佤藥娘母良藥酒通過(guò)抑制凋亡對(duì)勃起功能障礙大鼠的機(jī)制研究

趙 杰，羅 艷，謝雪華，陳 瑤，方鵬強(qiáng)，鮑 凱，溫偉波，，崔換天

（1.云南省中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明，650021；2.滄源佤族自治縣班老鄉(xiāng)衛(wèi)生院，云南 臨滄，677400；3.滄源佤族自治縣工業(yè)和科技信息化局，云南 臨滄，677400；4.云南中醫(yī)藥大學(xué)，云南 昆明，650500）

陰莖勃起功能障礙（erectile dysfunetion，ED）是1 種常見的男性性功能障礙，其特征是無(wú)法獲得并維持足夠的陰莖勃起以進(jìn)行令人滿意的性交，嚴(yán)重影響患者及其伴侶的生活質(zhì)量[1]。導(dǎo)致ED 的因素主要有器質(zhì)性因素（神經(jīng)源性、血管性、糖尿病等）[2]、心理因素（表現(xiàn)焦慮、壓力、精神障礙等）[3]、醫(yī)源性因素（手術(shù)損傷引起）[4]、年齡增長(zhǎng)（衰老）[5]等。目前臨床常用西地那非、他達(dá)拉非等藥物輔助治療[6]，但越來(lái)越多的患者表現(xiàn)出服藥效果不佳以及其他不良反應(yīng)，開發(fā)更安全有效的治療方法迫在眉睫[7]。中醫(yī)藥在防治ED方面表現(xiàn)出了特殊的優(yōu)勢(shì)。研究表明，補(bǔ)腎活血方聯(lián)合他達(dá)拉非可以改善海綿體血流情況，改善ED 患者的勃起情況[8]?；钛ńj(luò)起痿湯聯(lián)合小劑量他達(dá)拉非治療可有效提高ED 患者的國(guó)際勃起功能指數(shù)評(píng)分[9]。馬鬃蛇石油醚提取物可抑制陰莖海綿體細(xì)胞凋亡以改善ED 大鼠的勃起功能[10]。中藥酒是傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中防治疾病、強(qiáng)身健體的優(yōu)良食藥產(chǎn)品。娘母良（佤文Nya Miex Tiang 的音譯）作為云南佤族的1 種珍奇中草藥，其炮制的藥酒在佤醫(yī)臨床應(yīng)用中頗為廣泛，對(duì)強(qiáng)腎壯陽(yáng)、安神補(bǔ)腦、暖宮促孕等具有明顯功效[11]，但其作用機(jī)制不明。本文通過(guò)雙側(cè)髂內(nèi)動(dòng)脈結(jié)扎法建立ED 大鼠模型，分析娘母良藥酒對(duì)ED 大鼠的影響，并基于凋亡通路探索其作用機(jī)制。

1 方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF 級(jí)健康雄性6～8 周齡SD 大鼠，60 只，體質(zhì)量200～220 g，購(gòu)買于北京華阜康生物科技股份有限公司，動(dòng)物許可證號(hào):SCXK （京）2019-0008。大鼠5 只/籠，飼養(yǎng)于室溫（21 ± 2）℃，相對(duì)濕度50%～60%，明暗12 h/12 h 的環(huán)境并使大鼠自由進(jìn)食飲水。

1.2 藥品試劑 53%vol 茅臺(tái)鎮(zhèn)散酒（SC11552032 110418）；娘母良藥酒（娘母良200 g + 53%vol 茅臺(tái)鎮(zhèn)散酒4 000 mL）；枸櫞酸西地那非片（貨號(hào):H20143255，廣東白云山醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司）；鹽酸阿撲嗎啡（APO，貨號(hào):PHR2621，默克）；BCA 蛋白檢測(cè)試劑盒（貨號(hào):A045-4-2），一氧化氮（NO）測(cè)定試劑盒（貨號(hào):A013-2-1）均購(gòu)于南京建成生物工程研究所；大鼠環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）ELISA 檢測(cè)試劑盒（貨號(hào):ml003133，酶聯(lián)生物）；B 淋巴細(xì)胞瘤-2（Bcl-2，貨號(hào):ab59348），Bcl-2 相關(guān)X 蛋白（Bax，貨號(hào):ab32503） 均購(gòu)于Abcam 上海貿(mào)易有限公司；Cleaved caspase-3 （貨號(hào):9661），Cleaved caspase-9（貨號(hào):9507）均購(gòu)于Cell Signaling Technology 公司。

