牛布魯氏菌病防控模式新探索

傅 莉，李曉雪

（1. 古浪縣農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心，甘肅 古浪 733101；2. 武威市畜牧獸醫(yī)總站，甘肅 武威 733000）

布魯氏菌能夠引起牛、羊、豬等動(dòng)物和人的布魯氏病，常稱“布病”，是我國二類人畜共患傳染病。主要引起病畜不孕、流產(chǎn)、睪丸炎等和人的似感冒、似風(fēng)濕及流產(chǎn)、不孕等癥狀，不僅在養(yǎng)殖上造成極大的經(jīng)濟(jì)損失，更是嚴(yán)重危害人類健康和公共衛(wèi)生安全。布魯氏菌因其在胞內(nèi)生長繁殖不易被藥物治療、反復(fù)感染和尚未清晰發(fā)病機(jī)制等特點(diǎn)，從1905年被正式報(bào)道至今仍未被消除凈化，目前布魯氏菌的防控已成為動(dòng)物養(yǎng)殖和醫(yī)學(xué)界的共同難題。

近年來，地方政府把養(yǎng)牛產(chǎn)業(yè)作為產(chǎn)業(yè)發(fā)展的“重點(diǎn)工程”，養(yǎng)牛數(shù)量激增造成了更為嚴(yán)峻的疫病防控風(fēng)險(xiǎn)，尤其布病這個(gè)危害性極為嚴(yán)重的人畜共患病。牛布病將會(huì)引起不孕、流產(chǎn)、死胎等，嚴(yán)重影響?zhàn)B牛效益，更會(huì)污染周圍環(huán)境，增加人感染布病的風(fēng)險(xiǎn)，因此牛布病的科學(xué)防控是對畜牧業(yè)持續(xù)發(fā)展和保障人民健康的重要措施之一。本文將對牛布魯氏菌病的防控模式進(jìn)行探索，以期在布病防控中找到效果好、成本低、易操作的防控方式。

1 構(gòu)建生物安全體系

牛布魯氏菌病的生物安全體系的構(gòu)建包括養(yǎng)牛、產(chǎn)品加工和銷售運(yùn)輸?shù)雀鱾€(gè)環(huán)節(jié)；還包括牛場的選址布局和周邊環(huán)境、硬件設(shè)施設(shè)備和軟件飼養(yǎng)管理、人員車輛和環(huán)境衛(wèi)生消毒、病死畜和排泄物或污染物的無害化處理等。構(gòu)建合格的布魯氏菌病生物安全體系能夠有效避免布魯氏菌入侵，減少牛的患病幾率，從而降低布病感染造成的損失和風(fēng)險(xiǎn)，在源頭做好布病防控。

1.1 牛場設(shè)計(jì)與環(huán)境 參照《生鮮乳生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程（試行）》進(jìn)行選擇，包括地勢、水源、土質(zhì)、氣象、交通、周邊環(huán)境等。合理布局，需包括生活管理區(qū)、輔助生產(chǎn)區(qū)、生產(chǎn)區(qū)、糞污處理區(qū)和病畜隔離區(qū)等功能區(qū)，需做好道路、牛舍、牛床、水質(zhì)、運(yùn)動(dòng)場、排水、糞污處理等場地設(shè)施。

1.2 配套設(shè)施設(shè)備 配套生產(chǎn)設(shè)施有飼草飼料加工投喂設(shè)施、通風(fēng)及照明設(shè)施、雨水和污水分離的排水設(shè)施及消毒設(shè)施，場區(qū)入口和生產(chǎn)區(qū)入口處均需設(shè)置車輛消毒池或噴霧式消毒設(shè)備，人員通道需配備蒸汽消毒設(shè)施和消毒地墊，物品消毒間設(shè)有紫外燈、消毒柜或熏蒸設(shè)備，場區(qū)、圈舍內(nèi)備有消毒車和消毒墊等；無害化處理設(shè)施應(yīng)設(shè)有堆糞池、化尸池、焚燒爐或無害化處理暫存區(qū)等。

