蒼夷滴鼻油對(duì)小鼠鼻黏膜損傷的修復(fù)作用及緊密連接蛋白表達(dá)的影響※

楊 鈐,楊履世,賈力莉,宋美卿,牛艷艷,白崇智,王若瑜,馮瑪莉

(1.山西省中醫(yī)院,山西 太原 030012;2.山西黃河中藥有限公司,山西 太原 030012)

鼻炎是鼻腔的慢性炎癥性疾病,主要由鼻黏膜充血、水腫等炎性損傷引發(fā)。修復(fù)對(duì)于保護(hù)鼻黏膜組織生理結(jié)構(gòu),防御病原微生物入侵,減少黏性分泌物,減輕充血、水腫、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等炎性反應(yīng)具有重要作用。存在于上皮細(xì)胞間的緊密連接(TJs)主要作用是封閉相鄰細(xì)胞間的接縫,阻擋溶質(zhì)沿細(xì)胞間隙滲入體內(nèi),構(gòu)成機(jī)體與外界環(huán)境的第一道屏障,在鼻黏膜修復(fù)機(jī)制中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。緊密連接蛋白包括跨膜蛋白Occludin、Claudins、JAMs、胞質(zhì)附著蛋白ZO家族及與其相連的細(xì)胞骨架蛋白[1]。研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)鼻黏膜受損時(shí),緊密連接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin在黏膜上皮中的表達(dá)強(qiáng)度明顯下降,破壞上皮屏障功能[2-3]。

蒼夷滴鼻油由蒼耳子、白芷、辛夷油、冰片、薄荷油等藥物組成,具有通鼻竅、散風(fēng)寒的功效。蒼夷滴鼻油具有通鼻竅和排出分泌物的作用,對(duì)金黃色葡萄球菌、甲型溶血性鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌及肺炎鏈球菌均有不同程度的抑制作用(山西黃河中藥有限公司蒼夷滴鼻油臨床應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)總結(jié))。本品以蒼耳子、辛夷為君藥。蒼耳子始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,性溫,味辛、苦,歸肺經(jīng),具有散風(fēng)寒、通鼻竅、祛風(fēng)濕的功效。藥理學(xué)研究表明,蒼耳子具有降血糖、抗過(guò)敏、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、降血脂等作用[2]。辛夷性溫,味辛,歸脾、胃經(jīng),具有散風(fēng)寒、通鼻竅等功效。藥理學(xué)研究表明,辛夷具有降壓、抗炎、抗組胺、抗過(guò)敏、鎮(zhèn)痛等作用[4]。

為證實(shí)蒼夷滴鼻油對(duì)鼻黏膜損傷的修復(fù)作用及其可能通過(guò)恢復(fù)黏膜上皮緊密連接蛋白表達(dá)的作用機(jī)制。本研究建立鼻黏膜損傷小鼠模型,觀察蒼夷滴鼻油對(duì)鼻黏膜紅腫程度、組織病理改變及緊密連接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin表達(dá)的影響。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑 甲醛,購(gòu)自天津市申泰化學(xué)試劑有限公司,批號(hào)20171210;乙二胺四乙酸(EDTA),購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號(hào)20190315;PBS 緩沖液(即用型干粉),購(gòu)自Biosharp Life Sciences,批號(hào)21183986;ZO-1免疫組化一抗(兔抗小鼠),購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司,貨號(hào)bs-1329R,批號(hào)BA03303484;Claudin-1免疫組化一抗(兔抗小鼠),購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司,貨號(hào)bs-1428R,批號(hào)AI10091875;Occludin免疫組化一抗(兔抗小鼠),購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司,貨號(hào)bs-10011R,批號(hào)BA01222167;二抗(含內(nèi)源性過(guò)氧化物酶封閉液、鏈霉親和素溶液)(山羊抗兔),購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司,貨號(hào)SP-0023,批號(hào)BJ09074420;DAB顯色試劑盒(20×),購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,貨號(hào)ZLI-9019,批號(hào)232010302。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)昆明(KM)小鼠共60只,雌雄各半,體質(zhì)量18~20 g,購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(京)2019-0008。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):110322210100720285。飼養(yǎng)于山西省中醫(yī)藥研究院中心實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物房,自由進(jìn)食進(jìn)水,溫度為(22±1)℃,相對(duì)濕度為40%~60%。動(dòng)物倫理審查編號(hào):SZYLY2021KY-0101。

