circFAM73A靶向調(diào)控miR-140-3p對(duì)高糖誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、遷移和炎癥因子釋放的影響

李偉華,安書杰,孟 華,沙南希,王雙勇

(1.空軍軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院綜合診療科,陜西 西安 710032;2.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院眼科,廣東 廣州 510150)

糖尿病視網(wǎng)膜病變(Diabetic retinopathy,DR)是糖尿病患者最常見的眼部并發(fā)癥之一,主要是由于高血糖導(dǎo)致視網(wǎng)膜血管異常和新生血管形成,從而引起視網(wǎng)膜水腫、出血、視網(wǎng)膜缺血等病變[1-2]。人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞在糖尿病視網(wǎng)膜病變中發(fā)揮了重要的作用[3]。人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞是視網(wǎng)膜血管的內(nèi)層細(xì)胞,維持著視網(wǎng)膜血管壁的完整性和正常功能。在高血糖條件下,人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷,導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙和血管通透性增加,從而加速了DR的發(fā)展[4-5]。環(huán)狀RNA(circular RNA,circRNA)是一類環(huán)形RNA分子,具有穩(wěn)定性和廣泛的表達(dá)特點(diǎn)[6]。最近的研究[7]表明,circRNA在DR的發(fā)生和發(fā)展中也發(fā)揮了重要作用。研究[8-9]發(fā)現(xiàn)circRNA參與了視網(wǎng)膜神經(jīng)元凋亡、視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激活、視網(wǎng)膜毛細(xì)血管損傷等過(guò)程。研究[10]顯示circFAM73A在DR中顯著高表達(dá),然而其具體作用和調(diào)控機(jī)制尚未完全明確。因此,本研究主要探討circFAM73A對(duì)高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、遷移和炎癥因子釋放的影響,及對(duì)circFAM73A/miR-140-3p軸的調(diào)控機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基(美國(guó)Life Technologies Corporation公司),Trizol試劑(美國(guó)生命技術(shù)公司),RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本Takara公司),Lipofectamine 3000和Protein A磁珠(美國(guó)Invitrogen公司),Transwell小室(Chemicon公司),HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG抗體(美國(guó)CST公司),RIP RNA試劑盒(美國(guó)Millipore公司),細(xì)胞凋亡試劑盒(中國(guó)上海弗元生物科技有限公司),Dual Luciferase Reporter Assay試劑盒(美國(guó)Promega公司),兔抗人TNF-α、IL-6和Cleaved caspase 3抗體(美國(guó)Sigma-Aldrich公司)。引物由中國(guó)上海生工合成,質(zhì)粒由中國(guó)上海吉?jiǎng)P基因公司合成。

1.2 研究方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染:人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞購(gòu)自美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù),采用含有10% FBS、100 U/ml鏈霉素和100 U/ml青霉素的DMEM培養(yǎng)基,在5% CO2、37 ℃的條件下培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到70%～80%時(shí),進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞分為正常葡萄糖(NG)組和高葡萄糖(HG)組,葡萄糖干預(yù)濃度分為5.5 mmol/L和25 mmol/L。細(xì)胞轉(zhuǎn)染采用Lipofectamine 3000,將100 nmol/L的circFAM73A小干擾RNA(si-circFAM73A)、miR-140-3p inhibitors及相應(yīng)陰性對(duì)照轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染48 h后,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR):采用Trizol試劑提取人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞RNA樣本,使用RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒對(duì)circRNA和mRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,使用miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒對(duì)miRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。qPCR反應(yīng)使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒(適用于circRNA和mRNA)和miRNA熒光定量PCR試劑盒(適用于miRNA)進(jìn)行。以GAPDH(circRNA和mRNA)或U6(miRNA)作為內(nèi)參并通過(guò)2-ΔΔCt法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。

1.2.6 熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè):將野生型(WT)和突變型(MUT)3’-UTR circFAM73A的雙熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒與miR-140-3p mimic/nc mimic同時(shí)轉(zhuǎn)染入人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞中,并孵育48 h。隨后使用雙熒光素酶報(bào)告基因試劑盒檢測(cè)熒光素酶活性,并以Renilla熒光素酶活性作為內(nèi)參測(cè)量熒光素酶活性。