1.3 飼養(yǎng)管理 分別做好犢牛、青年牛、成年牛的飼養(yǎng)和管理。做好日糧搭配、保證充足的飼料營養(yǎng)和清潔新鮮的飲水供應(yīng)，注意添加維生素和礦物質(zhì)。做好飼草飼料的管理，對購入的青貯飼料、精料、飼料添加劑等進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，做好購買和使用記錄等，將飼料專庫儲(chǔ)存，定期檢查，避免受潮霉變和防蟲防鼠。做好引種管理，正規(guī)渠道購買引入精液、胚胎、種牛等，引種時(shí)注意證章證明等的檢查、驗(yàn)收和保管。對引入牛要進(jìn)行整群檢測，隔離觀察30 d，無發(fā)病死亡等現(xiàn)象方能混群飼養(yǎng)。同時(shí)注意做好圈舍防寒保暖、散熱通風(fēng)、衛(wèi)生打掃、定期消毒。注意牛的健康狀況觀測和記錄。建立自繁自養(yǎng)制度。

1.4 防疫管理

（1）消毒：建立消毒制度。按照消毒技術(shù)規(guī)范采用不同消毒液不同方式對場區(qū)、圈舍、工具、人員、車輛等進(jìn)行消毒。場區(qū)、圈舍每半月至少消毒一次，人員車輛每進(jìn)出一次場區(qū)和生產(chǎn)區(qū)均要消毒，工具使用前后消毒并在平時(shí)做好清潔保管。認(rèn)真做好每次消毒，保證消毒時(shí)間和效果，做到不留死角，并做好消毒記錄。

（2）監(jiān)測：按照《布魯氏菌病防治技術(shù)規(guī)范》根據(jù)地方區(qū)域性和養(yǎng)殖場情況制定布病監(jiān)測計(jì)劃，實(shí)行病原學(xué)監(jiān)測和免疫抗體監(jiān)測。奶畜和種畜每年進(jìn)行2 次陽性檢測，進(jìn)行淘汰和處置。免疫后進(jìn)行抗體檢測，不合格的及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免。

（3）免疫：做好布病免疫，建立免疫制度、科學(xué)制定免疫程序、建立免疫檔案，使用農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)的布病疫苗，實(shí)行區(qū)域性強(qiáng)制免疫，奶牛原則上不免疫（泌乳期奶牛禁止免疫），免疫后要進(jìn)行抗體效價(jià)檢測。

1.5 無害化處理 需按照《病害動(dòng)物和病害動(dòng)物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程》和《糞便無害化衛(wèi)生要求》對病原學(xué)陽性牛及其產(chǎn)品和污染物、牛群糞污等進(jìn)行無害化處理。

1.6 制度運(yùn)行管理 制定生物安全、人員車輛、無害化處理等管理制度并嚴(yán)格按照制度維護(hù)運(yùn)行。有專人負(fù)責(zé)生物安全管理，對場區(qū)人員進(jìn)行生物安全知識(shí)、疫病防控、消毒、飼養(yǎng)技術(shù)等的培訓(xùn)和考核；建立人員健康檔案，禁止人畜共患病人員進(jìn)行生產(chǎn)工作；做好生產(chǎn)人員和防疫人員的安全防護(hù)工作，避免人員被感染；建立車輛流通管理制度，防止外來車輛攜帶病原菌造成風(fēng)險(xiǎn)隱患；配備專職獸醫(yī)人員，對布病進(jìn)行監(jiān)測和診斷。

2 免疫接種

控制布病的最佳方式是免疫接種，目前所用的疫苗多為弱毒疫苗。雖然具有較好的免疫效果，但存在毒力返強(qiáng)、引發(fā)孕畜流產(chǎn)、疫苗感染人和無法區(qū)分自然感染等缺點(diǎn)。因此，學(xué)者們開啟了向低毒力、高免疫性、能區(qū)分自然感染等的布魯氏菌疫苗新的研究方向。

