我國銹色棕櫚象遺傳多樣性及遺傳結(jié)構(gòu)分析

肖雨倩, 黃夢伊 , 閻 偉, 石 娟

1北京林業(yè)大學(xué)林學(xué)院,北京 100089; 2中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院椰子研究所,海南 文昌 571300

銹色棕櫚象RhynchophorusferrugineusOliver隸屬鞘翅目Coleoptera象蟲科Cueculionidae棕櫚象屬Rhynchophorus(張潤志等,2003),別名有紅棕象甲、椰子隱喙象、椰子甲蟲等(鞠瑞亭等,2006)。該蟲在海南、廣西、廣東等中國南方地區(qū)一年可發(fā)生1～3代(陳義群等,2011; 歐善生等,2009),世代重疊嚴(yán)重。交配繁殖時,雌蟲全天可進(jìn)行交配,多次交配增加了雌蟲排卵數(shù),在一定程度上延長了雌雄成蟲的壽命(紀(jì)田亮,2018),使得該蟲在短時間內(nèi)可迅速增加種群數(shù)量,加劇為害棕櫚科植物。利用傳統(tǒng)的檢測技術(shù)并不能在早期發(fā)現(xiàn)植株內(nèi)部的幼蟲,導(dǎo)致受害植株很容易被運送到一個沒有蟲源的地方,直到侵害晚期該蟲才被發(fā)現(xiàn)(Mankinetal.,2008),這是銹色棕櫚象在世界范圍內(nèi)傳播速度加快的主要原因之一。銹色棕櫚象是南方林業(yè)檢疫的主要害蟲之一。1999年我國口岸檢疫部門已有多次截獲銹色棕櫚象的報道(黃法余等,2000)。20世紀(jì)90年代后,棕櫚科植物的貿(mào)易活動在南方多省份越來越頻繁,銹色棕櫚象的危害使得福建和廣東的棕櫚業(yè)受到重?fù)簟?/p>

SSR (simple sequence repeats)標(biāo)記是以特異引物PCR為基礎(chǔ)的分子標(biāo)記技術(shù),為“中性”標(biāo)記,能客觀反映生物之間的本質(zhì)差異,很容易進(jìn)行PCR擴增(Akagietal.,1997; Rassmannetal.,1991),在數(shù)量方面沒有生物學(xué)上的限制,位點具有高度的多態(tài)性(Rassmannetal.,1991),呈孟德爾共顯性遺傳模式。利用PCR擴增出來的不同DNA條帶模式可分為不同的基因型,提供了更多的遺傳信息(Songetal.,2003)。此外,SSR標(biāo)記在相關(guān)物種中還具有很高的可開發(fā)性,這些遺傳標(biāo)記物通?？捎米鞅容^遺傳作圖和進(jìn)化研究的錨定標(biāo)記(Varshneyetal.,2005)?；谝陨蟽?yōu)點,SSR被廣泛應(yīng)用于研究種間與種內(nèi)遺傳關(guān)系,在入侵昆蟲種群來源鑒定、傳播路徑、雜交程度等方面的研究逐漸增多(劉佳妮等,2008)。

目前,微衛(wèi)星分子標(biāo)記SSR技術(shù)在我國各省(自治區(qū))銹色棕櫚象不同地理種群間的遺傳關(guān)系和遺傳結(jié)構(gòu)還未有深入研究,僅有王桂花(2014)針對入侵歷史較早的福建、海南、廣西老疫區(qū)作的初步分析,并未涉及到2007年江西和2011年四川的新增疫區(qū)。鑒于此,本研究擬運用SSR技術(shù),進(jìn)一步擴大取樣范圍,增加近年才入侵的新地理種群(四川、江西)以及海南和云南邊境地方的地理種群,對銹色棕櫚象在全國范圍內(nèi)的種群進(jìn)行更詳細(xì)的遺傳結(jié)構(gòu)和分化研究,以期為今后控制銹色棕櫚象的傳播蔓延提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試?yán)ハx

2017年5月—2018年5月,在云南、四川、江西、廣西、福建、海南等地,使用誘捕器誘捕以及對銹色棕櫚象受害樹木進(jìn)行樹干解析,共采集到177頭供試銹色棕櫚象成蟲,全部用無水乙醇浸泡保存,并放置在-20 ℃冰箱中備用。