1.3 主要儀器 全自動(dòng)脫水機(jī)(Excelsior,美國(guó)Thermo公司);石蠟包埋機(jī)(TKY-BMB,湖北康泰醫(yī)療設(shè)備有限公司);旋轉(zhuǎn)石蠟切片機(jī)(F325,德國(guó)Thermo公司);萬(wàn)能熒光成像系統(tǒng)(BX51-DP72,日本奧林巴斯)。

2 方法

2.1 分組方法 按照均衡隨機(jī)法將60只KM 小鼠分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、滴通鼻炎水陽(yáng)性對(duì)照組及蒼夷滴鼻油高劑量、中劑量、低劑量組,每組10只。

2.2 鼻黏膜損傷小鼠模型制備方法 參考文獻(xiàn)[5]的造模方法,用蒸餾水替代生理鹽水進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定模型制備方法:除空白對(duì)照組,其余組均以70℃蒸餾水50μL滴于小鼠雙鼻中隔黏膜,每分鐘1次,滴30次。

2.3 給藥方法 將滴通鼻炎水(廣州白云山醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司白云山何濟(jì)公制藥廠,國(guó)藥準(zhǔn)字Z44022586,規(guī)格:每瓶15 m L)與生理鹽水按照1∶4比例稀釋為滴通鼻炎水混懸液。將蒼夷滴鼻油(山西黃河中藥有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字Z20053699,規(guī)格:每瓶10 m L)與溶媒(山西黃河中藥有限公司提供,為不含蒼夷滴鼻油藥味的基質(zhì))按照4∶1、2∶3、1∶4的比例分別稀釋為高、中、低濃度的蒼夷滴鼻油混懸液?？瞻讓?duì)照組、模型對(duì)照組不做處理。滴通鼻炎水陽(yáng)性對(duì)照組給予滴通鼻炎水混懸液治療,滴鼻量為5μL/(只·次·側(cè));蒼夷滴鼻油各給藥組給予高、中、低濃度的蒼夷滴鼻油混懸液治療,滴鼻量為5μL/(只·次·側(cè)),頭部斜下方20°滴入鼻腔兩側(cè),停留30 s。每日兩次,連續(xù)給藥7 d。

3 藥效觀察

3.1 觀察指標(biāo) ①鼻黏膜紅腫程度。給藥7 d后,取刺激區(qū)鼻中隔黏膜(帶軟骨),肉眼觀察腫脹、淤血程度并評(píng)分。0度:未見(jiàn)腫脹、淤血,與正常狀態(tài)比較,未發(fā)生損傷,計(jì)0分;1度:可見(jiàn)腫脹,未見(jiàn)淤血,與正常狀態(tài)比較,輕度損傷,計(jì)1分;2度:可見(jiàn)腫脹、淤血,與正常狀態(tài)比較,中度損傷,計(jì)2 分。②鼻黏膜病理組織學(xué)。給藥7 d后,取刺激區(qū)鼻中隔黏膜(帶軟骨)放入10%甲醛溶液固定12 h,10%乙二胺四乙酸(EDTA)脫鈣3 d后,脫水、浸蠟、包埋、切片,HE染色后光鏡下觀察各組小鼠黏膜組織結(jié)構(gòu)變化,包括假?gòu)?fù)層柱狀上皮細(xì)胞、毛細(xì)血管排列整齊與否,分泌腺體是否結(jié)構(gòu)清晰,毛細(xì)血管、腺體數(shù)量變化,以及黏膜與軟骨的密接程度等。③鼻黏膜上皮細(xì)胞緊密連接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin免疫組化。上述病理組織石蠟切片常規(guī)脫蠟至水,微波抗原修復(fù),高火3 次,每次5 min。內(nèi)源性過(guò)氧化物酶封閉液室溫孵育10 min,PBS緩沖液洗滌3次,每次3 min。封閉用正常山羊血清工作液室溫孵育10 min,甩干,一抗工作液(ZO-1,1∶250;Claudin-1,1∶200;Occludin,1∶400)4 ℃過(guò)夜孵育,PBS緩沖液洗滌3次,每次3 min,二抗工作液室溫孵育10 min,PBS緩沖液洗滌3次,每次3 min。HRP標(biāo)記的鏈霉親和素溶液室溫孵育10 min,緩沖液洗滌3次,每次3 min。DAB工作液顯色(顯色程度鏡下控制),蘇木素復(fù)染,脫水透明封片。染色時(shí)同批進(jìn)行空白對(duì)照。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野采集圖像,放大倍數(shù)為200倍。采用Image J圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像分析。

