• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    黎藥膽木內(nèi)生細菌群落結(jié)構(gòu)多樣性研究及其基因功能預測分析

    2023-11-16 06:53:54卜宣尹楊衛(wèi)麗
    熱帶農(nóng)業(yè)科學 2023年9期
    關(guān)鍵詞:植物

    卜宣尹 楊衛(wèi)麗

    黎藥膽木內(nèi)生細菌群落結(jié)構(gòu)多樣性研究及其基因功能預測分析

    卜宣尹1,2楊衛(wèi)麗1

    (1. 海南醫(yī)學院 海南海口 571199;2. 三明醫(yī)學科技職業(yè)學院 福建三明 365000)

    以海南省5個產(chǎn)區(qū)采集的膽木為材料,采用高通量16S rRNA測序技術(shù)分析了膽木的根、莖、葉和表皮4個組織的內(nèi)生細菌群落多樣性,并通過PICRUSt分析其內(nèi)生細菌的潛在功能。結(jié)果表明,膽木在16S rRNA V3-V4區(qū)高質(zhì)量序列片段共得到3759378條有效序列,劃分為3475個OUTs,內(nèi)生細菌分為30門、82綱、183目、326科、764屬,具有豐富的菌群多樣性,組間差異顯著。對內(nèi)生細菌群落結(jié)構(gòu)分析可知,共有優(yōu)勢菌屬為d(25.11%)、芽孢桿菌屬(15.16%)、伯克霍爾德氏菌屬(7.06%)、羅爾斯通菌屬(5.03%)、馬賽菌屬(4.60%)。其中,根優(yōu)勢菌屬為芽孢桿菌屬)、伯克霍爾德氏菌屬()、寡養(yǎng)單胞菌屬()、固氮根瘤菌()、根瘤菌屬(Rhizobium);莖優(yōu)勢菌屬為、羅爾斯通菌屬()、馬賽菌屬()、Mitochondria_unclassified;葉優(yōu)勢菌屬為短小桿菌屬();表皮優(yōu)勢菌屬為賴氨酸芽胞桿菌屬()、類芽孢桿菌屬()。PICRUSt分析顯示,膽木不同組織內(nèi)生細菌主要涉及6個生物代謝通路及36個子功能。不同組織的內(nèi)生細菌基因二級功能層預測基因種基本無差異,但基因豐度具有顯著差異,代謝為影響膽木植株內(nèi)生細菌多樣性和豐富度的重要因素。通過全面揭示膽木不同組織內(nèi)生細菌多樣性的變化趨勢和規(guī)律,能為其內(nèi)生細菌的進一步應用、充分挖掘其蘊含的豐富微生物資源奠定理論基礎(chǔ)。

    膽木;內(nèi)生細菌;群落結(jié)構(gòu);多樣性;基因功能

    內(nèi)生細菌為定居在植物組織中不對宿主植物有負面影響的微生物。內(nèi)生細菌可以從無菌的根、莖和葉等植物組織中分離出來[1],與植物宿主形成互利共生關(guān)系。有益的內(nèi)生細菌有維持植物生長健康、影響及調(diào)控植物代謝、產(chǎn)生次生代謝產(chǎn)物等作用[2]。同時,宿主植物能為內(nèi)生細菌提供生長所必需的能量和營養(yǎng),這種有益效果是通過產(chǎn)生具有重要生物活性(如抗真菌和抗病毒)的植物激素和次級代謝產(chǎn)物,并通過促進礦物質(zhì)吸收或固氮的增加來實現(xiàn)[3-4]。

    膽木[(Pierre ex Pitard)Merr. & Chun]為茜草科(Rubiaceae)烏檀屬()的多年生喬木,是我國特有的源生烏檀屬植物,也是海南黎藥資源重點研究保護物種[5],是海南省重點研究傳統(tǒng)黎族藥用植物之一。目前有關(guān)膽木的研究主要集中在化學成分、藥理作用、抗炎作用等方面[6],鮮有對膽木內(nèi)生菌的探究。對膽木內(nèi)生細菌進行探究有利于豐富和完善膽木內(nèi)生細菌種質(zhì)資源,對解決膽木因在自然條件下生長緩慢、人工種植產(chǎn)量不高、品質(zhì)不佳等問題提供方向,對開拓膽木輔助育種新方向具有重要意義。本研究基于Illumina MiSeq第二代高通量測序技術(shù),以海南省5個不同產(chǎn)區(qū)的膽木為材料,對其不同組織的內(nèi)生細菌進行全面解析,并進行相關(guān)的基因功能預測,為進一步闡明內(nèi)生細菌與膽木的相互作用機制奠定基礎(chǔ),為不同組織內(nèi)生細菌功能菌株的挖掘和利用提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    樣品均采集自海南省,包括鸚哥嶺自然保護區(qū)、瓊中黎族苗族自治縣、興隆植物園、尖峰嶺、儋州市。詳見表1。

    表1 樣品采集信息表

    注:PR~P3R、PJ~P3J、PL~P3L、PK~P3K分別表示在鸚哥嶺自然保護區(qū)坡告嶺采集的根、莖、葉、皮;WR、WJ、WL、WK分別表示在鸚哥嶺自然保護區(qū)青蛙嶺采集的植物根、莖、葉、皮;YR、YJ、YL、YK分別表示在鸚哥嶺自然保護區(qū)牙師村采集的植物根、莖、葉、皮;ZR、ZJ、ZL、ZK分別表示在鸚哥嶺自然保護區(qū)壯賀村采集的植物根、莖、葉、皮;JR、JJ、JL、JK分別表示在鸚哥嶺自然保護區(qū)青介村采集的植物根、莖、葉、皮。

