暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚對(duì)放牧牦牛瘤胃發(fā)酵和微生物區(qū)系的影響

■ 楊得玉 黃文植 薛 斌 張曉衛(wèi) 崔占鴻 馮宇哲

（青海大學(xué)畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部青藏高原放牧牦牛藏羊動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼草料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青海省牦牛工程技術(shù)研究中心，青海省高原放牧家畜動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青海西寧 810016）

作為青海、西藏等高海拔地區(qū)的象征，1 400多萬(wàn)頭牦牛為當(dāng)?shù)啬撩裉峁┝嘶镜纳尜Y源[1]。其構(gòu)成了高原畜牧業(yè)的主要支柱，不僅作為當(dāng)?shù)啬撩褓囈陨娴奈镔|(zhì)基礎(chǔ)，也是藏區(qū)特色優(yōu)勢(shì)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展重點(diǎn)[2-3]。牦牛主要以放牧為主，依靠天然牧草獲取所需的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。但是由于高寒牧區(qū)牧草生長(zhǎng)期短而枯草期較長(zhǎng)，牧草養(yǎng)分不平衡，導(dǎo)致牦牛生長(zhǎng)緩慢[4-5]。牦牛在暖季具有補(bǔ)償生長(zhǎng)能力[6]，研究表明，在暖季進(jìn)行補(bǔ)飼可以提高牦牛體況，更好地發(fā)揮其生長(zhǎng)潛力，達(dá)到短期育肥的目的。傳統(tǒng)放牧生產(chǎn)模式雖然有諸多優(yōu)點(diǎn)，但高寒草甸天然牧草營(yíng)養(yǎng)呈季節(jié)性變化，甚至每個(gè)月都有差異，致使這一模式低效。

補(bǔ)飼是目前提高牦牛養(yǎng)殖效益的一種有效措施。由于高寒草甸的特殊性，對(duì)于牦牛冷季補(bǔ)飼的探究已經(jīng)較為深入。針對(duì)青年牦牛和母牦牛，主要補(bǔ)充干草、精料、青貯、舔磚等[7-11]，關(guān)于牦牛犢牛也有報(bào)道[12-13]，結(jié)果均表明冷季進(jìn)行補(bǔ)飼能延緩掉膘。雖然在牦牛暖季補(bǔ)飼方面已有一些報(bào)道，主要對(duì)生長(zhǎng)期牦牛進(jìn)行補(bǔ)飼，探究其生長(zhǎng)性能，但對(duì)牦牛暖季的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)飼探究其機(jī)理的研究仍較少。礦物質(zhì)的補(bǔ)飼有多種形式，常見(jiàn)的形式是預(yù)混料添加劑，制成全價(jià)飼料進(jìn)行補(bǔ)飼，也有通過(guò)不同添加形式進(jìn)行補(bǔ)飼[14]，如瘤胃緩釋彈丸用以預(yù)防微量元素的缺乏[15]。常用的是制成舔磚進(jìn)行補(bǔ)飼。舔磚的種類各異，一般根據(jù)成分來(lái)命名，如鹽磚、糖蜜磚、尿素營(yíng)養(yǎng)舔磚。已有研究證實(shí)，補(bǔ)飼礦物質(zhì)對(duì)牦牛瘤胃發(fā)酵有促進(jìn)作用[16]。因此，本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)放牧牦牛進(jìn)行暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚，從微觀上探究瘤胃發(fā)酵和瘤胃微生物區(qū)系的變化，以期充分發(fā)揮放牧牦牛的生長(zhǎng)潛力，提高生產(chǎn)性能，為高寒草甸牦牛的礦物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)時(shí)間為2020年7月16日—2020年10月31日。試驗(yàn)地點(diǎn)為青海省海晏縣達(dá)日玉秀鄉(xiāng)高寒草甸區(qū)，草地類型為高寒草甸草地，草地優(yōu)勢(shì)種有高山嵩草、垂穗披堿草和草地早熟禾，伴生種有大花蒿、多裂委陵菜、翠雀花、黃帚橐吾、紫花針茅和芨芨草等。

