D-α-生育酚醋酸酯復(fù)配物對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的改善作用

闞緒甜，陳煒莉，李家旭，何文江，丁劉剛，黎 攀，杜 冰，李文治,

（1.無(wú)限極（中國(guó)）有限公司科研中心，廣東廣州 510623；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，廣東廣州 510642）

衰老是機(jī)體內(nèi)細(xì)胞、組織、器官漸漸衰退的生物學(xué)過(guò)程，這個(gè)過(guò)程往往伴隨著一些并發(fā)癥，如阿爾茨海默癥、心血管疾病等[1]。迄今，關(guān)于衰老機(jī)制的理論有自由基學(xué)說(shuō)、基因?qū)W說(shuō)、細(xì)胞凋亡學(xué)說(shuō)、端粒學(xué)說(shuō)等，其中被人們認(rèn)可和研究最多就是自由基學(xué)說(shuō)[2]。當(dāng)自由基的產(chǎn)生和抗氧化系統(tǒng)之間的平衡被破壞，會(huì)引起氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的發(fā)生，從而導(dǎo)致衰老和疾病[3]。核因子-E2-相關(guān)因子（Nuclear factor E2 related factor 2，Nrf2）是氧化還原動(dòng)態(tài)平衡和細(xì)胞解毒反應(yīng)的主要調(diào)節(jié)者，通過(guò)激活幾種抗氧化劑和解毒酶的基因轉(zhuǎn)錄，如醌氧化還原酶1（Quinone oxidoreductase 1，NQO-1），血紅素氧合酶1（Hemeoxygenase1，HO-1）發(fā)揮抗氧化作用，從而起到抗衰老作用[4-5]。因此，尋找具有抗氧化及抗衰老作用的物質(zhì)，并探究其作用機(jī)制是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一。

脂溶性維生素E 是一種天然抗氧化劑，可通過(guò)酯化反應(yīng)，生成維生素E 酯化衍化生物，使維生素E 酯化衍生物既有維生素E 原有的生理功能，又比維生素E 更穩(wěn)定[6]。天然形式的D-α-生育酚醋酸酯是目前常用的維生素E 酯化衍生物之一。美藤果油是從美藤果的果仁中提取出來(lái)的，含有很高的不飽和脂肪酸含量，具有良好的體外抗氧化性[7]。植物甾醇可提高超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）等抗氧化酶的活性，降低丙二醛（Malondialdehyde，MDA）濃度，改善氧化應(yīng)激[8]。蝦青素，一種類(lèi)胡蘿卜素的含氧衍生物，具有很好的體外抗氧化和提高抗氧化酶活性的能力[9]。大量研究表明，多種抗氧化劑的合用，能形成一個(gè)氧化-還原體系，其抗氧化能力明顯高于單一的抗氧化劑[10]。王娜等[11]研究發(fā)現(xiàn)維生素E 和白藜蘆醇聯(lián)合應(yīng)用會(huì)有明顯的抗氧化協(xié)同增效作用。Tang 等[12]研究發(fā)現(xiàn)α-生育酚、γ-谷維素和植物甾醇的抗氧化能力隨復(fù)配濃度的增加而增加。僅使用單一抗氧化劑不容易對(duì)機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)產(chǎn)生全面的作用，因此采用多種抗氧化劑聯(lián)合應(yīng)用漸漸成為抗氧化研究新趨勢(shì)。

鑒于此，本研究通過(guò)對(duì)比D-α-生育酚醋酸酯復(fù)配物的抗氧化和抗衰老效果，從而得出最佳的D-α-生育酚醋酸酯復(fù)配物，為抗衰老的相關(guān)研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

