老年急性腦出血并癲癇患者血清中血管生成素樣蛋白4和微小RNA-124蛋白表達(dá)水平及其臨床意義

杜志剛,伊紅麗,吳海燕,仇漢誠,崔晨曦,崔貴香

1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院順義院區(qū)綜合科,北京 101113;2.華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;3.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院神經(jīng)外科

老年急性腦出血具有高致死率、致殘率[1]。癲癇為發(fā)生率較高的急性腦出血并發(fā)癥,且癲癇發(fā)生率隨患者年齡的增長而上升,隨癲癇病情的發(fā)展,可造成患者認(rèn)知損傷加重,對(duì)患者預(yù)后影響較大[2-3]。血管生成素樣蛋白4(ANGPTL4)是可保持血管完整性、炎癥信號(hào)傳導(dǎo)、調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激的分泌蛋白[4]。微小RNA-124(miR-124)可參與神經(jīng)元分化與發(fā)育、神經(jīng)細(xì)胞凋亡等過程,對(duì)神經(jīng)元修復(fù)具有促進(jìn)作用[5]。目前關(guān)于ANGPTL4、miR-124在老年急性腦出血并發(fā)癲癇患者中表達(dá)研究報(bào)道較少。本文研究分析ANGPTL4、miR-124在老年急性腦出血并發(fā)癲癇患者中表達(dá)及其意義,以期為老年急性腦出血并發(fā)癲癇早期診治提供借鑒。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2020年1月至2022年1月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院順義院區(qū)收治的72例急性腦出血并發(fā)癲癇患者為急性腦出血并發(fā)癲癇組,另選取同期收治的單純急性腦出血患者50例為急性腦出血組,健康體檢的健康志愿者50例為對(duì)照組。本研究經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過,患者均已簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):急性腦出血患者均符合《中國腦出血診治指南(2019)》[6]的診斷標(biāo)準(zhǔn),急性腦出血并發(fā)癲癇患者同時(shí)符合《中國基因性全面性癲癇臨床診治實(shí)踐指南》[7]中的診斷標(biāo)準(zhǔn),均經(jīng)顱腦CT或MRI檢查確診;年齡≥65歲。排除標(biāo)準(zhǔn):合并視力障礙者;合并精神分裂者;近期服用抗抑郁焦慮藥物者;既往存在癲癇史者;腦出血恢復(fù)期者。

1.3 研究方法

1.3.1 ANGPTL4水平、miR-124 mRNA表達(dá)量檢測 于發(fā)病后第2天或體檢當(dāng)日抽取空腹靜脈血6 mL,以離心半徑3 cm、轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心處理15 min,分離上層血清,-70 ℃保存待檢。通過酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法對(duì)4組受試者ANGPTL4水平進(jìn)行檢測,通過實(shí)時(shí)熒光定量(Real-timePCR)法對(duì)血清中的miR-124 mRNA表達(dá)量進(jìn)行檢測,采用Trizol法提取血清總RNA,使用Takara逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將血清中的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,采用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)引物序列;反應(yīng)體系:0.4 μL上反向引物、1 μL cDNA模板、10 μL SYBGreen,加蒸餾水至20 μL。反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性1 s、95 ℃ 5 s、60 ℃ 31 s,共進(jìn)行40個(gè)循環(huán),采用2-ΔΔCt方法計(jì)算出miR-124的表達(dá)量。miR-124上游、反向引物序列分別為:5′-GCGGCCGTTCACAGCGGACC-3′、5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′,內(nèi)參基因U6上游、反向引物序列分別為:5′-CTCGCTTCGGCAGCAVATATACT-3′、5′-ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC-3′。

1.3.2 癲癇嚴(yán)重程度、認(rèn)知障礙及出血量評(píng)估 將癲癇依照嚴(yán)重程度分為輕度(2個(gè)月發(fā)作1次或更少),中度(1個(gè)月發(fā)作<4次,2個(gè)月發(fā)作>1次),重度(1個(gè)月發(fā)作≥4次)。通過簡易智能狀態(tài)量表(MMSE量表)對(duì)患者認(rèn)知障礙情況進(jìn)行評(píng)分,以分值≤27分為存在認(rèn)知障礙。采用CT對(duì)顱內(nèi)出血量進(jìn)行檢查計(jì)算,其中大出血為出血量≥30 mL,小出血為出血量<30 mL。

2 結(jié)果

2.1 各組臨床資料比較 3組性別、年齡、體重指數(shù)對(duì)比,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。見表1。

表1 各組臨床資料對(duì)比

2.2 各組間ANGPTL4水平及miR-124 mRNA表達(dá)的比較 與對(duì)照組比較,急性腦出血組、急性腦出血并發(fā)癲癇組ANGPTL4水平較高,miR-124 mRNA表達(dá)量較低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與急性腦出血組比較,急性腦出血并發(fā)癲癇組ANGPTL4水平較高,miR-124mRNA表達(dá)量較低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組ANGPTL4水平及miR-124 mRNA表達(dá)對(duì)比