選取體重接近的2.5 歲健康公牦牛12 頭，隨機(jī)分為2組，每組6頭。對(duì)照組牦牛全天放牧，鹽磚組牦牛放牧并補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚，自由舔食。圍欄內(nèi)放置飲水槽，并保證飲水干凈充足，兩組牦牛自由飲水。預(yù)試期15 d，正試期90 d。本試驗(yàn)天然牧草的營(yíng)養(yǎng)含量和礦物質(zhì)含量見(jiàn)表1 和表2，礦物質(zhì)鹽磚的主要礦物質(zhì)成分見(jiàn)表3。

表1 天然牧草常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量（干物質(zhì)基礎(chǔ)，%）

表2 天然牧草礦物質(zhì)含量（干物質(zhì)基礎(chǔ), mg/kg)

表3 礦物質(zhì)鹽磚的主要礦物質(zhì)成分

1.2 樣品采集

牧草采集：試驗(yàn)前根據(jù)牦牛的采食路線圈定采樣區(qū)域，采用對(duì)角線法采集多個(gè)0.25 m×0.25 m 大小樣方的牧草，混勻并在65 ℃烘干，并粉碎過(guò)篩保存，用于牧草養(yǎng)分分析。

瘤胃液采集：采樣前禁食8 h，使用胃管式瘤胃液采樣器采集每頭試驗(yàn)牛的瘤胃液樣品。先將試驗(yàn)牛保定，避免亂動(dòng)。然后將干凈的胃管式瘤胃液采樣器從口腔插入，到達(dá)瘤胃后用150 mL大型注射器抽取瘤胃液，舍棄前兩管，采集完畢后，緩慢將采樣器抽出。隨后立即將注射器中瘤胃液移入15 mL 凍存管中，測(cè)定pH，其余放入液氮，用于氨態(tài)氮（NH3-N）、揮發(fā)性脂肪酸（VFA）濃度的測(cè)定和16S rRNA測(cè)序分析。

1.3 指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 牧草常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量測(cè)定

粗灰分（Crude ash，Ash）：GB/T 6438—2007《飼料中粗灰分的檢測(cè)》；粗蛋白（Crude protein，CP）：GB/T 6432—2018《飼料中粗蛋白質(zhì)的測(cè)定 凱氏定氮法》；粗脂肪（Ether extract，EE）：GB/T 6433—2006《飼料中粗脂肪的測(cè)定》；中性（酸性）洗滌纖維（Neutral detergent fiber，NDF/Acid detergent fiber，ADF）：GB/T 20806—2006《飼料中中性洗滌纖維（NDF）的測(cè)定》。

1.3.2 牧草和礦物質(zhì)鹽磚礦物質(zhì)元素測(cè)定磷（Phosphorus，P）：GB/T 6437—2018《飼料中總磷的測(cè)定 分光光度法》；主要礦物質(zhì)元素：GB/T 13885—2017《飼料中鈣、銅、鐵、鎂、錳、鉀、鈉和鋅含量的測(cè)定 原子吸收光譜法》，使用儀器為普析TAS-990原子吸收分光光度計(jì)。

1.3.3 牦牛鹽磚采食量測(cè)定

將鹽磚組各頭牦牛采食的鹽磚固定好，確保每頭牛每天舔食同一塊鹽磚，采食前記錄每塊鹽磚的重量，在試驗(yàn)進(jìn)行30、60 d和90 d時(shí)對(duì)鹽磚稱重，并計(jì)算試驗(yàn)期間鹽磚的采食量。

1.3.4 生長(zhǎng)性能的測(cè)定

試驗(yàn)期開始前對(duì)所有牦牛進(jìn)行空腹稱重，記錄初始重，在試驗(yàn)進(jìn)行30、60、90 d 時(shí)空腹稱重并記錄，并計(jì)算試驗(yàn)期間的日增重。