研究人員對布魯氏菌的探索從病原學(xué)診斷到疫苗免疫及監(jiān)測，從基因型分類到機(jī)體作用機(jī)制逐步深入。標(biāo)記疫苗有望滿足安全性、保護(hù)性、功能性俱佳的條件，尤其是基因缺失疫苗幾乎完全符合學(xué)者們的期盼，成為了近年來的研究熱點(diǎn)。目前我國已成功上市了牛布氏菌病活疫苗（A19-△VirB12株），其特點(diǎn)為低毒、有效、能鑒別野毒感染。

2.1 A19- △VirB12 株疫苗 VirB12 蛋白是布魯氏菌免疫蛋白中IV 型分泌系統(tǒng)（T4SS）的成員。IV 型分泌系統(tǒng)（T4SS）是幫助布魯氏菌在巨噬細(xì)胞中定植、逃避溶酶體降解的一個(gè)復(fù)合蛋白體，包括VirB1～VirB12 共12 種蛋白，是布魯氏菌的關(guān)鍵的毒力因子，與布魯氏菌胞內(nèi)復(fù)制和感染相關(guān)。在這12 個(gè)蛋白中有三個(gè)是非必需蛋白，即VirB12 蛋白、VirB1 蛋白、VirB7 蛋白，它們的作用是增強(qiáng)T4SS 分泌和感染細(xì)胞功能。因此VirB12 基因的缺失只會(huì)弱化T4SS 系統(tǒng)的免疫功能，進(jìn)而影響和降低布魯氏菌的毒力，而且不會(huì)改變布魯氏菌菌株的生理和化學(xué)特性，可制成VirB12 基因缺失疫苗。

牛布氏菌病活疫苗（A19-△VirB12 株）是將布魯氏菌A19 株通過現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)敲除VirB12 基因而獲得的基因缺失疫苗。該疫苗于2020年7 月獲得中華人民共和國新獸藥注冊證書《布氏菌病活疫苗（A19-△VirB12 株）》獲批上市。新疆維吾爾自治區(qū)畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所和天康生物制藥有限公司已對該基因缺失疫苗進(jìn)行了十余年的研究、試驗(yàn)和論證，證實(shí)了該疫苗的安全性和有效性。同時(shí)，該疫苗為我國第一株可以鑒別牛布魯氏菌疫苗免疫和野毒株天然感染的疫苗。

2.2 疫苗免疫和野毒株天然感染的鑒別 牛布氏菌病活疫苗（A19-△VirB12 株）可以利用VirB12 蛋白的表達(dá)與否來鑒別天然感染的野毒株和疫苗免疫，具有鑒別功效。鐘旗等建立了用A19-ΔVirB12 株中因敲除基因無法表達(dá)的VirB12 蛋白作為標(biāo)記抗原的一種間接ELISA 方法，目的用于鑒別和區(qū)分牛布魯氏菌A19-ΔVirB12 疫苗免疫所產(chǎn)生的抗體和天然感染產(chǎn)生的抗體。任立松等發(fā)明建立了將VirB12 蛋白、BMEI 1330（內(nèi)參蛋白）兩個(gè)蛋白按比例混合后作為酶標(biāo)底物的一種間接ELISA 技術(shù)同樣可以鑒別和區(qū)分布魯氏菌病A19-ΔVirB12 疫苗的免疫與天然野毒株感染，且已經(jīng)組裝成了標(biāo)準(zhǔn)試劑盒。

2.3 免疫程序 牛布氏菌病活疫苗（A19-△VirB12株）用于預(yù)防牛布魯氏菌病，免疫有效期為12 個(gè)月。疫苗免疫后15～180 d 可用ELISA（VirB12）方法區(qū)分本疫苗和野毒株感染。3～8 月齡皮下注射5 mL/頭，根據(jù)抗體水平和布魯氏菌病流行情況進(jìn)行補(bǔ)免。疫苗2～8 ℃或-15 ℃條件下貯存，有效期為12 個(gè)月，需冷藏運(yùn)輸。免疫疫苗時(shí)要注意人員配備和防護(hù)，對使用過的一次性用品、疫苗空瓶等進(jìn)行無害化處理。