3.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad 8.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)和Dunnett-t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.3 結(jié)果

(1)鼻黏膜紅腫程度比較 模型對(duì)照組紅腫評(píng)分高于空白對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型對(duì)照組比較,滴通鼻炎水陽(yáng)性對(duì)照組、蒼夷滴鼻油高劑量組紅腫評(píng)分均降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與滴通鼻炎水陽(yáng)性對(duì)照組比較,蒼夷滴鼻油高劑量組紅腫評(píng)分雖有降低,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。圖1見(jiàn)本期第125頁(yè)。

表1 6組鼻黏膜損傷小鼠鼻黏膜紅腫程度比較(分,±s)

表1 6組鼻黏膜損傷小鼠鼻黏膜紅腫程度比較(分,±s)

注:與空白對(duì)照組比較,△P<0.05;與模型對(duì)照組比較,▲P<0.05。

組別只數(shù)紅腫評(píng)分空白對(duì)照組10 0.707±0.025模型對(duì)照組10 0.781±0.064△滴通鼻炎水陽(yáng)性對(duì)照組10 0.739±0.042▲蒼夷滴鼻油高劑量組10 0.707±0.025▲蒼夷滴鼻油中劑量組10 0.731±0.041蒼夷滴鼻油低劑量組10 0.760±0.058

圖1 6組鼻黏膜損傷小鼠鼻黏膜損傷紅腫程度

(2)鼻黏膜病理組織學(xué) 空白對(duì)照組:鼻黏膜表面被覆假?gòu)?fù)層柱狀上皮細(xì)胞,排列整齊,毛細(xì)血管規(guī)則,分泌腺清晰,可見(jiàn)杯狀細(xì)胞,胞核規(guī)則。模型對(duì)照組:鼻黏膜上皮細(xì)胞損傷,表皮細(xì)胞明顯剝脫,上皮細(xì)胞水腫,杯狀細(xì)胞肥大;基底膜層破壞,黏膜上皮層下血管明顯擴(kuò)張,血管數(shù)量增多,固有層間質(zhì)水腫,腺體肥大,腺管擴(kuò)張,有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),整個(gè)黏膜層增厚,結(jié)構(gòu)出現(xiàn)紊亂。滴通鼻炎水陽(yáng)性對(duì)照組:表皮細(xì)胞未見(jiàn)明顯剝脫,上皮細(xì)胞水腫程度、杯狀細(xì)胞肥大程度減輕;黏膜上皮層下血管數(shù)量增多不明顯,固有層間質(zhì)水腫好轉(zhuǎn),肥大腺體數(shù)目較模型對(duì)照組減少,腺管擴(kuò)張狀態(tài)好轉(zhuǎn),炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少,整個(gè)黏膜層厚度變薄,結(jié)構(gòu)趨于整齊。蒼夷滴鼻油高劑量組:表皮細(xì)胞未見(jiàn)明顯剝脫,上皮細(xì)胞水腫程度、杯狀細(xì)胞肥大程度明顯減輕;黏膜上皮層下血管數(shù)量增多不明顯,固有層間質(zhì)水腫明顯好轉(zhuǎn),肥大腺體數(shù)目明顯減少,腺管擴(kuò)張狀態(tài)好轉(zhuǎn),炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少,整個(gè)黏膜層厚度變薄,結(jié)構(gòu)趨于整齊。蒼夷滴鼻油中劑量組:表皮細(xì)胞未見(jiàn)明顯剝脫,上皮細(xì)胞水腫開(kāi)始減輕,杯狀細(xì)胞肥大不明顯;黏膜上皮層下血管擴(kuò)張有減輕,血管數(shù)量增多不明顯,固有層間質(zhì)水腫減輕,腺體體積變小,腺管擴(kuò)張狀態(tài)、腺管結(jié)構(gòu)好轉(zhuǎn),固有層炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少,整個(gè)黏膜層增厚及結(jié)構(gòu)紊亂出現(xiàn)好轉(zhuǎn)。蒼夷滴鼻油低劑量組:黏膜上皮細(xì)胞損傷,表皮細(xì)胞明顯剝脫,上皮細(xì)胞水腫,杯狀細(xì)胞肥大,分泌旺盛;基底膜層破壞,黏膜上皮層下血管數(shù)量增多不明顯,固有層間質(zhì)水腫,腺體肥大,腺管擴(kuò)張,有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),整個(gè)黏膜層增厚及結(jié)構(gòu)出現(xiàn)紊亂程度較模型對(duì)照組略輕。圖2見(jiàn)本期第125頁(yè)。

