水飛薊賓對(duì)索拉非尼在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響及機(jī)制研究

劉洪濤，張 磊，黃志云，張紅楠，張 帆，趙媛媛

水飛薊賓對(duì)索拉非尼在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響及機(jī)制研究

劉洪濤，張 磊，黃志云，張紅楠，張 帆，趙媛媛*

河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院藥劑科，河北 石家莊 050000

研究不同劑量水飛薊賓對(duì)索拉非尼在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響并探究相關(guān)機(jī)制。雄性SD大鼠隨機(jī)分為索拉非尼（100 mg/kg）組、低劑量（50 mg/kg）水飛薊賓＋索拉非尼（100 mg/kg）組和高劑量（100 mg/kg）水飛薊賓＋索拉非尼（100 mg/kg）組，每組6只，連續(xù)8 d ig空白溶劑或水飛薊賓后ig索拉非尼，于不同時(shí)間點(diǎn)采集血樣，測(cè)定血漿索拉非尼質(zhì)量濃度。采用qRT-PCR檢測(cè)大鼠肝組織中細(xì)胞色素P450 3A1（cytochrome P450 3A1，）、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A7（UDP-glucuronosyltransferase 1A7，）和小腸組織中P-糖蛋白（P-glycoprotein，）和乳腺癌耐藥蛋白（breast cancer resistance protein，）mRNA表達(dá)。50 mg/kg水飛薊賓使索拉非尼的max、AUC0～和AUC0～∞分別增加了47.4%、57.1%和64.7%，100 mg/kg水飛薊賓使索拉非尼的max、AUC0～和AUC0～∞分別增加了47.6%、80.5%和79.8%；聯(lián)合給藥組小腸組織中和mRNA表達(dá)明顯受到抑制（＜0.05），但肝組織中和mRNA表達(dá)沒有變化。水飛薊賓和索拉非尼聯(lián)用存在藥動(dòng)學(xué)相互作用，可能會(huì)增加索拉非尼不良反應(yīng)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，臨床聯(lián)合使用時(shí)應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測(cè)，必要時(shí)調(diào)整給藥劑量。

索拉非尼；水飛薊賓；藥物相互作用；P-糖蛋白；乳腺癌耐藥蛋白

肝細(xì)胞癌是原發(fā)性肝癌最主要的病理分型，占原發(fā)性肝癌的75%～85%，因其起病隱匿、惡性程度高且發(fā)展迅速，患者在確診時(shí)多處于肝細(xì)胞癌晚期，對(duì)于該類患者推薦使用系統(tǒng)治療[1]。索拉非尼是最早批準(zhǔn)用于肝細(xì)胞癌系統(tǒng)治療的小分子靶向藥物，是肝細(xì)胞癌晚期治療的重要一線藥物，但其較高的不良反應(yīng)發(fā)生率，給臨床使用帶來(lái)挑戰(zhàn)，積極有效的不良反應(yīng)治療和管理也成為了索拉非尼治療的重要環(huán)節(jié)。研究顯示，約17%的肝癌患者在使用索拉非尼治療時(shí)會(huì)出現(xiàn)轉(zhuǎn)氨酶升高[2]，加之肝癌患者在自然病程中也可能會(huì)伴隨肝功能異常，及時(shí)適當(dāng)?shù)厥褂帽８嗡幬锟商岣咧委煱踩訹1]，索拉非尼與保肝藥物在臨床存在廣泛聯(lián)合使用的現(xiàn)象，但是索拉非尼與保肝藥物相互作用研究較少。