    1.2 方法

    1.2.1 樣品采集前處理 樣品采集:在每個樣品采集地分別挑選間距8 m以上的5株健康的野生膽木作為采樣對象。使用鐵鍬小心挖至根末級,用剪刀剪下新鮮的莖、葉組織,用小刀剝?nèi)⌒迈r干皮。分別做好標記后將膽木組織樣品裝入塑封袋內(nèi)并做好標記后放入便攜式保溫箱干冰冰凍保存。具體分組見表1。

    1.2.2 樣品表面消毒 參照Inuwa等[7]預處理方法,將5個采集地的各組織進行細菌的分離實驗。先用自來水沖洗至表面無明顯雜質(zhì),無菌濾紙吸干表面水分。于超凈臺內(nèi)取出樣品后,75%的酒精溶液浸泡5 min,無菌水沖洗3次,再用5%次氯酸鈉溶液浸泡3~5 min,無菌水沖洗3次,保證其無菌,取最后1次沖洗的無菌水200 μL涂布于LB培養(yǎng)基上,28℃培養(yǎng)7 d,檢驗滅菌效果,確保表面滅菌徹底,分離出的為內(nèi)生細菌。最后挑取形態(tài)、顏色及大小有明顯差異的菌株,與40%甘油進行1∶1混合,保存于–80℃冰箱中,并進行后續(xù)實驗。

    1.2.3 微生物總DNA提取 根據(jù)制造商的說明,使用Magnetic Soil And Stool DNA Kit試劑盒(中國北京天根生物技術(shù)有限公司)從植物樣品中提取總DNA。對于具體的提取過程,參考Liu等[8]的CTAB方法。最后加入40 μL無菌水溶解DNA,于–20℃冰箱內(nèi)保存。通過瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA提取質(zhì)量,同時采用紫外分光光度計對DNA進行定量。

    1.2.4 目的片段PCR擴增及測序 以16sRNA反映菌群組成和多樣性的目標序列為靶點,使用Phusion酶進行一步PCR,細菌PCR所用引物[9]:V3-V4通用引物,341F(5′-CCTACGGGNGGCWGCAG-3′)和805R(5′-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3′)。使用NovaSeq 6000測序儀進行2×250 bp的雙端測序。所得樣品DNA委托杭州聯(lián)川生物技術(shù)股份有限公司完成測序。

    1.2.5 數(shù)據(jù)處理 使用QIIME2(2019.4)平臺DADA2方法進行序列處理。通過qiime dada2 denoise-paired調(diào)用DADA2進行質(zhì)控、去噪、拼接和去嵌合體,得到ASVs(amplicon sequence variants)?;诩毦鷶?shù)據(jù)庫silva 132,采用OIIME2的classify-sklearn算法進行物種分類學注釋。使用R軟件(VennDiagram)進行細菌分類OTU(操作單元)劃分,UPGMA(Unweighted Pair Group Method with Arithmetic Mean)方法對樣品進行聚類。使用Mothur軟件計算細菌物種豐度和多樣性?;贙EGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)數(shù)據(jù)庫,利用PICRUSt(Phylogenetic Investigationof Communities by Reconstruction of Unobserved States)對微生物群落進行功能預測。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 有效數(shù)據(jù)分析

    對原始下機數(shù)據(jù)進行高質(zhì)量數(shù)據(jù)統(tǒng)計,結(jié)果顯示:所采集膽木根、莖、皮、葉樣品中分別得到1 006 154、997 701、1 005 124、1 092 532條 Raw Tags;經(jīng)過濾掉低質(zhì)量或短長度tags后,分別獲得898 836、930 230、905 957、1 024 355條有效序列。隨著測序數(shù)量的增加,各個樣品中所包含的序列均被檢測到,表明各樣品測序深度范圍大,文庫覆蓋率高,數(shù)據(jù)合格且可靠。

    2.2 物種注釋及OUTs分布Venn圖

    圈和圈重疊部數(shù)目代表樣本間共有的ASV數(shù)目,沒有重疊的部分代表每個組特有的ASV數(shù)目。綠色代表膽木葉樣品;黃色代表膽木皮樣品;藍色代表膽木根樣品;紅色代表膽木莖樣品。

    通過物種注釋可得到膽木根莖皮葉中共有內(nèi)生細菌30門、82綱、183目、326科、764屬,具有豐富的菌群多樣性。通過Venn圖(圖1)直觀地呈現(xiàn)各分組共有和特有的ASV數(shù)目。結(jié)果顯示:膽木根、莖、皮、葉共有的OTUs個數(shù)為144,其中根樣品中特有的OTUs個數(shù)為418,莖樣品中特有的OTUs個數(shù)為810,皮樣品中特有的OTUs個數(shù)為506,葉樣品中特有的OTUs個數(shù)為931。說明膽木葉中特異性最高,群落結(jié)構(gòu)最為復雜,根中OTUs特異性最低,群落結(jié)構(gòu)較單一。其順序為:葉>莖>皮>根。由此可知,不同生長環(huán)境條件下,膽木各組織內(nèi)生細菌基于不同分類水平均存在數(shù)量上的差異。

    圖1 膽木內(nèi)生細菌物種(OTUs)組成的Venn圖

    2.3 Alpha多樣性分析

    如圖2,Chao1(圖2-a)指數(shù)用來估計物種的總數(shù)。物種總數(shù)順序為:葉>莖>皮>根。Coverage(圖2-b)指微生物覆蓋率。膽木根、莖、皮、葉的coverage指數(shù)均為1,表明測序深度已經(jīng)覆蓋到樣本中的所有物種。Shannon(圖2-c)微生物多樣性的指數(shù)值與群落多樣性呈正相關(guān)。膽木內(nèi)生細菌Shannon多樣性指數(shù)最高的是莖,其次是葉;最低是根。其多樣性為莖>葉、皮>根。這表明膽木莖中內(nèi)生細菌群落多樣性豐富,不確定性大,根中內(nèi)生細菌群落多樣性相對較低。