1.2 銹色棕櫚象基因組提取

將不同地理種群的銹色棕櫚象成蟲樣本放置在濾紙上5 min,待樣本上無水乙醇揮發(fā)(無酒精氣味)后,取其成蟲的頭部和前胸背板相連部位的肌肉,置于1.5 mL的微型離心管中,按照AxyPrep基因組DNA小量試劑盒說明書操作步驟,進(jìn)行提取。

1.3 PCR擴增及產(chǎn)物檢測

參考Capdevielle-Dulacetal.(2011)合成13對微衛(wèi)星引物,選取本研究前期已篩出的9對微衛(wèi)星,委托北京擎科生物技術(shù)有限公司根據(jù)引物目的擴增質(zhì)量和片段大小的不同,在各微衛(wèi)星引物的上游引物5′端加上FAM、HEX、ROX 3種熒光染料中的一種進(jìn)行熒光標(biāo)記,并采用高效液相色譜法純化合成上游及下游引物(表1)。

表1 銹色棕櫚象9對微衛(wèi)星引物的序列及相關(guān)信息Table 1 Primer sequences and character of 9 microsatellite loci of R. ferrugineus

對每個種群的樣本進(jìn)行微衛(wèi)星目的片段擴增,進(jìn)行微衛(wèi)星熒光引物試驗,采用25 μL的體系進(jìn)行擴增。PCR擴增反應(yīng)體系為:上下游引物各1 μL,DNA模板1 μL,2×T5 Super PCR Mix (擎科生物公司) 12.5 μL,補充無菌雙蒸水至25 μL。反應(yīng)程序如下:98 ℃預(yù)變性2 min;40個循環(huán):98 ℃變性10 s,退火(設(shè)置53～61 ℃,具體每個微衛(wèi)星引物的退火溫度見表2)10 s,72 ℃延伸10 s,最后72 ℃延伸5 min,在4 ℃下保存。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳后,置于凝膠成像儀中檢測拍照。檢測到有PCR產(chǎn)物后,將擴增相同個體的3個含有不同熒光標(biāo)記的產(chǎn)物混合在一起,送至北京擎科生物公司,在ABI 3730測序儀上進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測。為了更客觀地檢測不同省(自治區(qū))地理種群間的供試銹色棕櫚象是否符合哈迪-溫伯格平衡,本研究將12個地理種群以省(自治區(qū))為單位劃分為6組進(jìn)行檢測,分別為海南(三亞種群、昌江種群、萬寧種群、五指山種群、三亞種群)、云南(蒙自種群、勐臘種群)、廣西(玉林種群)、四川(崇州種群)、江西(新余種群)、福建(廈門種群、福清種群)。

表2 中國12個銹色棕櫚象地理種群在9個微衛(wèi)星位點的遺傳多樣性參數(shù)Table 2 The genetic diversity parameters of 12 geographic populations of R. ferrugineus in China

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

利用Gene Marker software version 2.2.0軟件確定每個位點等位基因的大小。讀取的數(shù)據(jù)以Excel表導(dǎo)出保存。利用Convert1.3.1軟件將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為后續(xù)分析軟件需要的格式。

利用PopGen32 (許佳丹等,2019; Yehetal.,2002),對銹色棕櫚象各種群SSR數(shù)據(jù)進(jìn)行期望雜合度(expected heterozygosity,He)、表觀雜合度(observed heterozygosity,Ho)、等位基因數(shù)(number of allele,Na)、有效等位基因數(shù)(number of effective allele,Ne)、種群的F固定指數(shù)(F-statistics)、種群間分化系數(shù)(inbreeding coefficient among populations,Fst)、種群內(nèi)近交系數(shù)(inbreeding coefficient in population,Fis)、總近交系數(shù)(totalinbreeding coefficient,Fit)、Nei氏標(biāo)準(zhǔn)遺傳距離(Nei′s standard genetic distance, GD)(王志存,2008; 鄭燕,2014)、基因流(gene flow,Nem)(Cushmanetal.,2006; Kreivietal.,2005)以及哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium test)(Rodriguezetal.,2009; Wiggintonetal.,2005)的檢測分析。

利用BOTTLENECK軟件(Piryetal.,1999),基于無限等位基因模型(infinite allele model, IAM)、逐步突變模型(step-wise mutation model, SMM)和雙相突變模型(two-phased model of mutation, TPM),使用符號檢驗(sign test)、標(biāo)準(zhǔn)化差異檢驗(standardized difference test)和Wilcoxon 檢驗(Wilcoxon test)3種檢驗方法對銹色棕櫚象的不同地理種群進(jìn)行瓶頸效應(yīng)檢驗(許佳丹等,2019; Kimura &Crow,1964; Ohta &Kimura,1973)。