1.3 建立ED 模型 使用雙側(cè)髂內(nèi)動(dòng)脈結(jié)扎法建立ED 模型[12]。將大鼠麻醉后固定于手術(shù)臺(tái)上，在腹部正中切口，分離腹壁肌肉組織，通過(guò)手術(shù)放大鏡輔助，沿髂總動(dòng)脈小心分離直至髂內(nèi)動(dòng)脈，以8-0 線結(jié)扎雙側(cè)髂內(nèi)動(dòng)脈。假手術(shù)組大鼠接受假手術(shù)，即按建模步驟但不予結(jié)扎。

采用APO 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證模型[13]:在大鼠頸項(xiàng)皮膚松軟處注射100 μg/kg APO，記錄30 min 內(nèi)大鼠陰莖勃起次數(shù)，以陰莖體增長(zhǎng)、末段陰莖體露出為陰莖勃起1 次；未檢測(cè)到陰莖勃起證明模型構(gòu)建成功。

1.4 分組和給藥 將60 只大鼠平均分為6 組:假手術(shù)、模型、白酒、西地那非、娘母良低劑量、娘母良高劑量組。假手術(shù)組大鼠接受假手術(shù)，其余組均使用雙側(cè)髂內(nèi)動(dòng)脈結(jié)扎法建立ED 模型。造模成功后第1 天開始給藥，西地那非組每天灌胃5 mg/kg 的西地那非，娘母良低、高劑量組每天分別灌胃3、6 mL/kg的娘母良藥酒，白酒組每天灌胃等體積等度數(shù)白酒，假手術(shù)與模型組每天分別灌胃等體積的生理鹽水作為平行對(duì)照，各組均給藥持續(xù)28 d。給藥結(jié)束后，所有大鼠進(jìn)行APO 勃起實(shí)驗(yàn)，之后被處死，稱重并收集樣本。

1.5 附睪和睪丸指數(shù)檢測(cè) 取各組大鼠睪丸，稱質(zhì)量后放入4%的多聚甲醛中備用。

臟器指數(shù)= 臟器質(zhì)量/ 體質(zhì)量× 100%。

1.6 附睪精子數(shù)量及存活率檢測(cè) 取大鼠右側(cè)附睪浸泡于37 ℃生理鹽水中，制備精子懸液，取10 μL 混勻的精子懸液，滴于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板中，顯微鏡下計(jì)數(shù)精子數(shù)量，N = 鏡下精子數(shù)目/ 100 × 106/mL；根據(jù)精子的活動(dòng)情況，統(tǒng)計(jì)活動(dòng)精子數(shù)，M = 鏡下活動(dòng)精子數(shù)目/ 100 × 106/mL，計(jì)算精子活率。

精子活率= M / N × 100%。

1.7 陰莖勃起相關(guān)生物活性因子測(cè)定 完成上述實(shí)驗(yàn)后，將大鼠下腹及會(huì)陰消毒，滅菌動(dòng)物手術(shù)器械將大鼠陰莖從根部剪斷，迅速取出龜頭和包皮組織，滅菌生理鹽水漂洗陰莖，陰莖后端放入4%的多聚甲醛中備用。稱取陰莖前端100 mg，剪碎，勻漿。按照生化試劑盒和ELISA 試劑盒說(shuō)明書分別檢測(cè)NO、cGMP含量。

1.8 陰莖海綿體與睪丸組織病理學(xué)染色 將置于4%多聚甲醛固定的大鼠陰莖海綿體組織及睪丸組織脫水，石蠟包埋，切片，常規(guī)HE 染色，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察大鼠海綿體與睪丸組織病理變化。