3 政府引導(dǎo)

政府部門對本地區(qū)牛布魯氏菌病的發(fā)生流行情況進(jìn)行檢測和調(diào)查，根據(jù)實(shí)際情況制定牛布病防控實(shí)施方案，提出防控目標(biāo)、防控機(jī)制、防控措施，需投入大量資金用以布病防控。布病防控的基本原則堅(jiān)持人病獸防、關(guān)口前移、堅(jiān)持科技引領(lǐng)，推動(dòng)畜間布病快速鑒別診斷技術(shù)和防控模式創(chuàng)新應(yīng)用。政府部門在布病監(jiān)測排查、強(qiáng)制免疫和評價(jià)、布病凈化和無疫小區(qū)建設(shè)、調(diào)運(yùn)監(jiān)管、基層動(dòng)物防疫檢疫人員生物安全防護(hù)、布病防治和群眾知識(shí)普及等方面需加強(qiáng)組織領(lǐng)導(dǎo)、保障經(jīng)費(fèi)投入、強(qiáng)化部門協(xié)作。

4 討論與結(jié)論

布魯氏菌病的防控已成為世界難題，尤其在人畜共患病方面。因人的布魯氏菌病無法根除治療，給患者的身心造成了嚴(yán)重的傷害。2022 年我國報(bào)道的人間布病71437 例，較2021 年增加了1670 例，可見我國人間布病仍在增加，防控形勢依然嚴(yán)峻。在人畜共患病防控方面，我國提出“人病獸防、關(guān)口前移”，因此做好畜間布病的防控對人間布病的控制尤為重要。

當(dāng)前，畜牧業(yè)發(fā)展日新月異，奶牛產(chǎn)業(yè)勢頭正盛、肉牛產(chǎn)業(yè)蒸蒸日上，而疫病防控風(fēng)險(xiǎn)也伴隨提高，集約化、數(shù)字化、綜合化的規(guī)模養(yǎng)牛場已成為市場主力。規(guī)模養(yǎng)牛場在牛的健康養(yǎng)殖上越發(fā)積極，在疫病防控上越發(fā)重視，且牛場的管理制度也越發(fā)健全完善，尤其在牛場的生物安全管理上越發(fā)科學(xué)規(guī)范。做好生物安全管理和生物安全體系建設(shè)是更直接、更有效、更低成本的防控疫病、保障養(yǎng)殖、增加效益的方法，因此，做好牛的布病的防控首先要做好生物安全體系建設(shè)。生物安全體系建設(shè)不僅可以有效控制牛布病發(fā)生和流行，也能做好其他疫病的防制。

疫苗不僅可以保障規(guī)模場牛的養(yǎng)殖，更能保障無法建立生物安全體系的散養(yǎng)戶牛的健康養(yǎng)殖和利益。牛布魯氏菌疫苗的使用是現(xiàn)階段我國防控牛布病的主要方法，能夠很好的預(yù)防牛感染布病。我國牛布魯氏菌疫苗的安全性、穩(wěn)定性、有效性越來越高，新型疫苗的研制使疫苗的可供選擇性也越來越多，這對牛布病防控來說及其有利。

奶牛原則上不免疫布魯氏菌疫苗，為保障奶牛健康除了做好生物安全體系建設(shè)外，更應(yīng)該做好布病凈化。布病凈化可以依據(jù)完善的法律法規(guī)，采取“檢測- 撲殺- 無害化處理- 監(jiān)測- 凈化”的技術(shù)路線和科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)脑u估方式，建立布病凈化場和無疫小區(qū)。肉牛養(yǎng)殖場也應(yīng)當(dāng)建立凈化制度，做好凈化管理。布魯氏菌病的凈化將成為布病防控今后一個(gè)階段的主要目標(biāo)和任務(wù)。

牛布魯氏菌病的防控模式可從建立生物安全體系、新型疫苗利用、布病凈化和政府政策等方面進(jìn)行探索，尋找出實(shí)際可行的防控新模式。