基于多指標權(quán)重分析結(jié)合正交試驗篩選補腎活血膏提取工藝

董曉蕊　張亮

【摘要】目的：篩選補腎活血膏提取工藝條件。方法：以高效液相色譜法測定補骨脂素、異補骨脂素、紅景天苷含量。以補骨脂素、異補骨脂素、紅景天苷的綜合評分值為指標，采用AHP-CRITIC混合加權(quán)法結(jié)合正交試驗，分析加水量、提取時間、提取次數(shù)對提取工藝的影響。結(jié)果：篩選出補腎活血膏提取工藝為組方藥材加水浸泡12 h，加10倍量水，提取2次，每次2 h。結(jié)論：以AHP-CRITIC混合加權(quán)法結(jié)合正交試驗確定的提取工藝科學可靠，為后期補腎活血膏工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】補腎活血膏；提取工藝；層次分析法；AHP－CRITIC 混合加權(quán)法；綜合評分

【中圖分類號】R28【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2023）18-0060-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.18.zgmzmjyyzz202318012

Extraction Process Screening of Bushen Huoxue Decocting Paste Based on Orthogonal Design And Multi-index Weight AnalysisDONG XiaoruiZHANG Liang

Qinghai Traditional Chinese Medicine Hospital， Xining 810000，ChinaAbstract：Objective? Screening the extraction process conditions of Bushen Huoxue decocting paste.Methods? Psoralen， isopsoralen， and salidroside were determined by HPLC. Using the comprehensive score values of psoralen， isopsoralen and salidroside， the AHP-CRITIC mixed weighting method combined with orthogonal test， and analyzed the influence of water addition， extraction time and extraction times on the extraction process.Results The extraction process of Bushen huoxue decocting paste was determined to soak it in water for 12h， add 10 times the amount of water， and extract 2 times for 2h each time. Conclusion The extraction process determined by AHP-CRITIC mixed weighting method combined with orthogonal test is scientific and reliable， which provides the basis for the later industrial production of Bushen huoxue decocting paste.

Keywords：Bushen Huoxue Decocting Paste; Extraction Technology; Hierarchical Analysis Method; AHP-CRITIC Mixed Weighting Method; Comprehensive Score

膏滋系指飲片用水煎煮，取煎煮液濃縮，加煉蜜或糖（或轉(zhuǎn)化糖）制成的半流體制劑［1］。膏滋藥有滋補、保健、強身、延年之功效，因膏劑黏稠，在體內(nèi)吸收慢，停留時間長，比其他劑型更能發(fā)揮滋養(yǎng)作用［2］，具有很高的營養(yǎng)價值，有助于預防和治療相關(guān)疾病，實乃滋補上品，在中醫(yī)藥寶庫中占據(jù)很重要的地位［3］。

慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease， COPD）是一種特殊的慢性消耗性疾病，容易復發(fā)，即使經(jīng)過常規(guī)治療后也需要長期的調(diào)理，中醫(yī)膏方作為祖國醫(yī)學歷史悠久的八大劑型之一，其藥力緩和，方便攜帶，口感佳，易保存，因而用藥的依從性高，可起到防治結(jié)合的作用［4］。補腎活血膏是我院肺病科?？朴盟帲?lián)合多索茶堿片治療COPD穩(wěn)定期，能改善患者癥狀，提高肺功能及生活質(zhì)量，其原因可能與降低IL-18、α-AT1、TGF-β1水平，使氣道炎癥減輕、氣道重塑改善有關(guān)，臨床療效優(yōu)于單純應(yīng)用多索茶堿片治療，值得臨床推廣應(yīng)用［5］。