1.9 Western blot 檢測(cè)陰莖組織中凋亡相關(guān)蛋白表達(dá) 提取陰莖海綿體組織蛋白后，電泳分離蛋白，將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF 膜后，浸5%脫脂奶粉于搖床上室溫封閉2 h，將封閉后的膜置于對(duì)應(yīng)一抗稀釋液中（Bcl-2，1 ∶10 000；Bax，1 ∶1 000；Cleaved caspase-3，1 ∶1 000；Cleaved caspase-9，1 ∶1 000）4 ℃過(guò)夜。使用封閉液按1 ∶6 000 稀釋二抗，溫室孵育2 h，置于化學(xué)發(fā)光儀中曝光。

1.10 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)利用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，組間比較采用單因素方差分析（ANOVA）統(tǒng)計(jì)；方差不齊采用秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠勃起功能比較 APO 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠的勃起次數(shù)顯著降低（4.10 ± 0.54 vs.0.90 ± 0.70，P＜0.01）；與模型組相比，白酒組無(wú)明顯差異（0.90 ± 0.70 vs.1.10 ± 0.70，P＞0.05），西地那非組與娘母良低、高劑量組大鼠的勃起次數(shù)均顯著增多（0.90 ± 0.70 vs.2.60 ± 0.49，P＜0. 01；0.90 ± 0.70 vs.1.70 ± 0.46，P＜0. 05；0.90 ± 0.70 vs.2.30± 0.64，P＜0.01）；與白酒組相比，娘母良低、高劑量組均顯著增多（1.10 ± 0.70 vs.1.70 ± 0.46，P＜0. 05；1.10 ±0.70 vs.2.30 ± 0.64，P＜0.01）；與西地那非組相比，娘母高劑量組無(wú)明顯差異（2.60 ± 0.49 vs.2.30 ± 0.64，P＞0.05）。見圖1。

圖1 各組大鼠勃起次數(shù)

2.2 各組大鼠附睪與睪丸的質(zhì)量及指數(shù)比較 結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠的附睪質(zhì)量、睪丸質(zhì)量、附睪指數(shù)、睪丸指數(shù)均顯著降低（0.88 ± 0.08 vs 0.39 ± 0.07，1.93 ± 0.18 vs 0.96 ± 0.12，0.25 ± 0.02 vs 0.10 ± 0.02，0.54 ± 0.05 vs 0.25 ± 0.03，均P＜0.01）；與模型組相比，白酒組無(wú)明顯差異（0.39 ± 0.07 vs 0.35 ±0.08，0.96 ± 0.12 vs 0.93 ± 0.10，0.10 ± 0.02 vs 0.09 ±0.03，0.25 ± 0.03 vs 0.24 ± 0.05，均P＞0.05），西地那非組與娘母良各劑量組均顯著升高（西地那非組，0.39 ±0.07 vs 0.72 ± 0.09，0.96 ± 0.12 vs 1.65 ± 0.17，0.10 ±0.02 vs 0.20 ± 0.03，0.25 ± 0.03 vs 0.46 ± 0.05，均P＜0.01；娘母良低劑量組，0.39 ± 0.07 vs 0.45 ± 0.08，0.96± 0.12 vs 1.34 ± 0.17，0.10 ± 0.02 vs 0.13 ± 0.03，均P＜0.01，0.25 ± 0.03 vs 0.38 ± 0.04，P＜0.05；娘母良高劑量組，0.39 ± 0.07 vs 0.78 ± 0.11，0.96 ± 0.12 vs 1.70 ±0.17，0.10 ± 0.02 vs 0.22 ± 0.03，0.25 ± 0.03 vs 0.48 ±0.04，均P＜0.01）；與白酒組相比，娘母良低、高劑量組顯著升高（娘母良低劑量組，0.35 ± 0.08 vs 0.45 ±0.08，P＜0.05，0.93 ± 0.10 vs 1.34 ± 0.17，0.09 ± 0.03 vs 0.13 ± 0.03，0.24 ± 0.05 vs 0.38 ± 0.04，均P＜0.01；娘母良高劑量組，0.35 ± 0.08 vs 0.78 ± 0.11，0.93 ± 0.10 vs 1.70 ± 0.17，0.09 ± 0.03 vs 0.22 ± 0.03，0.24 ± 0.05 vs 0.48 ± 0.04，均P＜0.01）；與西地那非組相比，娘母良高劑量組無(wú)明顯差異（0.72 ± 0.09 vs 0.78 ± 0.11，1.65 ±0.17 vs 1.70 ± 0.17，0.20 ± 0.03 vs 0.22 ± 0.03，0.46 ±0.05 vs 0.48 ± 0.04，均P＞0.05）。見圖2。

