

3 討論

長期吸煙是COPD發(fā)病的最主要因素,環(huán)境污染導(dǎo)致有害物質(zhì)進(jìn)入氣管和肺部也可促進(jìn)COPD發(fā)生,COPD作為一種慢性炎癥疾病,多采用激素類藥物治療,不適合患者長期應(yīng)用[12-13]。本文以氣管滴注脂多糖溶液并聯(lián)合煙熏法構(gòu)建COPD模型大鼠,結(jié)果顯示,造模大鼠BALF和血清中促炎因子TNF-α、PGE2水平升高,同時其中抗炎因子IL-10水平降低,引發(fā)大鼠體內(nèi)炎癥,造成大鼠BALF中白細(xì)胞計數(shù)增加,肺組織發(fā)生炎性損傷,導(dǎo)致大鼠肺功能指標(biāo)FVC、PEF降低,同時Ri、VT升高,最終致使大鼠出現(xiàn)精神萎靡、呼吸困難、咳嗽喘息等癥狀,提示COPD模型建立成功。

lncRNA MALAT1是一種可介導(dǎo)組織細(xì)胞增殖、分化、損傷及炎癥的非編碼RNA,在COPD患者中高表達(dá),并與其疾病分期、促炎因子TNF-α與IL-1β、IL-6水平等呈正相關(guān)[14],敲低lncRNA MALAT1可抑制巨噬細(xì)胞炎癥[3],并增強(qiáng)體外COPD模型細(xì)胞活力[4]。本研究結(jié)果顯示,以lncRNA MALAT1 siRNA質(zhì)粒處理COPD大鼠,可降低Ri、VT、肺組織lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表達(dá)、Holfbauer評分、BALF中白細(xì)胞計數(shù)、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平,升高FVC、PEF、肺組織miR-106b-5p表達(dá)、BALF和血清中IL-10水平,并減輕肺組織肺炎性損傷,表明敲低lncRNA MALAT1可減少促炎因子TNF-α、PGE2表達(dá),增加抗炎因子IL-10表達(dá),抑制COPD大鼠體內(nèi)炎癥,減輕肺組織炎性損傷,改善肺功能,揭示下調(diào)lncRNA MALAT1對COPD具有治療作用。

微小RNA可調(diào)控炎性細(xì)胞因子表達(dá),并參與調(diào)節(jié)COPD引發(fā)的氣道組織損傷和肺部炎癥[14-15],miR-106b-5p作為一種微小RNA,可參與介導(dǎo)COPD的發(fā)生發(fā)展[6],在過敏性鼻炎細(xì)胞模型中表達(dá)下調(diào),過表達(dá)miR-106b-5p可抑制其模型細(xì)胞炎癥和凋亡[16],并可抑制轉(zhuǎn)化生長因子β1誘導(dǎo)的支氣管上皮細(xì)胞纖維化[17],TLR4是其下游作用靶點,可被其下調(diào),進(jìn)而通過抑制炎癥減輕氧化低密度脂蛋白引起的內(nèi)皮功能障礙[8],COPD患者肺部感染會引發(fā)TLR4上調(diào),導(dǎo)致患者預(yù)后不佳[18],抑制TLR4表達(dá)可減少炎性細(xì)胞因子釋放,并促進(jìn)抗炎因子釋放,進(jìn)而通過抑制炎癥減輕COPD引發(fā)的肺功能損傷[19],因此miR-106b-5p/TLR4可作為COPD的潛在治療靶點,研究顯示,lncRNA MALAT1可通過吸收miR-106b-5p增強(qiáng)大腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移[5],并通過激活TLR4信號上調(diào)促炎因子IL-6和TNF-α的表達(dá),促進(jìn)急性胰腺炎中巨噬細(xì)胞的M1極化[20],由此預(yù)知調(diào)節(jié)miR-106b-5p/TLR4可能是敲低lncRNA MALAT1減輕COPD大鼠肺組織炎性損傷的作用機(jī)制。本文結(jié)果顯示,以miR-106b-5p antagomir處理COPD大鼠,可加重大鼠肺組織肺炎性損傷,并降低FVC、PEF、肺組織miR-106b-5p表達(dá)、BALF和血清中IL-10水平,升高Ri、VT、肺組織TLR4 mRNA表達(dá)、Holfbauer評分、BALF中白細(xì)胞計數(shù)、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平,表明抑制miR-106b-5p表達(dá)可促進(jìn)炎癥進(jìn)展,加重COPD大鼠肺組織肺炎性損傷及肺功能障礙,雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炞C實lncRNA MALAT1可靶向下調(diào)L2細(xì)胞中miR-106b-5p,且miR-106b-5p可靶向下調(diào)TLR4表達(dá),lncRNA MALAT1可通過靶向下調(diào)miR-106b-5p而促進(jìn)TLR4表達(dá),從而促使COPD發(fā)生,敲低lncRNA MALAT1可升高肺組織miR-106b-5p表達(dá),降低TLR4 mRNA表達(dá),表明miR-106b-5p/TLR4參與敲低lncRNA MALAT1對COPD大鼠肺組織炎性損傷的減輕過程。以lncRNA MALAT1 siRNA質(zhì)粒和miR-106b-5p antagomir聯(lián)合處理COPD大鼠,相比lncRNA MALAT1 siRNA質(zhì)粒單獨處理,可加重COPD大鼠肺組織肺炎性損傷,并降低大鼠FVC、PEF、肺組織miR-106b-5p表達(dá)、BALF和血清中IL-10水平,升高Ri、VT、肺組織lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表達(dá)、Holfbauer評分、BALF中白細(xì)胞計數(shù)、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平,表明miR-106b-5p antagomir可減弱敲低lncRNA MALAT1對COPD大鼠促炎因子表達(dá)的降低和抗炎因子表達(dá)的增強(qiáng)作用,拮抗其抗炎效果,最終逆轉(zhuǎn)其對COPD大鼠肺組織炎性損傷及肺功能的改善作用,提示敲低lncRNA MALAT1減輕COPD大鼠肺組織炎性損傷是通過上調(diào)miR-106b-5p實現(xiàn)的。

總之,lncRNA MALAT1可通過降低miR-106b-5p表達(dá)而上調(diào)TLR4,從而促使COPD發(fā)生發(fā)展。敲除lncRNA MALAT1可通過上調(diào)miR-106b-5p而降低TLR4表達(dá),從而阻止大鼠體內(nèi)炎癥發(fā)生發(fā)展,減輕其肺組織炎性損傷,改善其肺功能,調(diào)節(jié)miR-106b-5p/TLR4可能是其分子機(jī)制。