口服補(bǔ)液鹽散（III）中元素雜質(zhì)的研究

史大勇，郭 偉，顏世強(qiáng)，李亮亮，解春文

（山東達(dá)因海洋生物制藥股份有限公司，山東 威海 264300）

國(guó)際人用藥注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)議（International Conference on Harmonization，ICH）批準(zhǔn)的Q3D元素雜質(zhì)指南中，將藥品中的“重金屬”一詞變?yōu)椤霸仉s質(zhì)”。元素雜質(zhì)不僅對(duì)藥物藥效產(chǎn)生影響，也會(huì)導(dǎo)致人體中毒，因此，元素雜質(zhì)檢測(cè)在藥物研發(fā)過程中至關(guān)重要。我國(guó)于2017年加入ICH，在ICH Q3D的基礎(chǔ)上，《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版[1-2]收錄適合我國(guó)國(guó)情的元素雜質(zhì)控制要求。一般原料藥的元素雜質(zhì)來源有：有意加入的合成原料殘留物；無意加入的原料負(fù)載雜質(zhì)和生產(chǎn)設(shè)備等雜質(zhì)，且最終能被檢測(cè)到的元素雜質(zhì)[3-4]。

口服補(bǔ)液鹽散（III）是世界衛(wèi)生組織推薦的治療急性腹瀉脫水的藥物，其糾正脫水的速度優(yōu)于靜脈滴注，主要由氯化鈉、氯化鉀、枸櫞酸鈉和葡萄糖組成。除具有補(bǔ)充水、鈉和鉀的作用外，對(duì)急性腹瀉有治療作用，臨床主要用于補(bǔ)充水、鈉和鉀，治療急性腹瀉[5-8]。

本文參照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版和ICH Q3D元素雜質(zhì)指南要求，創(chuàng)建電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）法測(cè)定口服補(bǔ)液鹽散（III）中多元素雜質(zhì)的方法，靈敏度高，干擾少，簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，可用于對(duì)口服補(bǔ)液鹽散（III）中各元素雜質(zhì)的質(zhì)量控制[9-10]。

1 儀器與試藥

7700X型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；MS105DU電子分析天平（梅特勒-托利多）；MARS 20微波消解儀（美國(guó)CEM公司）。

口服補(bǔ)液鹽散（III）（批號(hào)：150802，150803，150804，山東達(dá)因海洋生物制藥股份有限公司）；多元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（鉛、鎘、砷、汞、鈷、釩、鎳、鎂、鋁、錳，唯一標(biāo)識(shí)：175056，國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心）；汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（唯一標(biāo)識(shí)：158022-1，國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心）；硝酸（優(yōu)級(jí)純，含量≥70 %，天津科密歐）；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 儀器參數(shù)與樣品測(cè)定

儀器參數(shù)見表1。

表1 金屬離子含量測(cè)定ICP-MS實(shí)驗(yàn)參數(shù)

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備溶液（各元素含量：10 ng/ml）精密量取多元素標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 ml與汞元素標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05 ml，置于50 ml量瓶，加5 %硝酸水溶液稀釋至刻度，搖勻，再精密量取混合液0.5 ml，置于50 ml量瓶，加5 %硝酸水溶液稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.2 對(duì)照品溶液 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液0.1，0.4，2，8，12，24 ml，分別置于50 ml量瓶，再以5 %硝酸水溶液稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.3 供試品溶液（10 mg/ml溶液） 精密稱取樣品0.5 g，置消解罐中，加入濃硝酸5 ml，消解 30 min，以5 %硝酸水溶液稀釋至50 ml即得。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

參考美國(guó)藥典＜233＞[11]，驗(yàn)證口服補(bǔ)液鹽散（III）元素雜質(zhì)的測(cè)定方法，其驗(yàn)證結(jié)果如下。

2.3.1 線性與定量限 精密量取各元素雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，在0～5 ng/ml濃度范圍內(nèi)，配制各元素雜質(zhì)的混合線性試液，以元素濃度（X）及校正數(shù)值（Y）進(jìn)行線性回歸，計(jì)算回歸方程。結(jié)果，鉛、鎘、砷、汞、鈷、錳、釩和鎳在0.01～4.99 ng/ml內(nèi)，鎂元素的濃度在0～4.89 ng/ml內(nèi)，鋁元素的濃度在0.16～5.02 ng/ml內(nèi)，線性關(guān)系良好，其R2均大于0.9940。取空白溶劑平行測(cè)定11次，計(jì)算定量限，均低于各元素相應(yīng)限度。結(jié)果見表2。

