隔藥餅灸對(duì)慢性疲勞綜合征大鼠免疫蛋白及T細(xì)胞調(diào)節(jié)因子Tim-3、LAG-3的影響?

徐小珊,熊羅節(jié),馬 偉,翟春濤,李 瑋,田岳鳳△

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿與康復(fù)學(xué)院,長(zhǎng)沙 410208;2.山西中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床學(xué)院,山西晉中 030619)

慢性疲勞綜合征(chronic fatigue syndrome,CFS)是屬于亞健康狀態(tài)的一種特殊表現(xiàn),又稱第三狀態(tài),也稱病前狀態(tài)、灰色狀態(tài)、潛病期、亞臨床期、臨床前期等,可見(jiàn)無(wú)明顯誘因且休息后無(wú)法緩解的疲勞?；颊呱袩o(wú)臨床癥狀或癥狀感覺(jué)輕微,但已出現(xiàn)潛在病理信息,常伴免疫力低下。團(tuán)隊(duì)前期研究表明隔藥餅灸對(duì)機(jī)體免疫功能有顯著調(diào)節(jié)作用[1],但具體機(jī)制尚不明確,本次實(shí)驗(yàn)采用力竭游泳與慢性束縛交替的方法復(fù)制CFS大鼠模型,觀察隔藥餅灸“神闕”“關(guān)元”“足三里”“期門”對(duì)CFS大鼠血清中免疫球蛋白(Ig)A、IgG、補(bǔ)體C3以及肌肉組織中T淋巴細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白(T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein, Tim)-3、淋巴細(xì)胞活化基因(lymphocyte-activation gene,LAG)-3的影響,從而探討隔藥餅灸的免疫干預(yù)效應(yīng)。本研究通過(guò)山西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),編號(hào):2020DW009。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠50只,雌雄各半,體質(zhì)量(200±20)g,購(gòu)自斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司,動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(京)2019-0010。大鼠飼養(yǎng)于山西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房,環(huán)境溫度20～25 ℃,濕度30%～50%,鼠籠與水壺定時(shí)清洗并消毒,墊料及時(shí)更換,保證環(huán)境清潔與空氣流通。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物的各項(xiàng)處理均嚴(yán)格遵守2006年發(fā)布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》[2]。

1.2 主要儀器與試劑

蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色液(貨號(hào)BA4025),珠海貝索BASO公司;封片劑(貨號(hào)10004160),上海國(guó)藥廠;酶聯(lián)免疫IgA(貨號(hào)MM-0062R1)、IgG(貨號(hào)MM-0064R1)、補(bǔ)體C3(貨號(hào)MM-0353R1)試劑盒,上海酶聯(lián)生物科技有限公司;Trizol試劑盒(貨號(hào)B511321),上海生工生物工程股份有限公司;瓊脂糖B(貨號(hào)A600014)、核酸染色劑(貨號(hào)A606695),香港(中國(guó))BBI生命科學(xué)公司;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號(hào)EP0743)、熒光定量PCR試劑盒(貨號(hào)B300721),美國(guó)賽默飛世爾科技公司。

ZH-YLS-181型懸尾測(cè)定儀,安徽正華生物儀器設(shè)備有限公司;OFT-100型曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱,成都泰盟軟件有限公司;SM600型酶標(biāo)儀,上海永創(chuàng)醫(yī)療器械有限公司;CX41型生物顯微鏡,中國(guó)奧林巴斯有限公司;DYY-6C型電泳儀,北京六一生物科技有限公司;FR980型凝膠成像系統(tǒng),上海復(fù)日科技有限公司;SMA4000型微量分光光度計(jì),北京美林恒通科技有限公司;LightCycler480 Ⅱ型熒光定量PCR儀,瑞士Rotkreuz公司。

1.3 艾灸與藥餅材料制備

艾絨(國(guó)藥準(zhǔn)字Z32020253),江蘇康美制藥有限公司;艾炷:用模具制成底徑約0.5 cm、高0.7 cm,質(zhì)量約(0.052±0.015)g的圓錐形艾炷,備用。

逍遙散組方:柴胡、白芍、當(dāng)歸、茯苓、白術(shù)各30 g,炙甘草15 g,薄荷10 g,燒生姜10 g,中藥飲片購(gòu)自山西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院。按組方劑量打碎成粉末,過(guò)90目篩,將藥粉與賦型劑按1:1比例調(diào)勻成泥狀,用模具制備為底徑0.8 cm,高0.2 cm,質(zhì)量(0.12±0.03)g的藥餅,牙簽刺5個(gè)小孔,備用。假藥餅只用賦型劑制備,方法同隔藥餅。