天然油脂復(fù)配物+植物甾醇（按小麥胚芽油：美藤果油：紅花籽油：蝦青素油：植物甾醇的比例為70:20:5:1:2 制得）、D-α-生育酚醋酸酯+植物甾醇復(fù)配物（按D-α-生育酚醋酸酯：植物甾醇的比例為45:1混合而制）、D-α-生育酚醋酸酯+植物甾醇+蝦青素復(fù)配物（按D-α-生育酚醋酸酯：植物甾醇：蝦青素比例為90:2:1 混合而制）均由無(wú)限極（中國(guó)）有限公司提供；雄性SPF 級(jí)C57BL/6 小鼠 50 只，（18±2）g，生產(chǎn)許可SCXK（粵）2021-0041 南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；丙二醛試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）試劑盒、總抗氧化能力（Total antioxidant capacity，T-AOC）檢測(cè)試劑盒、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Alanine aminotransferase，ALT）測(cè)試盒、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Astaxanthin，AST）測(cè)試盒、白介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）測(cè)試盒、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）測(cè)試盒、腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor，TNF-α）測(cè)試盒 南京建成生物工程研究所 ANKE TDL-5-A 型離心機(jī) 上海安亭分析儀器有限責(zé)任公司；Labserv K3 酶標(biāo)儀、Evolution 300 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、PIKOREAL96 熒光定量RCP儀 賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；DYY-6C 電泳儀 北京六一生物科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 體外抗氧化實(shí)驗(yàn)

1.2.1.1 DPPH·清除率 參照王肖行等[7]的方法，并略作修改。用乙醇將不同復(fù)配物、維生素C 稀釋成質(zhì)量濃度分別為1、2、3、4、5 mg/mL 的溶液，取2 mL 不同質(zhì)量濃度的樣品溶液于試管中，加入2 mL 0.2 mmol/L 的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，DPPH）溶液，混勻，4000 r/min離心6 min，靜置30 min，用乙醇為參比組調(diào)零，在517 nm 處測(cè)定吸光度。按照以下公式計(jì)算清除能力：

式中：As為樣品吸光度；Ac為用無(wú)水乙醇替代DPPH 溶液的對(duì)照組吸光度；A0為用無(wú)水乙醇替代復(fù)配物樣品溶液的空白組吸光度。

1.2.1.2 ·OH 清除率 參照王鈺等[13]的方法修改，用乙醇將不同的復(fù)配物、維生素C 稀釋成質(zhì)量濃度分別為1、2、3、4、5 mg/mL 的溶液，在試管中加入2 mL 配好的不同質(zhì)量濃度的樣品溶液、6 mmol/L的FeSO4溶液、6 mmol/L 的H2O2溶液，搖勻后靜置10 min，再加入6 mmol/L 的水楊酸2 mL，混勻，室溫避光靜置30 min，在510 nm 測(cè)其吸光度。羥基自由基（Hydroxyl radical，·OH）清除率按以下公式計(jì)算：

式中：As為樣品組吸光度；Ac為用蒸餾水替代水楊酸的對(duì)照組吸光度；A0為用蒸餾水替代復(fù)配物溶液的空白組吸光度。

1.2.1.3 Fe2+螯合能力 參考王寒等[14]的方法。用乙醇將不同復(fù)配物、維生素C 稀釋成質(zhì)量濃度分別為1、2、3、4、5 mg/mL 的溶液，在試管中加入1 mL不同質(zhì)量濃度復(fù)配物溶液，3.7 mL 蒸餾水、2 mmol/L的FeCl2溶液0.1 mL 和5 mmol/L 的菲啰嗪溶液0.2 mL，振蕩搖勻，避光靜置10 min 后，5000 r/min離心10 min，取上清液在562 nm 處測(cè)定吸光度，F(xiàn)e2+螯合率按以下公式計(jì)算：

式中：As為樣品組吸光度，Ac為用蒸餾水替代反應(yīng)體系中的FeCl2的空白組吸光度，A0為用蒸餾水替代復(fù)配物的空白組吸光度。

1.2.1.4 總還原能力 參考邢海亮等[15]的方法，用乙醇將不同復(fù)配物、維生素C 稀釋成質(zhì)量濃度分別為1、2、3、4、5 mg/mL 的溶液，利用三氯乙酸法測(cè)定總還原能力，在700 nm 測(cè)其吸光度。還原能力按以下公式計(jì)算：

