奧硝唑-甘草瀉心湯的CS/SA口腔雙層潰瘍膜的初步研究

馬海絨,楊嫣云,魯奕男,李 穎,武 鵬,牛 闖

(寧夏醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院,寧夏 銀川 750004)

復(fù)發(fā)性口瘡性口炎(RAS)是一種最常見的口腔潰瘍性疾病,發(fā)病率為5%～20%[1]。RAS病因至今未明,因而阻礙了對(duì)該疾病的有效治療[1]。RAS慢性、可復(fù)發(fā)性的特點(diǎn)導(dǎo)致在臨床治療時(shí),局部用藥的效果優(yōu)于全身用藥,因此目前臨床上治療RAS以散劑、噴劑、凝膠劑、膜劑等局部藥物為主,其中口腔膜可將藥物直接作用于潰瘍面而且可以延長(zhǎng)了藥物的作用時(shí)間[2],相比較而言膜劑材料更容易受到患者青睞[3]。因此,對(duì)膜劑的制作和臨床應(yīng)用至關(guān)重要的環(huán)節(jié)是找到一種具有良好生物相容性、足夠黏附力及合理經(jīng)濟(jì)成本的材料[4]。

殼聚糖(Chitosan,CS)是一種具有生物降解性和生物相容性的多糖,可以作為RAU治療藥物的緩釋載體,有減少疼痛、促進(jìn)愈合的效果[4]。海藻酸鈉(Sodium alginate,SA)具有價(jià)格低廉,良好的生物相容,對(duì)環(huán)境無害,一定的抑菌作用等特點(diǎn)[5]。單獨(dú)西醫(yī)治療主要以縮短病程,緩解癥狀,減輕病人的痛苦為主[6]。如長(zhǎng)期是使用復(fù)發(fā)性口腔潰瘍常用藥物如糖皮質(zhì)激素、非甾體類抗炎藥等,很容易產(chǎn)生毒性反應(yīng),并可能誘發(fā)或加劇潰瘍局部感染[6]。而在防止復(fù)發(fā)和控制并發(fā)癥、較小副作用方面中藥材料具有優(yōu)勢(shì)[6],因而被廣泛用于口腔潰瘍的治療[5]。醫(yī)圣張仲景在《金匱要略·百合狐惑陰陽毒病脈證治》及趙以德《金匱玉函經(jīng)二注》提出,甘草瀉心湯可治RAS,目前也已有中醫(yī)學(xué)者采用甘草瀉心湯為主方在臨床上治療復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍,并取得較為滿意效果[7]?，F(xiàn)代藥理研究表明甘草瀉心湯具有增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能、鎮(zhèn)痛、抗炎和抗口腔潰瘍等藥理作用,同時(shí)發(fā)現(xiàn)甘草瀉心湯可以有利于改善患者的臨床不良癥狀,并且降低患者潰瘍的復(fù)發(fā)率[8-9]。奧硝唑抑制殺滅絕大多數(shù)的厭氧菌,在抗厭氧菌的同時(shí)有著較小的毒副作用,而且可有效消除口腔內(nèi)部細(xì)菌造成的潰瘍創(chuàng)傷炎癥反應(yīng),為潰瘍的愈合創(chuàng)造有利環(huán)境[10]。本研究以SA和CS為主要成分,在其中加入適量的奧硝唑和甘草瀉心湯,探究雙層膜的制備方法,對(duì)制備奧硝唑-甘草瀉心湯的CS/SA口腔雙層潰瘍膜進(jìn)行體外評(píng)價(jià),篩選奧硝唑-甘草瀉心湯的CS/SA口腔雙層潰瘍膜制備最佳配比。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器