圖2 6組鼻黏膜損傷小鼠鼻黏膜組織病理學(xué)(×200倍)

(3)鼻黏膜上皮細(xì)胞緊密連接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin表達(dá)水平比較 模型對(duì)照組ZO-1、Claudin-1、Occludin表達(dá)水平均低于空白對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。滴通鼻炎水陽(yáng)性對(duì)照組、蒼夷滴鼻油高劑量組、蒼夷滴鼻油中劑量組ZO-1表達(dá)水平及滴通鼻炎水陽(yáng)性對(duì)照組、蒼夷滴鼻油高劑量組Claudin-1、Occludin表達(dá)水平均高于模型對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。蒼夷滴鼻油高劑量組ZO-1、Claudin-1、Occludin表達(dá)水平與滴通鼻炎水陽(yáng)性對(duì)照組比較,均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);蒼夷滴鼻油高劑量組ZO-1、Claudin-1、Occludin表達(dá)水平與模型對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。圖3見(jiàn)本期第125頁(yè)。

表2 6組鼻黏膜損傷小鼠鼻黏膜上皮細(xì)胞緊密連接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin表達(dá)水平比較(±s)

表2 6組鼻黏膜損傷小鼠鼻黏膜上皮細(xì)胞緊密連接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin表達(dá)水平比較(±s)

注:與空白對(duì)照組比較,△P<0.05;與模型對(duì)照組比較,▲P<0.05;與滴通鼻炎水陽(yáng)性對(duì)照組比較,★P<0.05。

組別鼠數(shù)ZO-1 Claudin-1 Occludin空白對(duì)照組5 0.286±0.008 0.282±0.010 0.254±0.010模型對(duì)照組5 0.220±0.009△0.237±0.014△0.230±0.014△滴通鼻炎水陽(yáng)性對(duì)照組 5 0.296±0.011▲0.297±0.044▲0.267±0.002▲蒼夷滴鼻油高劑量組5 0.290±0.020▲0.282±0.010▲0.261±0.010▲蒼夷滴鼻油中劑量組5 0.276±0.011▲★0.261±0.006★0.244±0.008★蒼夷滴鼻油低劑量組5 0.238±0.019★0.250±0.017★0.218±0.013★

圖3 6組鼻黏膜損傷小鼠鼻黏膜上皮細(xì)胞緊密連接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin表達(dá)(×200倍)

