牛傳染性鼻氣管炎的診斷及相應(yīng)防控措施

仁青加

牛傳染性鼻氣管炎是由牛傳染支氣管炎病毒引起的一種接觸性傳染病。本病具有病程短、死亡率高、病死率達80%以上等特點，給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失和嚴重社會影響。為了控制和消滅該病的發(fā)生與蔓延，應(yīng)加強對牛傳染性鼻氣管炎的診斷與防控?；诖?，本文以黃河源園區(qū)為例，對牛傳染性鼻氣管炎的診斷進行分析，并提出相應(yīng)的防控措施。

一、流行病學(xué)

1、病原

牛傳染性鼻氣管炎病毒（IBRV）屬副粘病毒科麻疹病毒亞科呼吸道合胞體病毒屬成員。其基因組全長約27kb，含有一個開放閱讀框ORF5a，編碼3 個結(jié)構(gòu)蛋白NSP4、M、L。兩個非結(jié)構(gòu)蛋白E 基因和G 基因。其中NSP4 是主要抗原決定簇，能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生中和抗體。M、L 分別位于膜表面和核內(nèi)，參與介導(dǎo)細胞融合和出芽過程。E 基因在病毒復(fù)制過程中起著重要作用。病毒粒子呈球形，直徑大約80nm，無囊膜包裹，具有脂質(zhì)雙層外殼，內(nèi)部由雙鏈DNA 組成，包括正鏈Rep 與負鏈Cap。該病毒對外界環(huán)境敏感，低溫條件下可長期存活，但不耐熱，60℃加熱至少1min 即被滅活。目前已經(jīng)分離到了多株不同血清型的牛傳染性鼻氣管炎病毒（IBRV）毒株，對于我國流行的優(yōu)勢血清型——Ⅰb 型，國內(nèi)已有較多研究報道，而對其他血清型的相關(guān)研究還比較缺乏。該病毒耐堿性較強，但不耐酸，pH 值為5.7 時3h 后仍能檢測到其感染力。

2、易感動物

主要是牛易感，其中以犢牛和青年母牛最易感，且發(fā)病率高、死亡率低。成年奶牛一般不發(fā)生臨床癥狀或僅表現(xiàn)輕微呼吸道癥狀。本病在一年四季均有發(fā)生，但多發(fā)生于冬春季節(jié)，尤其是氣候寒冷的季節(jié)。另外，妊娠期母牛也容易感染此病。本病全年任何年齡都可能感染，但以幼齡牛和青年牛較為多見。另外，山羊和豬也能夠感染，但很少引起明顯疾病。本病的自然疫源地包括非洲、亞洲、歐洲以及美洲等地區(qū)。近年來由于引種頻繁，使得本病在我國許多地方呈暴發(fā)趨勢。臨床上通常是20～60 日齡的牛群發(fā)生急性敗血型癥狀，而75%以上的病例為慢性經(jīng)過。本病的潛伏期長短不一，短則幾天到幾個月，長者可達半年之久。不同品種間潛伏期存在差異，其中荷斯坦牛最短，約3 天左右。黃牛較其他家畜稍長一些（大約4.5 天）。水牛較長，約8 天左右。牦牛最長，達1 個月左右。發(fā)病后體溫迅速升高，最高可超過40℃。

3、傳染源及傳播途徑

病牛和帶毒牛是該病主要的傳染源，也可以通過呼吸道或消化道進行垂直傳播。另外，被污染的飼料、飲水、用具、運輸工具、圈舍都能成為間接的傳染媒介。在自然界中，蜱蟲等吸血昆蟲叮咬也可能造成感染。因此，本病具有明顯的季節(jié)流行特點。當(dāng)天氣驟變時如陰雨連綿，氣溫下降，濕度增大，有利于病原體的繁殖生長。同時，由于飼養(yǎng)管理不當(dāng)，營養(yǎng)不良以及衛(wèi)生條件差等因素均會促進疾病發(fā)生與發(fā)展。此外，本病還有很強的人獸共患特性，對人類健康構(gòu)成威脅。另外，該病主要通過飛沫、空氣、精液傳播，其中以直接接觸為主要傳播方式。據(jù)報道，20%～50%的病例可經(jīng)由胎盤導(dǎo)致胎兒感染，而且母牛流產(chǎn)后所產(chǎn)犢牛更易發(fā)病。