1.3.5 瘤胃發(fā)酵指標(biāo)測(cè)定

NH3-N含量：采用馮宗慈等[17]改進(jìn)的比色法測(cè)定。

VFA 濃度：使用徐曉峰[18]的測(cè)定方法，使用儀器為島津GC 2014氣相色譜儀。

16S rRNA 測(cè)序：委托北京諾禾致源科技股份有限公司測(cè)序分析。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2016 軟件初步處理后，用SPSS 統(tǒng)計(jì)軟件中ANOVA 進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan’s法進(jìn)行多重比較和顯著性分析，數(shù)據(jù)結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚對(duì)放牧牦牛生長(zhǎng)性能的影響

由表4 可知，鹽磚組牦牛礦物質(zhì)鹽磚的平均日采食量為16 g左右。

表4 礦物質(zhì)鹽磚采食量（g）

由表5 可知，試驗(yàn)第30 天對(duì)照組、鹽磚組放牧牦牛體重?zé)o顯著差異（P>0.05）；試驗(yàn)第60、90 天鹽磚組牦牛平均體重顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；放牧牦牛平均日增重鹽磚組顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。

表5 暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚對(duì)放牧牦牛生長(zhǎng)性能的影響

2.2 暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚對(duì)放牧牦牛瘤胃發(fā)酵的影響

由表6 可知，隨著牧草營(yíng)養(yǎng)成分的變化，對(duì)照組的pH 呈升高趨勢(shì)，而鹽磚組瘤胃液的pH 呈先下降后上升的趨勢(shì)，試驗(yàn)第30 天兩組瘤胃液的pH 差異不顯著（P>0.05），試驗(yàn)第60、90 天鹽磚組瘤胃液的pH（分別為7.41、7.54）顯著低于對(duì)照組（7.59、7.70）（P<0.05）。隨著牧草營(yíng)養(yǎng)成分的變化，牦牛瘤胃發(fā)酵后的NH3-N 呈降低的趨勢(shì)，鹽磚組的NH3-N 含量顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。試驗(yàn)第30 天鹽磚組牦牛瘤胃發(fā)酵后的丁酸、戊酸、異戊酸、總揮發(fā)性脂肪酸含量顯著高于對(duì)照組（P<0.05），乙酸、丙酸、乙丙比、異丁酸兩組間差異不顯著（P>0.05）；試驗(yàn)第60 天鹽磚組牦牛瘤胃發(fā)酵后的乙酸、丁酸、戊酸、異戊酸、總揮發(fā)性脂肪酸含量顯著高于對(duì)照組（P<0.05），丙酸、異丁酸、乙丙比兩組間差異不顯著（P>0.05）；試驗(yàn)第90 天鹽磚組乙酸、丙酸、丁酸、異戊酸、總揮發(fā)性脂肪酸含量顯著高于對(duì)照組（P<0.05），異丁酸、乙丙比兩組間差異不顯著（P>0.05）。試驗(yàn)30、60、90 天鹽磚組牦牛瘤胃發(fā)酵后乙酸含量比對(duì)照組分別提高了15.06%、20.23%、36.05%；丙酸含量分別提高了10.69%、13.02%、29.90%，丁酸含量分別提高了63.16%、48.91%、46.21%，異丁酸含量分別提高了27.27%、4.44%、3.70%，總揮發(fā)性脂肪酸含量提高了19.24%、55.07%、32.91%。

表6 暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚對(duì)放牧牦牛瘤胃發(fā)酵的影響

2.3 暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚對(duì)放牧牦牛瘤胃微生物區(qū)系的影響

對(duì)所有樣本的有效序列，以97%的一致性進(jìn)行OUTs 聚類，再將OUTs 的序列進(jìn)行物種注釋。稀釋曲線見(jiàn)圖1，由圖1可知，當(dāng)測(cè)序深度達(dá)到53 500測(cè)序片段數(shù)時(shí)，對(duì)照組和鹽磚組的稀釋曲線趨于平緩，說(shuō)明測(cè)序所得數(shù)據(jù)量已經(jīng)覆蓋樣本中的絕大多數(shù)細(xì)菌物種。

