紅棗多糖對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能、抗氧化和免疫能力的影響

朱方超

（泰州醫(yī)藥高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)（泰州市高港區(qū)）畜牧獸醫(yī)站，江蘇 泰州 225326 ；揚(yáng)州大學(xué)農(nóng)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009）

植物提取物是動(dòng)物飼料中重要的外源添加劑。隨著農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第194 號(hào)公告明令禁止抗生素在動(dòng)物生產(chǎn)中使用，植物提取物的市場(chǎng)規(guī)模迅速擴(kuò)大。植物提取物可以動(dòng)物的生產(chǎn)性能和免疫力，在動(dòng)物生產(chǎn)中正逐漸擴(kuò)大應(yīng)用范圍。仔豬養(yǎng)殖是生豬養(yǎng)殖過(guò)程中的重要環(huán)節(jié)，仔豬斷奶后容易產(chǎn)生斷奶應(yīng)激。斷奶后仔豬缺少來(lái)自母體的免疫球蛋白的補(bǔ)充，免疫力降低，會(huì)引起食欲不振、腹瀉等狀況，對(duì)后續(xù)的生長(zhǎng)產(chǎn)生嚴(yán)重影響。補(bǔ)充抗生素一直是維持仔豬生長(zhǎng)安全的重要手段，抗生素的禁用使仔豬養(yǎng)殖面臨巨大挑戰(zhàn)，尋找抗生素替代品迫在眉睫。

紅棗是鼠李科棗屬植物，具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。紅棗富含維生素和多種活性物質(zhì)，在中醫(yī)藥典中是常見(jiàn)的一味中藥。紅棗主要在新疆地區(qū)種植，紅棗產(chǎn)量逐漸遞增，2019 年新疆地區(qū)的紅棗產(chǎn)量已經(jīng)高達(dá)270 萬(wàn)t，模型預(yù)測(cè)2023 年紅棗產(chǎn)量將達(dá)到645 萬(wàn)t。由于紅棗的儲(chǔ)存不便和產(chǎn)量遞增，紅棗將面臨供過(guò)于求。對(duì)紅棗的進(jìn)行開(kāi)發(fā)利用是解決紅棗囤積的關(guān)鍵。紅棗作為一味中藥，得益于豐富的維生素和各種活性物質(zhì)，紅棗具有了增強(qiáng)免疫力的功能。多糖是重要的一種植物次生代謝物，具有抗氧化、抗炎和增強(qiáng)免疫力的功能。在抗生素禁用的環(huán)境下，用多糖提高動(dòng)物的機(jī)體免疫力是一個(gè)重要的研究方向。多項(xiàng)研究表明植物多糖可以提高動(dòng)物的免疫力。紅棗多糖提取方式簡(jiǎn)便，熱水浸提即可獲得紅棗多糖，非常適用于經(jīng)濟(jì)不發(fā)達(dá)的地區(qū)。在紅棗產(chǎn)量劇增的情況下，紅棗開(kāi)發(fā)刻不容緩，紅棗多糖將會(huì)在動(dòng)物生產(chǎn)中嶄露頭角。但目前關(guān)于紅棗多糖在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用較少，缺乏足夠的科學(xué)依據(jù)支撐紅棗多糖的發(fā)展。本文以紅棗多糖為試驗(yàn)材料，斷奶仔豬作為試驗(yàn)動(dòng)物，研究紅棗多糖對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、抗氧化和免疫能力的影響，為紅棗多糖的利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

紅棗多糖使用熱水浸提法進(jìn)行提取，料液比為1 ∶10，提取溫度80℃，浸提3 h，利用淀粉富集多糖，之后濃縮干燥獲得紅棗多糖。硫酸苯酚法測(cè)定多糖含量為35%，其余為淀粉64%，1%為黃酮和皂苷等物質(zhì)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取體重相近的35 日齡的仔豬40 頭，仔豬品種為“杜長(zhǎng)大”。將這批仔豬隨機(jī)分成4 組，每組10頭。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧；低濃度組飼喂添加0.25%紅棗多糖的基礎(chǔ)日糧；中濃度組飼喂添加0.5%紅棗多糖的基礎(chǔ)日糧；高濃度組飼喂添加1%紅棗多糖發(fā)基礎(chǔ)日糧。基礎(chǔ)日糧成分見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)日糧組成

表2 結(jié)腸基因序列

1.3 試驗(yàn)飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在泗洪縣朱立俊生豬養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行。飼養(yǎng)場(chǎng)地提前消毒殺菌。仔豬先進(jìn)行一周適應(yīng)性飼養(yǎng)，正式飼養(yǎng)期五周，自由采食和飲水。