1.4 中藥懸濁液制備

按70 kg成人每日臨床用量9 g為標(biāo)準(zhǔn),大鼠的等效劑量相當(dāng)于人的6.3倍,可得逍遙散懸濁液的濃度約為60 mg/kg。將逍遙散組方藥粉按比例配制成懸濁液,備用。

2 方法

2.1 造模方法

根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為空白組、模型組、隔藥餅灸組、假藥餅灸組、中藥灌胃組,共5組,每組10只。適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后,對(duì)除空白組外其余4組大鼠進(jìn)行CFS造模,依據(jù)文獻(xiàn)選擇復(fù)合造模方法,21 d內(nèi)施加力竭游泳(身體疲勞)與慢性束縛(心理疲勞)2種造模因素[3-5]。造模后行為學(xué)檢測(cè)(曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)與懸尾實(shí)驗(yàn))結(jié)果顯示模型組大鼠各項(xiàng)指標(biāo)均發(fā)生顯著變化,提示造模成功。

力竭游泳模型制備方法:每日上午9:00,大鼠在自制游泳箱中自由游泳,游泳時(shí)水深約30 cm,水溫(22±3)℃,以大鼠游泳動(dòng)作明顯失調(diào)或頭部沉入水中10 s不能浮出水面為力竭標(biāo)準(zhǔn)。

慢性束縛模型制備方法:將大鼠放入自制束縛筒內(nèi),關(guān)閉閘門并收緊瓶身,限制活動(dòng)。每日下午1:00開(kāi)始,每次束縛3 h。束縛期間注意觀察大鼠狀態(tài),避免其因情緒過(guò)度緊張或呼吸不暢死亡。

2.2 干預(yù)方法

造模結(jié)束后第2天開(kāi)始干預(yù)治療,空白組和模型組大鼠不做任何干預(yù)。

隔藥餅灸組:使用之前制備好的藥餅與艾炷,選取大鼠“神闕”“關(guān)元”“足三里(雙)”“期門(雙)”共6個(gè)穴位,治療前將各穴位處毛剪去,放置藥餅與艾炷,點(diǎn)燃艾炷、燃盡更換,每穴灸5壯,每日灸,連灸10 d。穴位定位參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》常用動(dòng)物穴位定位法以及擬人比照法[6-7],“神闕”位于大鼠臍正中央;“關(guān)元”位于臍下約25 mm處,大鼠第3、第4對(duì)乳頭連線中點(diǎn)水平與腹白線相交處;“足三里”位于膝關(guān)節(jié)后外側(cè),腓骨小頭下約5 mm處,左右各一穴;“期門”位于胸側(cè)部第6肋間,肋骨與肋軟骨交界處,左右各一穴。

假藥餅灸組:與隔藥餅灸組干預(yù)方法相同,穴位處放置賦形劑制備的假藥餅,每穴灸5壯,每日灸,連續(xù)10 d。

中藥灌胃組:使用制備好的逍遙散懸濁液,在艾灸治療基礎(chǔ)上每日按大鼠體質(zhì)量進(jìn)行灌胃給藥,連續(xù)10 d。

2.3 樣品采集及處理

干預(yù)治療結(jié)束后次日,將大鼠麻醉后迅速腹主動(dòng)脈取血,取上清液于-20 ℃保存待測(cè)。同時(shí)取大鼠肝臟、脾臟及雙側(cè)股四頭肌組織,置于0.9%氯化鈉溶液中清洗至表面無(wú)血跡,并用濾紙吸干。肝臟、脾臟組織置于4%多聚甲醛溶液中固定,用于常規(guī)HE染色。股四頭肌組織置于液氮中凍存,用于熒光定量PCR檢測(cè)。

2.4 指標(biāo)檢測(cè)

2.4.1 血清中IgA、IgG及補(bǔ)體C3的含量 采用ELISA法測(cè)定各組大鼠血清中IgA、IgG及補(bǔ)體C3的含量,具體步驟參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

2.4.2 大鼠肝臟、脾臟組織病理學(xué)變化 從4%多聚甲醛溶液中取出各組大鼠肝臟、脾臟組織,梯度脫水,二甲苯透明,石蠟包埋,切片(3～5 μm),常規(guī)HE染色,顯微鏡下觀察病理學(xué)變化。

2.4.3 肌肉組織Tim-3、LAG-3 mRNA水平 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法,將各組大鼠冰凍的股四頭肌組織用Trizol法進(jìn)行總RNA提取,反轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)的cDNA并設(shè)定反應(yīng)條件后擴(kuò)增。以β-actin為內(nèi)參,所得數(shù)據(jù)用2-△△Ct法進(jìn)行mRNA相對(duì)定量分析。引物序列見(jiàn)表1。