二、臨床癥狀

自然感染情況下，該病具有4～6 天的潛伏期。根據(jù)病毒侵害部位不同，其臨床表現(xiàn)也有所差異。一般來說，最常見的是呼吸道型和生殖系統(tǒng)型兩種類型，在其他部位也有感染現(xiàn)象，具體為以下幾點現(xiàn)象。

1、呼吸道型

呼吸道型是臨床上最為常見的類型。通常會出現(xiàn)發(fā)熱（體溫可達39℃以上）、咳嗽、流涕等癥狀，并伴有漿液或黏液膿性鼻漏。眼瞼腫脹，結(jié)膜充血，嚴重時可見角膜潰瘍?？谇火つぐl(fā)生糜爛，舌面呈紅色，甚至形成壞死灶。部分病例還會出現(xiàn)腹瀉，糞便稀軟不成形，帶有惡臭味。此外，還有一些病例無明顯特征性癥狀，僅表現(xiàn)為精神萎靡不振、食欲減退以及體重減輕。另外，泌乳母?；疾『?，初期的產(chǎn)奶量會快于正常情況下的產(chǎn)奶量。但隨著病情發(fā)展，乳汁中開始含有大量泡沫，且顏色發(fā)黃，此時奶牛的采食量也隨之減少。當(dāng)病情進一步加重，奶牛的呼吸困難程度加劇，最終因窒息而死亡，病程通常可持續(xù)超過10 天。

2、生殖道型

患病母牛主要癥狀為陰道分泌物增多，并伴有腥臭氣味。在分娩前，其陰門處會流出白色或黃色黏液樣物質(zhì)。妊娠后期，胎兒發(fā)育速度加快，導(dǎo)致子宮頸口開張度降低，從而使得病原體更容易侵入到子宮內(nèi)。陰道分泌物增多和外陰紅腫，同時伴有體溫升高、陰唇水腫等現(xiàn)象。若是妊娠后期或哺乳期間感染該疾病，則很容易造成流產(chǎn)或者早產(chǎn)。一般來說，在產(chǎn)后7 天內(nèi)發(fā)病的概率最高。

患病公牛主要是發(fā)生傳染性龜頭包皮炎，表現(xiàn)出陰莖包皮部位出現(xiàn)紅斑、丘疹、水泡以及糜爛，嚴重時還會形成潰瘍面。此外，還可能引發(fā)尿道炎、睪丸炎以及附睪炎癥。通常情況下，患上這種疾病的公牛不會死亡，但是也會對生殖系統(tǒng)產(chǎn)生一定影響，甚至?xí)T發(fā)不孕不育。但大部分在2 周內(nèi)即可康復(fù)，少數(shù)病例需要1 個月左右才能恢復(fù)健康。

3、結(jié)膜炎型

該類型在臨床上較為常見，病牛主要表現(xiàn)出眼瞼腫脹、流淚和分泌物增多等癥狀。如果沒有及時進行治療，會導(dǎo)致病情加重，最終引起失明。同時，部分患有該類疾病的病牛還會伴發(fā)角膜炎或角膜潰瘍。不過沒有明顯的全身癥狀，有時會與呼吸道型一同出現(xiàn)。

4、流產(chǎn)型

通常是妊娠6～9 個月左右的初產(chǎn)母牛易發(fā)，且多發(fā)于冬季?；疾『螅喊l(fā)育遲緩，并伴隨著陰道排出大量灰白色黏液或者血液。一般來說，經(jīng)過5 天時間便可以自行痊愈，但嚴重時則需要一周以上才可以完全康復(fù)。另外，還有一部分患有該類疾病的病?？赡軙l(fā)生死胎現(xiàn)象。通常流產(chǎn)前往往不會表現(xiàn)出任何前驅(qū)癥狀，而在流產(chǎn)過程中也很少會有其他異常情況發(fā)生。