利用STRUCTURE進(jìn)行遺傳結(jié)構(gòu)分析,對ΔK和lnPr(X|K)的結(jié)果進(jìn)行比較分析,最后得出最佳K值(Evannoetal.,2005; Janesetal.,2017)。

利用GenAlex 6.502 (Rod &Peter,2012)計算種群的遺傳距離計算和個體間遺傳距離,根據(jù)計算結(jié)果,選擇主坐標(biāo)分析法(PcoA),查看不同坐標(biāo)軸解釋的種群間和個體間遺傳變異所占百分比。

2 結(jié)果

2.1 遺傳多樣性

各個銹色棕櫚象地理種群在9個微衛(wèi)星位點上的觀測等位基因數(shù)Na的范圍為2.7778～5.7778;有效等位基因數(shù)Ne為1.8524～3.2160;Shannon′s信息指數(shù)I為0.6730～1.3511。各銹色棕櫚象地理種群在基因座位上的表觀雜合度Ho情況不一樣,但均偏低,最高僅為0.4296,最低為0.2500;期望雜合度He在0.4831～0.6644;云南省勐臘銹色棕櫚象種群擁有最高的基因多樣性指數(shù)Nei′s,為0.6422,海南省昌江種群的基因多樣性指數(shù)Nei′s最低,僅為0.3937 (表2)。

2.2 固定指數(shù)及基因流

由表3可知:中國的12個銹色棕櫚象地理種群在各位點上Fit為0.1681～0.6952,平均值為0.3778;Fis為0.2717～0.8067,平均值為0.4879。Fst值在位點P1C8最大,為0.3659;在位點P1C11最小,為0.1058,平均值為0.1769。說明銹色棕櫚象主要的遺傳變異發(fā)生在種群內(nèi)部,種群內(nèi)發(fā)生的遺傳變異(82.31%)顯著高于在種群間發(fā)生的遺傳變異(17.69%)。9個微衛(wèi)星位點中僅有P1C8、P4D8的基因流Nem值小于1,分別為0.4332和0.7919,其他位點的基因流Nem值均大于1。

表3 各位點固定指數(shù)及基因流Table 3 Fixation index and gene flow of 9 microsatellite loci

2.3 遺傳分化

中國12個銹色棕櫚象地理種群兩兩之間的遺傳相似度為0.4183～0.9702 (表4),銹色棕櫚象福清種群與來自海南省(昌江、瓊海、五指山、萬寧、三亞)和云南省(蒙自、勐臘)的種群遺傳相似度均小于0.6,種群之間的交流較少。其他種群兩兩之間的遺傳相似度大于0.6,表明這些種群之間基因交流較為頻繁。銹色棕櫚象三亞種群和福清種群之間的遺傳距離最遠(yuǎn),為0.8715,萬寧種群和五指山種群之間的遺傳距離最近,為0.0208。

表4 中國12個銹色棕櫚象地理種群間遺傳相似系數(shù)(右上角)和Nei′s標(biāo)準(zhǔn)遺傳距離(左下角)Table 4 Genetic similarity index (above diagonal) and Nei′s standard genetic distance (below diagonal) among 12 geographic populations of R. ferrugineus in China

2.4 哈迪-溫伯格平衡

在哈迪-溫伯格平衡檢測中(表5),銹色棕櫚象昌江種群和蒙自種群分別在P1C8位點和P2F8位點上缺失了雜合度。對不同省(自治區(qū))供試種群在9個微衛(wèi)星位點上的檢測發(fā)現(xiàn):四川種群在所有位點上都偏離哈迪-溫伯格平衡;海南和福建種群僅分別在位點P2F8和P3A8上符合哈迪-溫伯格平衡;云南種群只在P1A3、P1C11上符合哈迪-溫伯格平衡;廣西種群在P2F6、P2F8、P1C11、P4D8、P3E5B上符合哈迪-溫伯格平衡;江西種群在P2F6、P1C11、P4D8、P3A8符合哈迪-溫伯格平衡。在這些種群中,廣西和江西種群幾乎在一半位點上都符合哈迪-溫伯格平衡。

表5 不同種群的哈迪-溫伯格平衡的P值Table 5 P value of Hardy-Weinberg equilibrium exact test for different populations