表1 引物序列表

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1.1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 與空白組比較,模型組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)水平跨格數(shù)與站立次數(shù)顯著降低(P<0.05);與模型組比較,隔藥餅灸組與中藥灌胃組大鼠水平跨格數(shù)與站立次數(shù)均顯著升高(P<0.05),且2組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);假藥餅灸組與模型組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1.2 懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果 與空白組比較,模型組大鼠懸尾實(shí)驗(yàn)掙扎次數(shù)顯著減少,不動(dòng)時(shí)間明顯增加(P<0.05);與模型組比較,隔藥餅灸組、假藥餅灸組與中藥灌胃組大鼠掙扎次數(shù)明顯上升,不動(dòng)時(shí)間顯著下降(P<0.05);隔藥餅灸組與中藥灌胃組比較,大鼠掙扎次數(shù)與不動(dòng)時(shí)間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與假藥餅灸組比較,隔藥餅灸組與中藥灌胃組大鼠掙扎次數(shù)上升(P<0.05),但不動(dòng)時(shí)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.2 ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與空白組比較,模型組大鼠血清IgA、IgG與補(bǔ)體C3含量明顯降低(P<0.05);與模型組比較,隔藥餅灸組與中藥灌胃組大鼠血清IgA、IgG與補(bǔ)體C3含量均明顯升高(P<0.05);與中藥灌胃組比較,隔藥餅灸組大鼠血清IgA、IgG含量升高(P<0.05),補(bǔ)體C3含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);假藥餅灸組與模型組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠血清IgA、IgG、補(bǔ)體C3含量比較

3.3 HE染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.3.1 肝臟組織病理結(jié)果 空白組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整且清晰,以中央靜脈為中心向四周放射狀排列,同時(shí)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,肝竇正常,胞核結(jié)構(gòu)清晰,核大,呈圓形;模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)較完整,肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)模糊,肝細(xì)胞排列基本整齊,可見(jiàn)散在細(xì)胞體積縮小,胞質(zhì)密度增加,核質(zhì)濃縮,核膜核仁破碎,偶爾可見(jiàn)凋亡小體;隔藥餅灸組與中藥灌胃組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)與空白組相近,肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)基本整齊,偶見(jiàn)細(xì)胞體積縮小,核質(zhì)濃縮;假藥餅灸組大鼠肝細(xì)胞索排列不清,可見(jiàn)部分肝細(xì)胞體積增大,出現(xiàn)水腫,見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠肝臟組織HE染色結(jié)果比較(×200)

3.3.2 脾臟組織病理結(jié)果 空白組大鼠脾臟組織白髓結(jié)構(gòu)完整,數(shù)量多且形態(tài)較規(guī)則,紅白髓分界較清楚,脾小節(jié)較大,淋巴細(xì)胞密集。模型組大鼠白髓數(shù)量明顯減少且結(jié)構(gòu)不規(guī)則,淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯減少,脾小節(jié)明顯縮小,紅白髓移行區(qū)消失,紅白髓交織在一起,白髓數(shù)量減少,部分被紅髓替代。隔藥餅灸組與中藥灌胃組大鼠白髓結(jié)構(gòu)較完整,紅髓數(shù)量有所上升,形態(tài)較規(guī)則,呈現(xiàn)過(guò)渡階段,脾小節(jié)較空白組有輕微變小,淋巴細(xì)胞密度較大,總體具有明顯的紅白髓移行區(qū),但部分紅白髓分界不明。假藥餅灸組大鼠淋巴細(xì)胞數(shù)量較模型組增加不明顯,脾小節(jié)變小,紅白髓交織且白髓結(jié)構(gòu)不規(guī)則,見(jiàn)圖2。

圖2 各組大鼠脾臟組織HE染色結(jié)果比較(×200)

3.4 熒光定量PCR結(jié)果

與空白組比較,模型組大鼠股四頭肌Tim-3、LAG-3 mRNA水平顯著升高(P<0.05);與模型組比較,隔藥餅灸組與中藥灌胃組大鼠股四頭肌Tim-3、LAG-3 mRNA水平顯著降低(P<0.05),假藥餅灸組Tim-3 mRNA水平降低(P<0.05);隔藥餅灸組與中藥灌胃組組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表5。