5、腦膜腦炎型

該類型只有犢牛發(fā)生，病程持續(xù)時間短，死亡率高。主要臨床特征為體溫升高至38℃，精神萎靡不振，食欲減退甚至廢絕，呼吸急促，眼結(jié)膜充血、潮紅，眼角膜渾濁，流淚增多，口吐白沫，四肢無力，共濟失調(diào)，步態(tài)不穩(wěn)等。剖檢可見大腦軟化灶，小腦變性或壞死，脊髓水腫明顯，呈灰黃色，質(zhì)地松軟，表面覆蓋一層淡黃色液體。心臟和肝臟腫大變軟，心包積液。脾大且邊緣鈍圓，腎臟腫脹，輸尿管擴張。經(jīng)過3～6 天出現(xiàn)間歇性顫抖，最后因衰竭致死。本病可分為急性期（發(fā)病1 周內(nèi)）和慢性期（超過1 個月）兩個階段。急性期以神經(jīng)系統(tǒng)癥狀為主要特點，如抽搐、角弓反張、肢體強直、震顫、轉(zhuǎn)圈運動以及后軀麻痹等。慢性期則主要表現(xiàn)為體溫升高、咳嗽、氣喘、消瘦、貧血、黃疸、便秘、腹瀉交替發(fā)生，并伴有關(guān)節(jié)炎、滑膜炎、腦膜炎、肺炎、胸膜炎等多種并發(fā)癥。

三、診斷方法

1、病原體檢測

①病毒分離鑒定

根據(jù)病牛的臨床癥狀及感染器官不同，從相應(yīng)部位采取病料。將采集到的組織樣品接種在普通瓊脂培養(yǎng)基上進行細菌學(xué)檢查，然后挑取單個菌落進行革蘭氏染色鏡檢，再用VITEK2 全自動微生物分析儀對其進行血清型檢測，同時還可以采用RealtimePCR 技術(shù)來確定該病的基因序列。選用各種牛源細胞培養(yǎng)物進行病毒分離和鑒定，如BHK21 (DF)、MDBK(DQ)、JSLA409(NYG)、BHK216(NX)、BHK58(DZ)、BHK71(NW）等。接種病料后的2～4 天觀察臨床癥狀并記錄發(fā)病情況，同時剖檢患病動物，觀察病理變化。典型病變是鼻腔黏膜充血腫脹，有黏液膿性分泌物流出。喉頭水腫，氣管內(nèi)有大量黏液或血樣物質(zhì)附著，肺臟表面可見出血點。肝臟腫大呈土黃色，質(zhì)地較硬且邊緣鈍圓，膽囊充盈，腎臟腫大，顏色發(fā)黑。

該法需要較長的時間，通常超過1 周，但在實際工作中發(fā)現(xiàn)其對于快速鑒別病原感染非常重要。基于血清學(xué)檢測的快速診斷方法——“ELISA”，可在3 小時內(nèi)完成檢測，具有操作簡便、結(jié)果可靠的優(yōu)點?？赏ㄟ^建立一種新的檢測方法來確定是否為BVDV 感染，即采用免疫熒光抗體技術(shù)進行檢測，以期提高BVDV 早期診斷效率和準(zhǔn)確率。

②核酸檢測

主要包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）和基因芯片兩種方法。PCR 是目前應(yīng)用最廣泛的分子生物學(xué)檢測手段之一，它能夠從基因組水平上反映病毒的結(jié)構(gòu)特點以及與宿主之間相互作用關(guān)系等信息，并可用于流行病學(xué)研究?；蛐酒瑒t可以同時檢測多種病原體或遺傳物質(zhì)，且敏感度高，特異性強，重復(fù)性好，成本低廉，具體的操作為將樣品固定后加入探針雜交形成單分子層，然后用掃描儀對其表面進行掃描，最后得到圖像。該法已經(jīng)被廣泛地運用到臨床醫(yī)學(xué)中，如腫瘤標(biāo)記物、藥物篩選、食品安全監(jiān)測等。

