沉默CBX4抑制食管胃結(jié)合部腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲*

彭雨婷， 武 鋒， 任益凡， 徐澤宇， 萊智勇， 徐 鈞△

（1山西醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院，山西 太原 030001；2山西醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)學院，山西 太原 030001；3山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院，山西 太原 030001）

食管胃結(jié)合部腺癌（adenocarcinoma of esophagogastric junction， AEG）是腫瘤中心位于食管-胃解剖交界線上下5 cm 范圍以內(nèi)的腺癌［1］。其解剖結(jié)構和生物學行為既不同于食管癌也不同于胃癌。在全球范圍內(nèi)，盡管遠端胃癌的發(fā)病率和死亡率呈穩(wěn)步下降狀態(tài)，但AEG 的發(fā)病率在過去幾十年中持續(xù)呈現(xiàn)上升趨勢［2］，尤其在西方國家，其發(fā)病率急劇增加［3］。美國研究結(jié)果表明，自1973 年至1992 年，AEG 的發(fā)病率增加了近2.5 倍［4］。而國內(nèi)關于AEG 發(fā)病率的研究報道暫時還較少。從國內(nèi)某一項單機構數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，僅在1988 年至2012 年間，在研究者所在機構中，發(fā)現(xiàn)AEG 的比例由原來的22.3%增加到35.7%［5］。

目前，AEG 的治療方式仍然以手術為主。雖然一定程度可以短期控制病情和抑制遠處轉(zhuǎn)移，但患者的遠期存活率在近年來依舊沒有明顯改善。AEG普遍預后較差的主要原因之一在于AEG的早期癥狀不典型，大部分患者在腫瘤初期階段尚未診斷出來，一旦被確診時或已經(jīng)發(fā)生了遠處轉(zhuǎn)移等晚期征象。且AEG 的發(fā)病原因復雜，尚未知曉其明確的發(fā)病機制。因此只有明確AEG 的易感因素，在分子水平上進行更加深入的機制研究，才能有效地遏制疾病的發(fā)生發(fā)展，便于疾病能夠早期診斷、及時治療，從而降低患者的死亡率以及提高患者的遠期存活率。

多梳蛋白家族（ploycomb group proteins， PcG）通過修飾染色質(zhì)來調(diào)控轉(zhuǎn)錄過程，在調(diào)節(jié)細胞的周期和衰老、細胞命運決定以及腫瘤等多種生理及病理功能中起到重要作用［6］。截止到目前為止，已經(jīng)有越來越多的證據(jù)表明，PcG 蛋白參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的調(diào)控，其可作為治療反應和預后的生物標志物［7］。

色素框同源蛋白4（chromobox 4， CBX4）作為PcG 中的重要成員之一［8］，也稱為多梳蛋白2（polycomb 2， Pc2），是具有小泛素相關修飾物（small ubiquitin-related modifier， SUMD）E3 連接酶活性的蛋白質(zhì)［9］。由于其可調(diào)控RNA 轉(zhuǎn)錄以及蛋白質(zhì)翻譯后修飾等多個環(huán)節(jié)，因而可參與調(diào)節(jié)多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。有文獻報道，在多種惡性腫瘤中，如肺癌、乳腺癌、肝癌、骨肉瘤及宮頸癌等，CBX4可以作為腫瘤基因促進腫瘤細胞的增殖和遷移［10-16］。但也有學者發(fā)現(xiàn)在有些腫瘤中，CBX4對腫瘤的惡性進展起到了抑制作用，例如Wang 等［17］研究發(fā)現(xiàn)CBX4 通過介導Runx2 來遏制結(jié)直腸癌細胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移。CBX4是作為腫瘤基因或是抑癌因子，取決于是在何種細胞中以及與其相互起作用的因子。綜上所述，盡管CBX4 在多種腫瘤中已有研究，但CBX4 在AEG中的表達水平以及功能作用暫不清楚，有待我們進一步研究。