表5 各組大鼠股四頭肌Tim-3、LAG-3 mRNA水平比較

4 討論

CFS患者常出現(xiàn)無(wú)明顯原因的持續(xù)或間斷性發(fā)作疲勞(>6個(gè)月),且常伴低熱、肌肉酸痛、睡眠質(zhì)量下降等癥狀[8]。目前對(duì)于CFS發(fā)病機(jī)制的研究結(jié)果尚不明確,研究者認(rèn)為與多系統(tǒng)失調(diào)相關(guān),可能為免疫系統(tǒng)紊亂、神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)失調(diào)、能量代謝異常、心血管系統(tǒng)異常等復(fù)合作用導(dǎo)致[9]。免疫系統(tǒng)和全身能量代謝處于低水平狀態(tài)時(shí),患者往往易產(chǎn)生疲勞癥狀,進(jìn)而影響其神經(jīng)與心血管功能,導(dǎo)致認(rèn)知功能出現(xiàn)障礙,影響患者日常工作與生活[10-11]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)CFS尚無(wú)針對(duì)性強(qiáng)的治療手段,多采用補(bǔ)充維生素等營(yíng)養(yǎng)療法、抗抑郁藥物以及多種非藥物療法,但療效仍存在一定局限性[12]。而中醫(yī)治療CFS效果較好,使用中藥或針灸治療能調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫,提高機(jī)體免疫力,減輕神疲乏力、抑郁易怒等癥狀,恢復(fù)機(jī)體活力[13-14]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,CFS根據(jù)其主要臨床表現(xiàn),被稱為“郁證”“虛勞”,其病機(jī)多為本虛標(biāo)實(shí),主要與肝、脾密切相關(guān),臨床最常見(jiàn)的證型則為肝郁脾虛。《素問(wèn)·五藏生成論篇》曰“肝受血而能視”,體現(xiàn)了肝藏血主疏泄功能保障人體正常的生命活動(dòng),肝氣不舒則情志不調(diào),容易出現(xiàn)焦慮抑郁的狀態(tài)。脾主四肢肌肉,“脾氣虛則四肢不用”,脾虛則筋脈失養(yǎng)、氣血生化乏源,而見(jiàn)神疲乏力、不欲動(dòng)。因此在臨床應(yīng)對(duì)癥治療,疏肝氣以調(diào)暢情志,補(bǔ)脾氣以充氣血,可以采用疏肝解郁、補(bǔ)氣和血的逍遙散組方。逍遙散作為經(jīng)方,由甘草、茯苓、當(dāng)歸、白芍、白術(shù)、柴胡組成,善治肝郁脾虛證,對(duì)肝氣郁結(jié)所致的咽干口燥、兩脅作痛與脾虛所致的疲勞難愈、氣血虧虛都有較好的改善效果[15-16]。另一方面,實(shí)驗(yàn)選取“神闕”“關(guān)元” “足三里”“期門”穴共同配合來(lái)干預(yù)CFS?！吧耜I” “關(guān)元”均為任脈之所屬,神闕穴與任、督、沖脈等相關(guān)進(jìn)而統(tǒng)屬全身經(jīng)絡(luò),為人體生命之門,有調(diào)氣補(bǔ)脾、強(qiáng)壯保健之效,關(guān)元穴為足三陰經(jīng)交會(huì)之處,《醫(yī)經(jīng)理解》認(rèn)為關(guān)元穴為“男子藏精,女子蓄血之處。是人生之關(guān)要,真元之所存也”,可培本固元、補(bǔ)益元?dú)?。足三里為足?yáng)明胃經(jīng)之合穴,善補(bǔ)益脾氣、調(diào)理脾胃,可以有效增強(qiáng)人體免疫力,抵抗疲勞[17-18]。另期門穴為肝經(jīng)之募穴,有健脾疏肝、理氣活血的作用,針刺期門可以有效緩解CFS患者抑郁焦慮的精神狀態(tài)[19]。

本實(shí)驗(yàn)采用隔藥餅灸的方法,將逍遙散組方藥按標(biāo)準(zhǔn)制成藥餅,并將其置于大鼠“神闕” “關(guān)元” “足三里” “期門”等穴位上。研究結(jié)果顯示:隔藥餅灸相較于單純艾灸療效更佳,除艾灸的熱效應(yīng)外,逍遙散組方藥物透皮吸收后能夠更好地發(fā)揮療效,針對(duì)性改善CFS肝郁脾虛證。同時(shí)隔藥餅灸相較于單純口服中藥,加入了艾灸帶來(lái)的溫?zé)岽碳ば?yīng),艾灸本就具有溫通經(jīng)脈、調(diào)和氣血作用,熱力熏蒸能促進(jìn)機(jī)體透過(guò)皮膚對(duì)藥物進(jìn)行吸收,還能使藥效經(jīng)穴位、經(jīng)絡(luò)傳輸,刺激人體產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng),有效抵御病邪,增強(qiáng)抵抗力。正如《靈樞·官能》所云“針?biāo)粸?灸之所宜”,隔藥餅灸療法集藥物、穴位、艾灸三者作用于一體,藥效進(jìn)一步深入人體各臟腑,能夠調(diào)節(jié)免疫球蛋白濃度從而提高免疫力,增強(qiáng)免疫功能[20-21]。