式中：其中As為樣品組吸光度，A0為用乙醇替代復(fù)配物稀釋液作為空白組的吸光度。

1.2.2 衰老小鼠模型的抗氧化及抗衰老研究

1.2.2.1 衰老模型建立及干預(yù) 50 只SPF 級(jí)小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，按體重隨機(jī)分為5 組，每組10只。其中，陰性對(duì)照組（NC）小鼠每日于頸背處皮下注射等體積的0.9%生理鹽水；衰老模型組（SLM組）、天然油脂復(fù)配物+植物甾醇組（VEO 組）、D-α-生育酚醋酸酯+植物甾醇復(fù)配組（VEZ 組）、D-α-生育酚醋酸酯+植物甾醇+蝦青素復(fù)配組（VEX 組）小鼠每日于頸背處皮下注射300 mg/kg 的D-半乳糖，同時(shí)VEO 組、VEZ 組、VEX 組經(jīng)口灌胃，給予劑量為1.7 mg/kg 體重的相應(yīng)受試樣品，按照體重計(jì)算給藥體積（0.1 mL/10 g），連續(xù)6 周。

1.2.2.2 血清及肝臟組織的采集 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，小鼠禁食12 h，使用1%巴比妥鈉（3.5 μL/g）麻醉各組小鼠，摘除小鼠眼球，用離心管收集小鼠血液，將收集好的血液，靜置2 h，然后3500 r/min 離心15 min，取上清液-20 ℃保存待測(cè)。采血后，即刻頸椎脫臼處死小鼠，迅速取出肝臟，并將其在預(yù)冷的生理鹽水中漂洗，去除血液，用濾紙吸干表面水分，凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2.3 抗氧化指標(biāo)測(cè)定 根據(jù)GSH-Px 試劑盒、TAOC 試劑盒、MDA 試劑盒的說(shuō)明書(shū)，測(cè)定血清中相應(yīng)的指標(biāo)。

1.2.2.4 血清炎癥因子測(cè)定 根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)，測(cè)定IL-6、IL-1β、TNF-α炎癥因子水平。

1.2.2.5 肝功能指標(biāo)測(cè)定 根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)，測(cè)定血清中AST、ALT 含量。

1.2.2.6 RT-qPCR 檢測(cè)Nrf2 通路中mRNA 的表達(dá) 參照胡麗麗等[16]的方法，取肝臟組織0.02 g，用Trizol 法提取組織總RNA，以組織總mRNA 為模板，逆轉(zhuǎn)錄cDNA，根據(jù)SYBR Premix EXTaqⅡ試劑盒使用說(shuō)明配制反應(yīng)體系，擴(kuò)增條件為：預(yù)變性，95 ℃，10 min；擴(kuò)增反應(yīng)，95 ℃，15 s 和95 ℃，30 s，共40 個(gè)循環(huán)；溶解曲線分析在60～95 ℃。2-ΔΔCt法分析Nrf2 相對(duì)內(nèi)參基因β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）的表達(dá)水平。PCR 引物由北京擎科有限公司設(shè)計(jì)合成，引物序列見(jiàn)表1。

表1 引物序列Table 1 Primer sequences

1.2.2.7 Western Blot 檢測(cè)Nrf2 通路中蛋白的表達(dá) 剪取0.025 g 肝臟組織，用冰預(yù)冷PBS 洗組織，加入300 μL RIPA 裂解液于生物樣品均質(zhì)儀中研磨，冰上裂解10 min；裂解結(jié)束后于4 ℃，12000 r/min離心15 min，取上清液進(jìn)行蛋白定量。上樣20 μL 樣品進(jìn)行電泳分離后，轉(zhuǎn)膜封閉；將膜與Nrf2、NQO-1、HO-1、β-actin 抗體一起室溫孵育60 min，4 ℃過(guò)夜；第2 d 室溫放置30 min，加入二抗孵育90 min 后，在ECL 化學(xué)發(fā)光液中顯色，利用凝膠圖像處理系統(tǒng)處理。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)利用GraphPad Prism 9 軟件進(jìn)行匯總、顯著性分析以及繪圖，數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05 則有顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 體外抗氧化能力

