溫針對大鼠糖尿病周圍神經(jīng)病變坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度及MDA、SOD、TAOC的作用

孫遠(yuǎn)征,王偉華,毛翔

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溫針對大鼠糖尿病周圍神經(jīng)病變坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度及MDA、SOD、TAOC的作用

孫遠(yuǎn)征,王偉華,毛翔

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,哈爾濱 150001)

運(yùn)用溫針治療糖尿病周圍神經(jīng)病變(Diabetic Peripheral Neuropathy)模型大鼠,觀察該法對大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度以及氧化和抗氧化能力的影響,從神經(jīng)保護(hù)的角度探討溫針治療DPN的可能機(jī)制。鏈尿佐菌素(Streptozotocin,STZ)肌肉注射誘導(dǎo)形成糖尿病周圍神經(jīng)病變模型,隨機(jī)分為模型組、彌可保組、溫針組。溫針組每日針刺大鼠雙側(cè)脾俞、腎俞、環(huán)跳和后三里穴,得氣后在針尾纏繞艾絨點(diǎn)燃施灸30 min,彌可保組每日肌肉注射彌可保50mg/kg。另設(shè)正常組進(jìn)行對照,模型組和正常組只作捆綁處理。共治療8星期。分別于治療前及治療后觀察一般狀態(tài)、血糖,測定坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度,用化學(xué)比色法測定坐骨神經(jīng)丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和總抗氧化能力(TAOC)。治療后,彌可保組和溫針組坐骨神經(jīng)感覺傳導(dǎo)速度明顯優(yōu)于模型組(＜0.01),MDA水平明顯低于模型組(＜0.01),SOD和TAOC水平明顯高于模型組(＜0.01)。而溫針組與彌可保組相比較,以上各項(xiàng)亦有明顯差異(＜0.05)。溫針能有效提高DPN模型大鼠神經(jīng)傳導(dǎo)速度,并且能有效地減輕氧化應(yīng)激對神經(jīng)的損傷程度。

糖尿病神經(jīng)病變;溫針療法;坐骨神經(jīng);感覺傳導(dǎo)速度;總抗氧化能力

糖尿病并發(fā)癥十分復(fù)雜,臨床表現(xiàn)多樣,給患者帶來的痛苦往往大于糖尿病本身。其中糖尿病周圍神經(jīng)病變(DPN)發(fā)病率高,致殘率高,治療難度大,遷延不愈,給患者帶來生活不便和精神痛苦。目前溫針對DPN的臨床療效肯定,但機(jī)制不明,本實(shí)驗(yàn)通過溫針對DPN模型大鼠的干預(yù)治療,發(fā)現(xiàn)溫針能提高周圍神經(jīng)抗氧化能力?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動物造模

40只Wistar雄性大鼠由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供,分籠飼養(yǎng),每籠10只,食用標(biāo)準(zhǔn)顆粒鼠糧。實(shí)驗(yàn)前一星期一次性購入,喂養(yǎng)于安靜溫暖環(huán)境中,室溫保持在16～23℃,給予充足的食物和水。造模前12 h,禁食禁水,排空尿糞。參照Schmeichel等[1]方法,把鏈尿佐菌素STZ(STZ由Sigma公司提供)溶于0.1 mol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH4.2)配制成濃度為1%的溶液,以60 mg/kg(體重)劑量單次由腹腔注射。72 h后,通過尾尖取血測定空腹血糖,以空腹血糖大于7.8 mmol/L者為造模成功大鼠[2]。繼續(xù)喂養(yǎng)8星期,造成DPN模型大鼠[3]。