本研究檢測40 對AEG 患者腫瘤組織和對應的臨近正常組織中CBX4 的表達水平，分析CBX4 的表達量與患者預后生存時間的關系；同時選擇恰當?shù)募毎颠M行實驗，通過敲低CBX4在AEG 細胞中的表達，研究沉默CBX4對AEG 細胞增殖、遷移以及侵襲的影響，并初步探討CBX4 在AEG 中起作用的分子機制，以期為AEG 患者提供新的分子標志物以及治療靶點。

材 料 和 方 法

1 材料

1.1 數(shù)據(jù)收集 收集山西省腫瘤醫(yī)院進行手術切除的22 例患者的AEG 組織，將這22 例患者的AEG組織以及配對的癌旁組織送往深圳華大基因研究院，采用Illumina HiSeq 測序平臺進行高通量測序［18］。CBX4 與Wnt/β-catenin 信號通路蛋白相關性分析使用在線GEPIA2數(shù)據(jù)庫。

1.2 人胃食管結(jié)合部腺癌組織樣本 臨床組織樣本均取自于2017 年6 月至2019 年6 月在山西省腫瘤醫(yī)院接受手術治療患者的40 例AEG 組織和距離腫瘤2~5 cm范圍內(nèi)配對正常組織。腫瘤標本以及配對的正常組織均取自手術切除的組織，切緣術后病理類型全為陰性。40 例患者基本信息見表1。AEG 的診斷與治療均依據(jù)中國學者普遍認可的Siewert分型及治療方法，所有患者均未接受任何其他的術前治療。本次研究中涉及的所有患者，均已獲得知情同意，且書面知情同意書均已簽署。所有方案均經(jīng)山西省醫(yī)學科學院倫理委員會和山西省腫瘤醫(yī)院批準。

表1 40例患者的基本信息Table 1.Clinical information of 40 patients

1.3 細胞系 由于AEG 解剖位置以及結(jié)構的特殊性，暫時沒有特定的AEG 細胞系?？紤]到AEG 的病理類型，故選用食管腺癌以及胃癌細胞系作為替代細胞完成后續(xù)實驗。本研究選用了以下4 種細胞系作為實驗研究對象：AGS、HGC-27、SK-GT-4 和TE-1。均購于中國科學院上海細胞庫。

1.4 試劑 胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）、胰蛋白酶（Trypsin）、RPMI-1640 培養(yǎng)液和BCA 蛋白濃度測定試劑盒購于賽文創(chuàng)新（北京）生物科技有限公司；Trizol 試劑、細胞計數(shù)試劑盒8（Cell Counting Kit-8，CCK-8）和LipofectamineTM2000 試劑盒購自Invitrogen；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購于天根生化科技（北京）有限公司；PVDF 膜購自Millipore；兔抗CBX4、c-MYC 和細胞周期蛋白D1（cyclin D1）多克隆抗體購自上海生工生物工程股份有限公司。

2 主要方法

2.1 細胞培養(yǎng) 4 種AEG 細胞系（AGS、SK-GT-4、HGC-27和TE1）和1種正常人胃黏膜上皮細胞（GES-1）均用含有10% FBS 和1%青霉素和鏈霉素雙抗的RPMI-1640 培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)于37 ℃、5% CO2、濕度97%的細胞培養(yǎng)箱中。每2~3 d 更換1 次新鮮培養(yǎng)基。待細胞融合至80%~90%時，以胰蛋白酶消化，傳代培養(yǎng)。

2.2 細胞轉(zhuǎn)染 將AGS和SK-GT-4細胞接種于6孔板上培養(yǎng)，每孔1×105個細胞。待細胞密度培養(yǎng)到50%~70%后更換成不含F(xiàn)BS 的RPMI-1640 培養(yǎng)基。根據(jù)轉(zhuǎn)染試劑的產(chǎn)品說明書，使用Lipofectamine 2000分別將CBX4 siRNA （si-CBX4）或亂序無意義陰性對照（negative control siRNA， si-NC）轉(zhuǎn)染在6 孔板上培養(yǎng)的AGS 和SK-GT-4 細胞中。si-CBX4 和si-NC購自上海吉瑪生物有限公司，序列見表2。轉(zhuǎn)染6 h后，更換成含有FBS的培養(yǎng)基。