水飛薊賓是臨床治療肝功能異常的常用藥物之一，具有穩(wěn)定肝細(xì)胞膜、保護(hù)肝細(xì)胞酶系統(tǒng)、清除肝細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基的作用，臨床常用于急慢性肝炎的治療，其在腫瘤患者的應(yīng)用較為普遍[3]。研究顯示，水飛薊賓可以抑制細(xì)胞色素P450 3A（cytochrome P450 3A，CYP3A）等I相代謝酶、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A1（UDP-glucuronosyltransferase 1A1，UGT1A1）等II相代謝酶以及P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）轉(zhuǎn)運(yùn)體的活性，能夠影響由這些酶代謝或者轉(zhuǎn)運(yùn)的藥物的藥動(dòng)學(xué)[4]。索拉非尼在肝臟主要經(jīng)過(guò)UGT1A9和CYP3A4代謝，同時(shí)又是P-gp和乳腺癌耐藥蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）底物，其與多種藥物存在相互作用[5-8]。綜上，水飛薊賓與索拉非尼合用可能發(fā)生基于代謝酶和/或轉(zhuǎn)運(yùn)體的藥物相互作用，然而目前尚沒有相關(guān)研究的報(bào)道。因此，開展水飛薊賓與索拉非尼藥動(dòng)學(xué)相互作用研究并初步探究其機(jī)制，對(duì)于兩藥物在臨床的安全合理使用有重要意義。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量220～250 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（京）2016-0006。大鼠在標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境中飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前12 h禁食，自由飲水。本研究獲得河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（No.20230226)

1.2 藥品與試劑

索拉非尼對(duì)照品（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.8%，批號(hào)ZZS-20-638-G3）、內(nèi)標(biāo)d3-索拉非尼（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.9%，批號(hào)ZZS-20-X261-A1）均購(gòu)自上海甄準(zhǔn)生物科技有限公司；水飛薊賓膠囊（批號(hào)250704032）購(gòu)自藥店天士力制藥集團(tuán)有限公司；乙腈（批號(hào)F23N14201）、甲酸（批號(hào)C12531069）為色譜純，水為娃哈哈純凈水；TRNzol Universal總RNA提取試劑（批號(hào)X084）、FastKing cDNA第一鏈合成試劑盒（批號(hào)W0008）、SuperReal PreMix Plus（SYBR Green）熒光定量預(yù)混試劑增強(qiáng)版（批號(hào)X0829）購(gòu)自北京天根生化科技有限公司；引物由武漢賽維爾生物科技有限公司合成。

1.3 儀器

LC-30A型超高效液相色譜儀（日本島津公司）；Sciex Triple Quad 5500型串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜儀，配有Turbo VTM型電噴霧離子化源（美國(guó)AB公司）；SLAN-96S型qRT-PCR儀（上海宏石醫(yī)療科技有限公司）；全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀（上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司）；Epoch全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Tek公司）；?80 ℃超低溫冰箱（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）。

2 方法

2.1 大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究

18只雄性SD大鼠，隨機(jī)分為索拉非尼（100 mg/kg，相當(dāng)于臨床劑量14 mg/kg）組、低劑量（50 mg/kg，相當(dāng)于臨床劑量7 mg/kg）水飛薊賓＋索拉非尼（100 mg/kg）組和高劑量（100 mg/kg，相當(dāng)于臨床劑量14 mg/kg）水飛薊賓＋索拉非尼（100 mg/kg）組，每組6只，實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，自由飲水。所有藥物以0.5%羧甲基纖維素鈉混懸，大鼠連續(xù)8 d ig水飛薊賓或者空白溶劑后，ig索拉非尼，在給藥前和給藥后1、3、5、6、7、8、10、12、24、36、48、72、96 h取血0.3 mL于肝素化抗凝管中，血液樣本4500 r/min離心10 min，取血漿保存于?80 ℃冰箱待分析。

2.2 水飛薊賓對(duì)大鼠肝臟CYP3A1、UGT1A7和小腸組織P-gp、BCRPmRNA表達(dá)的影響

采血結(jié)束后，大鼠ip 2%戊巴比妥麻醉后，迅速取出肝臟及小腸組織，組織經(jīng)預(yù)冷的生理鹽水沖洗，濾紙吸濕，放入組織包埋盒，在液氮中速凍后保存在?80 ℃待分析。使用總RNA快速抽提試劑盒提取肝臟和小腸組織中的總RNA，測(cè)定總RNA的濃度，根據(jù)260 nm與280 nm的吸光度（）比值評(píng)估總RNA的純度，該值在1.8～2.0。使用FastKing cDNA第一鏈合成試劑盒將總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。采用SuperReal PreMix Plus（SYBR Green）試劑盒進(jìn)行定量PCR反應(yīng)。反應(yīng)程序設(shè)置預(yù)變性95 ℃持續(xù)15 min，PCR反應(yīng)（40個(gè)循環(huán)，95 ℃、10 s，60 ℃、32 s），引物序列見表1。