圖1 暖季放牧牦牛瘤胃細(xì)菌稀釋曲線

2.3.1 基于OUTs的韋恩圖分析

基于OUTs 韋恩圖圖2 可以看出，試驗(yàn)第30 天對(duì)照組、鹽磚組OTUs 數(shù)分別為4 289 個(gè)、3 929 個(gè)，兩組共享3 439 個(gè)，對(duì)照組特有OTUs 859 個(gè)，鹽磚組特有OTUs 490 個(gè)；試驗(yàn)第60 天對(duì)照組、鹽磚組OTUs 數(shù)分別為3 978個(gè)、3 900個(gè)，兩組共享3 392個(gè)，對(duì)照組特有OTUs 586個(gè)，鹽磚組特有OTUs 508 個(gè)；試驗(yàn)第90 天對(duì)照組、鹽磚組OTUs 數(shù)分別為3 656 個(gè)、5 116 個(gè)，兩組共享3 203 個(gè)，對(duì)照組特有OTUs 453 個(gè)，鹽磚組特有OTUs 1 913個(gè)。

圖2 韋恩圖

2.3.2 暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚對(duì)放牧牦牛瘤胃微生物群落α多樣性的影響

Ace、Chao1 指數(shù)代表菌群豐富度，其值越大，表明物種總數(shù)越多，Shannon、Simpson 指數(shù)代表菌群多樣性，指數(shù)越大表明物種多樣性越高，各物種分配越均勻[19]。由表7 可知，補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚對(duì)放牧牦牛瘤胃菌群豐富度估計(jì)值（Ace、Chao1 指數(shù)）試驗(yàn)第30、60 天鹽磚組的物種總數(shù)與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05），試驗(yàn)第90 天鹽磚組顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；Shannon 指數(shù)除試驗(yàn)第60 天對(duì)照組顯著高于鹽磚組（P<0.05），其他時(shí)間段兩組沒(méi)有顯著差異（P>0.05）；Simpon指數(shù)組間沒(méi)有顯著差異（P>0.05）。

表7 數(shù)據(jù)預(yù)處理結(jié)果

2.3.3 放牧牦牛瘤胃細(xì)菌β多樣性分析

由圖3 可知，基于屬水平上的PCoA 分析，試驗(yàn)第30、60、90天鹽磚組和對(duì)照組樣品的間距較小，說(shuō)明同組樣品間菌落結(jié)構(gòu)差異較小，結(jié)果顯示PCoA1占總變異的35.57%，PCoA2差異占總變異的14.86%。

圖3 放牧牦牛瘤胃細(xì)菌的主坐標(biāo)分析（PCoA）

2.3.4 暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚對(duì)放牧牦牛瘤胃細(xì)菌門水平組成的影響

由圖4可知，含量前十的門分別為擬桿菌門（Bacteroidetes）、厚壁菌門（Firmicutes）、變形菌門（Proteobacteria）、疣微菌門（Verrucomicrobiota）、未鑒定菌門（unidentified_Bacteria）、放線菌門（Actinobacteria）、纖細(xì)菌門（Gracilibacteria）、螺線體門（Spirochaetota）、互養(yǎng)菌門（Synergistota）、廣古菌門（Euryarchaeota）。試驗(yàn)第30、60、90 天對(duì)照組和鹽磚組以擬桿菌門（分別為 51.59%、55.95%、57.58% 和 54.40%、59.34%、52.25%）、厚壁菌門（分別為31.10%、30.24%、25.53%和30.56%、26.81%、24.52%）、變形菌門（分別為0.91%、1.01%、1.64%和1.46%、1.28%、4.64%）、疣微菌門（分別為3.14%、2.18%、4.05%和2.46%、2.06%、3.93%）、未鑒定菌門（分別為2.97%、1.43%、1.73%和1.88%、1.43%、3.54%）、放線菌門（分別為2.40%、2.11%、1.47%和1.84%、1.85%、2.13%）相對(duì)豐度較高（相對(duì)豐度≥1%）。值得注意的是，變形菌門在鹽磚組的含量高于對(duì)照組。

圖4 放牧牦牛瘤胃細(xì)菌門水平相對(duì)豐度

2.3.5 暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚對(duì)放牧牦牛瘤胃細(xì)菌屬水平的影響