    藍色.根;黃色.莖;紅色.葉;紫色.皮。

    2.4 膽木內(nèi)生細菌群落組成分析

    基于物種注釋統(tǒng)計表,將通過門和屬水平的聚類圖對物種豐度進行展示分析,見圖3。從門的分類水平看。膽木根莖皮葉中共有優(yōu)勢菌門主要由變形桿菌門(Proteobacteria)、藍細菌門(Cyanobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)、酸桿菌門(Actinobacteriota)、擬桿菌門(Bacteroidota)、(Campylobacterota)、疣微菌門(Verrucomicrobiota)、綠彎菌門(Chloroflexi)和芽單孢桿菌門(Gemmatimonadota)等組成,其平均相對豐度分別為42.18%、25.19%、24.83%、4.15%、3.09%、0.20%、0.12%、0.05%和0.02%。膽木根、莖和葉3個不同組織中,出現(xiàn)了大量變形桿菌門(Proteobacteria)。菌群豐度分別達到45.40%、42.90%、44.95%,但同時期皮部的豐度較低(35.85%);皮、莖和葉發(fā)現(xiàn)少量的綠彎菌門(Chloroflexi),豐度為0.02%~0.10%,在根中并未發(fā)現(xiàn);莖和葉中還發(fā)現(xiàn)了微量芽單孢桿菌門(Gemmatimonadota),豐度為0.01%~0.04%,但在根和皮中均未發(fā)現(xiàn)。

    從屬水平分類上看,所有樣本共有18個屬的平均相對豐度大于1.0%,分別是、芽孢桿菌屬()、伯克霍爾德氏菌屬()、羅爾斯通菌屬()、馬賽菌屬()、()、賴氨酸芽胞桿菌屬()、假單胞菌屬()、短小桿菌屬()、類芽孢桿菌屬()、寡養(yǎng)單胞菌屬()、腸桿菌屬()、固氮根瘤菌()、羅氏甲基桿菌()、黏液桿菌屬()、根瘤菌屬()、泛菌屬()及克雷伯氏菌屬()。其中平均豐度最高的屬為(25.11%),其次是芽孢桿菌屬(15.16%)、伯克霍爾德氏菌屬(7.06%)、羅爾斯通菌屬(5.03%)、馬賽菌屬(4.60%)。

    圖中展示相對豐度前30的門類群。

    由圖4可知,在膽木莖、皮和葉3個不同組織中,出現(xiàn)了大量。菌群豐度分別達到31.84%、26.89%、31.77%,但同時期根部的豐度較低(9.94%);在根中存在比其他組織具有較高占比的菌群芽孢桿菌屬()、伯克霍爾德氏菌屬()、寡養(yǎng)單胞菌屬()、固氮根瘤菌()、根瘤菌屬()。莖、皮和葉中還發(fā)現(xiàn)少量短小桿菌屬()(豐度為0.42%~8.30%),而根中沒有。

    圖中展示相對豐度前30的屬進行排序。

    2.5 功能預測分析

    PICRUSt是基于比對微生物群落的豐富度與數(shù)據(jù)庫,從而在不可觀測的情況下推測出生物群落的功能信息。基于高通量測序技術(shù)和KEGG數(shù)據(jù)庫比對,發(fā)現(xiàn)膽木不同組織內(nèi)生細菌在一級功能層共包含6類生物代謝通路(表2),即:遺傳信息處理、細胞過程、生物體系統(tǒng)、環(huán)境信息處理、人體疾病、新陳代謝。其中,根在環(huán)境信息處理通路的豐度最高,葉在遺傳信息處理、細胞過程、生物體系統(tǒng)、人類疾病、新陳代謝5個通路中豐度均高,皮在參與調(diào)控各種代謝通路的豐度均較低。

    同時,針對膽木不同組織的內(nèi)生細菌基因二級功能層進行預測分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),其內(nèi)生細菌基因二級功能層由36個子功能組成(圖5)。其中,代謝過程相關(guān)的基因數(shù)最多,占總基因數(shù)的33.3%。主要包括多糖合成與代謝、碳水化合物代謝、輔助因子和維生素代謝、脂質(zhì)代謝、氨基酸代謝等代謝過程;其次為生物體系統(tǒng)過程,占總基因數(shù)的20.5%,主要涉及消化系統(tǒng)、排泄系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)等過程;人類疾病過程占總基因數(shù)的12.8%,主要涉及免疫系統(tǒng)疾病、心血管疾病、代謝性疾病等過程。

    表2 膽木不同組織內(nèi)生細菌KEGG(Leve1)功能豐度分析

    3 結(jié)論

    目前,關(guān)于膽木微生態(tài)結(jié)構(gòu)的報道,僅有陳燕艷等[10]對于膽木根際的細菌群落結(jié)構(gòu)和多樣性的研究,其根際土壤細菌共有優(yōu)勢菌門芽單胞菌門(Gemmatimonadetes)、浮霉菌門(Planc-tomycetes)、厚壁菌門(Firmicutes)、疣微菌(Verrucomicrobia)、綠彎菌門(Chloroflexi)、放線菌門(Actinobacteria)、變形菌門(Proteobacteria)、酸桿菌門(Acidobacteria),與本研究結(jié)果相似,但豐度均有不同;而優(yōu)勢菌屬中,僅有芽孢桿菌屬()與本研究結(jié)果相似,且豐度差異大。其結(jié)果說明,雖為同種植物,但由于分離部位的不同及采集環(huán)境差異的影響導致膽木微生態(tài)菌群結(jié)構(gòu)基于在不同分類水平上均存在菌群種類及豐度上的差別。

    Alpha多樣性分析顯示,膽木莖中表示細菌群落豐度和多樣性的相關(guān)指數(shù)均高于膽木根、葉、皮內(nèi)生細菌群落對應的相關(guān)指數(shù),這可能是由于莖暴露于物理化學條件如溫度、濕度、紫外線照射等劇烈變化的環(huán)境中,而且莖中含有淀粉、糖和木質(zhì)部的其他植物營養(yǎng)物質(zhì),這個營養(yǎng)豐富的生態(tài)系統(tǒng)有利于豐富細菌的種類[11],因此莖中的內(nèi)生細菌多樣性較高。