表2 siRNA序列和RT-qPCR引物序列Table 2.Sequences of siRNA and primers for RT-qPCR

2.3 實時熒光定量聚合酶鏈式反應（real-time quantitative polymerase chain reaction， RT-qPCR） 根據(jù)提取RNA 試劑盒的說明書，用提取細胞RNA 試劑盒提取細胞的總RNA，同時使用Trizol 試劑從AEG 組織樣品中分離出RNA。使用微量核酸儀檢測RNA的純度和濃度。使用 Prime-Script? 一步式RT-qPCR試劑盒將RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。然后以cDNA 為模板，進行PCR 擴增。PCR 反應設定為95 ℃ 10 min；然后95 ℃ 15 s、60 ℃ 60 s，重復45 個循環(huán)。GAPDH是內(nèi)參照。GAPDH和CBX4引物序列見表2。

2.4 劃痕愈合實驗 將經(jīng)敲減處理過AGS 和SKGT-4 的si-NC 組和si-CBX4 組的細胞以5×105的細胞濃度均勻接種在 6 孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)至小孔長滿。使用無菌移液槍槍頭的尖端在每個孔中進行劃痕處理。然后用PBS 進行洗滌以清除細胞碎片，然后在不含 FBS 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。在劃痕0、24 h 時，在每孔的相同位置拍攝記錄細胞的遷移狀態(tài)。

2.5 CCK-8實驗 將AGS和SK-GT-4細胞經(jīng)敲減處理后，每孔吸取100 μL 的經(jīng)敲減處理過的AGS 和SK-GT-4 細胞分別接種于96 孔板，調(diào)整細胞濃度到每孔2×103個細胞，每組設置3 個復孔。用同樣的方法鋪5 板96 孔培養(yǎng)板。取其中一板，在鋪板后孵育約4 h，待細胞完全貼壁，向每個孔中加入 10 μL 的CCK-8 工作液，繼續(xù)在培養(yǎng)箱中孵育2~4 h。然后應用酶標儀檢測每個孔在450 nm 處的吸光度（A）值。其余4 板在連續(xù)4 d 的相同時間段每孔加入10 μL 的CCK-8 工作液以及測量A值，連續(xù)觀察5 d AGS 和SK-GT-4細胞的si-NC組和si-CBX4組的細胞活力。

2.6 Transwell 實驗 用不含血清的培養(yǎng)基重懸經(jīng)敲減處理過細胞，采用特制的Matrigel Invasion Chamber，在上室加入200 μL 細胞懸液（無血清），在下室加入 600 μL 含10% FBS 的培養(yǎng)基。放入恒溫孵箱中孵育48 h后，拿出培養(yǎng)板，用鑷子小心取出細胞小室，吸干上室內(nèi)的液體，移到預先加入約600 μL的4%的多聚甲醛的孔中，室溫固定30 min 后用0.1%~0.2%結(jié)晶紫染色5~10 min，觀察計數(shù)。

2.7 Western blot 將RIPA 裂解液與蛋白酶抑制劑按照100∶1 的比例配置。經(jīng)干擾處理過的si-NC 組和si-CBX4組的細胞，用裂解液（含有蛋白酶抑制劑）從細胞中分離總蛋白30 min，隨后在13 000 ×g下離心10 min后以收集蛋白質(zhì)的上清液。使用BCA試劑盒測蛋白濃度后，各管蛋白用裂解液和loading buffer定量后金屬浴變性10 min。每孔20 μg 蛋白上樣，行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離等量的蛋白質(zhì)。電泳結(jié)束后，然后電轉(zhuǎn)移到PVDF膜，用5%脫脂牛奶（TBST配制）封閉 2 h后，分別加入CBX4、c-MYC、cyclin D1、β-catenin、和β-actinⅠ抗，4 ℃孵育過夜。用TBST 洗膜3 次后，加入辣根過氧化物酶偶聯(lián)的Ⅱ抗，在室溫下?lián)u床孵育 2 h。最后，加入電化學發(fā)光檢測試劑，避光顯影，凝膠成像系統(tǒng)曝光拍照。以β-actin 為內(nèi)參照，并使用ImageJ軟件分析目的條帶的灰度值。