2.1.1 DPPH·清除率 DPPH·清除率常用來(lái)評(píng)估物質(zhì)的抗氧化能力，該值越大，抗氧化能力越強(qiáng)[17]。由圖1 可知，質(zhì)量濃度為1～5 mg/mL 時(shí)，VEO 組、VEZ組、VEX 組的DPPH·清除率分別從20.83%、16.08%、14.25%升高到58.86%、67.81%、63.18%；在5 mg/mL時(shí)，VEZ 組的清除率最高。

2.1.2 ·OH 清除率 ·OH 是活性氧的一種，具有極強(qiáng)的氧化性[13]。由圖1 可知，除VEX 組之外，其余復(fù)配物的·OH 清除率隨質(zhì)量濃度的增加而升高，其中VEZ 組的清除率顯著優(yōu)于VEO 組（P<0.001）。VEX組的·OH 清除能力在3 mg/mL 達(dá)到最大；在5 mg/mL時(shí)，VEZ 組的清除能力為67.48%，優(yōu)于VEO 組和VEX 組。

2.1.3 Fe2+螯合能力 Fe2+離子具有強(qiáng)烈的助氧化能力，通過(guò)與過(guò)氧化氫（H2O2）之間的芬頓反應(yīng)加速催化過(guò)氧自由基（·OOH）生成，誘導(dǎo)氧化反應(yīng)的發(fā)生，而螯合劑可使Fe2+轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的氧化形式Fe3+，從而抑制芬頓反應(yīng)中自由基的產(chǎn)生，發(fā)揮抗氧化作用[18]。從圖1 可知，在質(zhì)量濃度為1～5 mg/mL 范圍內(nèi)，不同復(fù)配物的Fe2+螯合能力隨質(zhì)量濃度的增加而升高，表現(xiàn)出比維生素C 的Fe2+螯合能力強(qiáng)的效果；其中VEZ組表現(xiàn)最佳，在5 mg/mL 時(shí)可達(dá)61.64%。

2.1.4 總還原能力 總還原能力指的是自由基接收到電子后轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定物質(zhì)的能力，抗氧化能力隨總還原能力增強(qiáng)而增強(qiáng)[19]。由圖1 可知，在質(zhì)量濃度為1～5 mg/mL 范圍內(nèi)，不同復(fù)配物總還原能力隨質(zhì)量濃度的增加而升高，當(dāng)質(zhì)量濃度高于3 mg/mL 后，VEZ 組的總還原能力更好。劉曉飛等[20]研究表明植物甾醇具有良好的抗氧化能力，這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。綜上，不同復(fù)配物中，VEZ 組的DPPH·清除能力、·OH 清除能力、Fe2+螯合能力、總還原能力較強(qiáng)。

2.2 衰老小鼠模型抗氧化結(jié)果

2.2.1 不同復(fù)配物對(duì)衰老小鼠體內(nèi)抗氧化指標(biāo)的影響 在正常生理狀態(tài)下，抗氧化系統(tǒng)負(fù)責(zé)清除組織中過(guò)多的活性氧（ROS），以保護(hù)機(jī)體免受氧化應(yīng)激損傷，GSH-Px 是抗氧化系統(tǒng)中主要的抗氧化酶，負(fù)責(zé)把組織中的ROS 轉(zhuǎn)化為乙醇和水，以中斷過(guò)度氧化反應(yīng)[21]。T-AOC 各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成的總抗氧化水平，是抗氧化系統(tǒng)功能狀態(tài)的綜合指標(biāo)[22]。MDA 是脂質(zhì)過(guò)氧化的重要降解產(chǎn)物之一，其含量的表達(dá)間接反映了活性氧對(duì)細(xì)胞和組織的損害程度[23]。