    群落組成分析中,4種不同組織中均有相同的內(nèi)生細菌定殖,但分布存在一定的組織差異性,并發(fā)現(xiàn)了膽木不同組織中的主要門類、核心屬類和一些低豐度的微生物種群。這表明在膽木不同部位發(fā)現(xiàn)的許多分類群可能有著相似的來源。變形桿菌門(Proteobacteria)、藍細菌門(Cyanobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)為膽木根莖葉皮中共有的優(yōu)勢菌門。有研究已證實,變形菌門有助于藥用植物產(chǎn)量及有效物質(zhì)含量的提高[12-13],且在促進植物生長,防治病害方面發(fā)揮重要作用。變形菌門是常見的植物內(nèi)生細菌門[14],表明膽木內(nèi)生細菌具有一般植物內(nèi)生細菌的特點。厚壁菌門可以保護其宿主免受疾病、促進生長、在其他植物上定植[15],且在生態(tài)中也起著重要作用。魏玉倩等[16]從植物蘇鐵中證實,藍細菌門將空氣中的氮氣(N2)轉(zhuǎn)化成無機氮,為蘇鐵的生長提供氮源,光能和化能自養(yǎng)藍細菌具有產(chǎn)生吲哚乙酸促進植物生長發(fā)育的能力。

    在屬水平上,含量最高的為未分類細菌Chloroplast_unclassified,這說明膽木中還蘊含大量未知微生物種類,有關(guān)膽木內(nèi)生細菌在屬水平上的探究還不夠深入,需要采用其他分析手段進一步鑒定確認。此外,分類學地位明確的豐度前10的菌屬主要是芽孢桿菌屬()、伯克霍爾德氏菌屬()、羅爾斯通菌屬()、馬賽菌屬()、賴氨酸芽胞桿菌屬()、假單胞菌屬(s)、短小桿菌屬()、類芽孢桿菌屬()、寡養(yǎng)單胞菌屬()、腸桿菌屬(),這些在土壤改良[17]、合成次級代謝產(chǎn)物和酶[18-19]、固氮解磷促生[20-23]、抗植物病蟲害等方面[24-25]起到關(guān)鍵作用。值得一提的是,在根中存在比其他組織更高占比的菌群,芽孢桿菌屬()、伯克霍爾德氏菌屬()、寡養(yǎng)單胞菌屬()、固氮根瘤菌(、根瘤菌屬(),這些均被證實有固氮、促氮作用,能促進植物次生代謝的積累[26-29],后續(xù)可依據(jù)其優(yōu)勢菌群功能進行深入研究分析,為解決膽木病變及有效物質(zhì)分子形成機制提供理論支持。

    內(nèi)生菌的生物學功能跟其所擁有的功能基因密切相關(guān)。本研究采用PIRCUSt對膽木內(nèi)生細菌進行功能預測發(fā)現(xiàn),膽木不同組織的內(nèi)生細菌含大量關(guān)于碳水化合物、脂質(zhì)、糖類、氨基酸,輔酶及代謝產(chǎn)物合成的基因信息。一方面,碳水化合物是植物生長的基本營養(yǎng)物質(zhì),影響植物的品質(zhì)[30-31],VC是植物代謝過程不可或缺的產(chǎn)物,參與調(diào)控細胞分裂、體內(nèi)活性氧清除和細胞生長等多種生理過程[32-34];另一方面,這些代謝過程說明膽木內(nèi)生細菌可能參與代謝膽木根、莖、葉和表皮中各種營養(yǎng)物質(zhì),為膽木植株生長發(fā)育提供重要的激素、營養(yǎng)等,且氨基酸是蛋白質(zhì)合成的基礎(chǔ),環(huán)境脅迫下植物體內(nèi)的游離氨基酸代謝可以對植物的抗逆性起到指示作用[35]。此外,還預測到多糖類化合物和次生代謝產(chǎn)物合成相關(guān)的基因,說明膽木內(nèi)生細菌有合成藥用活性物質(zhì)的潛力。該研究可為從膽木根、莖、葉和表皮分離出生產(chǎn)有效藥用成分的植物內(nèi)生細菌提供理論基礎(chǔ)。

    [1] El-Tarabily K A. An endophytic chitinase-producing isolate of Actinoplanes missouriensensis, with potential for biological control of root rot of lupine caused by[J]Aust J Bot, 2003, 51(3): 257-266.

    [2] 梁振霆, 唐婷. 內(nèi)生菌對植物次生代謝產(chǎn)物的生物合成影響和抗逆功能研究[J]. 生物技術(shù)通報, 2021, 37(8): 35-45.

    [3] Yang R, Liu P, Ye W. Illumina-based analysis of endophytic bacterial diversity of tree peony (Sect. Moutan) roots and leaves[J]. Braz J Microbiol, 2017, 48: 695-705.

    [4] Zinniel D K, Lambrecht P, Harris N B, et al. Isolation and characterization of endophytic colonizing bacteria from agronomic crops and prairie plants[J]. Appl Environ Microbiol, 2002, 68: 2 198-2 208.

    [5] Wang G H, Wang H J, Liu H, et al. The rapid profiling and simultaneous determination of 12 major alkaloids inby UPLC-Q-TOF-MS and HPLC-ESI-MS/MS[J]. Analytical methods:advancing Methods and Applications. 2021, 13(47): 5 787-5 803.

    [6] 麥世瑛, 王怡然, 李永輝, 等.中藥膽木化學成分及其藥理活性研究進展[J].廣州化工, 2018, 46(16):38-41.

    [7] InuwaA B, MaryamY A, Arzai A H, et al.Distribution of culturable endophytic bacteria in lemon grass[J]. Bayero Journal of Pure and Applied Sciences, 2017.