2.3 ANGPTL4、miR-124與老年急性腦出血并發(fā)癲癇臨床特征的關(guān)系 ANGPTL4與癲癇嚴(yán)重程度、認(rèn)知障礙、腦卒中史呈正相關(guān),miR-124與癲癇嚴(yán)重程度、認(rèn)知障礙、腦卒中史呈負(fù)相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 ANGPTL4、miR-124與老年急性腦出血并發(fā)癲癇臨床特征的關(guān)系分析

2.4 影響急性腦出血并發(fā)癲癇危險(xiǎn)因素的logistic回歸分析 以老年急性腦出血是否發(fā)生癲癇為因變量(0=否,1=是),以認(rèn)知障礙、腦卒中史、ANGPTL4、miR-124為自變量,建立logistic回歸模型,多因素結(jié)果顯示認(rèn)知障礙、腦卒中史、ANGPTL4、miR-124為影響老年急性腦出血發(fā)生癲癇的危險(xiǎn)因素。見表4。

表4 影響急性腦出血并發(fā)癲癇的logistic回歸分析

2.5 ROC曲線分析ANGPTL4、miR-124對(duì)老年急性腦出血并發(fā)癲癇的預(yù)測價(jià)值 ROC曲線顯示,2項(xiàng)聯(lián)合檢測對(duì)老年急性腦出血并發(fā)癲癇的預(yù)測價(jià)值高于ANGPTL4、miR-124單項(xiàng)檢測預(yù)測,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表5、圖1。

注:ANGPTL4為血管生成素樣蛋白4;miR-124為微小RNA-124。

表5 ROC曲線分析ANGPTL4、miR-124對(duì)老年急性腦出血并發(fā)癲癇的預(yù)測價(jià)值

3 討論

老年急性腦出血可造成線粒體功能障礙、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞損傷、神經(jīng)遞質(zhì)失衡,進(jìn)而對(duì)神經(jīng)細(xì)胞間電傳導(dǎo)過程造成了影響,導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性變化,最終發(fā)生癲癇。癲癇作為老年急性腦出血常見并發(fā)癥,可造成患者腦部神經(jīng)元損傷加重、缺氧時(shí)間延長,進(jìn)而影響其預(yù)后[8-10]。

ANGPTL4是一種主要在脂肪組織、肝臟中所存在的分泌蛋白,可調(diào)節(jié)脂肪代謝,減少脂質(zhì)吸收,同時(shí)可促進(jìn)血管形成、調(diào)節(jié)血管通透性、參與炎癥反應(yīng),在心腦血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展過程中均有參與[11-13]。本研究發(fā)現(xiàn)老年急性腦出血并發(fā)癲癇患者中ANGPTL4水平較高,且與患者癲癇嚴(yán)重程度、認(rèn)知障礙、腦卒中史相關(guān)。研究[14-16]發(fā)現(xiàn),ANGPTL4在腦血管疾病中多呈高表達(dá),可增加腦出血患者病灶區(qū)域血管通透性,加劇腦水腫、神經(jīng)炎癥發(fā)展,繼而引發(fā)神經(jīng)元損傷,促進(jìn)急性腦出血并發(fā)癲癇患者病情發(fā)展;同時(shí)ANGPTL4可造成腦灌注量減少,加重腦缺血性損傷、認(rèn)知能力下降,其結(jié)果與本研究結(jié)果相似。表明,老年急性腦出血并發(fā)癲癇患者中ANGPTL4異常表達(dá),其與老年急性腦出血并發(fā)癲癇病情發(fā)展密切相關(guān)。

miR-124作為微小RNA家族成員之一,在個(gè)體正常發(fā)育、DNA修復(fù)、細(xì)胞增殖及分化、免疫調(diào)節(jié)等過程中均發(fā)揮著重要作用,在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及成熟過程中miR-124呈高表達(dá)[17-19]。有研究[20]表明,miR-124可通過調(diào)節(jié)突觸長時(shí)程可塑性增強(qiáng)機(jī)體學(xué)習(xí)能力,認(rèn)知障礙程度減低;同時(shí)miR-124可抑制炎癥因子表達(dá),而炎癥因子可促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞興奮性及癲癇發(fā)作。因此,高表達(dá)miR-124可抑制癲癇的發(fā)生、發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn),老年急性腦出血并發(fā)癲癇患者中miR-124呈低表達(dá),低表達(dá)的miR-124為老年急性腦出血并發(fā)癲癇發(fā)生的因素之一,且與癲癇嚴(yán)重程度、認(rèn)知障礙、腦卒中史相關(guān),其結(jié)果與董晗等[21]研究結(jié)果相似。表明,miR-124與患者臨床特征相關(guān),可參與老年急性腦出血并發(fā)癲癇的發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述,老年急性腦出血并發(fā)癲癇患者中ANGPTL4高表達(dá),miR-124低表達(dá),ANGPTL4、miR-124與癲癇嚴(yán)重程度、認(rèn)知障礙、腦卒中史相關(guān),兩者均為發(fā)生老年急性腦出血并發(fā)癲癇的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,且ROC曲線顯示,ANGPTL4、miR-124兩者聯(lián)合檢測對(duì)老年急性腦出血并發(fā)癲癇的預(yù)測價(jià)值較高。