1.2 分組與處理

將造模成功后大鼠隨機(jī)分為模型組、彌可保組和溫針組。彌可保組每日肌肉注射彌可保50mg/kg,左右腿交替,共治療8星期。溫針組按“大鼠穴位圖譜”[4],取雙側(cè)脾俞、腎俞、后三里、環(huán)跳穴,用乙醇棉球在所選穴位進(jìn)行消毒后,用華佗牌針灸針進(jìn)針,做適度提插捻轉(zhuǎn),得氣后在針尾纏繞艾絨點(diǎn)燃后施灸,持續(xù)30 min,治療8星期。模型組與正常組只做捆綁處理。

1.3 指標(biāo)觀察與檢測

1.3.1 一般情況

分別于治療前后對大鼠毛色、精神狀態(tài)、攝食狀況、飲水及尿量進(jìn)行觀察。

1.3.2 體重和血糖

分別于治療前后用電子稱測大鼠體重;用德國羅公司ACCU-CHEK血糖儀測定血糖。

1.3.3 坐骨神經(jīng)感覺傳導(dǎo)速度測定

大鼠腹腔注射10%水合氯醛(300 mg/kg)使其麻醉,將大鼠以俯臥位固定于支架,用DANTEC Cantata肌電圖誘發(fā)電位儀采用單極針電極近神經(jīng)法測定各組大鼠尾神經(jīng)電生理指標(biāo)。刺激針電極置于股骨大粗隆與坐骨結(jié)節(jié)之間,參考電極在刺激電極與記錄電極之間距記錄針電極1 cm處。單脈沖方波刺激,每兩個(gè)刺激之間間隔5 s,記錄3個(gè)動作電位波形,測量刺激與記錄電極之間之距離,以測出感覺傳導(dǎo)速度(SCV)。

1.3.4 坐骨神經(jīng)中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和總抗氧化能力(TAOC)的測定

用乙醇棉球?qū)Υ笫箅p側(cè)股骨部位皮毛反復(fù)消毒,用手術(shù)剪剪掉外部被毛,暴露出皮膚,然后快速用180℃、12 h處理過的手術(shù)剪刀將外皮輕輕剝開3 cm長的切口,剝離坐骨神經(jīng)并游離下來,置于恒溫37℃的生理鹽水中30 s,待其生理指標(biāo)穩(wěn)定,應(yīng)用化學(xué)比色法測定坐骨神經(jīng)MDA、SOD和TAOC含量,操作嚴(yán)格按相應(yīng)試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)中模型組、彌可保組各死亡2只,推測可能由于血糖水平過高導(dǎo)致死亡。

2.1 一般情況觀察

治療8星期后正常組大鼠表現(xiàn)為精神狀態(tài)良好,體重增加,動作自如。模型組大鼠表現(xiàn)出明顯的多尿、多飲、多食、消瘦及體重增長緩慢、精神萎靡、蜷臥拱背、反應(yīng)遲鈍、行動遲緩等糖尿病的癥狀與體征。溫針組和彌可保組也有類似表現(xiàn),但程度較模型組為輕。

2.2 體重

治療結(jié)束后,各組大鼠與正常組大鼠相比體重明顯減輕(＜0.01)。彌可保組和溫針組治療后體重較模型組略有增加,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05),提示用彌可保、溫針治療后對糖尿病大鼠體重變化無明顯改善作用。詳見表1。

表1 治療前后大鼠體重的變化情況 (±s,g)

注:與正常組比較1)＜0.01

2.3 血糖

與正常組比較,各組糖尿病大鼠血糖明顯升高(＜0.01)。治療后各治療組血糖與治療前比較無明顯降低(＞0.05)。提示用溫針、彌可保治療后對糖尿病大鼠血糖變化無明顯改善作用。詳見表2。

表2 治療前后大鼠血糖的變化情況 (±s,mmol/L)

注:與正常組比較1)＜0.01

2.4 大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度的變化

治療后各組大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度與正常組相比均減慢(＜0.01);與模型組相比彌可保組和溫針組大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度均有提高(＜0.01),溫針組坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度較彌可保組有所提高(＜0.05)。提示溫針治療對STZ糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度的減慢具有明顯的改善作用。詳見表3。