2.3 溶液的配制

精密稱取索拉非尼對(duì)照品適量，用二甲基亞砜溶液溶解，制成終質(zhì)量濃度為1 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。取適量對(duì)照品儲(chǔ)備液，用50%乙腈稀釋為50、150、500、2000、8000、2×104、5×104ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液。同法配制低、中、高混合質(zhì)控工作溶液和稀釋可靠性工作溶液，索拉非尼質(zhì)量濃度分別為100、5000、3.75×104、1×105ng/mL。

表1 引物序列

稱取d3-索拉非尼1 mg于1 mL二甲基亞砜中溶解，制成1 mg/mL的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，用50%乙腈稀釋得到500 ng/mL的混合內(nèi)標(biāo)工作溶液。分析前，所有溶液保存于?20 ℃冰箱。

2.4 血漿樣品處理

血漿樣品50 μL，加入內(nèi)標(biāo)工作溶液5 μL，加入乙腈150 μL，渦旋混合1 min，12 000 r/min離心10 min，取上清液100 μL加入200 μL 50%乙腈，渦旋混勻，轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣小瓶，待進(jìn)樣分析。

2.5 LC-MS/MS條件

2.5.1 色譜條件 ZORBAX SB-C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，3.5 μm），流動(dòng)相為乙腈（A）-含0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸銨溶液（B），梯度洗脫：0～2.5 min，60% B；2.5～3.5 min，60%～90% B；3.5～5.5 min，90% B；5.5～5.6 min，90%～60% B；5.6～6.6 min，60% B。體積流量為0.7 mL/min；進(jìn)樣體積為5 μL。

2.5.2 質(zhì)譜條件 電噴霧離子源正離子檢測(cè)模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描，索拉非尼和內(nèi)標(biāo)d3-索拉非尼定量離子對(duì)分別為/465.2→270.2、468.2→255.4；去簇電壓140 V；碰撞能量45 eV；源噴射電壓5500 V；霧化氣壓力413.7 kPa；加熱氣壓力344.75 kPa；氣簾氣壓力137.9 kPa；離子源溫度500 ℃。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 選擇性 取6份不同來(lái)源的空白血漿以及制備的定量限校正標(biāo)樣，按照“2.4”項(xiàng)下方法處理后獲得樣品色譜圖，考察方法的選擇性。

2.6.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量限 取“2.3”項(xiàng)下對(duì)照品工作溶液5 μL加入45 μL空白血漿，渦旋混合，制成索拉非尼質(zhì)量濃度分別為5、15、50、200、800、2000、5000 ng/mL的校正標(biāo)樣，按“2.4”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以分析物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，分析物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比為縱坐標(biāo)，采用最小加權(quán)二乘法以1/2為權(quán)重因子進(jìn)行曲線擬合得回歸方程。

2.6.3 精密度和準(zhǔn)確度 配制含索拉非尼質(zhì)量濃度為5.0、10.0、500.0、3 750.0 ng/mL的定量下限、低、中、高4個(gè)質(zhì)量濃度的質(zhì)控血漿樣品，按“2.4”項(xiàng)下方法處理，每個(gè)質(zhì)量濃度平行6份，連續(xù)3 d測(cè)定，計(jì)算日內(nèi)、日間精密度和準(zhǔn)確度。

2.6.4 基質(zhì)效應(yīng) 取6份不同來(lái)源的空白血漿50 μL，按“2.4”項(xiàng)下方法處理，不加內(nèi)標(biāo)，取上清液即為空白基質(zhì)溶液，向空白基質(zhì)加入低、高質(zhì)量濃度的質(zhì)控工作溶液和內(nèi)標(biāo)溶液適量（使其質(zhì)量濃度與低、高質(zhì)控樣本質(zhì)量濃度相同），每個(gè)質(zhì)量濃度6樣本，測(cè)得峰面積記為B；以50%乙腈代替空白基質(zhì)其余操作同上，測(cè)得峰面積記為C，以B/C分別計(jì)算分析物和內(nèi)標(biāo)的基質(zhì)效應(yīng)因子，再以分析物的基質(zhì)效應(yīng)因子除以內(nèi)標(biāo)的基質(zhì)效應(yīng)因子計(jì)算歸一化的基質(zhì)效應(yīng)因子。