補腎活血膏組方中包含炙補骨脂、黨參、黃芪、紅景天等27味中藥，具有扶正固本，祛痰逐瘀，活血通脈的作用。補骨脂溫腎助陽、納氣平喘、溫脾止瀉，主要活性成分為黃酮類、香豆素類及單萜酚類化合物［6］，其中總香豆素是補骨脂止喘的主要成分［7］，補骨脂素、異補骨脂素及其糖苷補骨脂苷、異補骨脂苷是香豆素的主要活性成分［8］。紅景天益氣活血、通脈平喘［9］，主要含有黃酮類、苯烷基苷類、有機酸類、多糖類等化合物［10］。本研究擬通過多指標權(quán)重分析結(jié)合正交試驗對補腎活血膏提取過程進行分析，篩選補腎活血膏提取工藝，為后期補腎活血膏生產(chǎn)工藝的確定及質(zhì)量標準的制定奠定基礎(chǔ)。

1儀器與試藥

1.1儀器D3（H）021403電子天平（上海良平儀器儀表有限公司）；QUINTIX35-1CN電子天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；Agilent 1120 高效液相色譜儀；Direct-Q5UV超純水儀（默克密理博）。

1.2試藥補骨脂素（批號21010802，含量以99.99%計）、異補骨脂素（批號19101704，含量以99.31%計）對照品均購自成都格利普生物科技有限公司；紅景天苷（批號10338-51-9，含量以99.2%計）購自中國食品藥品檢定研究院。試劑均為色譜純，水為超純水。試驗用中藥飲片均符合《中國藥典》2020版各藥材相關(guān)項下之規(guī)定。

2方法與結(jié)果

2.1單因素考察通過直觀考察不同浸泡時間下飲片浸潤及溶劑透心程度，確定制備補腎活血膏樣品的飲片浸泡時間。由于補腎活血膏方中阿膠、鹿角膠、龜板膠、紫河車粉均在收膏時加入，黃酒用于膠類的烊化，均不在本次試驗的考察范圍內(nèi)，因此在后續(xù)試驗中制備樣品時均將上述細料藥剔除。取除阿膠、鹿角膠、龜板膠、紫河車粉外其它處方中藥飲片3份，加入2倍量水，分別浸泡5 h、12 h、15 h，觀察飲片浸潤程度及溶劑透心程度。結(jié)果顯示，浸泡12 h后，處方中所有飲片完全浸透，故在后續(xù)提取工藝研究試驗中，固定飲片浸泡12 h。見表1。

2.2補骨脂素、異補骨脂素、紅景天苷含量測定

2.2.1色譜條件Agilent Eclipse Plus C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）PN 959990-902；補骨脂素、異補骨脂素以甲醇-水（55∶45）為流動相，檢測波長為246 nm［11］195；紅景天苷以甲醇-水（15∶85）為流動相，檢測波長為275 nm［11］162；流速為1 mL/min，柱溫為30 ℃，進樣量為10 μL。

2.2.2補腎活血膏濃縮液制備精密稱取除阿膠、鹿角膠、龜板膠、紫河粉外車其它處方中藥飲片9份，按照表2因素水平進行提取，提取液趁熱濾過，濾液濃縮至300 mL。

2.2.3供試品溶液的制備精密量取各正交試驗所得的補腎活血膏濃縮液20 mL，精密加入甲醇20 mL，加熱回流2 h，放冷，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4對照品溶液的制備補骨脂素對照品20.04 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得；異補骨脂素對照品20.44 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。紅景天苷對照品20.20 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.5炙補骨脂、紅景天陰性對照品溶液的制備精密稱取除炙補骨脂、紅景天、阿膠、鹿角膠、龜板膠、紫河車粉外其它處方中藥飲片1份，加水浸泡12 h，加8倍量水，提取2次，每次2 h，提取液趁熱濾過，濾液濃縮至300 mL。按照2.2.3項下供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。

2.2.6專屬性試驗精密吸取各對照品溶液、陰性對照溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀。結(jié)果如圖1所示。