從圖2 可知，與NC 組相比，SLM 組的GSH-Px酶活力和T-AOC 活性分別顯著（P<0.001）下降了63.54%、45.00%，MDA 量顯著增加了70.60%（P<0.0001），這表明D-半乳糖致衰老小鼠模型造模成功。與SLM 組相比，不同復(fù)配物的GSH-Px 酶活力都提高了，VEO 組、VEZ 組、VEX 組分別增加了34.28%、98.12%、170.49%；Min 等[24]研究表明向飼料中添加維生素E 能夠通過(guò)上調(diào)GSH-Px 基因的表達(dá)，發(fā)揮抗氧化能力，這與本研究結(jié)果一致。對(duì)于TAOC 活性，VEO 組、VEZ 組、VEX 組分別比SLM組增加了65.01%、70.18%、70.67%（P<0.01）；對(duì)于MDA 生成量，VEO 組、VEZ 組、VEX 組分別比SLM 組降低了56.04%、67.04%、64.04%（P<0.0001）。張露等[25]研究表明蝦青素預(yù)處理，使高糖作用下晶狀體上皮細(xì)胞的GSH-Px 顯著升高、MDA 顯著降低；李曉鈺等[26]研究表明植物甾醇能降低高脂飲食建立的非酒精性脂肪肝小鼠模型的MDA 上升。本研究發(fā)現(xiàn)，三組復(fù)配物顯著降低了D-半乳糖誘導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA 的表達(dá)，并增加了GSH-Px和T-AOC 的抗氧化酶活性，說(shuō)明三組復(fù)配物具有良好的抗氧化能力，對(duì)小鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激損傷具有一定的改善作用。

圖2 不同復(fù)配物對(duì)小鼠體內(nèi)抗氧化指標(biāo)的影響Fig.2 Effects of different complexes on antioxidant indexes in mice

2.2.2 不同復(fù)配物對(duì)衰老小鼠血清中炎癥因子的影響 IL-6、IL-1β和TNF-α是參與炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子，參與到各種炎癥反應(yīng)與氧化應(yīng)激中，當(dāng)炎癥增加，IL-6、IL-1β和TNF-α均升高[27]。由圖3 可知，與NC 組相比，SLM 組血清中炎癥因子IL-6、IL-1β、TNF-α含量表現(xiàn)出顯著的升高（P<0.0001），通過(guò)不同復(fù)配物的干預(yù)后，均有所下降。與SLM 組相比，VEO 組、VEZ 組、VEX 組的IL-6 含量分別下降了4.45%、3.34%、1.76%，IL-1β含量分別下降了4.79%、1.96%、2.30%，TNF-α含量分別下降了9.99%、8.07%、13.71%。這與丁婷婷等[28]研究結(jié)果一致，表明三組復(fù)配物在一定程度上具有緩解D-半乳糖致衰老小鼠炎癥的能力。

圖3 不同復(fù)配物對(duì)小鼠血清中炎癥因子的影響Fig.3 Effects of different complexes on serum inflammatory factors in mice

2.2.3 不同復(fù)配物對(duì)衰老小鼠ALT、AST 含量的影響 氧化應(yīng)激引發(fā)的肝功能破壞導(dǎo)致ALT、AST 等酶的釋放、脂質(zhì)過(guò)氧化、抗氧化功能喪失以及活性氧的產(chǎn)生，因此ALT、AST 酶活性的大小可以用于衡量肝功能的受損程度[29-30]。從圖4 可知，與NC 組相比，SLM 組的ALT 和AST 水平顯著升高（P<0.0001），說(shuō)明衰老導(dǎo)致了小鼠肝功能損傷。在不同復(fù)配物干預(yù)后，與SLM 組相比，VEO 組、VEZ 組、VEX 組的ALT 水平分別下降22.21%、25.96%、24.11%，AST水平分別下降了8.85%、12.75%、16.01%（P<0.01）。這與Li 等[31]研究結(jié)果相似，表明三組復(fù)配物有利于降低D-半乳糖致衰老小鼠的血清中AST、ALT 含量，以緩解衰老導(dǎo)致的肝損傷。

圖4 不同復(fù)配物對(duì)小鼠AST、ALT 活力的影響Fig.4 Effects of different complexes on AST and ALT activity in mice