2.6.5 提取回收率 配制低、中、高質(zhì)量濃度的質(zhì)控樣品，按“2.4”項(xiàng)下方法處理，進(jìn)樣分析后，記錄分析物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值為A；取空白血漿，同法處理后加入3個(gè)質(zhì)量濃度質(zhì)控工作溶液和內(nèi)標(biāo)溶液，使之與質(zhì)控樣品質(zhì)量濃度相同，記錄分析物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值為B，A/B即為分析物提取回收率。

2.6.6 穩(wěn)定性 配制低、高質(zhì)量濃度質(zhì)控樣品分別考察含藥血漿在室溫下放置8 h、2～8 ℃冰箱放置24 h、?80 ℃放置14 d、處理后樣品在自動(dòng)進(jìn)樣器放置12 h、?80 ℃凍融3次的穩(wěn)定性。

2.6.7 稀釋可靠性 制備2倍于定量上限質(zhì)量濃度的血漿樣本，再用空白血漿稀釋該樣品5倍，平行6份，測(cè)定結(jié)果與標(biāo)示量的偏差。

2.6.8 殘留效應(yīng) 定量上限質(zhì)量濃度后進(jìn)樣空白基質(zhì)生物樣本，考察本方法的殘留效應(yīng)。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 方法學(xué)驗(yàn)證

3.1.1 選擇性 索拉非尼及內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別為1.17、1.16 min?？瞻籽獫{中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾分析物的測(cè)定，方法的選擇性良好，色譜圖見圖1。

I-空白血漿色譜圖 II-加入5 ng/mL索拉非尼和內(nèi)標(biāo)的空白血漿

3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及定量限 索拉非尼在5～5000 ng/mL內(nèi)線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線為＝4.28×10?3－2.46×10?4（＝0.996 3），連續(xù)測(cè)定6份定量限樣本，其精密度與準(zhǔn)確度均滿足要求，定量限為5 ng/mL。

3.1.3 精密度和準(zhǔn)確度 定量限、低、中、高質(zhì)量濃度質(zhì)控樣品的日內(nèi)精密度、日間精密度及準(zhǔn)確度均滿足要求（表2）。

3.1.4 基質(zhì)效應(yīng)和提取回收率 索拉非尼低、高質(zhì)量濃度質(zhì)控樣品經(jīng)內(nèi)標(biāo)校正的基質(zhì)效應(yīng)分別為97.0%和100.6%，RSD分別為7.0%和4.0%，結(jié)果表明基質(zhì)的存在不干擾索拉非尼的測(cè)定。索拉非尼的提取回收率為95.5～101.8%（表3）。

表2 精密度和準(zhǔn)確度(, n = 6)

表3 基質(zhì)效應(yīng)和提取回收率(, n = 6)

3.1.5 穩(wěn)定性 索拉非尼含藥血漿在室溫放置8 h、2～8 ℃冰箱放置24 h、?80 ℃放置14 d、處理后樣品在自動(dòng)進(jìn)樣器放置12 h、?80 ℃凍融3次的穩(wěn)定性均未受到影響，其準(zhǔn)確度為96.4%～107.2%，RSD均小于10%（表4），表明在上述條件下，血漿中索拉非尼穩(wěn)定性良好。

3.1.6 稀釋可靠性 索拉非尼稀釋5倍的樣品測(cè)定結(jié)果與標(biāo)示量偏差為3.2%，RSD小于15%，索拉非尼血漿藥物質(zhì)量濃度高于定量上限時(shí)，可以采用空白血漿稀釋后準(zhǔn)確測(cè)定。

3.1.7 殘留效應(yīng) 最高濃度校正標(biāo)樣后連續(xù)分析的1個(gè)空白基質(zhì)樣品在分析物和內(nèi)標(biāo)保留時(shí)間處無(wú)明顯干擾峰，說(shuō)明高質(zhì)量濃度樣品對(duì)低質(zhì)量濃度樣品的測(cè)定無(wú)殘留影響。