2.2.7線性關(guān)系考察按照2.2.4項下方法，分別配制濃度為0.0626 mg/mL、0.1253 mg/mL、0.2505 mg/mL、0.5010 mg/mL、1.0020 mg/mL、2.0040 mg/mL的補骨脂素對照品溶液，濃度為0.0634 mg/mL、0.1269 mg/mL、0.2538 mg/mL、0.5075 mg/mL、1.0150 mg/mL、2.0300 mg/mL的異補骨脂素對照品溶液，濃度為0.1376 mg/mL、0.2753 mg/mL、0.5506 mg/mL、1.1011 mg/mL、2.2023 mg/mL的紅景天苷對照品溶液，按2.2.1項下條件進樣10 μL，測定峰面積。以對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標作圖，得標準曲線的回歸方程為： 補骨脂素：Y＝3955.9374X+2.0239，相關(guān)系數(shù)r＝1.0000；異補骨脂素：Y＝3709.0685X-1.5040，相關(guān)系數(shù)r＝1.0000；紅景天苷：Y＝283.9616X-3.4279，相關(guān)系數(shù)r＝0.9999。表明補骨脂素含量在0.0626～ 2.0040 mg/mL之間范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；異補骨脂素含量在0.0634～2.0300 mg/mL之間范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；紅景天苷含量在0.1376～2.2023 mg/mL之間范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3正交試驗設(shè)計采取正交試驗，以補骨脂素、異補骨脂素及紅景天苷含量為指標，研究補腎活血膏最佳提取工藝。因素水平及結(jié)果見表2。

2.4正交試驗權(quán)重分析

2.4.1基于層次分析法（AHP）的正交試驗結(jié)果分析AHP是美國著名運籌學家Saaty教授于20世紀 70 年代初提出的一種權(quán)重決策分析方法。首先，采用1～9標度法對三項指標進行兩兩比較評判重要性［12］，判斷并建立各指標的優(yōu)先矩陣，確定優(yōu)先順序為紅景天苷>補骨脂素=異補骨脂素，見表3。利用SPSSAU軟件計算紅景天苷、補骨脂素、異補骨脂素3個指標權(quán)重系數(shù)。見表4。

由表4可知，三項指標的權(quán)重值分別是：26.111%、32.778%、41.111%；同時，評價本次權(quán)重結(jié)果的一致性，計算一致性指標CR值（CR=CI/RI），CR=0.052<0.1，矩陣滿足一致性檢驗，計算所得權(quán)重具有一致性。

2.4.2基于CRITIC法的正交試驗結(jié)果分析中藥膏方成分復雜，在提取過程中各有效成分間的相互作用對最終提取效果的影響不明確，因此單憑主觀確定權(quán)重系數(shù)有失偏頗，可采用CRITIC客觀賦權(quán)法對各指標進行權(quán)重分析。結(jié)果見表5。

2.4.3AHP-CRITIC混合加權(quán)法計算權(quán)重本試驗共采用AHP法和CRITIC法兩種方法分別計算權(quán)重，AHP法是主觀賦值權(quán)重，量化了評價指標兩兩間比較判斷的優(yōu)先信息，CRITIC法是客觀賦值權(quán)重，AHP-CRITIC 混合加權(quán)法融合了不同類型賦權(quán)方法的優(yōu)點，在保持權(quán)重穩(wěn)定性的同時，更能區(qū)分樣本數(shù)據(jù)，保證數(shù)據(jù)點均勻分散，實驗結(jié)果穩(wěn)定可靠［13］，將兩種方法結(jié)合使得到的權(quán)重系數(shù)更加合理。按如下公式：