圖2 各組大鼠附睪與睪丸的質(zhì)量及指數(shù)

2.3 各組大鼠精子質(zhì)量比較 結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠的精子數(shù)量及存活率均顯著降低（84.00 ± 10.90 vs.5.40 ± 1.70，86.31 ± 5.73 vs.28.59 ±18.15，均P＜0.01）；與模型組相比，白酒組無(wú)明顯差異（5.40 ± 1.70 vs.5.80 ± 0.75，28.59 ± 18.15 vs.32.70 ±10.20，均P＞0.05），西地那非組與娘母良各劑量組均顯著升高（西地那非組，5.40 ± 1.70 vs.71.10 ± 7.09，28.59 ± 18.15 vs.69.02 ± 5.32，均P＜0.01；娘母良低劑量組，5.40 ± 1.70 vs.47.00 ± 4.30，28.59 ± 18.15 vs.48.90 ± 4.81，均P＜0.01；娘母良高劑量組，5.40 ± 1.70 vs.67.05 ± 4.49，28.59 ± 18.15 vs.74.76 ± 3.31，均P＜0.01）；與白酒組相比，娘母良組顯著升高（娘母良低劑量組，5.80 ± 0.75 vs.47.00 ± 4.30，32.70 ± 10.20 vs.48.90 ± 4.81，均P＜0.01；娘母良高劑量組，5.80 ± 0.75 vs.67.05 ± 4.49，32.70 ± 10.20 vs.74.76 ± 3.31，均P＜0.01）；與西地那非組相比，娘母良高劑量組精子數(shù)量無(wú)明顯差異，精子活率顯著升高（71.10 ± 7.09 vs.67.05 ± 4.49，P＞0.05，69.02 ± 5.32 vs.74.76 ± 3.31，P＜0.05）。見圖3。

圖3 各組大鼠精子質(zhì)量

2.4 各組大鼠陰莖海綿體與睪丸病理的變化 HE結(jié)果顯示，假手術(shù)組大鼠陰莖海綿體組織形態(tài)正常，血竇豐富且排列規(guī)則，內(nèi)皮細(xì)胞完整且均勻分布于血管壁上；模型組和白酒組大鼠陰莖海綿體組織血竇減少并分布紊亂、內(nèi)皮細(xì)胞損傷并且密度降低等病理變化；西地那非與娘母良干預(yù)后陰莖海綿體組織形態(tài)逐漸恢復(fù)正常。見圖4。

圖4 各組大鼠陰莖海綿體組織HE 染色（100×）

假手術(shù)組大鼠睪丸組織生精細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，層次規(guī)則，生精小管管腔飽滿，各生精小管之間接觸緊密，僅有部分生精小管呈空腔狀態(tài)，說(shuō)明大部分的精子細(xì)胞完好；模型組大鼠睪丸組織生精細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常，排列紊亂，生精小管管腔縮小，各生精小管之間的間隙明顯變寬；西地那非與娘母良干預(yù)后睪丸組織形態(tài)逐漸恢復(fù)正常。見圖5。

圖5 各組大鼠睪丸組織HE 染色（100×）

2.5 各組大鼠NO/cGMP 信號(hào)傳導(dǎo)變化 結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠的NO 和cGMP 水平均顯著降低（5.16 ± 0.73 vs.2.18 ± 0.50，1.90 ± 0.37 vs.0.41 ± 0.08，均P＜0.01）；與模型組相比，白酒組無(wú)明顯差異（2.18 ± 0.50 vs.1.98 ± 0.52，0.41 ± 0.08 vs.0.43 ±0.05，均P＞0.05），西地那非組與娘母良各劑量組均顯著升高（西地那非組，2.18 ± 0.50 vs.3.98 ± 0.43，0.41 ±0.08 vs.1.49±0.36，均P＜0.01；娘母良低劑量組，2.18±0.50 vs.3.21 ± 0.42，0.41 ± 0.08 vs.0.93 ± 0.18，均P＜0.01；娘母良高劑量組，2.18 ± 0.50 vs.4.28 ± 0.45，0.41 ± 0.08 vs.1.56 ± 0.35，均P＜0.01）；與白酒組相比，娘母良組顯著升高（娘母良低劑量組，1.98 ± 0.52 vs.3.21 ± 0.42，0.43 ± 0.05 vs.0.93 ± 0.18，均P＜0.01；娘母良高劑量組，1.98 ± 0.52 vs.4.28 ± 0.45，0.43 ± 0.05 vs.1.56 ± 0.35，均P＜0.01）；與西地那非組相比，娘母良高劑量組無(wú)明顯差異（3.98 ± 0.43 vs.4.28 ± 0.45，1.49 ±0.36 vs.1.56 ± 0.35，均P＞0.05）。見圖6。