1.4 指標(biāo)測(cè)定及方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定

試驗(yàn)仔豬在正式飼養(yǎng)試驗(yàn)期的第一天和最后一天進(jìn)行空腹稱重。每天對(duì)投入料和剩料進(jìn)行稱重統(tǒng)計(jì)。計(jì)算日平均采食量、平均日增重和料重比。

1.4.2 血清和肝臟指標(biāo)測(cè)定

飼喂期最后一天，仔豬采血后頸部放血處死，隨后進(jìn)行解剖。血液靜置2.5 h 后3 500 rpm/min 離心5 min，取上層血清于-20℃保存。肝臟和結(jié)腸樣品液氮速凍后-80℃保存。

使用南京建成生物工程研究所有限公司的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）試劑盒測(cè)定抗氧化指標(biāo)，使用免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）試劑盒測(cè)定免疫球蛋白含量。

使用天根生化科技（北京）有限公司的動(dòng)物組織RNA 提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒和熒光定量PCR試劑盒測(cè)定結(jié)腸ZO-1、Occludin 和Claudins 的mRNA 相對(duì)表達(dá)量。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 軟件進(jìn)行單因素方差分析，以P＜0.05 為差異顯著。試驗(yàn)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 紅棗多糖對(duì)生長(zhǎng)性能的影響

由表3 可知，高劑量組和中劑量組的末重、平均日增重和平均日采食量顯著高于對(duì)照組和低劑量組（P＜0.05）。高劑量組和中劑量組的料重比顯著低于對(duì)照組和低劑量組（P＜0.05）。

表3 紅棗多糖對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

2.2 紅棗多糖對(duì)血清抗氧化能力的影響

表4結(jié)果顯示中劑量組和高劑量組的SOD、GSH-Px 和CAT 活性顯著高于對(duì)照組和低劑量組（P＜0.05）。低劑量組的GSH-Px 活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。中劑量組和高劑量組的MDA 含量顯著低于對(duì)照組和低劑量組（P＜0.05）。

表4 紅棗多糖對(duì)仔豬血清抗氧化能力的影響

2.3 紅棗多糖對(duì)肝臟抗氧化能力的影響

表5結(jié)果表明，高劑量組SOD和CAT 活性顯著高于中低劑量組和對(duì)照組（P＜0.05）。中劑量組和高劑量組的GSH-Px 活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。高劑量組的MDA 含量顯著低于對(duì)照組和低劑量組（P＜0.05）。

表5 紅棗多糖對(duì)仔豬肝臟抗氧化能力的影響

2.4 紅棗多糖對(duì)血清免疫指標(biāo)的影響

表6結(jié)果顯示中劑量組和高劑量組的IgA 含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。隨劑量增加，IgG 和IgM 含量上升。高劑量組IgG 和IgM含量顯著高于其余三組（P＜0.05）。TNF-α 含量隨劑量升高而下降，對(duì)照組TNF-α 含量顯著高于高劑量組（P＜0.05）。

表6 紅棗多糖對(duì)仔豬血清免疫能力的影響 g/L

2.5 紅棗多糖對(duì)結(jié)腸緊密連接蛋白的影響

圖1結(jié)果顯示隨紅棗多糖添加劑量升高，結(jié)腸緊密連接蛋白基因ZO-1、Occludin 和Claudin-3 的mRNA 相對(duì)表達(dá)量呈上升趨勢(shì)。高劑量組的ZO-1 相對(duì)表達(dá)量顯著高于中低劑量組和對(duì)照組（P＜0.05）。紅棗多糖添加組Occludin 的mRNA 相對(duì)表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。中劑量組和高劑量組的Claudins-3 相對(duì)表達(dá)量顯著高于對(duì)照組和低劑量組（P＜0.05）。