2014年5月30日，由中國(guó)水利學(xué)會(huì)聯(lián)合禹城大禹文化研究會(huì)、國(guó)際生態(tài)安全合作組織、全聯(lián)環(huán)境服務(wù)業(yè)商會(huì)、水利部科技推廣中心共同主辦的“中國(guó)（國(guó)際）水務(wù)高峰論壇——2014中國(guó)·禹城水生態(tài)文明建設(shè)論壇”在山東禹城開幕。此次論壇主題為“水生態(tài)文明建設(shè)與縣域經(jīng)濟(jì)”，來(lái)自全國(guó)相關(guān)政府部門、權(quán)威機(jī)構(gòu)、學(xué)術(shù)單位的專家學(xué)者以及企業(yè)代表300余人齊聚一堂，共謀水生態(tài)文明建設(shè)之道。

1.2.4 遷移實(shí)驗(yàn):細(xì)胞被用預(yù)冷PBS洗滌兩次,然后在無(wú)血清的DMEM中稀釋到1×104/ml的細(xì)胞懸液。接下來(lái),將Transwell小室插入24孔板中,基底腔包含含有10% FBS的培養(yǎng)基,而上面腔則包含細(xì)胞懸液。培養(yǎng)48 h后遷移的細(xì)胞被100%甲醇固定30 min,然后用0.1%結(jié)晶紫染色,倒置顯微鏡下觀察每個(gè)孔的五個(gè)隨機(jī)視野中遷移的細(xì)胞數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。本研究的所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)進(jìn)行了3次,使用Student’st檢驗(yàn)或單因素方差分析(ANOVA)進(jìn)行組間比較,使用Tukey的事后檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較;P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡:細(xì)胞轉(zhuǎn)染后采用PBS洗滌2次,在暗室中同時(shí)用膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)染色15 min。使用FC-500流式細(xì)胞儀識(shí)別FITC+和PI+/-的凋亡細(xì)胞,并計(jì)算各組細(xì)胞凋亡率。

circRNA能夠通過(guò)多種途徑調(diào)節(jié)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞功能和DR的發(fā)展[11]。最常見的調(diào)控方式為circRNA作為miRNA的“海綿”吸附miRNA,從而影響miRNA的功能;另外部分circRNA則可以與RNA結(jié)合蛋白(RNA binding protein,RBP)相互作用,調(diào)節(jié)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)和蛋白翻譯;此外,還有部分circRNA與表觀遺傳修飾相關(guān),可以影響人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)和功能[12-13]。而人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞在維持視網(wǎng)膜血管壁結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)揮著關(guān)鍵的作用[14]。高血糖狀態(tài)下,視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能異常,會(huì)導(dǎo)致視網(wǎng)膜微循環(huán)障礙,進(jìn)而引發(fā)糖尿病視網(wǎng)膜病變[15]。因此,調(diào)控人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)功能對(duì)控制DR進(jìn)展具有重要作用。

1.2.5 Western blot:采用RIPA裂解緩沖液提取細(xì)胞中的總蛋白質(zhì),然后用BCA蛋白質(zhì)濃度檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度。將蛋白質(zhì)通過(guò)10%的SDS-PAGE電泳分離,并將分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。5% 脫脂牛奶封閉膜 2 h,使用含有 0.1% Tween-20 (TBST) 的 TBS 洗滌 ,然后在4 ℃下與一抗共同孵育過(guò)夜。第2天,將膜與二抗一起在25 ℃下孵育2 h。使用ECL試劑盒來(lái)分析蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。其中,GAPDH作內(nèi)參計(jì)算各組蛋白相對(duì)表達(dá)量。

2 結(jié) 果

2.3 circFAM73A能夠靶向結(jié)合miR-140-3p 為驗(yàn)證circFAM73A對(duì)高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)功能的具體作用機(jī)制。circFAM73A和miR-140-3p存在結(jié)合位點(diǎn)(圖3A),雙熒光素酶基因報(bào)告結(jié)果顯示circFAM73A-WT組中轉(zhuǎn)染miR-140-3p mimics后雙熒光素活性明顯下降(圖3B,P<0.05),RIP結(jié)果顯示circFAM73A和miR-140-3p能夠結(jié)合Ago2蛋白,在轉(zhuǎn)染miR-140-3p mimics能夠增加Ago2蛋白和circFAM73A的結(jié)合(圖3C,P<0.05)。miR-140-3p的表達(dá)水平在HG組顯著降低(圖3D,P<0.05),在HG組轉(zhuǎn)染si-circRNA FAM73A后,miR-140-3p的表達(dá)水平明顯高于HG+si-nc組(圖3D,P<0.05)。這提示circFAM73A能夠通過(guò)ceRNA機(jī)制靶向結(jié)合miR-140-3p。