由圖5 可知含量前十的屬分別為普雷沃氏菌屬（Prevotella）、理研菌屬RC9（Rikenellaceae_RC9_gut_group）、普雷沃氏菌UCG-001（Prevotellaceae_UCG-001)、奎因氏菌屬（Quinella）、克里斯滕森菌R-7（Christensenellaceae_R-7_group）、普雷沃氏菌UCG-003（Prevotellaceae_UCG-003）、擬 桿 菌屬（Bacteroides）、Candidatus Saccharimonas、Qscillospira、桿菌屬（Bacillus）。數(shù)據(jù)表明，試驗(yàn)第30、60、90 天對(duì)照組和鹽磚組以普雷沃氏菌屬（分別為17.41%、11.11%、13.87%和14.03%、13.20%、11.45%）、理研菌屬RC9（分別為7.29%、9.44%、12.45% 和7.72%、10.99%、11.88%）、普雷沃氏菌UCG:001（分別為2.44%、5.90%、2.87%和2.71%、3.83%、3.53%）、奎因氏菌屬（分 別 為2.47%、3.04%、1.41% 和2.75%、1.90%、1.87%）、克里斯滕森菌R-7（分別為4.09%、4.02%、3.77%和3.77%、1.90%、1.87%）、普雷沃氏菌UCG-003（分別為1.71%、3.01%、2.75%和2.21%、3.29%、2.53%）、擬桿菌屬（分別為0.77%、1.65%、2.19%和1.48%、1.04%、1.71%）相對(duì)豐度較高（相對(duì)豐度≥1%）。

圖5 放牧牦牛瘤胃細(xì)菌屬水平相對(duì)豐度

2.3.6T檢驗(yàn)

由圖6 可以看出，試驗(yàn)60 d 對(duì)照組和鹽磚組主要的差異菌門是廣古菌門，試驗(yàn)第90 天對(duì)照和鹽磚組主要的差異菌門是變形菌門，通過(guò)對(duì)比，試驗(yàn)第60 天鹽磚組的廣古菌門豐度顯著高于對(duì)照組（P<0.05），試驗(yàn)第90 天鹽磚組的變形菌門豐度顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。

圖6 T檢驗(yàn)兩組間物種差異分析（門水平）

由圖7可以看出，試驗(yàn)第60天對(duì)照組和鹽磚組主要的差異菌屬是普雷沃氏菌UCG-005 和甲烷短桿菌屬，試驗(yàn)第90 天對(duì)照組和鹽磚組主要的差異菌屬有克里斯滕森菌R-7、Candidatus Saccharimonas、歐陸森氏菌屬、Saccharofermentans和解琥珀酸菌屬，通過(guò)對(duì)比，試驗(yàn)第60 天對(duì)照組的普雷沃氏菌UCG-005 豐度顯著高于鹽磚組（P<0.05），鹽磚組的甲烷短桿菌屬顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；試驗(yàn)第90天對(duì)照組的克里斯滕森菌R-7、Candidatus Saccharimonas、歐陸森氏菌屬、Saccharofermentans和解琥珀酸菌屬豐度顯著高于鹽磚組（P<0.05）。