ω=αβ/∑αβ

ω表示綜合權(quán)重，α為AHP法所得權(quán)重值，β為CRITIC法所得權(quán)重值。

計算得補骨脂素、異補骨脂素、紅景天苷權(quán)重系數(shù)分別為12.14%、15.84%、21.85%。

2.4.4結(jié)果采用 AHP-CRITIC 混合加權(quán)法得到的權(quán)重系數(shù)對試驗結(jié)果進行綜合評分，綜合評分=［（ 補骨脂素含量/ 補骨脂素最大含量） × 0.1341+（異補骨脂素含量/異補骨脂素最大含量）×0.1410+（紅景天苷含量/紅景天苷最大含量）×0.2185］×100%［14］（表2）；利用SPSSAU對正交試驗結(jié)果進行分析，直觀分析結(jié)果見表6。

由表6結(jié)果直觀分析可知，試驗各因素對于補腎活血膏提取工藝的影響主次順序為B>C>A，最優(yōu)工藝為ABC。因此，補腎活血膏提取工藝確定為：按處方比例，取炙補骨脂、黨參、黃芪、紅景天等27味藥材，加水浸泡12 h，加10倍量水，提取2次，每次2 h。

3討論

近些年來，隨著中醫(yī)治未病理念的不斷推廣，膏方的臨床應(yīng)用日益受到青睞，已逐步成為群眾廣為接受的慢病調(diào)理、改善體質(zhì)、養(yǎng)生保健的有效手段［15］。膏方制劑的質(zhì)量控制，是目前亟待解決的一個問題，除了在制備過程中（諸如浸泡、煎煮、濃縮、收膏和儲存等環(huán)節(jié)）要把好質(zhì)量關(guān)外，尚如浸泡飲片的加水量及浸泡時間、藥物的煎煮時間及煎液的濃縮溫度控制，收膏中糖和蜂蜜的用量以及成膏后包裝材料的選擇等環(huán)節(jié)，均有待于進一步深入探討［16］。

補腎活血膏為中藥配伍組方，成分眾多，其療效的發(fā)揮是方中多種有效成分綜合作用的結(jié)果。方中補骨脂對腎陽虛衰，腎不納氣之虛喘，可奏標本兼顧之效［9］。補骨脂總香豆素對豚鼠過敏性哮喘及組胺性哮喘潛伏期有顯著的延長作用，作用機制可能與補骨脂總香豆素調(diào)節(jié)體內(nèi)環(huán)磷酸腺苷、環(huán)鳥苷酸的量及比值變化有關(guān)［17］。紅景天及其有效成分紅景天苷具有抗疲勞、抗抑郁、增強免疫力、清除活性氧自由基（ROS）、抗腫瘤等藥理活性，常用于治療高原反應(yīng)，對心腦血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)等的疾病均有一定療效［18］。同時，研究［18］表明紅景天及紅景天苷對多種肺部疾?。ㄈ绶蝿用}高壓、肺組織纖維化、COPD）均具有一定的療效，其機制主要與抗氧化、抗炎、抗凋亡有關(guān)。故本試驗選擇了組方中療效確切，含量較高的補骨脂素、異補骨脂素及紅景天苷作為檢測指標。

多個指標共同指導工藝往往難以獲得一致的評價結(jié)果，所以對于多指標成分來說，如何進行合適的權(quán)重劃分是最終確定最佳提取工藝的關(guān)鍵［19］。針對權(quán)重系數(shù)分配，目前常用方法有 AHP 法、CRITIC法。其中，AHP法雖體現(xiàn)了中藥復方君臣佐使配伍的規(guī)律特點，但受研究者主觀判斷影響；CRITIC法權(quán)重結(jié)果受客觀試驗數(shù)據(jù)影響，忽略了中藥復方各藥材的配伍特點［20］。本試驗以AHP-CRITIC混合加權(quán)法分配權(quán)重系數(shù)，主觀與客觀結(jié)合，使總體評價的結(jié)果更具科學性和合理性。

綜上所述，本研究通過正交試驗前單因素試驗，考察確定了組方飲片的浸泡時間，采用AHP-CRITIC 混合加權(quán)法得到權(quán)重系數(shù)對試驗結(jié)果進行綜合評分，利用SPSSAU軟件對正交試驗結(jié)果進行分析，確定了補腎活血膏的提取工藝為組方藥材加水浸泡12 h，加10倍量水，提取2次，每次2 h。研究所得結(jié)果科學合理，為日后補腎活血膏工業(yè)化生產(chǎn)提供了支持，具有一定的應(yīng)用價值。參考文獻

［1］李范珠，李永吉．中藥藥劑學［M］．北京：人民衛(wèi)生出版社，2012：97．

［2］朱佳，吳龍傳．徐景藩膏方經(jīng)驗談［J］．江蘇中醫(yī)藥，2012，44（3）：8-9.