注:**P<0.01,***P<0.001,****P<0.0001A:RT-qPCR檢測(cè)circFAM73A表達(dá)水平;B、C:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;D、E:Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)分子Cleaved caspase 3表達(dá)水平圖1 circFAM73A對(duì)高糖誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響

布魯諾走下法庭前又轉(zhuǎn)過(guò)身來(lái)大聲說(shuō)道：“我看見了，你們?cè)谛袝r(shí)比我更害怕！”這聲音嗡嗡地在教堂里回響。主教們趕忙擦著汗，夾起文件匆勿散去。

2.2 circFAM73A對(duì)高糖誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和炎癥因子釋放的影響 HG組細(xì)胞遷移(圖2A,P<0.05)和炎癥因子TNF-α和IL-6的表達(dá)水平(圖2B、C,P<0.05)明顯高于NG組,HG+si-circRNA FAM73A組細(xì)胞遷移(圖2A,P<0.05)和炎癥因子TNF-α和IL-6的表達(dá)水平(圖2B、C,P<0.05)明顯低于HG+si-nc組。這提示沉默circFAM73A能夠顯著抑制高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和炎癥因子TNF-α和IL-6的釋放。

注: ****P<0.0001A:Transwell檢測(cè)細(xì)胞遷移情況;B、C:RT-qPCR檢測(cè)炎癥因子TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)水平圖2 circFAM73A對(duì)高糖誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和炎癥因子釋放的影響

2.1 circFAM73A對(duì)高糖誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響 對(duì)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞分別采用5.5 mmol/L葡萄糖(NG組)或25 mmol/L葡萄糖(HG組)處理細(xì)胞,同時(shí)在HG組分別轉(zhuǎn)染si-nc(HG+si-nc組)和si-circRNA FAM73A(HG+si-circRNA FAM73A組)。結(jié)果顯示circFAM73A的表達(dá)水平在HG組顯著升高(圖1A,P<0.05),在HG組轉(zhuǎn)染si-circRNA FAM73A后,circFAM73A的表達(dá)水平明顯低于HG+si-nc組(圖1A,P<0.05)。在人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡上,HG組細(xì)胞凋亡率明顯高于NG組(圖1B、C,P<0.05),HG+si-circRNA FAM73A組細(xì)胞凋亡率明顯低于HG+si-nc組(圖1B、C,P<0.05);HG組細(xì)胞凋亡相關(guān)分子Cleaved caspase 3的表達(dá)水平明顯高于NG組(圖1D、E,P<0.05),HG+si-circRNA FAM73A組細(xì)胞凋亡相關(guān)分子Cleaved caspase 3的表達(dá)水平明顯低于HG+si-nc組(圖1D、E,P<0.05)。這提示沉默circFAM73A能夠顯著抑制高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。

Seepage calculation and discussion of double drainage blind ditch in finite thickness aquifer YE Kun WANG Xian-neng(68)

注:****P<0.0001A:circFAM73A和miR-140-3p結(jié)合位點(diǎn);B、C:雙熒光素酶報(bào)告和RIP實(shí)驗(yàn)證實(shí)circRNA FAM73A能夠靶向結(jié)合miR-140-3p;D:RT-qPCR檢測(cè)miR-140-3p表達(dá)水平圖3 circFAM73A能夠靶向結(jié)合miR-140-3p

2.4 circFAM73A/miR-140-3p軸對(duì)高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、遷移和炎癥因子釋放的影響 為驗(yàn)證circFAM73A/miR-140-3p軸對(duì)高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)功能的影響,在高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染si-circRNA FAM73A(HG+si-circRNA FAM73A組)、miR-140-3p inhibitors(HG+miR-140-3p inhibitors組)和si-circRNA FAM73A+miR-140-3p inhibitors(HG+si-circRNA FAM73A+miR-140-3p inhibitors組)。結(jié)果顯示低表達(dá)miR-140-3p能夠顯著促進(jìn)高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡(圖4A、B,P<0.05)、凋亡相關(guān)蛋白Cleaved caspase 3的表達(dá)水平(圖4C、D,P<0.05)、遷移(圖4E、F,P<0.05)、炎癥因子TNF-α和IL-6的釋放(圖4G、H,P<0.05)。共轉(zhuǎn)染si-circRNA FAM73A和miR-140-3p inhibitors能夠顯著減弱單獨(dú)轉(zhuǎn)染miR-140-3p inhibitors對(duì)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡(圖4A、B,P<0.05)、凋亡相關(guān)蛋白Cleaved caspase 3的表達(dá)水平(圖4C、D,P<0.05)、遷移(圖4E、F,P<0.05)、炎癥因子TNF-α和IL-6的釋放(圖4G、H,P<0.05)。這提示circFAM73A能夠通過(guò)靶向結(jié)合miR-140-3p調(diào)控高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、遷移和炎癥因子釋放。