表3 治療后各組大鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度變化比較 (±s,m/s)

注:與正常組比較1)＜0.01;與模型組比較2)＜0.01;與彌可保組比較3)＜0.01

2.5 溫針對DPN大鼠坐骨神經(jīng)中MDA、SOD和TAOC水平的影響

結(jié)果顯示模型組大鼠坐骨神經(jīng)MDA的水平明顯高于正常組(＜0.01),而SOD、TAOC水平則明顯低于正常組(＜0.01)。與模型組相比,溫針組和彌可保組能降低坐骨神經(jīng)中MDA的水平,提高TAOC、SOD水平(均＜0.05),溫針組與彌可保組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05),提示溫針具有抗氧化應(yīng)激的作用。詳見表5。

表5 大鼠坐骨神經(jīng)中MDA、SOD和TAOC的比較 (±s,nmol/mL)

注:與正常組比較1)＜0.01;與模型組比較2)＜0.05;與彌可保組比較3)＜0.05

3 討論

隨著人民生活水平的提高,糖尿病發(fā)病率逐年增加,其慢性并發(fā)癥之一的周圍神經(jīng)病變更為常見。其患病率為50%～80%[3]?？衫奂案杏X、運(yùn)動、自主神經(jīng)等,尤其是感覺神經(jīng)為主要表現(xiàn),患者以痛溫覺減弱或消失而感到痛苦。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論公認(rèn)自由基學(xué)說是目前重要的衰老學(xué)說之一。也是糖尿病周圍神經(jīng)病變的重要機(jī)制之一,目前報(bào)道中[2],以灸法為主,可以明顯地降低中老年人過氧化脂質(zhì)水平,提高體內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)含量,降低丙二醛(MDA)水平。

糖尿病周圍神經(jīng)病變屬中醫(yī)學(xué)“消渴”合并“痿證”、“痹證”范疇,多數(shù)醫(yī)家認(rèn)為該病為本虛標(biāo)實(shí)之證,其虛主要以氣虛、陰虛為主,其實(shí)為血脈痹阻不通[5,6]。臟腑辨證以脾腎兩虛為主,故擬益氣養(yǎng)陰,活血通絡(luò)。腎為先天之本,內(nèi)藏元陰元陽,故取腎俞補(bǔ)腎陰而治其本;脾俞為脾氣轉(zhuǎn)輸之所,氣血生化之源,足三里為足陽明胃經(jīng)合穴,與脾俞伍用補(bǔ)后天之本以益氣行血,環(huán)跳調(diào)和經(jīng)脈、疏通氣血治其標(biāo);四穴相配益氣健脾,滋補(bǔ)腎陰,活血通絡(luò),共奏標(biāo)本同治,扶正祛邪之功效,加之電針具有改善微循環(huán)和血液流態(tài)的作用,更增強(qiáng)其通絡(luò)祛瘀之功,諸穴相配益氣能帶動血液運(yùn)行,養(yǎng)陰能補(bǔ)充血液恢復(fù),活血能改善血液黏稠,通絡(luò)能打開血液通道,推動血液流動[7,8]。由此推測,溫針治療DPN能提高坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度可能是通過改善神經(jīng)、血管的供血和供氧,保護(hù)髓鞘、軸索的結(jié)構(gòu)和功能,刺激軸突的再生而起作用,故可以治療糖尿病周圍神經(jīng)病變。