相比較于病毒分離鑒定而言，PCR 技術(shù)具有靈敏度高、特異性強、可在短時間內(nèi)完成大量樣本的檢測工作等優(yōu)點，但也存在著耗時長，費用昂貴，需要專業(yè)人員操作，實驗條件要求嚴格等缺點。而DNA 測序技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一項新技術(shù)，它能夠一次性獲得大量序列信息，大大提高了效率和準(zhǔn)確率，降低了人力消耗，減少了環(huán)境污染，因此越來越受到重視，目前已應(yīng)用到許多領(lǐng)域。

2、血清學(xué)檢測

①中和試驗

中和試驗曾是診斷該病最常用的方法之一，其原理是利用抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)生的凝集素或沉淀對待檢樣品進行處理后再用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定其中的抗體水平，從而判斷出病原體是否感染動物機體。該方法最常用的方法之一，由于該方法簡便易行，且不需要特殊設(shè)備儀器，故一直沿用至今。

該法基本原理是對已知滴度的牛傳染性鼻氣管炎病毒液與待檢血清混合，若出現(xiàn)凝集現(xiàn)象則判定為陽性。反之則判定為陰性。但在實際工作中發(fā)現(xiàn)，有些血清并不會出現(xiàn)明顯的凝集現(xiàn)象，如健康奶牛血清、未免疫過的羊只血清等，這給臨床上的判定帶來了困難。因此，我們通過大量實驗研究，提出一種新的判定標(biāo)準(zhǔn)，即當(dāng)待檢血清中較低的病毒存在時，即使沒有出現(xiàn)凝集現(xiàn)象也可判定為陽性結(jié)果。反之則判定為陰性結(jié)果。既可以避免因血清不凝集導(dǎo)致的誤診和漏診，又能提高檢測效率。

②酶聯(lián)免疫吸附試驗

相比于中和試驗，酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）具有操作簡便、特異性高、敏感性好、重復(fù)性好、成本低廉等優(yōu)點而被廣泛應(yīng)用。本次實驗采用間接ELISA 方法測定血清抗體水平，并用此來評價疫苗免疫效果。具體的運用中其步驟如下：首先將待測樣品稀釋成不同濃度梯度，然后加入抗原包被板，再與酶標(biāo)二抗結(jié)合后進行顯色反應(yīng)，最后在450nm 處讀取吸光度值，從而定量分析出該樣品中的抗體含量?；蛑苯油ㄟ^肉眼觀察結(jié)果判斷是否有抗體產(chǎn)生。如果沒有則繼續(xù)加樣直至出現(xiàn)陽性條帶為止。若仍然無任何條帶出現(xiàn)，可判定為陰性。反之，若有一條或多條清晰明亮的條帶出現(xiàn)，即可判斷為陽性。

四、防控措施

1、藥物治療

病牛立即隔離，并使用抗生素治療。對于癥狀嚴重的病牛可用磺胺類藥物和四環(huán)素類等廣譜抗菌藥配合治療。同時還要注意加強飼養(yǎng)管理、改善環(huán)境條件以及增強機體抗病能力等綜合防治措施。成年病?？善は禄蛘哐ㄎ蛔⑸?0～30mL 的青霉素鈉溶液（按體重計算用量），每天1 次，連用一周左右。也可以肌肉注射鏈霉素每次6 萬單位，每天2 次，連續(xù)用藥兩周以上。如果出現(xiàn)繼發(fā)感染，病牛還要肌肉注射2 支400 萬IU 青霉素或5%葡萄糖生理鹽水混合液，每天1 次，連用3 天，效果顯著。