2.5 瓶頸效應(yīng)檢測

利用BOTTLENECK軟件檢驗發(fā)現(xiàn)(表6),被常用來作檢測分析的TPM模型中,云南蒙自的銹色棕櫚象種群在3種檢測方法中的P值均小于0.05,說明該種群在近期可能經(jīng)歷過瓶頸效應(yīng)。而其他種群在TPM的3種檢測中均未表現(xiàn)出近期有瓶頸效應(yīng)經(jīng)歷(P>0.05)。IAM模型中3種檢測方法得到的結(jié)果與TPM模型的結(jié)果相似,除了蒙自種群經(jīng)歷過瓶頸效應(yīng)以外,其他種群都未經(jīng)歷過該效應(yīng)。在SMM模型中,雖然某些檢測顯示有一小部分種群經(jīng)歷過瓶頸效應(yīng),但大部分種群均沒有檢測出該效應(yīng)經(jīng)歷。

表6 檢測銹色棕櫚象種群瓶頸效應(yīng)的P值Table 6 P value of BOTTLENECK test on populations of R. ferrugineus

2.6 STRUCTURE的遺傳結(jié)構(gòu)分析

對STRUCTURE輸出的結(jié)果進(jìn)行ΔK和lnPr(X|K)計算,確定12個銹色棕櫚象地理種群聚類的最佳K值為3。從STRUCTURE推斷出的三大分支在12個種群中的具體分布情況可知(圖1):3個分支在各個地理種群中都有混合現(xiàn)象,說明不同種群間存在不同程度的基因滲透。其中,云南勐臘和云南蒙自種群以及廣西玉林種群中第一分支(紅色部分)所占的比例較大。在海南的5個種群中,都是第三分支(紫色部分)所占的比例最大,5個種群劃分在一組,江西新余和四川崇州種群中第二分支(黃色部分)的占比較大,但是第一和第三分支也有一定的占比,2個種群的分支混合結(jié)果較為相似。福建廈門與福建福清種群中第二分支(黃色部分)的占比最高。但是相比福建福清種群,福建廈門種群中第三分支和第一分支的比例要更高一些,與江西新余和四川崇州的種群有一定相似性。

2.7 基于主坐標(biāo)分析法(PcoA)的分析

利用GenAlex 6.502構(gòu)建了空間排序二維圖,通過二維方式展現(xiàn)不同坐標(biāo)軸。在種群主坐標(biāo)(圖2)中,第一主坐標(biāo)解釋了總變異的56.71%,第二主坐標(biāo)解釋了總變異的19.33%,由于前2個主坐標(biāo)解釋的總變異大于70%,本研究主要通過第一和第二主坐標(biāo)分析不同種群和個體間的關(guān)系。銹色棕櫚象12個地理種群中,海南的5個種群聚為一個類群,這與STRUCTURE分析的聚類結(jié)果一致,福清種群與其他所有地理種群都有一定差異,保持最遠(yuǎn)的距離,與它較接近的種群有廈門和崇州種群,新余種群則與崇州和玉林的種群距離都較相似,但結(jié)合種群(圖2)和個體(圖3)的主坐標(biāo)分析,新余與崇州距離關(guān)系更近,因此,將福清、廈門、崇州、新余的種群劃分在一起,STRUCTURE分析結(jié)果也顯示這3個種群與福清種群有一定的相似性。而云南的2個種群在主坐標(biāo)分析中也聚在一起,與2個種群關(guān)系較近的是玉林種群,將其劃為一支?？傮w來說,主坐標(biāo)構(gòu)建的分析結(jié)果與STRUCTURE保持一致。

圖2 銹色棕櫚象12個地理種群的主坐標(biāo)(PcoA)分析Fig.2 Principal coordinate analysis (PcoA) of R. ferrugineus of 12 geographic populationsCJ:昌江;SY:三亞;QH:瓊海;ZS:五指山;WN:萬寧;MZ:蒙自;ML:勐臘;CZ:崇州;XY:新余;XM:廈門;YL:玉林;FQ:福清。CJ: Changjiang; SY: Sanya; QH: Qionghai; ZS: Wuzhishan; WN: Wanning; MZ: Mengzi; ML: Mengla; CZ: Chongzhou;XY: Xinyu; XM: Xiamen; YL: Yulin; FQ: Fuqing.

圖3 銹色棕櫚象不同個體間的主坐標(biāo)(PcoA)分析Fig.3 Analysis of principal coordinates (PcoA) between different individuals of R. ferrugineusCJ:昌江;SY:三亞;QH:瓊海;ZS:五指山;WN:萬寧;MZ:蒙自;ML:勐臘;CZ:崇州;XY:新余;XM:廈門;YL:玉林;FQ:福清。CJ: Changjiang; SY: Sanya; QH: Qionghai; ZS: Wuzhishan; WN: Wanning; MZ: Mengzi; ML: Mengla; CZ: Chongzhou;XY: Xinyu; XM: Xiamen; YL: Yulin; FQ: Fuqing.