圖6 各組大鼠NO/cGMP 信號(hào)傳導(dǎo)

2.6 各組大鼠凋亡相關(guān)蛋白變化 Western blot 結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠Bax/Bcl-2，Cleaved caspase-3 和Cleaved caspase-9 的蛋白表達(dá)水平均顯著升高（0.08± 0.02 vs.1.00 ± 0.00，0.26 ± 0.02 vs.1.00 ± 0.00，0.27 ± 0.06 vs.1.00 ± 0.00，均P＜0.01）；與模型組相比，白酒組無(wú)明顯差異（1.00 ± 0.00 vs.0.93 ± 0.05，1.00 ± 0.00 vs.0.99 ± 0.05，1.00 ± 0.00 vs.1.06 ± 0.06，均P＞0.05），西地那非組與娘母良組不同程度降低（西地那非組，1.00 ± 0.00 vs.0.14 ± 0.02，1.00 ± 0.00 vs.0.35 ± 0.04，1.00 ± 0.00 vs.0.66 ± 0.02，均P＜0.01；娘母良低劑量組，1.00 ± 0.00 vs.0.39 ± 0.03，1.00 ± 0.00 vs.0.58 ± 0.08，均P＜0.01，1.00 ± 0.00 vs.1.13 ± 0.11，P＞0.05；娘母良高劑量組1.00 ± 0.00 vs.0.16 ± 0.02，1.00 ± 0.00 vs.0.38 ± 0.05，1.00 ± 0.00 vs.0.67 ± 0.09，均P＜0.01）；與白酒組相比，娘母良組顯著降低（娘母良低劑量組，0.93 ± 0.05 vs.0.39 ± 0.03，0.99 ± 0.05 vs.0.58 ± 0.08，均P＜0.01，1.06 ± 0.06 vs.1.13 ± 0.11，P＞0.05；娘母良高劑量組0.93 ± 0.05 vs.0.16 ± 0.02，0.99 ± 0.05 vs.0.38 ± 0.05，1.06 ± 0.06 vs.0.67 ± 0.09，均P＜0.01）；與西地那非組相比，娘母良高劑量組無(wú)明顯差異（0.14 ± 0.02 vs.0.16 ± 0.02，0.35 ±0.04 vs.0.38 ± 0.05，0.66 ± 0.02 vs.0.67 ± 0.09，均P＞0.05）。見圖7。

圖7 各組大鼠凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)

3 討論

中醫(yī)認(rèn)為ED 是經(jīng)由肝郁、濕熱、瘀滯、命門火衰、陰虛火旺、陰虛火旺、心脾血虛等原因致病。娘母良具有補(bǔ)腎助陽(yáng)、養(yǎng)心安神、祛痰解痙的功效[11]。臨床應(yīng)用于腎虛陽(yáng)萎、早泄等性功能減退癥以及心悸怔忡、腎虛咳喘、宮寒帶下等證[12]。并且，佤族民間早已驗(yàn)證其強(qiáng)壯、增力、抗疲勞作用，是1 種純天然強(qiáng)壯劑。娘母良藥酒在娘母良的基礎(chǔ)上組方而成，具有舒筋活血、補(bǔ)腎助陽(yáng)的功效[13]。