3.2 大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)結(jié)果

索拉非尼單獨(dú)給藥和聯(lián)合水飛薊賓后索拉非尼的血藥濃度-時(shí)間曲線見圖2，索拉非尼的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表5。當(dāng)索拉非尼與低、高劑量水飛薊賓聯(lián)合給藥時(shí)，索拉非尼的AUC0～t、AUC0～∞和max明顯增加（＜0.05），表觀分布容積（）和清除率（CL）降低。低劑量水飛薊賓聯(lián)合索拉非尼組和高劑量水飛薊賓聯(lián)合索拉非尼組的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。低劑量水飛薊賓組和索拉非尼單用組的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)max和AUC0～t幾何均值比的90% CI分別為128.04%～174.09%和120.31%～233.67%，高劑量水飛薊賓組和索拉非尼單用組的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)max和AUC0～t幾何均值比的90% CI分別為115.49%～184.63%和127.13%～274.34%，均不在80.00%～125.00%，結(jié)果表明低、高劑量水飛薊賓均明顯影響大鼠體內(nèi)索拉非尼的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程。低劑量水飛薊賓使索拉非尼的AUC0～t升高1.67倍，高劑量水飛薊賓使索拉非尼的AUC0～t升高1.87倍，結(jié)果均大于1.25倍且小于2倍，表明水飛薊賓對(duì)大鼠體內(nèi)索拉非尼體內(nèi)過(guò)程可能存在弱抑制。

表4 穩(wěn)定性(, n = 6)

圖2 索拉非尼在大鼠體內(nèi)的平均藥-時(shí)曲線(, n = 6)

表5 索拉非尼的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(, n = 6)

與索拉非尼組比較：*＜0.05

*< 0.05sorafenib group

3.3 水飛薊賓對(duì)大鼠肝臟CYP3A1、UGT1A7和小腸組織P-gp、BCRPmRNA表達(dá)的影響

如圖3所示，與索拉非尼組比較，低、高劑量水飛薊賓聯(lián)合索拉非尼組小腸組織中和mRNA表達(dá)水平均明顯降低（＜0.05），肝臟組織中和mRNA表達(dá)無(wú)明顯變化。

4 討論

索拉非尼因其較優(yōu)異的抗腫瘤效果，一直是晚期肝癌患者的重要治療手段，但因腫瘤患者常存在共患病，索拉非尼與其他藥物聯(lián)合使用的現(xiàn)象十分普遍，加之索拉非尼的體內(nèi)過(guò)程容易受到代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體活性改變的影響[9-10]，如合用藥物影響代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體，藥物相互作用的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)也會(huì)增加。藥物相互作用發(fā)生隱匿，通常對(duì)于沒有治療藥物監(jiān)測(cè)的藥物使用中很難發(fā)覺，而一旦發(fā)現(xiàn)藥物相互作用，一般是患者已經(jīng)出現(xiàn)了藥物不良反應(yīng)，因此，主動(dòng)探究聯(lián)用藥物之間相互作用發(fā)生的可能，對(duì)于索拉非尼的安全合理使用十分必要。肝癌患者在自然病程中或治療過(guò)程中常會(huì)伴隨肝功能異常，及時(shí)適當(dāng)?shù)厥褂帽８嗡幬锟梢越档筒l(fā)癥和改善生活質(zhì)量，臨床上水飛薊賓因其較好的保肝效果也是晚期肝癌患者的常用藥物之一，其與索拉非尼聯(lián)合使用的現(xiàn)象也十分普遍。本研究在大鼠體內(nèi)，從整體水平考察了不同劑量多次給予水飛薊賓與單次給予索拉非尼的藥動(dòng)學(xué)相互作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)50 mg/kg水飛薊賓使索拉非尼的max、AUC0～t和AUC0～∞分別增加了47.4%、57.1%和64.7%，100 mg/kg水飛薊賓使索拉非尼的max、AUC0～t和AUC0～∞分別增加了47.6%、80.5%和79.8%，鑒于索拉非尼達(dá)穩(wěn)態(tài)后藥物暴露有2.5～7.0倍的蓄積，因此兩藥穩(wěn)態(tài)下合用后藥物暴露增加程度可能加大。研究顯示索拉非尼體內(nèi)暴露量與不良反應(yīng)相關(guān)[11]，藥物暴露增加會(huì)導(dǎo)致手足綜合征和腹瀉的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加，不利于藥物治療的安全性。因此當(dāng)臨床上水飛薊賓與索拉非尼聯(lián)合使用時(shí)，需要臨床給予重視，對(duì)索拉非尼的療效和安全性應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測(cè)，必要時(shí)減少索拉非尼的給藥劑量或者進(jìn)行治療藥物監(jiān)測(cè)，以免影響藥物治療結(jié)局。