丙二醛(MDA)為脂質(zhì)過氧化物的最終產(chǎn)物,其水平的高低可反映出組織中脂質(zhì)過氧化物反應(yīng)的程度。SOD是機(jī)體細(xì)胞內(nèi)重要內(nèi)生性的自由基清除酶,是機(jī)體免受氧自由基損害的主要防御酶,催化超氧自由基轉(zhuǎn)化為氧和過氧化氫。SOD活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力,而MDA的高低又間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度;總抗氧化能力(TAOC)測定清楚地顯示糖尿病患者抗氧化防御能力的高低,并且總的抗氧化能力比單個(gè)的抗氧化測定能更好地反應(yīng)抗氧化劑狀態(tài)[9,10]。因此,測定MDA水平、總SOD活性及總抗氧化能力反映了機(jī)體脂質(zhì)過氧化的程度以及機(jī)體清除自由基的能力。所以我們選擇MDA、SOD和TAOC作為本實(shí)驗(yàn)的觀察指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在糖尿病大鼠造模后8星期時(shí)坐骨神經(jīng)中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量均明顯升高,同時(shí)伴隨著SOD和TAOC水平的下降,這一結(jié)果表明機(jī)體內(nèi)氧自由基產(chǎn)生增多和抗氧化防御能力減弱,從而證實(shí)了糖尿病可導(dǎo)致氧化應(yīng)激的產(chǎn)生。本實(shí)驗(yàn)還觀察到溫針治療可顯著降低血清、坐骨神經(jīng)中MDA水平,提高SOD和TAOC水平,提示溫針治療具有抗氧化應(yīng)激的作用。基礎(chǔ)研究表明[11],抗氧化劑可改善神經(jīng)傳導(dǎo)速度、神經(jīng)內(nèi)膜血流及痛覺過敏反應(yīng)。本研究顯示溫針治療有類似抗氧化劑一樣的功能,雖無降糖作用,也可在一定程度上改善氧化應(yīng)激狀態(tài),減輕周圍神經(jīng)的結(jié)構(gòu)和功能損傷,對周圍神經(jīng)起到一定的保護(hù)作用。

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Effect of Warm Needling on Sciatic Nerve Conduction Velocity, MDA, SOD and TOCA in Rats with Diabetic Peripheral Neuropathy

-,-,.

,150001,

To investigate the effect of warm needling on sciatic nerve conduction velocity, oxidation capacity and total antioxidant capacity in rats with diabetic peripheral neuropathy and explore the possible mechanism of warm needling treatment for DPN from neural protection.A rat model of diabetic peripheral neuropathy was made by intramuscular injection of streptozotocin (STZ). The rats were randomly allocated to model, mecobalamin and warm needling groups. The warm needling group received acupuncture at bilateral points Pishu (BL20), Shenshu (BL23), Huantiao (GB30) and Zusanli (ST36) every day. After arrival of qi, moxibustion by igniting the moxa put on the needle handle was performed for 30 min. The mecobalamin group received intramuscular injection of mecobalamin 50mg/kg every day. A normal group was established as a control. The model and normal groups were treated only by binding. Treatment lasted 8 weeks. Before and after treatment, the general state and blood sugar were examined, sciatic nerve conduction velocity was determined and sciatic nerve malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD) and total antioxidant capacity(TAOC) were measured by chemical colorimetry.After treatment, sciatic nerve conduction velocity was significantly higher (＜0.01), MDA levels were significantly lower (＜0.01) and SOD and TAOC levels were significantly higher (＜0.01) in the mecobalamin and warm needling groups than in the blank group. There were also statistically significant differences in the above items between the warm needling and mecobalamin groups (＜0.05).Warm needling can effectively increase sciatic nerve conduction velocity and reduce a nerve injury due to oxidative stress in a rat model of diabetic peripheral neuropathy.

Diabetic neuropathy; Warm needling therapy; Sciatic nerve; Sensory conduction velocity; Total antioxidant capacity

R2-03

A

1005-0957(2011)02-0134-03

10.3969/j.issn.1005-0957.2011.02.134

哈爾濱市科技局科技創(chuàng)新人才研究專項(xiàng)資金優(yōu)秀學(xué)科帶頭人項(xiàng)目(2007RFXXS061)

孫遠(yuǎn)征(1957 - ),男,主任醫(yī)師,博士生導(dǎo)師

2010-08-20