［3］郭彤，郭榆西，賈雪梅，等．淺析楊倩教授運用膏方調(diào)護脾胃病經(jīng)驗［J］．中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2020，28（7）：69-71．

［4］韋筱園，梁愛武．膏方治療慢性阻塞性肺疾病的優(yōu)勢探討［J］．臨床醫(yī)藥文獻雜志，2019，6（20）：81-82.

［5］竇增娥，姚惠青，呂華，等．補腎活血膏方聯(lián)合多索茶堿片治療慢性阻塞性肺疾病穩(wěn)定期臨床觀察［J］．湖北中醫(yī)雜志，2019，41（11）：3-6.

［6］張瑩，呂惠子．補骨脂的化學成分和藥理作用研究進展［J］．臨床醫(yī)藥文獻電子雜志，2020，30（7）：195．

［7］鄧時貴，李愛群，歐潤妹，等．補骨脂總香豆素的平喘作用［J］．中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學雜志，2001，18（6）：439-440．

［8］郭潔，宋殿榮．補骨脂香豆素成分研究進展［J］．天津中醫(yī)藥，2013，30（4）：250-253．

［9］鐘贛生．中藥學［M］．北京：中國中醫(yī)藥出版社，2012：379．

［10］周凡，陳雪梅，范文璽，等．紅景天屬植物化學成分研究進展［J］．中國中醫(yī)藥信息雜志，2013，20（7）：108-110．

［11］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）［M］．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020：162，195.

［12］李慧，劉其南，張麗，等．基于層次分析法及多指標正交試驗優(yōu)選酒燉女貞子炮制工藝［J］．中草藥，2016，47（16）：2832-2837.

［13］賈成友，李微，張傳輝，等．基于多指標權(quán)重分析和正交設(shè)計法優(yōu)選白黃泄熱止痢片復方提取工藝［J］．中草藥，2016，47（6）：917-922.

［14］石征蓉，谷江華，楊秀青，等．基于多指標權(quán)重分析和正交設(shè)計法優(yōu)選糖腎清毒顆粒的提取工藝［J］．遼寧中醫(yī)雜志，2018，45（3）：577-581.

［15］潘鳳仙；蘭鵬；黎紅丹，等．解郁合歡膏治療卒中后抑郁的臨床療效觀察［J］．中醫(yī)臨床研究，2021，13（36）：66-68．

［16］張宏武，葛新春．膏方制劑質(zhì)量影響因素芻議［J］．內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2019，38（9）：146-148.

［17］梁建軍，徐亞莉，田樹喜，等．補骨脂研究現(xiàn)狀及前景［J］．河北中醫(yī)，2013，35（12）：1904-1906.

［18］王小博，侯婭，王文祥等．藏藥紅景天的藥理作用及其機制研究進展［J］．中國藥房，2019，30（6）：851-856．

［19］孫水根，耿賽龍，羊健，等．基于層次分析法綜合評分優(yōu)選芪靈消積顆粒的提取工藝［J］．中國藥師，2022，25（10）：1740-1745．

［20］王強，張湛，楊彬，等．基于AHP－CRITIC混合加權(quán)法的正交試驗優(yōu)選神氣湯提取工藝［J］．中國藥業(yè)，2021，30（19）：51-55．

（收稿日期：2022-12-26編輯：杜玲玉珊）