3 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)均采用GraphPad Prism 7.0 軟件進行分析。計量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差（mean±SD）表示，兩組均數(shù)比較使用獨立樣本t檢驗，多組間比較使用單因素方差分析。采用Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，生存分析采用log-rank 檢驗。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

1 AEG 組織高通量測序得出CBX4 可能與腫瘤發(fā)生發(fā)展有關

對22 對山西腫瘤醫(yī)院的AEG 患者組織進行高通量測序，對測序所得到的40 523 個RNA 轉(zhuǎn)錄本數(shù)據(jù)進行“基因權重共表達網(wǎng)絡分析”，并將這22 例AEG 組織的臨床樣本的血清學的腫瘤標志物和WGCNA 分析所獲得的modules 分別做相關性分析，分析結(jié)果表示研究目標將鎖定在Blue module 和Brown module 兩個基因群。對Blue module 和Brown module 這兩個基因群進行功能富集分析，分析發(fā)現(xiàn)在Blue module 和Brown module 中排名前五的幾種基因可能是這兩個基因群組的核心基因（表3），選用Brown module 中前三個基因在AEG 組織中進行驗證，發(fā)現(xiàn)與臨近正常組織相比，TRIM28 和SLC3A2 在AEG 組織中表達無明顯差異，而CBX4 在AEG 中表達增高。因而選用CBX4 進行后續(xù)實驗，加以驗證分析。

表3 Blue module（TOP1）和Brown module （TOP5）中的核心基因Table 3.core genes in Blue module （TOP1） and Brown module （TOP5）

2 CBX4在食管胃結(jié)合部腺癌組織和細胞中的表達

2.1 RT-qPCR 檢測CBX4在食管胃結(jié)合部腺癌組織中的表達 為了確定CBX4 在AEG 發(fā)生中的作用，通過提取山西省腫瘤醫(yī)院的40 對AEG 組織和匹配的相鄰正常組織的樣本RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA 后，使用RT-qPCR 檢測CBX4 在食管胃結(jié)合部腺癌組織中的表達情況。與臨近正常組織相比，AEG 組織中CBX4 的表達量顯著上調(diào)（P<0.01）。使用GraphPad Prism 8.0 對患者手術后生存時間與CBX4 表達量的相關性進行分析，結(jié)果表明，當CBX4表達量高時，患者預后生存時間較短，具有統(tǒng)計學意義，見圖1。

Figure 1.The expression of CBX4 in 40 pairs of AEG tissues and matched adjacent normal tissues was detected by RT-qPCR （A），and then the survival rate was analyzed （B）.Mean±SD.n=40.**P<0.01 vs normal.圖1 CBX4表達量及生存率分析

2.2 檢測CBX4 在食管胃結(jié)合部腺癌細胞中的表達 利用RT-qPCR 和Western blot 實驗進一步檢測AEG細胞系中CBX4的表達情況。結(jié)果表明，相較于正常胃上皮細胞GES-1， CBX4在AEG細胞系中均呈高表達。數(shù)據(jù)表明，CBX4 表達的增高可能有助于AEG的發(fā)展。見圖2。

Figure 2.Expression of CBX4 in GES-1， AGS， HGC-27， SK-GT-4 and TE-1 cell lines.Mean±SD.n=3.**P<0.01 vs GES-1.圖2 CBX4在GES-1、AGS、HGC-27、SK-GT-4和TE-1細胞系中的表達情況