2、疫苗接種

①弱毒疫苗

即在動物體外或者非自然宿主體內(nèi)形成的弱毒株，通過肌肉注射接種到牛群體內(nèi)，經(jīng)過一段時間后能夠使其產(chǎn)生免疫力而抵抗強毒攻擊，從而達到保護作用。目前國內(nèi)外已經(jīng)研制出多種不同類型和劑量的弱毒疫苗，如滅活疫苗、減毒活疫苗、亞單位疫苗、基因工程菌苗等。但是由于弱毒疫苗具有較高的變異率，因此需要進行多次反復(fù)試驗才能確定最佳使用方案。一般情況下，弱毒疫苗應(yīng)該與抗生素類藥物配合應(yīng)用以增強療效，同時注意觀察臨床癥狀并做好記錄工作，一旦發(fā)生不良反應(yīng)及時采取措施加以處理。

②基因工程缺失標(biāo)記疫苗

采取分子生物學(xué)方法將相關(guān)基因片段插入到載體上，然后導(dǎo)入細菌或病毒中表達，最后獲得重組蛋白質(zhì)，即為基因工程缺失標(biāo)記疫苗（Genetically engineered deletion marker)。目前常用的有大腸桿菌DH5α 和沙門氏菌SL1078 兩種載體。這種疫苗能夠在不影響細菌生長繁殖能力的前提下，使得外源抗原得到高效表達。但是由于其本身存在一些缺陷，如不能產(chǎn)生有效的抗體、免疫原性低等，所以還需要進一步改進。

③核酸疫苗

該疫苗可促使機體形成持久性的細胞介導(dǎo)作用，并且具有較強的特異性。主要包括腺病毒Ad5、流感病毒NPV、乙肝表面抗原、甲肝乙肝核心抗原以及麻疹病毒MVA、脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗等。這些疫苗都可以誘導(dǎo)機體產(chǎn)生針對相應(yīng)病原微生物的特異性抗體或致敏淋巴細胞。其中以腺病毒Ad5 最為突出，它不僅能刺激機體分泌IgG，而且還能誘導(dǎo)Th1 型反應(yīng)。另外，還有些疫苗雖然也能夠刺激機體產(chǎn)生IgG 和Th2 型反應(yīng)，但是在一定程度上會抑制Thl 型反應(yīng)。

3、加強飼養(yǎng)管理

調(diào)控牛舍內(nèi)溫度適宜，一般溫度控制在15～20℃之間，相對濕度保持60%左右，通風(fēng)良好，空氣新鮮，定期消毒。對于新引進的牛要隔離觀察一周以上才能合群飼養(yǎng)，避免將外界病菌帶入本場。同時做好日常的護理工作，保證圈舍清潔衛(wèi)生，經(jīng)常刷拭牛體表，防止皮膚感染細菌或者寄生蟲。此外，還應(yīng)該給犢牛及時補鐵，增強免疫力?？梢允褂?0%的酒精擦拭牛體表進行消毒處理，每天一次即可。為了減少應(yīng)激因素的影響，盡量不要讓犢牛受到驚嚇，以免發(fā)生流產(chǎn)現(xiàn)象。對于牛舍用具可用50%的漂白粉溶液浸泡消毒，每隔兩天更換一次。另外，牛糞也是病毒主要傳染源，應(yīng)當(dāng)采取無害化處理措施，并且加強管理，做到糞便和污水不隨意排放，以防止疾病傳播蔓延。對于病死牛還應(yīng)當(dāng)做好無害化處理工作，禁止食用或出售，從而切斷病原體的傳播途徑，將其運送樣遠離養(yǎng)殖區(qū)域500 米之外進行焚燒，并利用深埋等形式做好處理，以免病毒再次擴散。

綜上所述，牛傳染性鼻氣管炎可以通過接觸傳播或者飛沫傳播。也可能從空氣中直接進入人群。因此，做好牛傳染性鼻氣管炎早期預(yù)警預(yù)報工作，及時采取有效的防治策略是預(yù)防該疾病的有效手段。同時，要加大宣傳力度，普及相關(guān)知識，提高群眾自我保護意識，降低發(fā)病概率。