表2 線性實(shí)驗(yàn)與定量限結(jié)果

2.3.2 回收率 按2.2.1項(xiàng)對(duì)照品儲(chǔ)備溶液配制對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，按2.2.2項(xiàng)對(duì)照品溶液配制對(duì)照品溶液。

供試品溶液1：精密稱取樣品0.5 g，共6份，分別加入對(duì)照品儲(chǔ)備液1 ml，置入消解罐，加入濃硝酸5 ml，開始消解，再加5 %硝酸水溶液稀釋至50 ml，即得。

供試品溶液2：精密稱取樣品0.5 g，共6份，分別加入對(duì)照品儲(chǔ)備液10 ml，置入消解罐，加入濃硝酸5 ml，進(jìn)行消解，再加5 %硝酸水溶液稀釋至50 ml，即得。

供試品溶液3：精密稱取樣品0.5 g，共6份，分別加入對(duì)照品儲(chǔ)備液20 ml，置消解罐中，加入濃硝酸5 ml，進(jìn)行消解，再加5 %硝酸水溶液稀釋至50 ml，即得。

每個(gè)濃度各制備6份，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算各元素回收率。結(jié)果見表3。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3.3 精密度 取待測(cè)樣品按2.2.3項(xiàng)下方法處理，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算各元素的濃度。結(jié)果，各元素含量RSD為0～12.9 %。

2.3.4 重復(fù)性 取待測(cè)樣品6份，按2.2.3項(xiàng)下方法處理，計(jì)算各元素的濃度。結(jié)果，各元素含量RSD為0～12.6 %。

2.3.5 中間精密度 不同日期，不同操作人員分別取待測(cè)樣品6份，按2.2.3項(xiàng)下方法處理，計(jì)算各元素的濃度。結(jié)果，各元素含量RSD為0～12.1 %。

2.4 測(cè)定結(jié)果

取不同批次待測(cè)樣，按2.2.3項(xiàng)下方法處理后，分別進(jìn)樣分析，計(jì)算樣品中各元素的含量。結(jié)果見表4。

表4 待測(cè)品測(cè)定結(jié)果

3 分析與討論

3.1 樣品處理方法的選擇

ICP-MS的進(jìn)樣方式有消解進(jìn)樣、直接或稀釋進(jìn)樣及有機(jī)加氧進(jìn)樣等方式[12-13]。消解進(jìn)樣具有分解快速、完全，揮發(fā)性元素?fù)p失小等優(yōu)點(diǎn)；而直接或稀釋進(jìn)樣適合固態(tài)樣品和有機(jī)成分少的樣品。本品處方中葡萄糖含量大于60 %，選擇直接或稀釋進(jìn)樣會(huì)有干擾元素被檢出，對(duì)待測(cè)元素產(chǎn)生干擾，所以進(jìn)行消解，可保證測(cè)定結(jié)果可靠[14-15]，因此選擇微波消解法。

3.2 供試品消解量的確定

分別稱取口服補(bǔ)液鹽散（III）0.5，1.0，1.5 g，按2.1項(xiàng)方法對(duì)供試品進(jìn)行消解，發(fā)現(xiàn)稱取供試品1.0 g與1.5 g無法消解完全，因此確定取供試品0.5 g進(jìn)行消解。

3.3 元素雜質(zhì)的確定 和限度制定依據(jù)

按照ICH Q3D中對(duì)口服固體制劑的檢測(cè)規(guī)定，需對(duì)1類、2A類元素雜質(zhì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估?？诜a(bǔ)液鹽散（III）由原料氯化鈉與氯化鉀引入鋁、鎂和錳，這3種雜質(zhì)元素屬于ICH Q3D中的其他元素分類，毒性較低；但上述元素雜質(zhì)在含量較高條件下會(huì)引起腎毒性及肝毒性，因此同樣需檢測(cè)其含量。本文根據(jù)ICH Q3D關(guān)于金屬催化劑或金屬試劑殘留限度指南規(guī)定，制定了口服補(bǔ)液鹽散（III）中各個(gè)元素雜質(zhì)的限度，并創(chuàng)建合理的控制上述元素雜質(zhì)的方法[16]。