圖7 T檢驗(yàn)兩組間物種差異分析圖（屬水平）

2.3.7 細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)線性判別（LEfSe）分析

圖8 中，LDA 分支大于閾值（閾值為3）的顯著差異物種，即組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的生物標(biāo)識(shí)，篩選出兩組之間顯著差異物種，再以圖9 展示出各層次水平中存在組間差異的微生物群落或物種結(jié)構(gòu)，最終可知，試驗(yàn)第30天鹽磚組與對(duì)照組相比共有8種差異顯著的菌，其中擬桿菌科（Bacteroidaceae）、擬桿菌屬、腸桿菌門（Enterobacterales）、腸桿菌科（Enterobacteriaceae）、副乳桿菌目（Lactobacillales）、terium_enrichment_culture_clone-HN117 等菌屬的豐度較對(duì)照組顯著增加（P<0.05）；試驗(yàn)第60天對(duì)照組與鹽磚組相比共有7 種差異顯著的菌，其中布勞特氏菌屬（Blautia）、真桿菌屬（Eubacterium_coprostanoligenes_group）、韋榮球菌科（Veillonellaceae）、RF39、芽孢桿菌綱（Bacilli）、細(xì)菌（Bacteria）、瘤胃菌科（Ruminococcaceae）的豐度顯著高于鹽磚組（P<0.05），鹽磚組與對(duì)照組相比共有6 種差異顯著的菌，其中Archaea、廣古菌門、甲烷桿菌科（Methanobacteriaceae）、甲烷桿菌綱（Methanobacteria）、甲烷桿菌目（Methanobacteriales）、甲烷桿菌屬（Methanobrevibacter）的豐度較對(duì)照組顯著增加（P<0.05）；試驗(yàn)第90 天對(duì)照組與鹽磚組相比共有19 種異顯著的菌，其中Saccharimonadia、Saccharimonadales、Saccharimonadaceae、Candidatus_Saccharimonas、副 桿菌科（Parabacteroides_merdae）、歐陸森氏菌屬（Olsenella）、Atopobiaceae、科氏桿菌（Coribacteriia）、紅蝽菌目（Coriobacteriales）、甲烷桿菌屬、古生菌（Archaea）、廣古菌門、甲烷桿菌綱、甲烷桿菌目、甲烷桿菌科、克里斯滕森菌目（Christensenellales）、克里斯滕森菌科（Christenellaceae）、克里斯滕森菌R-7、擬桿菌（Bacteroidales_BS11_gut_group）等菌豐度較SG 組顯著增加（P<0.05），鹽磚組與對(duì)照組相比共有12種差異顯著的菌，其中變形菌門、變形菌綱（Gammaproteobacteria）、芽孢桿菌綱、放線菌門、酸微菌綱（Acidimicrobiia）、α-變形菌綱（Alphaproteobacteria）、微球菌目（Micrococcales）、微球菌科（Micrococcaceae）、細(xì)菌、紅細(xì)菌目（Rhodobacterales）、紅細(xì)菌科（Rhodobacteraceae）、纖維素單胞菌科（Cellulomonadaceae）等菌豐度顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。

圖8 差異物種的LDA值分布柱狀圖

圖9 進(jìn)化分支圖

3 討論

3.1 暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚對(duì)放牧牦牛生長(zhǎng)性能和瘤胃發(fā)酵的影響

對(duì)于放牧牦牛而言，牧草礦物元素的季節(jié)性缺乏將直接影響牦牛的生長(zhǎng)。補(bǔ)充礦物質(zhì)鹽磚則會(huì)平衡牧草導(dǎo)致的礦物質(zhì)缺乏，而體重能直接反映牦牛生長(zhǎng)及育肥效果。研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)充礦物質(zhì)能促進(jìn)牦牛的生長(zhǎng)發(fā)育[20]，暖季補(bǔ)飼礦物元素能顯著提高牦牛犢牛[21]、生長(zhǎng)期牦牛[22]和母牛[23]的生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)的結(jié)果與上述研究一致。這正說(shuō)明在暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)能夠促進(jìn)放牧牦牛的生長(zhǎng)。

瘤胃液pH 是評(píng)價(jià)反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)環(huán)境與機(jī)體健康最為直觀的指標(biāo)。反芻動(dòng)物瘤胃液pH 的正常范圍為6.0～7.5[24-25]。本試驗(yàn)中各月份放牧組牦牛瘤胃液pH 高于7.5，研究表明低能量水平飼糧瘤胃液pH 要高于高能量飼糧瘤胃pH[26]，本研究牦牛主要采食天然牧草，其能量水平低于精料日糧，這可能是導(dǎo)致瘤胃液pH高的原因。