    [8] Liu F, Yuan Z S, Zhang X T, et al. Characteristics and diversity of endophytic bacteria in Moso Bamboo () based on 16S rDNA Sequencing[J]. Archives of Microbiology, 2017, 199(6): 1 259-1 266.

    [9] Hunter J J K, Ruffner H P. Assimilate transport in grapevines-effect of phloem disruption[J]. Aust J Grape Wine Res, 2001, 7: 118-126.

    [10] 陳燕艷, 徐詩濤, 王德立, 等. 不同種植地膽木根際的細菌群落結(jié)構(gòu)和多樣性[J]. 熱帶生物學報, 2022, 13(5): 488-495.

    [11] 劉陳靜. 內(nèi)生菌強化商陸修復鎘污染土壤效應及機制研究[D]. 北京:北京科技大學, 2023.

    [12] Ying Y X, Ding WL, Li Y. Characterization of soil bacterial communities in rhizospheric and nonrhizospheric soil of Panax ginseng[J]. Biochemical genetics, 2012, 50 (11-12) : 848-859.

    [13] Jin H, Yang X Y, Yan Z Q, et al.Characterization of rhizosphere and endophytic bacterial communities from leaves, stems and roots ofL. [J]. Systematic and Applied Microbiology, 2014, 37(5): 376-385.

    [14] 宋旭紅, 李隆云, 崔廣林, 等.不同生長年限桔梗根部內(nèi)生細菌種群結(jié)構(gòu)分析[J].南方農(nóng)業(yè)學報, 2020, 51(10):2 358-2366.

    [15] Pankaj Kumar, Satyajeet Khare, RC Dubey. Diversity of bacilli from disease suppressive soil and their role in plant growth promotion and yield enhancement[J]. New York Science Journal, 2012.

    [16] 魏玉倩, 陳健鑫, 鄭艷玲, 等.不同種蘇鐵珊瑚狀根內(nèi)生微生物多樣性及適應性研究[J].微生物學報, 2022, 62(7):2 835-2849.

    [17] 田美, 劉漢湖, 申欣, 等.百樂克(BIOLAK)活性污泥宏基因組的生物多樣性及功能分析[J].環(huán)境科學, 2015, 36(5):1739-1748.

    [18] 楊恩東, 崔丹曦, 汪維云.馬賽菌屬細菌研究進展[J].微生物學通報, 2019, 46(6):1537-1548.

    [19] 李春燕. 白及內(nèi)生細菌的多樣性及內(nèi)生細菌BSR2010的次級代謝產(chǎn)物分析[D].武漢: 中南民族大學, 2021.

    [20] 孫紅敏, 魏玉珍, 方曉梅, 等.蛇足石杉內(nèi)生細菌多樣性[J].微生物學報, 2016, 56(4):614-628.

    [21] 向益青, 廖海浪, 李娜, 等.黃連種子內(nèi)生細菌的分離鑒定及功能驗證[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2023, 35(2): 191-199.

    [22] 杜佳慧, 徐偉芳, 楊曉冬, 等.多花黃精產(chǎn)吲哚乙酸內(nèi)生菌的分離篩選及其對黃精種子萌發(fā)的影響[J].生物技術(shù)通報, 2022, 38(12):223-232.

    [23] 楊琦, 劉淳劼, 郭兵, 等.苧麻根部內(nèi)生細菌的分離鑒定及促生潛力評價[J].中國麻業(yè)科學, 2020, 42(5):219-226.

    [24] 徐亞軍, 趙龍飛, 陳普, 等.植物病原菌拮抗性野生艾蒿內(nèi)生菌的分離、篩選和鑒定[J].生態(tài)學報, 2013, 33(12):3 697-3705.

    [25] Wang K, Wu Y, Ye M Y, et al. Comparative genomics reveals potential mechanisms of plant beneficial effects of a novel bamboo-endophytic bacterial isolateSuichang626[J]. Frontiers in Microbiology, 2021, 12: 686998.

    [26] Gage DJ.Infection and invasion of roots by symbiotic, nitrogen-fixing rhizobia during nodulation of temperate legumes[J].Microbiol Mol Biol Rev, 2004, 2:280-300.

    [27] Cui R Q, Zhang J M, Ma X J, et al. Effects ofsp. T28 strain on the growth of Tomato[J]. Plant Physiology. 2015, 51(11):6.

    [28] Tapia-García E Y, Arroyo-Herrera I, Rojas-Rojas F U, et al.sp. nov., a nitrogen-fixing species isolated from rhizoplane ofMill. var.in Mexico[J]. Systematic and Applied Microbiology, 2020, 43(6): 126133-126133.

    [29] Zhou M J. Analysis of underground microbial community of salt-tolerant Jerusalem Artichoke under different nitrogen application treatments and study on the mechanism of endogenous nitrogen-fixing oligomonas promoting the growth of[D]. Nanjing: Nanjing Agricultural University, 2020.

    [30] 王永章, 張大鵬. 乙烯對成熟期新紅星蘋果果實碳水化合物代謝的調(diào)控[J]. 園藝學報, 2000, 27(6): 391-395.

    [31] LINCOLNTAIZ, EDUARDOZEIGER. 植物生理學. 第5版[M]. 北京: 科學出版社, 2015.

    [32] Ishikawa T, Shigeoka S. Recent advances in ascorbate biosynthesis and the physiological significance of ascorbate peroxidase in photosynthesizing organisms[J]. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 2008, 72(5): 1 143-1 154.

    [33] Ishikawa T, Dowdle J, Smirnoff N. Progress in manipulating ascorbic acid biosynthesis and accumulation in plants[J]. Physiologia Plantarum, 2006, 126: 343-355.

    [34] Pignocchi C, Foyer C H. Apoplastic ascorbate metabolism and its role in the regulation of cell signalling[J]. Current Opinion in Plant Biology, 2003, 6(4): 379-389.