與索拉非尼組比較：*P＜0.05

為進(jìn)一步探究水飛薊賓影響索拉非尼體內(nèi)藥物暴露的原因，本研究基于既往研究[12-13]選擇了與索拉非尼相關(guān)的藥物代謝酶（CYP3A4、UGT1A9）和轉(zhuǎn)運(yùn)體（P-gp、BCRP）作為靶點(diǎn)，通過(guò)相關(guān)基因表達(dá)情況初步探究水飛薊賓改變索拉非尼體內(nèi)過(guò)程的原因。UGT1A9和CYP3A4是索拉非尼在人體的主要代謝酶，在大鼠體內(nèi)兩者的功能分別由UGT1A7和CYP3A1所取代，因此本研究以UGT1A7和CYP3A1作為研究靶點(diǎn)。盡管多項(xiàng)體外研究顯示水飛薊賓是UGTs和CYP3A4的抑制劑[14-15]，但是本研究沒有得到相同結(jié)果，可能是因?yàn)樗w薊賓的生物利用度低，在肝臟沒有達(dá)到體外研究的藥物濃度。外排轉(zhuǎn)運(yùn)體在索拉非尼吸收中起著重要作用，索拉非尼生物利用度較低，可能與腸道外排相關(guān)[13]，體外研究顯示索拉非尼為P-gp和BCRP底物，其對(duì)BCRP的親和力強(qiáng)于P-gp[16]。水飛薊賓是BCRP底物，對(duì)P-gp的影響存在相反結(jié)果，這可能與給藥劑量、給藥頻次有關(guān)[4]。本研究顯示大鼠連續(xù)8 d ig給予50、100 mg/kg水飛薊賓，均可以抑制大鼠小腸和的mRNA表達(dá)，兩組間沒有差異，推測(cè)可能是因?yàn)樗w薊賓生物利用度極低（約0.95%）[17]，即使增加劑量其吸收進(jìn)入小腸細(xì)胞的藥物并未增加多少，導(dǎo)致其對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)體產(chǎn)生的作用沒有差別。綜上所述，水飛薊賓可能是通過(guò)抑制大鼠小腸P-gp和BCRP而使索拉非尼生物利用度增加，兩者也可能同時(shí)競(jìng)爭(zhēng)小腸BCRP而使索拉非尼的生物利用度增加，具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。本研究為動(dòng)物體內(nèi)開展的藥動(dòng)學(xué)研究，由于物種的差異，并不能完全代表人體體內(nèi)情況。索拉非尼與水飛薊賓穩(wěn)態(tài)下長(zhǎng)期藥動(dòng)學(xué)相互作用及藥效學(xué)相互作用尚需進(jìn)一步研究。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1]中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì). 原發(fā)性肝癌診療指南 (2022年版) [J]. 腫瘤綜合治療電子雜志, 2022, 8(2): 16-53.

[2]Kudo M, Finn R S, Qin S K,. Lenvatinib versus sorafenib in first-line treatment of patients with unresectable hepatocellular carcinoma: A randomised phase 3 non-inferiority trial [J]., 2018, 391(10126): 1163-1173.

[3]張志鵬, 孟艷秋, 王趲. 水飛薊賓及其衍生物生物活性及作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 中草藥, 2021, 52(12): 3717-3724.

[4]Xie Y, Zhang D Q, Zhang J,. Metabolism, transport and drug-drug interactions of silymarin [J]., 2019, 24(20): 3693.

[5]Mross K, Steinbild S, Baas F,. Results from anand a clinical/pharmacological phase I study with the combination irinotecan and sorafenib [J]., 2007, 43(1): 55-63.

[6]Karbownik A, Sobańska K, Grabowski T,.assessment of the drug interaction between sorafenib and paracetamol in rats [J]., 2020, 85(6): 1039-1048.

[7]Karbownik A, Szkutnik-Fiedler D, Grabowski T,. Pharmacokinetic drug interaction study of sorafenib and morphine in rats [J]., 2021, 13(12): 2172.

[8]Karbownik A, Szkutnik-Fiedler D, Czyrski A,. Pharmacokinetic interaction between sorafenib and atorvastatin, and sorafenib and metformin in rats [J]., 2020, 12(7): 600.