4 討論

4.1 鼻黏膜損傷的中醫(yī)病因病機(jī)分析 導(dǎo)致鼻竅疾病發(fā)生的基本病因很多,外因主要為外感六淫、異物入鼻,內(nèi)因主要為臟腑失調(diào)。風(fēng)邪具有升發(fā)、向上、易襲陽(yáng)位的特性,鼻屬陽(yáng)中之陽(yáng)竅,故外邪犯鼻以風(fēng)邪為主。風(fēng)為百病之長(zhǎng),寒、暑、火、熱邪常依附于風(fēng)邪,而濕邪則易與他邪兼夾致病。病毒、過(guò)敏原、細(xì)菌、空氣懸浮粉塵及外界冷熱空氣變化等因素均可導(dǎo)致鼻病發(fā)生。除外感導(dǎo)致鼻病外,脾胃熱盛、肺臟虛弱、氣血失調(diào)均可導(dǎo)致鼻病發(fā)生。鼻為多氣多血之竅,脾統(tǒng)血,若脾熱移肝或胃火上攻,易致血不循經(jīng),流溢脈外而發(fā)衄血。肺主鼻,肺氣宣發(fā),則宗氣、衛(wèi)氣布散于鼻,鼻竅得以溫煦,方能溫和通利。若肺氣不足,不能宣發(fā),易被邪毒侵襲而發(fā)鼻病。此外,氣血失調(diào)必然累及機(jī)體各項(xiàng)生理功能,導(dǎo)致疾病發(fā)生。

4.2 鼻黏膜損傷模型制備方法研究 針對(duì)鼻黏膜損傷的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),PM2.5刺激隨濃度升高和時(shí)間延長(zhǎng),鼻黏膜上皮細(xì)胞之間緊密連接完整性明顯降低[6];低氧可誘導(dǎo)鼻黏膜上皮細(xì)胞釋放高遷移率族蛋白B1(HMGB1),促進(jìn)黏膜上皮屏障損傷[7];兔的正常鼻黏膜經(jīng)過(guò)光動(dòng)力療法(PDT)干預(yù)后會(huì)出現(xiàn)可恢復(fù)性損傷[8];大鼠鼻黏膜上皮損傷,甲硝唑、環(huán)丙沙星、慶大霉素經(jīng)鼻給藥兩周,停藥后損傷黏膜迅速修復(fù)[9];通過(guò)病理形態(tài)和透射電鏡觀察,4、6、8 Gy劑量一次性照射均能很好地建立小鼠鼻黏膜急性損傷模型[10]。此外,對(duì)不同水溫刺激后大鼠鼻黏膜損傷及修復(fù)過(guò)程的組織形態(tài)學(xué)改變的研究發(fā)現(xiàn),50℃、70 ℃生理鹽水滴鼻30次(每分鐘1次)刺激大鼠鼻中隔黏膜后,均可引起鼻黏膜損傷,50℃組兩周后即可修復(fù),70 ℃組在第28日僅少數(shù)恢復(fù),第42日后仍未完全恢復(fù)[5]。本研究參考文獻(xiàn)[5],用蒸餾水替代生理鹽水,通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)觀察鼻黏膜損傷小鼠模型制備的可行性及損傷持續(xù)的時(shí)間,采用70 ℃蒸餾水50μL滴在小鼠雙鼻中隔黏膜,每分鐘1次,滴30次,致小鼠鼻黏膜熱損傷。