根據(jù)CFS的發(fā)病機(jī)制假說(shuō),本次實(shí)驗(yàn)主要研究隔藥餅灸能否通過(guò)干預(yù)免疫系統(tǒng)中紊亂的免疫球蛋白與T細(xì)胞調(diào)節(jié)因子,進(jìn)而影響CFS發(fā)展進(jìn)程。IgA、IgG是體液免疫的重要防線,與相應(yīng)抗原結(jié)合后可以激活補(bǔ)體,IgA為黏膜防御系統(tǒng)的重要成分,IgG的主要功能為抗感染[22]。而補(bǔ)體C3作為血清中含量最高的補(bǔ)體成分,是補(bǔ)體激活途徑中最重要的環(huán)節(jié),參與機(jī)體的特異性免疫[23]。它們的含量與機(jī)體免疫水平存在一定因果關(guān)系,也是實(shí)驗(yàn)中常用的免疫學(xué)指標(biāo)。

有實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)艾灸“關(guān)元”穴能有效升高CFS模型大鼠血清中的IgA、IgG與補(bǔ)體C3水平,提示艾灸可以提高CFS大鼠的免疫功能,且與穴位配伍能使療效更優(yōu)[24]。另有研究觀察在CFS疾病發(fā)展過(guò)程中,IgA、IgG、IgM的含量可以作為突出指標(biāo),來(lái)觀測(cè)針灸對(duì)疾病的治療效果[25]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與單純中藥灌胃和假藥餅灸相比,隔藥餅灸更能有效恢復(fù)CFS大鼠免疫球蛋白IgA、IgG、補(bǔ)體C3的含量,提示隔藥餅灸干預(yù)手段可能通過(guò)調(diào)節(jié)體液免疫、增強(qiáng)免疫功能來(lái)達(dá)到治療CFS的目的。

Tim-3基因是癌癥研究常觀察的靶點(diǎn)之一,在多種T細(xì)胞上均可存在,被認(rèn)為可以提高癌癥免疫治療的療效,并被探討是否可以作為治療癌癥的新方法[26-27]。Tim-3存在于巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、CD4+T、CD8+T上,影響細(xì)胞凋亡與吞噬[28],同時(shí)它作為免疫負(fù)調(diào)節(jié)因子,能有效調(diào)控T細(xì)胞的增殖與分化,抑制T細(xì)胞的免疫應(yīng)答,誘導(dǎo)免疫耐受,與多種自身免疫性疾病、免疫衰竭疾病相關(guān)[29]。本次實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Tim-3基因表達(dá)后發(fā)現(xiàn),這種T細(xì)胞表面抑制性分子在CFS模型大鼠肌肉組織中出現(xiàn)表達(dá)上調(diào)現(xiàn)象,經(jīng)隔藥餅灸治療后下降,說(shuō)明隔藥餅灸可能阻斷Tim-3基因表達(dá),調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫進(jìn)而抑制疾病的發(fā)生發(fā)展,有助于CFS疾病免疫耐受的恢復(fù),為后續(xù)實(shí)驗(yàn)與臨床研究提供了新的思路。

LAG-3作為重要的免疫調(diào)控分子,主要表達(dá)于自然殺傷細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞,以及活化的T細(xì)胞上,是單鏈跨膜蛋白,與主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類分子(major histocompatibility complex,MHC-Ⅱ)結(jié)合共同抑制T細(xì)胞活化[30]。LAG-3作為新興的免疫檢查點(diǎn),與特異性T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)相關(guān),屬于免疫負(fù)調(diào)節(jié)因子[31]。本次研究發(fā)現(xiàn)隔藥餅灸能下調(diào)CFS模型大鼠LAG-3 mRNA表達(dá),再次證明隔藥餅灸增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的效果顯著。

綜上所述,本研究結(jié)果提示隔藥餅灸可以明顯緩解CFS大鼠疲勞狀態(tài),且對(duì)免疫系統(tǒng)具有正向刺激作用,能夠提升IgA、IgG、補(bǔ)體C3的含量,下調(diào)Tim-3、LAG-3 mRNA的表達(dá)水平,同時(shí)改善肝脾組織病理形態(tài),這可能是隔藥餅灸改善CFS的作用機(jī)制之一。