    [35] 燕輝, 彭曉邦, 薛建杰. NaCl脅迫對花棒葉片光合特性及游離氨基酸代謝的影響[J]. 應用生態(tài)學報, 2012, 23(7): 1 790-1 796.

    Study on Diversity of Endophytic Bacteria Community Structure and Prediction of Gene Function in Medicinalof Li nationality

    BU Xuanyin1,2YANG Weili1

    (1. Hainan Medical University, Haikou, Hainan 571199, China; 2. Sanming Medical and Polytechnic Vocational College, Sanming, Fujian 365000, China)

    The high-throughput 16S rRNA sequencing technology was used to analyze the community diversity of endophytic bacteria in the root, stem, leaf, and epidermis ofcollected from five regions in Hainan Province, and the potential function of endophytic bacteria was analyzed by PICRUSt. The results showed that 3 759 378 effective sequences were obtained from the high-quality sequence fragments in the 16S rRNA V3-V4 region, divided into 3 475 OUTs. Endophytic bacteria were divided into 30 phyla, 82 classes, 183 orders, 326 families, and 764 genera, with rich flora diversity and significant differences among groups. The community structure of endophytic bacteria was analyzed, and the common dominant bacterial genera were(25.11%),(15.16%),(7.06%),(5.03%), and(4.60%). The root-dominant bacteria were,,,and. The dominant stem fungi were,,and. The dominant genus of leaf bacteria was. The dominant genera of Skin wereand. PICRUSt analysis showed that the endophytic bacteria in different tissues ofwere mainly involved in six biological metabolic pathways and 36 subfunctions. The gene species predicted by the secondary functional layer of endophytic bacteria genes from different tissues are unchanged, but the gene abundance is significantly different, and metabolism is a vital factor affecting the diversity and abundance of endophytic bacteria in. Revealing the changing trends and laws of the various endophytic bacteria in different tissues ofcan lay a theoretical foundation for the further application of its endophytic bacteria and fully exploit its rich microbial resources.

    ; endophytic bacteria; community structure; diversity; gene function

    S567

    A

    10.12008/j.issn.1009-2196.2023.09.010

    2023-02-06;

    2023-02-20

    海南省自然科學基金資助項目(No.820RC624)。

    卜宣尹(1995—),女,碩士研究生,研究方向為植物內(nèi)生菌研究,E-mail:1183231729@qq.com。

    楊衛(wèi)麗(1979—),女,碩士,教授,主要研究方向為中藥資源研究,E-mail:731338097@qq.com。

    (責任編輯 龍婭麗)