3 討論

除了廣西和江西的種群在大部分位點符合哈迪-溫伯格平衡以外,其他種群在所研究的9個微衛(wèi)星位點基本都偏離該平衡,尤以入侵較早的海南、福建、云南3個省份的銹色棕櫚象偏離最顯著。表觀雜合度比期望雜合度低是種群偏離哈迪-溫伯格平衡的典型表現(xiàn)。觀察銹色棕櫚象的生活習(xí)性可以發(fā)現(xiàn),該害蟲在中國多個省(自治區(qū))一年可繁殖2～3代,世代重疊嚴(yán)重。銹色棕櫚象各蟲期基本都在同一棕櫚樹中生活取食直至寄主樹死亡,由于該害蟲遷飛能力較弱,只能短距離擴散,近親交配繁殖的概率明顯大于與異源種群進(jìn)行交配繁殖,所以在這些入侵歷史較早的省(自治區(qū))中,銹色棕櫚象之間仍然會存在較高的近交機會。本文得到的較高近交系數(shù)Fit(最高達(dá)0.6952,平均值0.3778)和總近交系數(shù)Fis(最高達(dá)0.8067,平均值0.4879)也反映出銹色棕櫚象存在一定的近交現(xiàn)象。頻繁的近交必然導(dǎo)致種群個體間隨機交配的概率下降,從而導(dǎo)致等位基因缺少雜合度,海南昌江和云南蒙自的種群分別在P1C8位點和P2F8位點上缺失雜合度,以及海南、福建、云南這3個省份種群多樣性指數(shù)中表觀雜合度大部分低于期望雜合度的情況也證明了這一點。

阿利效應(yīng)(Allee effects)指出:當(dāng)物種種群密度較低時,過分稀疏的種群數(shù)量會阻止個體的生長,并且增加了個體找到合適配偶的難度(王瑤等,2007)。入侵物種到達(dá)新的入侵地時,一般數(shù)量較小,為了避免阿利效應(yīng),會先選擇一個適合生存的地方進(jìn)行群聚,停止在新入侵地擴大擴散范圍,避免天敵和其他不利因素影響,使種群在新入侵地滅絕(Drake &Lodge,2006; Taylor &Hastings,2005)。待種群密度較高時,再入侵其他地方。四川崇州種群是近年才入侵的種群,在入侵初期,種群可入侵的路徑較少,種群數(shù)量小。對于新建立的種群,為避免阿利效應(yīng),銹色棕櫚象會在新入侵地很小范圍內(nèi)繁殖(擴散范圍基本沒有很明顯變化),個體在種群中會因沒有合適的配偶而更容易近親繁殖。新分布地區(qū)的限制、環(huán)境的適應(yīng)性以及該害蟲在寄主中鉆蛀取食的習(xí)性,這些因素都可能加重其在新入侵地四川崇州的近交現(xiàn)象,該種群在所有位點的表觀雜合度都明顯低于預(yù)期雜合度的結(jié)果也證明了近交現(xiàn)象的存在。因此,對于海南、云南、四川新余、福建的種群出現(xiàn)哈迪-溫伯格平衡偏離的原因可以認(rèn)為主要是種群內(nèi)頻繁近交。

所有檢測的種群中只有蒙自種群顯示經(jīng)歷了瓶頸效應(yīng),但是在對蒙自種群的遺傳多樣性進(jìn)行分析時,發(fā)現(xiàn)該種群的遺傳多樣性還是較豐富的,并未因為瓶頸效應(yīng)而急劇降低種群的遺傳多樣性。雖然種群有經(jīng)歷瓶頸效應(yīng),但是蒙自與一些東南亞國家的地理距離較近,目前,東南亞被認(rèn)為是銹色棕櫚象的起源地之一(Ferry &Gomez,2002),也是發(fā)生記錄較早的地區(qū),這些國家的銹色棕櫚象種群保留著豐富的遺傳多樣性,且云南省與廣西鄰近,推斷蒙自種群在經(jīng)歷瓶頸效應(yīng)前,與這些國家和地方之間進(jìn)行頻繁的基因交流,使得其遺傳多樣性極為豐富。此外,基因流檢測結(jié)果(蒙自種群與中國其他10個種群有頻繁的交流;STRUCTURE中顯示該種群有不同分支來源的混合)也都暗示了這點。雖然蒙自種群在近期遭遇了瓶頸效應(yīng),但是由于前期擁有極為豐富的遺傳多樣性基礎(chǔ),即使種群數(shù)量減少而丟失了部分遺傳多樣性,該種群也能保持較高水平的遺傳多樣性。