殼聚糖、海藻酸鈉、奧硝唑(上海阿拉丁生化科技股份有限公司),冰乙酸(天津市博華通化工產(chǎn)品銷售中心),甘草瀉心湯購于寧夏銀川市古方中醫(yī)藥店。

培養(yǎng)板(比克曼生物,中國(guó))、恒溫干燥箱(賽默飛,美國(guó)),生物安全柜(賽默飛,美國(guó)),磁力攪拌器(Joanlab,中國(guó))。

1.2 方法

1.2.1 膜的制備

單層膜制備:(1)取1mg的CS,加入100mL,濃度為0.5%的冰乙酸水溶液中,磁力攪拌3h,使殼聚糖完全溶解,靜置脫泡后,倒入模具,37℃恒溫干燥,得單層殼聚糖膜。(2)取適量SA,加入90mL純水,磁力攪拌5h使殼聚糖完全溶解,加入10mL甘草瀉心湯和奧硝唑混合液,磁力攪拌1h,靜置脫泡后,37℃恒溫干燥,得單層殼聚糖藥膜。

雙層藥膜制備:取1mg的殼聚糖,加入100mL,濃度為0.5%的冰乙酸水溶液中,磁力攪拌使殼聚糖完全溶解,脫泡后,倒入模具中,37℃恒溫干燥4h成型后,將制備好的海藻酸鈉單層藥膜液倒入模具中,干燥、脫膜,得雙層藥物膜。

雙層膜優(yōu)化:載藥層膜劑基質(zhì)比例優(yōu)化,選擇奧硝唑和海藻酸鈉作為正交因素進(jìn)行試驗(yàn),含奧硝唑含量分別為0.05%、0.1%、0.15%、0.2%,及海藻酸鈉分別為0.1%、0.2%時(shí)所制膜的性能差異,選擇最優(yōu)配比。

1.2.2 膜的體外檢測(cè)

1.2.2.1 外觀性狀測(cè)定

以雙層貼膜的成膜性、易剝程度、柔韌性、脆性等作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。以10分制打分,打分越高,膜外觀越好,其中藥物與基質(zhì)分離打0分。掃描電鏡下觀察膜的形態(tài)。

1.2.2.2 溶解性

將100 mL蒸餾水放入燒杯中,37℃水浴恒溫加熱,用玻璃棒攪拌,攪拌速度為30 r/min,將載藥層膜(1 cm×1 cm)放入水浴中并開始計(jì)時(shí),記錄膜劑溶解的時(shí)間。膜溶解時(shí)間越長(zhǎng),其停留在口腔的時(shí)間越長(zhǎng),效果越好。

1.2.2.3 成膜性

主要用揭膜完整性來評(píng)價(jià)。用手揭雙層膜的最大面積的膜重量與總膜重的百分比來表示,比值越大越好。

2 結(jié)果

2.1 不同甘油含量1%殼聚糖單層基底膜成膜性能比較

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在殼聚糖(CS)中不加甘油,成膜后極易破碎,因此將甘油作為一個(gè)因素進(jìn)行實(shí)驗(yàn),表1結(jié)果顯示含0.1%甘油的CS基底膜更符合實(shí)驗(yàn)所需。

表1 不同甘油含量1%殼聚糖單層基底膜成膜性能比較

2.2 不同含量奧硝唑-甘草瀉心湯-海藻酸鈉藥膜成膜性能比較

海藻酸鈉含量為2%,奧硝唑含量為0.1%時(shí),藥膜的成膜性最佳。詳見表2。實(shí)驗(yàn)中將添加了0.1%甘油的1%(mg/mL)殼聚糖作為基底膜,0.1%奧硝唑-甘草瀉心湯-2%SA制備藥膜,將基底膜與藥膜結(jié)合,制備雙層膜。對(duì)制備好的雙層藥膜,進(jìn)行外觀性能、溶解性、成膜性檢測(cè),結(jié)果詳見圖1。單純SA膜為白色透明狀,加入奧硝唑后SA單層膜為白色,奧硝唑-甘草瀉心湯-CS/SA雙層膜為淺黃色,能夠看到雙層形態(tài),奧硝唑分布均勻,未見明顯的粉末狀沉積。圖2結(jié)果顯示,殼聚糖和海藻酸鈉可以較好的融合,雙層膜不會(huì)自動(dòng)分離。說明溶劑澆鑄法可以作為制備雙層載藥口腔膜劑的方法。見圖2。