    猜你喜歡
    植物
    誰是最好的植物?
    為什么植物也要睡覺
    長得最快的植物
    各種有趣的植物
    植物也會感到痛苦
    會喝水的植物
    植物的防身術(shù)
    把植物做成藥
    哦,不怕,不怕
    將植物穿身上
    在线亚洲精品国产二区图片欧美| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲人成77777在线视频| 蜜桃国产av成人99| 真人做人爱边吃奶动态| 日韩制服骚丝袜av| 高清黄色对白视频在线免费看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 男男h啪啪无遮挡| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产色视频综合| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 老汉色av国产亚洲站长工具| 热re99久久精品国产66热6| 窝窝影院91人妻| 国产一区二区在线观看av| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 欧美精品一区二区免费开放| 国产在线视频一区二区| 人妻 亚洲 视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产一级毛片在线| 人妻人人澡人人爽人人| 2018国产大陆天天弄谢| 日本一区二区免费在线视频| 精品免费久久久久久久清纯 | 精品欧美一区二区三区在线| 中亚洲国语对白在线视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 精品人妻在线不人妻| 午夜精品国产一区二区电影| 久久国产精品影院| 国产在视频线精品| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 午夜老司机福利片| 青草久久国产| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 91成年电影在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 成人av一区二区三区在线看 | 成人亚洲精品一区在线观看| 国产又爽黄色视频| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 欧美精品亚洲一区二区| 少妇 在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| netflix在线观看网站| 制服人妻中文乱码| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲天堂av无毛| 91国产中文字幕| 久久中文字幕一级| 大香蕉久久网| 91精品三级在线观看| 热99久久久久精品小说推荐| 日本91视频免费播放| 亚洲 国产 在线| 老司机靠b影院| 亚洲熟女毛片儿| 久热爱精品视频在线9| 99热全是精品| 亚洲专区国产一区二区| 在线 av 中文字幕| 午夜激情av网站| 亚洲精品国产av成人精品| 一本久久精品| 丝袜美足系列| 在线观看舔阴道视频| 亚洲国产欧美网| 午夜福利视频精品| 两个人看的免费小视频| 国产精品一区二区在线不卡| av天堂久久9| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲情色 制服丝袜| 久久99热这里只频精品6学生| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲天堂av无毛| 国产麻豆69| 日韩有码中文字幕| 久久九九热精品免费| 黄色视频,在线免费观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲成人免费av在线播放| 999久久久国产精品视频| 成人av一区二区三区在线看 | 精品国产乱码久久久久久男人| 91av网站免费观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 成人亚洲精品一区在线观看| 在线精品无人区一区二区三| 黄色视频,在线免费观看| 性色av乱码一区二区三区2| kizo精华| 他把我摸到了高潮在线观看 | 中文字幕制服av| 国产精品久久久av美女十八| 久久亚洲精品不卡| 久久久欧美国产精品| 亚洲中文av在线| 狠狠狠狠99中文字幕| 大香蕉久久成人网| 中文字幕人妻熟女乱码| 91国产中文字幕| 精品国产一区二区久久| 狂野欧美激情性xxxx| 久久热在线av| 国产精品一区二区在线不卡| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产成人精品久久二区二区免费| 色婷婷久久久亚洲欧美| 一级黄色大片毛片| 18禁观看日本| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久狼人影院| 亚洲国产日韩一区二区| 国产精品av久久久久免费| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 国产免费福利视频在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 满18在线观看网站| 色精品久久人妻99蜜桃| 日本一区二区免费在线视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| 人人澡人人妻人| 国产精品一区二区免费欧美 | 19禁男女啪啪无遮挡网站| 最近最新中文字幕大全免费视频| 久久免费观看电影| a级毛片在线看网站| 久久精品亚洲av国产电影网| 午夜老司机福利片| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲国产成人一精品久久久| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产淫语在线视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久99一区二区三区| 十八禁人妻一区二区| 欧美黄色淫秽网站| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 国产男女内射视频| 亚洲天堂av无毛| 欧美一级毛片孕妇| 美女扒开内裤让男人捅视频| 免费在线观看日本一区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲精品在线美女| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲全国av大片| 国产在线观看jvid| 精品少妇黑人巨大在线播放| 成在线人永久免费视频| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 中文字幕人妻熟女乱码| 欧美一级毛片孕妇| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲欧美一区二区三区久久| 在线 av 中文字幕| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产在线观看jvid| www.av在线官网国产| 欧美xxⅹ黑人| av网站免费在线观看视频| 日韩大码丰满熟妇| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 精品久久蜜臀av无| 欧美少妇被猛烈插入视频| 制服人妻中文乱码| 丰满饥渴人妻一区二区三| 午夜两性在线视频| 成人av一区二区三区在线看 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 在线av久久热| 久久久久久久久免费视频了| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲成人手机| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 99re6热这里在线精品视频| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲国产欧美一区二区综合| 成年人黄色毛片网站| 婷婷丁香在线五月| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲av美国av| 99国产综合亚洲精品| 久久九九热精品免费| 黑人猛操日本美女一级片| 男男h啪啪无遮挡| 我要看黄色一级片免费的| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 一二三四社区在线视频社区8| 又黄又粗又硬又大视频| 成人免费观看视频高清| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲 欧美一区二区三区| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 久久国产精品大桥未久av| 麻豆国产av国片精品| 免费不卡黄色视频| 黄色怎么调成土黄色| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 一个人免费在线观看的高清视频 | 正在播放国产对白刺激| 五月天丁香电影| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲国产欧美在线一区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产精品一二三区在线看| 久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久这里只有精品19| 免费在线观看日本一区| 亚洲精品第二区| av欧美777| 黄色视频,在线免费观看| 美女主播在线视频| 91大片在线观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 亚洲久久久国产精品| 麻豆av在线久日| 婷婷丁香在线五月| 日韩免费高清中文字幕av| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 国产欧美日韩一区二区三 | 亚洲欧洲日产国产| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 一进一出抽搐动态| 伦理电影免费视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 免费少妇av软件| 久久女婷五月综合色啪小说| 黄色片一级片一级黄色片| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| videosex国产| 丝袜人妻中文字幕| 欧美精品av麻豆av| 久久久久久免费高清国产稀缺| 91精品三级在线观看| 亚洲av日韩在线播放| 成人国产av品久久久| 啦啦啦 在线观看视频| 成年人黄色毛片网站| 欧美久久黑人一区二区| 一级黄色大片毛片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 久久久久久久久免费视频了| 777久久人妻少妇嫩草av网站| tube8黄色片| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 在线观看免费高清a一片| 丝袜在线中文字幕| 一本一本久久a久久精品综合妖精| a在线观看视频网站| 欧美国产精品一级二级三级| 水蜜桃什么品种好| av欧美777| 久久精品国产亚洲av高清一级| 最新在线观看一区二区三区| 日本a在线网址| 狂野欧美激情性xxxx| 美女国产高潮福利片在线看| 国产又爽黄色视频| 亚洲av日韩在线播放| 日韩中文字幕视频在线看片| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 天天影视国产精品| 久久久国产精品麻豆| 99久久国产精品久久久| 亚洲av成人一区二区三| 91成人精品电影| 国产亚洲精品久久久久5区| 91麻豆av在线| a 毛片基地| 午夜免费观看性视频| 又大又爽又粗| 欧美另类一区| 99热全是精品| 99re6热这里在线精品视频| 99精品久久久久人妻精品| 国产成人精品久久二区二区免费| 丝瓜视频免费看黄片| 国产精品一区二区在线观看99| 99久久国产精品久久久| 国产在视频线精品| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 777米奇影视久久| 亚洲专区国产一区二区| 蜜桃在线观看..