社會(huì)大眾借助社會(huì)化媒體，比如微信、微博等媒體平臺(tái)將信息快速傳播出去。在其他社會(huì)受眾對(duì)照片或視頻進(jìn)行轉(zhuǎn)發(fā)評(píng)論的同時(shí)，社會(huì)信息的傳播實(shí)現(xiàn)了更加多樣化的傳播。在文字和照片以及信息的傳播過(guò)程中，信息得到及時(shí)交互，傳受關(guān)系得到進(jìn)一步擴(kuò)散[1]。但實(shí)際上，網(wǎng)上的關(guān)系并不是一種人際關(guān)系，這是一種新型的社會(huì)角色關(guān)系，當(dāng)這種關(guān)系借助手機(jī)和社會(huì)化媒體發(fā)展，媒介融合的特質(zhì)也得到進(jìn)一步顯現(xiàn)，社會(huì)化媒體中的用戶關(guān)系和用戶地位也會(huì)隨時(shí)發(fā)生改變。

3 討 論

1.2.7 RNA免疫沉淀(RIP):收集培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞,并用RIP裂解緩沖液重懸。接下來(lái),將細(xì)胞提取物與含有抗Ago2抗體或小鼠免疫球蛋白G(IgG)對(duì)照結(jié)合的磁珠RIP緩沖液在4 ℃下孵育過(guò)夜。次日,洗滌磁珠3次,并將磁珠與蛋白酶K一起孵育。使用Trizol試劑從提取物中分離出總RNA。最后,通過(guò)RT-qPCR分析確定circFAM73A和miR-140-3p的相對(duì)富集量。

在糖尿病患者中,高血糖水平會(huì)導(dǎo)致視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的增加,這會(huì)引起視網(wǎng)膜缺血、缺氧和代謝紊亂,從而誘發(fā)新生血管生成和病變進(jìn)展[16-17]。研究顯示circSLC16A12可以調(diào)控miR-140-3p/FGF2軸抑制視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,進(jìn)而減緩DR的進(jìn)展[18]。circVEGFC能夠通過(guò)miR-338-3p/HIF-1α/VEGFA軸加重高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[19]。本研究結(jié)果顯示circFAM73A的表達(dá)水平高糖處理的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞中明顯高表達(dá),高糖能夠明顯誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,而沉默circFAM73A能夠顯著抑制高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。

總之，列寧“政治遺囑”中關(guān)于領(lǐng)導(dǎo)干部政治品格、大局意識(shí)和專業(yè)素質(zhì)等方面的要求，指向的是當(dāng)時(shí)俄共（布）的干部隊(duì)伍，對(duì)今天我們黨加強(qiáng)干部隊(duì)伍建設(shè)仍然具有重要的啟發(fā)意義。面對(duì)新形勢(shì)、新任務(wù)，我們黨在要求領(lǐng)導(dǎo)干部學(xué)習(xí)馬列主義、毛澤東思想，提高政治理論素養(yǎng)的同時(shí)，也要高度重視領(lǐng)導(dǎo)干部的專業(yè)知識(shí)學(xué)習(xí)，使他們?nèi)嫣岣邩I(yè)務(wù)素質(zhì)。正如習(xí)近平總書記所強(qiáng)調(diào)的，領(lǐng)導(dǎo)干部要“結(jié)合工作來(lái)學(xué)習(xí)，不斷提高自己的知識(shí)化、專業(yè)化水平。要堅(jiān)持干什么學(xué)什么、缺什么學(xué)什么，有針對(duì)性地學(xué)習(xí)掌握好領(lǐng)導(dǎo)工作、履行崗位職責(zé)所必備的各種知識(shí)，努力使自己成為行家里手、內(nèi)行領(lǐng)導(dǎo)”[2]405。