4.3 鼻黏膜上皮緊密連接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin作用分析 鼻黏膜細(xì)胞間的連接方式主要有TJs、黏附連接(AJs)、橋粒及縫隙連接4種[11]。其中,TJs是形成表皮滲透屏障和維持屏障功能的先決條件。研究發(fā)現(xiàn),TJs是由多種蛋白構(gòu)成的大分子復(fù)合物,呈連續(xù)的帶狀結(jié)構(gòu),圍繞著上皮或內(nèi)皮細(xì)胞,在調(diào)節(jié)物質(zhì)旁細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)、維持細(xì)胞極性及細(xì)胞增殖、遷移、存活、分化等過(guò)程中發(fā)揮重要作用[12]。蛋白激酶C(PKC)是一類磷脂依賴性蛋白激酶,可催化多種蛋白質(zhì)磷酸化,PKC介導(dǎo)的磷酸化和去磷酸化可調(diào)控TJs的分布和功能。作為第1種被發(fā)現(xiàn)的緊密連接跨膜蛋白,相鄰細(xì)胞間Occludin蛋白相互結(jié)合,參與調(diào)控旁細(xì)胞通透性及維持細(xì)胞極性。當(dāng)細(xì)胞中PKC含量過(guò)高,會(huì)導(dǎo)致已磷酸化的Occludin蛋白去磷酸化,跨膜電阻值(TER)明顯下降,細(xì)胞極性和細(xì)胞間通透性遭到顯著破壞[13-14]。此外,Occludin蛋白過(guò)表達(dá)導(dǎo)致16HBE 細(xì)胞的TER 增加,FITC右旋糖苷通透性(Pa/Pc)降低,進(jìn)而顯著抑制HMGB1,導(dǎo)致氣道上皮屏障功能損傷[15]。當(dāng)敲除Occludin基因后,小鼠腸道和膀胱上皮的旁細(xì)胞通透性并未發(fā)生改變,提示Occludin可能不是構(gòu)成TJ復(fù)合物所必需的結(jié)構(gòu)蛋白,盡管如此,Occludin基因敲除小鼠仍然存在很多表型異常,如生長(zhǎng)阻滯、胃黏膜上皮細(xì)胞慢性炎癥和增生、睪丸肥大、唾液腺紋狀管細(xì)胞漿內(nèi)的分泌顆粒缺失等,說(shuō)明在TJ的通透性調(diào)節(jié)功能方面,Occludin蛋白仍發(fā)揮著關(guān)鍵作用[16]。Claudin家族共有27個(gè)成員,分布于所有的上皮和內(nèi)皮組織。其中,Claudin-1被認(rèn)為是機(jī)體旁細(xì)胞屏障中較為重要的TJ蛋白,廣泛表達(dá)于各種上皮組織。敲除Claudin-1基因的小鼠因水電解質(zhì)嚴(yán)重失調(diào),僅能存活1 d[17]。目前,ZO家族中ZO-1是TJ中第1個(gè)被發(fā)現(xiàn)的胞漿蛋白,構(gòu)成TJ網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的“橋梁”分子,是參與TJ組裝與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵分子。研究發(fā)現(xiàn),MDCK 單層細(xì)胞中ZO-1敲低會(huì)伴隨肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白形態(tài)學(xué)改變和重組,進(jìn)而降低TER 值,增加示蹤分子透過(guò)率[18]。綜上,ZO-1、Claudin-1、Occludin對(duì)表皮、上皮和內(nèi)皮等屏障功能的維持發(fā)揮關(guān)鍵作用。

滴通鼻炎水噴霧劑可祛風(fēng)清熱、宣肺通竅,治療傷風(fēng)鼻塞、慢性鼻炎、過(guò)敏性鼻炎、鼻竇炎等疾病臨床療效確切,因此在本研究中作為陽(yáng)性對(duì)照藥。另外,根據(jù)人用劑量,將蒼夷滴鼻油用量由每日數(shù)次折算為每日1次,按照蒼夷滴鼻油∶溶媒=4∶1、2∶3、1∶4分別設(shè)置高、中、低劑量組,經(jīng)滴鼻治療7 d后,蒼夷滴鼻油高劑量組鼻黏膜損傷紅腫程度明顯減輕,且可明顯上調(diào)鼻黏膜上皮細(xì)胞緊密連接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin表達(dá)水平,保護(hù)鼻黏膜表皮完整性,減輕上皮細(xì)胞水腫和杯狀細(xì)胞肥大程度,減輕間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),降低黏膜厚度,促進(jìn)鼻黏膜結(jié)構(gòu)恢復(fù)。本研究結(jié)果證實(shí),蒼夷滴鼻油對(duì)鼻黏膜具有保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能與上調(diào)鼻黏膜上皮細(xì)胞緊密連接蛋白ZO-1、Claudin-1、Occludin表達(dá)有關(guān)。本研究通過(guò)制備鼻黏膜損傷小鼠模型,證明蒼夷滴鼻油對(duì)鼻黏膜損傷具有治療作用,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討,但蒼夷滴鼻油對(duì)機(jī)體的調(diào)節(jié)作用仍需進(jìn)一步深入研究。