2.2.4 Nrf2 通路的mRNA 和蛋白的相對(duì)表達(dá)量Nrf2 是機(jī)體在氧化應(yīng)激損傷時(shí)重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，對(duì)位于其下游靶基因的表達(dá)起活化作用，當(dāng)出現(xiàn)氧化應(yīng)激時(shí)，Nrf2 會(huì)激活下游NQO-1、HO-1 等基因的表達(dá)[32]。Nrf2 基因表達(dá)上調(diào)可能顯著改善衰老相關(guān)疾病或延緩衰老過(guò)程，HO-1 是體內(nèi)負(fù)責(zé)把血紅素分解的誘導(dǎo)酶，NQO-1 能調(diào)節(jié)細(xì)胞的氧化還原電位水平，來(lái)發(fā)揮抗氧化作用[33-34]。由圖5～圖6 可知，與NC 組相比，SLM 組的Nrf2、NQO-1、HO-1 的mRNA 和蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著下降（P<0.0001）。對(duì)于mRNA 表達(dá)水平而言，與SLM 組相比，VEO組、VEZ 組、VEX 組的Nrf2 表達(dá)水平分別上升了336.31%、749.80%、393.06%，NQO-1 的表達(dá)量分別上升了319.57%、668.94%、419.10%，HO-1 表達(dá)量上升了404.83%、727.48%、460.43%（P<0.0001）；對(duì)于蛋白表達(dá)水平而言，與SLM 組相比，VEO 組、VEZ 組、VEX 組的Nrf2 表達(dá)水平分別上升了42.6.67%、1093.33%、746.67%顯著上升（P<0.0001），NQO-1 的表達(dá)量分別上升了844.44%、1088.89%、1033.33%（P<0.0001），HO-1 表達(dá)量上升了1150.00%、1912.50%、1412.50%（P<0.0001）。這與李曉鈺等[28]、Sun 等[35]研究結(jié)果一致，說(shuō)明通過(guò)給予D-α-生育酚醋酸酯復(fù)配物可能通過(guò)激活Nrf2 信號(hào)通路，減少氧化損傷，增加衰老小鼠下游靶基因NQO-1 和HO-1 的表達(dá)，能調(diào)節(jié)抗氧化酶活性，從而延緩衰老進(jìn)程，并且在這不同D-α-生育酚醋酸酯復(fù)配物中，VEZ 組的效果最好。

圖5 Nrf2、NQO1、HO-1 的蛋白表達(dá)Fig.5 Protein expression of Nrf2,NQO1 and HO-1

圖6 Nrf2、NQO-1、HO-1mRNA 和蛋白的相對(duì)表達(dá)量Fig.6 Relative expression of Nrf2,NQO-1,HO-1 genes and proteins

3 結(jié)論

本研究通過(guò)測(cè)定不同復(fù)配物的體外抗氧化能力，并采用D-半乳糖致小鼠衰老模型評(píng)價(jià)復(fù)配物的抗衰老作用。結(jié)果顯示，三組復(fù)配物中VEZ 組的體外抗氧化效果較佳；與衰老模型小鼠相比，經(jīng)過(guò)三組復(fù)配物干預(yù)后，小鼠體內(nèi)GSH-Px、T-AOC 升高，MDA 生成量下降，從而改善氧化應(yīng)激損傷，血清中炎癥因子IL-6、IL-1β、TNF-α和肝功能指標(biāo)ALT、AST 水平均下降；三組復(fù)配物干預(yù)后，Nrf2、NQO-1、HO-1 的mRNA 和蛋白相對(duì)表達(dá)量增強(qiáng)，其中VEZ組表達(dá)效果最佳。綜上所述，D-α-生育酚醋酸酯復(fù)配物能激活Nrf2 通路，增加NQO-1 和HO-1 的表達(dá)，提高抗氧化酶活性，降低脂質(zhì)過(guò)氧化水平，來(lái)提升D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化應(yīng)激能力增強(qiáng)抗氧化效果，從而延緩衰老進(jìn)程，其中D-α-生育酚醋酸酯與植物甾醇復(fù)配的效果更佳。通過(guò)本研究結(jié)果將為D-α-生育酚醋酸酯復(fù)配物開(kāi)發(fā)成為延緩衰老的食品提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。