圖1 紅棗多糖對(duì)結(jié)腸緊密連接蛋白的影響

3 討論

仔豬斷奶后缺少來(lái)自母體的免疫球蛋白補(bǔ)充，對(duì)飼料還沒(méi)有完全適應(yīng)，常常會(huì)發(fā)生腹瀉、采食量下降的狀況，這種情況統(tǒng)稱為斷奶應(yīng)激。嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)?dǎo)致仔豬死亡，產(chǎn)生經(jīng)濟(jì)損失。因此斷奶仔豬養(yǎng)殖是生豬養(yǎng)殖的重要階段。多糖在動(dòng)物中已經(jīng)有多項(xiàng)相關(guān)研究。杜淑慧在21 日齡的仔豬日糧中添加0.2%和0.4%的黃芪多糖，顯著降低了仔豬的平均日增重，降低了料重比。鄭夢(mèng)荷在犢牛日糧中添加枸杞多糖，犢牛的體重和日增重顯著提升，犢牛對(duì)飼料的消化水平也顯著提高。張生楠發(fā)現(xiàn)肉仔雞的日糧中添加750、1 000 mg/kg 的黃花蒿多糖，肉仔雞的平均日增重極顯著提高，料重比顯著降低。本研究中紅棗多糖添加量為0.5%和1%時(shí)，仔豬的平均日增重和平均采食量顯著升高，料重比顯著降低。這是因?yàn)槎嗵蔷哂斜Ｗo(hù)幼齡腸道功能的作用，促進(jìn)幼齡動(dòng)物的腸道發(fā)育和對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。紅棗多糖還具有誘食劑的作用，促進(jìn)了動(dòng)物的采食。結(jié)論表明0.5%和1%的紅棗多糖添加量能提高仔豬的生長(zhǎng)性能。

仔豬斷奶后產(chǎn)生的疾病通常是由于仔豬的免疫力下降和體內(nèi)抗氧化能力降低引起的。提高仔豬的機(jī)體免疫力和體內(nèi)抗氧化能力有助于仔豬抵抗疾病。多項(xiàng)研究表明植物多糖能夠提高動(dòng)物的抗氧化能力和免疫力。張建明在長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)日糧中添加0.2 g/kg 黃芪多糖，發(fā)現(xiàn)幼魚(yú)血清相關(guān)抗氧化指標(biāo)得到顯著改善， 血清IgG、IgM、C3、C4、總蛋白（TP）含量及堿性磷酸酶（AKP）、溶菌酶（LZM）活性顯著提高，黃芪多糖顯著提高了長(zhǎng)江鱘幼魚(yú)的抗氧化能力和免疫力。呂尚揆的研究表明400 mg 葛根多糖提高了犢牛的抗氧化能力，犢牛血清中CD4、分泌型免疫球蛋白（sIgA）、IgA 和IgG 含量分別提高了2.47%、4.05%、8.91%和6.11%。本研究結(jié)果表明紅棗多糖添加量為0.5%時(shí)，仔豬血清SOD、CAT、GSH-Px 活性顯著升高，MDA 活性顯著降低。紅棗多糖添加量為1%時(shí)，仔豬血清和肝臟SOD、CAT、GSH-Px 活性均顯著升高，MDA 活性顯著降低。仔豬血清IgA、IgG、IgM 的含量隨紅棗多糖添加量增加。多糖在體外以劑量依賴式對(duì)1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和羥基等自由基具有抗氧化活性，在仔豬體內(nèi)也可以清除仔豬體內(nèi)的自由基，提高仔豬的抗氧化能力。仔豬抗氧化能力的提升也有助于仔豬免疫器官的發(fā)育，從而達(dá)到提高免疫力的作用。結(jié)論表明紅棗多糖具有提高仔豬抗氧化能力和免疫力的效果，紅棗多糖添加量為1%時(shí)效果最好。

仔豬斷奶后引起的腹瀉與腸道屏障緊密相關(guān)。仔豬腸道發(fā)育不完善，幼齡時(shí)容易受到病菌入侵，導(dǎo)致腸道通透性增加，從而降低對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，并引起腹瀉等癥狀。杜淑慧研究表明仔豬采食黃芪多糖腹瀉率顯著降低。劉凱偉也發(fā)現(xiàn)黃芪多糖降低了羔羊的腹瀉頻率。本研究中并未發(fā)現(xiàn)仔豬腹瀉的癥狀，但這可能是因?yàn)樽胸i樣本數(shù)較少導(dǎo)致的。本試驗(yàn)研究了仔豬腸道緊密連接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-3 的表達(dá)量，結(jié)果表明隨紅棗多糖添加量的提高，ZO-1、Occludin 和Claudin-3 的表達(dá)量上調(diào)，這表明仔豬的腸道通透性降低，仔豬的腸道屏障得到了保護(hù)，有助于避免腹瀉的發(fā)生。因此紅棗多糖與黃芪多糖具有相同的功效，具有保護(hù)腸道屏障的功能，紅棗多糖添加了為1%時(shí)保護(hù)效果最好。

4 結(jié)論

紅棗多糖添加量為0.5% 和1%，顯著提高了仔豬的平均日增重和采食量，降低了料重比。紅棗多糖添加量為1%，顯著提高了仔豬的抗氧化和免疫能力。隨紅棗多糖添加量升高，仔豬腸道緊密連接蛋白ZO-1、Occludin 和Claudin-3 的表達(dá)量上升，表明紅棗多糖具有預(yù)防仔豬腹瀉的潛力。