在本文的研究中，采用雙側(cè)髂內(nèi)動(dòng)脈結(jié)扎法建立ED 大鼠模型，使用APO 檢測(cè)造模成功與否。結(jié)果顯示ED 模型大鼠的勃起功能受限，而娘母良藥酒干預(yù)后ED 大鼠的勃起功能有所恢復(fù)。當(dāng)ED 發(fā)生時(shí)，會(huì)出現(xiàn)精子質(zhì)量低下，陰莖海綿體和睪丸組織形態(tài)改變的現(xiàn)象。娘母良藥酒干預(yù)后對(duì)ED 大鼠的精子質(zhì)量以及陰莖海綿體和睪丸的病理具有明顯改善。NO/cGMP信號(hào)傳導(dǎo)在陰莖勃起中發(fā)揮關(guān)鍵作用。NO 刺激可溶性鳥苷環(huán)化酶，將三磷酸鳥苷轉(zhuǎn)化為cGMP，進(jìn)而激活蛋白激酶，有利于海綿體平滑肌的松弛，并增強(qiáng)血液流入陰莖，導(dǎo)致陰莖勃起[14]。我們的結(jié)果發(fā)現(xiàn)ED大鼠的NO 和cGMP 產(chǎn)生受損，但娘母良藥酒干預(yù)后NO 和cGMP 水平明顯提升。在這些結(jié)果中，西地那非組和娘母良藥酒組相比沒有明顯差異，說(shuō)明娘母良藥酒可能是1 種可以代替西地那非改善ED 的潛在藥物。白酒組與模型組相比沒有明顯差異，白酒組與娘母良藥酒組相比具有明顯差異，說(shuō)明娘母良在ED 大鼠勃起功能恢復(fù)過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。以上內(nèi)容驗(yàn)證了娘母良藥酒對(duì)ED 具有良好的改善作用。

細(xì)胞凋亡是1 種受基因調(diào)控的有序、自發(fā)的細(xì)胞死亡形式，是維持細(xì)胞和器官正常功能的重要病理生理過(guò)程[15]。此外，細(xì)胞凋亡也是ED 的關(guān)鍵病理機(jī)制，可能導(dǎo)致海綿體缺血，從而削弱勃起功能[16-17]。既往研究報(bào)道，Akt/Bad/Bax/Caspase-3 通路可顯著預(yù)防海綿體神經(jīng)損傷大鼠的體細(xì)胞凋亡[18]。五子衍宗方通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡，有效改善與衰老相關(guān)的睪丸功能障礙[19]。Bcl-2 蛋白家族被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子[19]。Bcl-2 具有抗凋亡作用，Bax 具有促凋亡作用，二者可形成二聚體發(fā)揮作用。Bcl-2/Bax 比率降低可能會(huì)導(dǎo)致線粒體功能障礙，Bcl-2/Bax 的平衡是決定細(xì)胞凋亡程度的主要因素[20]。當(dāng)Bax-Bcl-2 二聚體增多時(shí)，可以促進(jìn)線粒體穿孔，通過(guò)釋放細(xì)胞色素c啟動(dòng)細(xì)胞凋亡的過(guò)程，它激活Caspase 級(jí)聯(lián)，導(dǎo)致細(xì)胞破壞[21]。Caspase-9 是1 種起始caspase，在caspase-3/-7 上游發(fā)揮作用。細(xì)胞色素c 從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)中，與凋亡蛋白酶激活因子1 結(jié)合形成凋亡體，最終激活Procaspase-9[22]。Procaspase-9 然后在大亞基和小亞基之間的亞基間連接子處裂解激活Pro caspases-3[23]。在本研究中，Wesrern blot 結(jié)果表明，ED大鼠Bax/Bcl-2 比例、Cleaved caspase-3 和Cleaved caspase-9 表達(dá)升高，而娘母良藥酒干預(yù)后Bax/Bcl-2比例、Cleaved caspase-3 和Cleaved caspase-9 表達(dá)下降，表明娘母良藥酒可能是通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡改善ED。

綜上所述，娘母良藥酒可以促進(jìn)NO 與cGMP 的產(chǎn)生并抑制陰莖海綿體組織細(xì)胞凋亡進(jìn)而改善ED大鼠勃起功能。見圖8。本研究對(duì)娘母良藥酒治療ED大鼠的效果及機(jī)制進(jìn)行了初步探索，以期為娘母良藥酒的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。然而，娘母良藥酒對(duì)ED 的深入作用機(jī)制，還需要在未來(lái)進(jìn)行多角度的研究。

圖8 圖形摘要