在糖尿病患者中,視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移增加,血管生成加速,血管通透性增加,細(xì)胞外基質(zhì)合成和降解失衡,導(dǎo)致了視網(wǎng)膜微血管的結(jié)構(gòu)和功能的改變[20-21]。同時(shí),在DR中高血糖會(huì)誘導(dǎo)視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的炎性反應(yīng),促進(jìn)白細(xì)胞黏附和滲出,導(dǎo)致視網(wǎng)膜水腫、出血和缺氧等病理改變[20]。研究顯示沉默circ-UBAP2能夠通過(guò)調(diào)控miR-589-5p/EGR1軸抑制視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和氧化應(yīng)激,繼而抑制DR進(jìn)展[22]。研究顯示抑制circ-0002570可以通過(guò)miR-1243/angiomotin軸抑制高糖誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成和炎性反應(yīng)[10]。在本研究中,高糖能夠明顯誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和炎癥因子TNF-α和IL-6的釋放,而沉默circFAM73A能夠顯著抑制高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和炎癥因子TNF-α和IL-6的釋放。這提示circFAM73A參與了高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、遷移和炎癥因子釋放。

為進(jìn)一步探討circFAM73A對(duì)高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)功能的具體作用機(jī)制,雙熒光素酶報(bào)告和RIP實(shí)驗(yàn)證實(shí)circRNA FAM73A能夠靶向結(jié)合miR-140-3p。miR-140-3p的表達(dá)水平在高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞中顯著降低,沉默circRNA FAM73A能夠促進(jìn)miR-140-3p的表達(dá),這提示circFAM73A能夠通過(guò)ceRNA機(jī)制靶向結(jié)合miR-140-3p。研究顯示circ-0128846能夠通過(guò)ceRNA機(jī)制靶向結(jié)合miR-140-3p調(diào)控骨關(guān)節(jié)炎的進(jìn)展[23]。circRNA-0088036 能夠通過(guò)ceRNA機(jī)制靶向結(jié)合miR-140-3p促進(jìn)膀胱癌的進(jìn)展[24]。

隨著一批批商業(yè)銀行的成功上市和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)的加劇，銀行正在走向市場(chǎng)主導(dǎo)型的營(yíng)銷模式，也加快了我國(guó)商業(yè)銀行營(yíng)銷模式的轉(zhuǎn)變進(jìn)程[4]。但是，在營(yíng)銷戰(zhàn)略和觀念上，這種觀念的轉(zhuǎn)變還不夠徹底。外資銀行在進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)后一般采取輕表內(nèi)業(yè)務(wù)、重表外業(yè)務(wù)；輕傳統(tǒng)存貸業(yè)務(wù)、重現(xiàn)代創(chuàng)新業(yè)務(wù)；輕市場(chǎng)份額、重盈利增長(zhǎng)和輕負(fù)債業(yè)務(wù)、重資產(chǎn)業(yè)務(wù)的重點(diǎn)化競(jìng)爭(zhēng)戰(zhàn)略。相對(duì)外資銀行來(lái)說(shuō)，我國(guó)城市商業(yè)銀行利潤(rùn)的主要來(lái)源仍舊是傳統(tǒng)的存貸業(yè)務(wù)，因此，我國(guó)的城市商業(yè)銀行在一定程度上仍舊墨守過(guò)去的營(yíng)銷策略和營(yíng)銷理念。

研究顯示miR-140-3p在DR中顯著低表達(dá),circRNA-0084043能夠通過(guò)靶向結(jié)合miR-140-3p促進(jìn)高糖誘導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激和炎癥因子釋放[25]。本研究在恢復(fù)實(shí)驗(yàn)中,在高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染si-circRNA FAM73A、miR-140-3p inhibitors和si-circRNA FAM73A+miR-140-3p inhibitors。結(jié)果顯示低表達(dá)miR-140-3p能夠顯著促進(jìn)高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、遷移、炎癥因子TNF-α和IL-6的釋放;共轉(zhuǎn)染si-circRNA FAM73A和miR-140-3p inhibitors能夠顯著減弱低表達(dá)miR-140-3p對(duì)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、遷移和炎癥因子釋放的作用。因此,沉默circFAM73A能夠通過(guò)靶向結(jié)合miR-140-3p抑制高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、遷移和炎癥因子釋放。