Fst值變化越大,表明種群分化程度就越高,銹色棕櫚象12個地理種群在各位點的Fst值大部分都小于0.18,平均值為0.1769,說明銹色棕櫚象主要的遺傳變異發(fā)生在種群內(nèi)部,種群間遺傳變異程度低于種群內(nèi)遺傳變異程度。銹色棕櫚象種群間的基因流結(jié)果顯示:大部分種群間存在頻繁的基因交流,但福建福清種群與海南和云南的7個地理種群(昌江、瓊海、五指山、三亞、萬寧、勐臘、蒙自)之間并沒有出現(xiàn)高水平的基因流,考慮到福建福清種群與海南和云南個種群的遺傳距離較遠(yuǎn)(Nei′s>0.5),此結(jié)果有可能預(yù)示著中國銹色棕櫚象種群存在多個入侵源和入侵路徑。

STRUCTURE和主坐標(biāo)分析(PcoA)結(jié)果結(jié)合遺傳距離和遺傳相似性結(jié)果,福清種群與廈門、新余、崇州的種群都有一定的基因交流,這4個種群聚為一支。新入侵地江西新余和四川崇州的種群都表現(xiàn)出與福建福清和廈門種群特征相似的遺傳結(jié)構(gòu)。從STRUCTURE結(jié)果中發(fā)現(xiàn),雖然福建2個地理種群在這2個新入侵地的遺傳結(jié)構(gòu)中占比最大,但來自云南省和海南省的種群也對這2個入侵地有一定程度的基因滲透。所以對于四川崇州和江西新余的種群來說,入侵源不是單一的,主要來自福建。雖然四川省和云南省接壤,與福建省相距較遠(yuǎn),但是地理距離不是主要影響因素。推測長期穩(wěn)定的棕櫚植物的貿(mào)易往來會導(dǎo)致長時間的入侵,以至于遠(yuǎn)距離的福建種群的入侵程度大于接壤省份云南省的種群的入侵程度。

STRUCTURE和主坐標(biāo)分析(PcoA)將云南的2個種群及廣西玉林種群聚為一支。云南的勐臘和蒙自種群都表現(xiàn)出與其他種群不同的遺傳結(jié)構(gòu),這2個種群都處于云南省的邊境,可能與相鄰東南亞國家的銹色棕櫚象種群在遺傳結(jié)構(gòu)上會更相似,這與Wangetal.(2015)認(rèn)為中國南部銹色棕櫚象最可能的來源地是印度、菲律賓和越南的結(jié)論相符。

海南的5個種群單獨聚為一支,它們與其他種群的遺傳結(jié)構(gòu)有一定區(qū)別,這與Wangetal.(2017)對海南和福建種群的遺傳結(jié)構(gòu)分析結(jié)果相符。海南的地理位置四面環(huán)海,氣候更為濕潤,與其他種群地理位置和氣候有著明顯區(qū)別。此外,Wangetal.(2017)研究顯示,來自廣東的種群與海南和廣西的種群在遺傳結(jié)構(gòu)上較相似,并與這2個省(自治區(qū))的種群有很強的基因交流。雖然海南與廣東之間有海峽的地理障礙,但是地理障礙不是阻止銹色棕櫚象在這些地區(qū)分布的主要因素。而人類活動卻大大影響害蟲的擴散,棕櫚植物的運輸廣泛影響了銹色棕櫚象的分布,以此推斷海南種群可能從廣東通過苗木運輸傳入。而廣西玉林種群在本研究中與云南種群的遺傳結(jié)構(gòu)相似,推測廣東種群和云南種群在遺傳結(jié)構(gòu)上有一定相似性。針對本研究的結(jié)果可以推斷:中國銹色棕櫚象的入侵源并不是單一的,而是由多個來源地在不同時間通過不同或相同的路徑傳入中國。對銹色棕櫚象入侵路徑的推斷,本文雖然在前人的基礎(chǔ)上,增加了更多的供試樣品進(jìn)行了探討,但是鑒于入侵種入侵方式和路徑的復(fù)雜性,還需要采集國外如東南亞的種群進(jìn)行對比分析,才能得到更為精準(zhǔn)的結(jié)論。