圖1 奧硝唑-甘草瀉心湯-CS/SA膜實(shí)物圖

圖2 奧硝唑-甘草瀉心湯-CS/SA雙層膜橫切電鏡圖

表2 不同含量奧硝唑-甘草瀉心湯-海藻酸鈉藥膜成膜性能比較

2.3 奧硝唑-甘草瀉心湯-CS/SA雙層膜與市面常見潰瘍材料性能對(duì)比

與市面上常售的幾種治療口腔潰瘍材料相比,本實(shí)驗(yàn)制備的CS/SA口腔雙層潰瘍膜顏色為淺黃色更容易被接受,柔韌性好,薄厚適宜,溶解性一般,能較長(zhǎng)時(shí)間維持形態(tài),有利于藥物釋放,利于潰瘍愈合,但黏性一般,如過敏還可及時(shí)取出。詳見表3。

表3 奧硝唑-甘草瀉心湯-CS/SA雙層膜與市面常見潰瘍材料性能對(duì)比

3 討論

目前市面上常見的口腔潰瘍膜藥物主要成分有西藥或者中藥,西藥主要以抗菌和局麻藥為主如醋酸地塞米松、利多卡因;中藥多見蜂膠,暫未見到西藥和中藥混合制備的雙層潰瘍藥膜。

本實(shí)驗(yàn)利用溶劑澆鑄法將添加了0.01%甘油的1%(mg/mL)殼聚糖作為基底膜,0.1%奧硝唑-甘草瀉心湯-2%SA制備藥膜,將基底膜與藥膜結(jié)合,成功制備制備處雙層口腔潰瘍膜。

SA為白色或淡黃色粉末,溶于水會(huì)形成黏稠狀的溶液,這是因SA含有大量的極性基團(tuán),所以其易溶于水,不溶于有機(jī)溶劑,因此具有很強(qiáng)的親水性[11]。同時(shí)SA的溶液濃度及聚合度的增大又會(huì)增加溶液的黏度[11]。甘草瀉心湯的處方中含有甘草、大棗等含糖藥材,因此當(dāng)奧硝唑含量過高時(shí),成膜后更容易粘貼在模具上,不能較好保持完整的藥膜形態(tài),所以選擇0.01%奧硝唑作為最適藥量。掃描電鏡照片提示殼聚糖和海藻酸鈉可以較好的融合,雙層膜不會(huì)自動(dòng)分離,這可能與殼聚糖帶正電荷而海藻酸鈉帶負(fù)電荷有關(guān)。

實(shí)驗(yàn)制備的口腔潰瘍膜含有奧硝唑和甘草瀉心湯兩種藥物,奧硝唑在抗菌消炎、促進(jìn)潰瘍傷口愈合方面效果顯著,但單一奧硝唑口腔粘貼片無法有效預(yù)防RAS復(fù)發(fā),而甘草瀉心湯具有益氣和胃的功效,適用于口腔潰瘍脾胃虛弱證,因此兩藥聯(lián)合可增強(qiáng)治療效果[8-10]。制備的雙層潰瘍膜能以直接貼附持效的方式給藥,保證藥物在潰瘍表面最大程度釋藥,而良好的溶解性又可延長(zhǎng)給藥時(shí)間進(jìn)而增強(qiáng)藥物療效。

4 結(jié)論

利用溶劑澆鑄法可以制備奧硝唑-甘草瀉心湯的CS/SA雙層口腔潰瘍膜,這對(duì)于臨床治療口腔潰瘍有一定的臨床價(jià)值。