本試驗(yàn)測(cè)得試驗(yàn)第30、60 天瘤胃液中NH3-N 濃度范圍是6～8 mg/dL，試驗(yàn)第90 天瘤胃中NH3-N 濃度范圍為3.8～5.5 mg/dL，與郭天龍等[27]測(cè)出的結(jié)果相符。補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚的牦牛組NH3-N 含量顯著高于未補(bǔ)飼組，補(bǔ)飼鹽磚組牦牛對(duì)牧草CP、EE的消化率提高，提升了氮利用率，從而也顯著提高了NH3-N含量。此外，礦物質(zhì)添加提高了放牧牦牛瘤胃NH3-N 含量，但其機(jī)理還需進(jìn)一步研究。

VFA 是反芻動(dòng)物主要能量來(lái)源[28]，研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)公牛[29]、奶牛[30]、山羊[31]補(bǔ)充礦物質(zhì)，能提高乙酸、總揮發(fā)性脂肪酸的含量，這與本研究結(jié)果一致。本研究中，8、9、10月補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚牦牛組瘤胃乙酸含量比未補(bǔ)飼組分別提高了15.06%、20.23%、36.05%；丙酸含量分別提高了10.69%、13.02%、29.9%，丁酸含量分別提高了63.16%、48.91%、46.21%，異丁酸含量分別提高了27.27%、4.44%、3.70%，總揮發(fā)性脂肪酸含量提高了19.24%、55.07%、32.91%。暖季放牧牦牛補(bǔ)充礦物質(zhì)鹽磚明顯提高了VFA的含量。

3.2 暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚對(duì)放牧牦牛瘤胃微生物區(qū)系的影響

16S rRNA 高通量測(cè)序技術(shù)利用其在不同菌種中序列的多樣性來(lái)鑒定菌種的類別[32]。本研究通過(guò)檢測(cè)暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚對(duì)放牧牦牛瘤胃微生物菌群的變化，來(lái)評(píng)價(jià)補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚對(duì)放牧牦牛微生物菌群是否有積極影響。本試驗(yàn)兩試驗(yàn)組第30、60、90 天的優(yōu)勢(shì)菌群均為擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門，與前人研究結(jié)果相似[33-36]。鹽磚組試驗(yàn)第30、60天擬桿菌門豐度與對(duì)照組相比有所增加，但差異不顯著；兩組間厚壁菌門豐度差異不顯著。研究發(fā)現(xiàn)，擬桿菌門主要作用是對(duì)非纖維物質(zhì)的降解，而厚壁菌門主要作用是對(duì)纖維物質(zhì)的降解[37]。鹽磚組、對(duì)照組的優(yōu)勢(shì)菌屬均為普雷沃氏菌屬，兩組間差異不顯著。根據(jù)T檢驗(yàn)，在門水平下，試驗(yàn)第60 天鹽磚組的廣古菌門豐度顯著高于對(duì)照組。廣古菌門主要作用是產(chǎn)生甲烷，有研究表明，瘤胃中產(chǎn)氣量越高，表明飼料在瘤胃內(nèi)的發(fā)酵程度越高[38]。試驗(yàn)第90 天鹽磚組的變形菌門豐度顯著高于對(duì)照組。根據(jù)LEfSe 分析，試驗(yàn)第90 天對(duì)照組牦牛瘤胃中甲烷桿菌綱、甲烷桿菌目、甲烷桿菌科的相對(duì)豐度顯著高于鹽磚組。瘤胃產(chǎn)甲烷桿菌在生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生甲烷，甲烷的產(chǎn)生不僅造成了動(dòng)物飼料能量的浪費(fèi)，也增加了溫室氣體排放。有研究表明，克里斯滕森菌科、克里斯滕森菌 R-7 與血清中的甘油三酯成反比關(guān)系[39]。

綜合以上結(jié)果表明，補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚能降低瘤胃甲烷桿菌、克里斯滕森菌科、克里斯滕森菌R-7 等菌的相對(duì)豐度，提高了變形菌門、放線菌門、紅細(xì)菌科、纖維素單胞菌科等菌的相對(duì)豐度。

4 結(jié)論

暖季補(bǔ)飼礦物質(zhì)鹽磚降低了放牧牦牛瘤胃液pH，顯著升高了其瘤胃NH3-N 的濃度及瘤胃VFA 的含量，提高了能量的利用，促進(jìn)了瘤胃發(fā)酵。