| 久9热在线精品视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 国产欧美日韩综合在线一区二区| 美女福利国产在线| 99久久人妻综合| 香蕉丝袜av| 久久久久视频综合| 老司机在亚洲福利影院| 欧美午夜高清在线| 久久精品亚洲av国产电影网| 国产成人a∨麻豆精品| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 成人免费观看视频高清| 欧美黄色淫秽网站| 国产精品熟女久久久久浪| 人妻 亚洲 视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 国产成人欧美| 国产免费现黄频在线看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 日本av手机在线免费观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 欧美激情高清一区二区三区| 亚洲国产av新网站| 亚洲精品国产av成人精品| 国产精品国产av在线观看| 精品国产乱码久久久久久小说| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲国产看品久久| 青草久久国产| 黄色毛片三级朝国网站| 十八禁高潮呻吟视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 成年女人毛片免费观看观看9 | 考比视频在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 国产成人精品久久二区二区免费| 男人添女人高潮全过程视频| 美女大奶头黄色视频| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 男女床上黄色一级片免费看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 在线 av 中文字幕| 日本精品一区二区三区蜜桃| 精品一区二区三区四区五区乱码| 色婷婷久久久亚洲欧美| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲五月色婷婷综合| 久久国产精品大桥未久av| av一本久久久久| 91字幕亚洲| 天堂中文最新版在线下载| av天堂久久9| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 在线看a的网站| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 99久久综合免费| 日韩电影二区| 日本av免费视频播放| 久久 成人 亚洲| 成年动漫av网址| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久精品国产综合久久久| 国产xxxxx性猛交| 久久性视频一级片| 国产成+人综合+亚洲专区| 另类亚洲欧美激情| 国产极品粉嫩免费观看在线| 老司机亚洲免费影院| 人妻一区二区av| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产不卡av网站在线观看| 日韩有码中文字幕| 欧美日韩av久久| 国产精品.久久久| 精品一区在线观看国产| www.自偷自拍.com| 日韩欧美免费精品| 亚洲avbb在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 90打野战视频偷拍视频| 人妻久久中文字幕网| 欧美亚洲日本最大视频资源| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 夜夜夜夜夜久久久久| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲视频免费观看视频| 国产国语露脸激情在线看| 欧美激情久久久久久爽电影 | 欧美乱码精品一区二区三区| 国产又色又爽无遮挡免| 精品久久久久久电影网| 亚洲欧美激情在线| 国产在线免费精品| 国产激情久久老熟女| 纯流量卡能插随身wifi吗| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲色图综合在线观看| 十八禁高潮呻吟视频| 大香蕉久久成人网| 我要看黄色一级片免费的| 久久久水蜜桃国产精品网| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 高清av免费在线| 午夜视频精品福利| 亚洲七黄色美女视频| 久久久久精品国产欧美久久久 | 亚洲精品国产精品久久久不卡| 日韩大片免费观看网站| 国产成人欧美| 欧美精品一区二区大全| 国产成人免费无遮挡视频| 国产xxxxx性猛交| 91国产中文字幕| 五月天丁香电影| 成人免费观看视频高清| 制服人妻中文乱码| 丁香六月天网| 在线观看免费午夜福利视频| 人妻人人澡人人爽人人| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 成人三级做爰电影| 久久久久久久国产电影| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 制服人妻中文乱码| av天堂在线播放| 亚洲精品自拍成人| 精品国产国语对白av| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 最新在线观看一区二区三区| 国产成人欧美| 久久久久久久久久久久大奶| 黑人操中国人逼视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 免费看十八禁软件| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产男女内射视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 免费观看a级毛片全部| 久久国产精品影院| 香蕉丝袜av| 中文字幕高清在线视频| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲综合色网址| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 制服诱惑二区| 亚洲精品第二区| 51午夜福利影视在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 一区福利在线观看| 一本色道久久久久久精品综合| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 一区二区三区精品91| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 国产欧美日韩综合在线一区二区| 又紧又爽又黄一区二区| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久青草综合色| 人妻一区二区av| 爱豆传媒免费全集在线观看| 自线自在国产av| 亚洲天堂av无毛| 午夜两性在线视频| 亚洲黑人精品在线| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 黄色视频,在线免费观看| 亚洲国产av影院在线观看| 亚洲精品在线美女| 99国产精品免费福利视频| 高清在线国产一区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 99久久精品国产亚洲精品| 国产深夜福利视频在线观看| 日本av免费视频播放| 秋霞在线观看毛片| 亚洲精华国产精华精| 在线 av 中文字幕| 免费观看人在逋| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 中文字幕最新亚洲高清| 午夜免费观看性视频| 91麻豆av在线| 在线观看一区二区三区激情| 桃花免费在线播放| 飞空精品影院首页| 制服诱惑二区| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 成年人午夜在线观看视频| 免费观看av网站的网址| 9191精品国产免费久久| 亚洲,欧美精品.| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 高清视频免费观看一区二区| 欧美久久黑人一区二区| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 婷婷色av中文字幕| 欧美成狂野欧美在线观看| 日韩一区二区三区影片| 免费看十八禁软件| 亚洲专区国产一区二区| 午夜福利在线观看吧| 美女国产高潮福利片在线看| 成年美女黄网站色视频大全免费| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲色图综合在线观看| 十八禁网站免费在线| 一级毛片精品| 在线天堂中文资源库| 窝窝影院91人妻| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 一二三四社区在线视频社区8| 国产一区二区 视频在线| kizo精华| 久久久精品94久久精品| av视频免费观看在线观看| 大片电影免费在线观看免费| 男人添女人高潮全过程视频| 老司机福利观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 久久久国产一区二区| 国产一区有黄有色的免费视频| 成人国产av品久久久| 国产一卡二卡三卡精品| 日本wwww免费看| 国产亚洲精品第一综合不卡| 成人国产av品久久久| 欧美日韩亚洲高清精品| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 另类精品久久| 国产一区二区三区av在线| 婷婷成人精品国产| av福利片在线| 嫩草影视91久久| 亚洲伊人久久精品综合| 成年av动漫网址| 99香蕉大伊视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 视频在线观看一区二区三区| 欧美日韩av久久| a在线观看视频网站| 麻豆乱淫一区二区| 成年人黄色毛片网站| 少妇粗大呻吟视频| 男人操女人黄网站| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久精品国产综合久久久| 一个人免费在线观看的高清视频 | 亚洲成人免费av在线播放| 777米奇影视久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产亚洲欧美精品永久| 国产又爽黄色视频| 午夜成年电影在线免费观看| 午夜福利一区二区在线看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产在线视频一区二区| 色播在线永久视频| 最近中文字幕2019免费版| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 啪啪无遮挡十八禁网站| 性色av一级| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美另类一区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 中文字幕高清在线视频| 天堂中文最新版在线下载| 老司机亚洲免费影院| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲五月色婷婷综合| 麻豆国产av国片精品| 丝瓜视频免费看黄片| 狂野欧美激情性xxxx| 午夜福利一区二区在线看| 人人澡人人妻人| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| tube8黄色片| 久久久精品94久久精品| 十八禁网站免费在线| 精品国产国语对白av| 永久免费av网站大全| 国产视频一区二区在线看| 久久香蕉激情| 丝袜喷水一区| 国产精品欧美亚洲77777|