[9]Karbownik A, Miedziaszczyk M, Grabowski T,.assessment of potential for UGT-inhibition-based drug-drug interaction between sorafenib and tapentadol [J]., 2020, 130: 110530.

[10]Bins S, van Doorn L, Phelps M A,. Influence of OATP1B1 function on the disposition of sorafenib-β--glucuronide [J]., 2017, 10(4): 271-279.

[11]Boudou-Rouquette P, Ropert S, Mir O,. Variability of sorafenib toxicity and exposure over time: A pharmacokinetic/pharmacodynamic analysis [J]., 2012, 17(9): 1204-1212.

[12]J?rvinen E, Deng F, Kiander W,. The role of uptake and efflux transporters in the disposition of glucuronide and sulfate conjugates [J]., 2021, 12: 802539.

[13]Tandia M, Mhiri A, Paule B,. Correlation between clinical response to sorafenib in hepatocellular carcinoma treatment and polymorphisms of P-glycoprotein (ABCB1) and of breast cancer resistance protein (ABCG2): Monocentric study [J]., 2017, 79(4): 759-766.

[14]Sridar C, Goosen T C, Kent U M,. Silybin inactivates cytochromes P450 3A4 and 2C9 and inhibits major hepatic glucuronosyltransferases [J]., 2004, 32(6): 587-594.

[15]Beckmann-Knopp S, Rietbrock S, Weyhenmeyer R,. Inhibitory effects of silibinin on cytochrome P-450 enzymes in human liver microsomes [J]., 2000, 86(6): 250-256.

[16]Agarwal S, Sane R, Ohlfest J R,. The role of the breast cancer resistance protein (ABCG2) in the distribution of sorafenib to the brain [J]., 2011, 336(1): 223-233.

[17]Tvrdy V, Pourová J, Jirkovsky E, K?en V, Valentová K, Mladěnka P. Systematic review of pharmacokinetics and potential pharmacokinetic interactions of flavonolignans from silymarin [J]., 2021, 41(4): 2195-2246.

Effect and mechanism of silibinin on pharmacokinetics of sorafenib in rats

LIU Hong-tao, ZHANG Lei, HUANG Zhi-yun, ZHANG Hong-nan, ZHANG Fan, ZHAO Yuan-yuan

Department of Pharmacy, The First Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000, China

To investigate the effect of silibinin on pharmacokinetics and mechanism of sorafenib in rats.Male SD rats were randomly divided into sorafenib (100 mg/kg) group, low-dose silibinin (50 mg/kg) + sorafenib (100 mg/kg) group and high-dose silibinin (100 mg/kg) + sorafenib (100 mg/kg) group, with six rats in each group. After 8 d of ig blank solvent or silibinin, rats were ig sorafenib, blood samples were collected at different time points to determine the concentration of sorafenib in plasma. The mRNA expressions of cytochrome P450 3A1 (CYP3A1), UDP-glucuronosyltransferase 1A7 (UGT1A7) in liver tissue and P-glycoprotein (P-gp), breast cancer resistance protein (BCRP) in small intestine tissue of rats were detected by qRT-PCR.Silibinin at dose of 50 mg/kg increased themax, AUC0?tand AUC0?∞of sorafenib by 47.4%, 57.1% and 64.7% respectively, while 100 mg/kg silibinin increased themax, AUC0?tand AUC0?∞of sorafenib by 47.6%, 80.5% and 77.5% respectively. The expressions ofandmRNA in small intestine were obviously inhibited (< 0.05), but the expressions ofandmRNA in liver tissue had no change.There is a pharmacokinetic interaction between silibinin and sorafenib, which may increase the risk of adverse reactions of sorafenib. Monitoring should be strengthened in clinical combined use, and the dosage should be adjusted if necessary.

sorafenib; silibinin; drug-drug interaction; P-glycoprotein; breast cancer resistance protein

R285.62

A

0253 - 2670(2023)21 - 7104 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.21.019

2023-06-11

河北醫(yī)科大學(xué)星火計(jì)劃課題（XHJH202301）

劉洪濤，副主任藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)相關(guān)研究。E-mail: lhtyl16@126.com

通信作者：趙媛媛，主任醫(yī)師，主要從事精神疾病及藥物研究。E-mail: zhaoyuanyuan9955@163.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]