3 沉默CBX4 對食管胃結(jié)合部腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力的影響

3.1 siRNA 敲低CBX4表達的效率 與對照組si-NC 相比，經(jīng)過si-CBX4 敲減處理后的AGS 和SK-GT-4細胞中CBX4的mRNA和蛋白表達水平均明顯下調(diào)（P<0.05），證實CBX4 敲減有效果。其中在AGS 和SK-GT-4 中，si-CBX4-1 的敲減效率最好，選擇其對細胞進行敲減處理完成后續(xù)實驗，見圖3。

Figure 3.Verifying the knockdown efficiency of CBX4 siRNA using RT-qPCR （A） and Western blot （B）.Mean±SD.n=3.**P<0.01 vs si-NC.圖3 RT-qPCR和Western blot驗證CBX4 siRNA的敲減效率

3.2 沉默CBX4對食管胃結(jié)合部腺癌細胞活力的影響 將用si-CBX4-1 處理過的AGS 和SK-GT-4 細胞鋪進96 孔板中，利用CCK-8 實驗測量細胞的活力。結(jié)果表明，與si-NC 組相比，當CBX4 的表達量降低后，AGS和SK-GT-4細胞的活力明顯下降，見圖4。

Figure 4.Effects of CBX4 silencing on the viability of AGS and SK-GT-4 cells.Mean±SD.n=3.*P<0.05， **P<0.01 vs si-NC.圖4 沉默CBX4對AGS和SK-GT-4細胞活力的影響

3.3 沉默CBX4對食管胃結(jié)合部腺癌細胞遷移功能的影響 待6 孔板中的AGS 和SK-GT-4 長到70%~80%左右時，對 AGS 和SK-GT-4 細胞進行敲減處理，通過劃痕愈合實驗檢測沉默CBX4對AGS 和SK-GT-4 細胞遷移能力的影響。結(jié)果顯示，當CBX4基因表達量下降后，AGS 細胞和SK-GT-4 細胞的遷移能力明顯下降，見圖5。

Figure 5.Effects of CBX4 silencing on the migration of AGS and SK-GT-4 cells.Mean±SD.n=3.**P<0.01 vs si-NC.圖5 沉默CBX4對AGS和SK-GT-4細胞遷移能力的影響

3.4 沉默CBX4對食管胃結(jié)合部腺癌細胞侵襲功能的影響 通過Transwell 侵襲實驗檢測沉默CBX4對AGS 細胞和SK-GT-4 細胞侵襲能力的影響。結(jié)果表明，當CBX4敲低后，AGS 細胞和SK-GT-4 細胞侵襲能力明顯下降，且具有統(tǒng)計學意義，見圖6。

Figure 6.Effect of CBX4 silencing on the invasive ability of AGS and SK-GT-4 cells.Mean±SD.n=3.*P<0.05， **P<0.01 vs si-NC.圖6 沉默CBX4對AGS和SK-GT-4細胞侵襲能力的影響

4 沉默CBX4 對Wnt/β-catenin 信號通路相關蛋白表達水平的影響

通過在線數(shù)據(jù)庫GEPIA2 在線分析CBX4 與c-MYC存在正相關（P<0.05），如圖7A所示。而c-MYC是Wnt/β-catenin 信號通路的重要分子，在多種腫瘤中 起 作 用［19］。因 而 探 究CBX4 是 否 通 過Wnt/β-catenin 信號通路來調(diào)節(jié)AEG。利用Western blot 實驗檢測沉默CBX4是否與Wnt/β-catenin 通路中相關蛋白的表達量相關。結(jié)果表明當CBX4基因敲低后，在AGS 和SK-GT-4 細胞中CBX4 的表達下降，β-catenin 以及下游靶基因c-MYC、cyclin D1 的蛋白表達水平明顯下降，見圖7。

Figure 7.The effect of CBX4 knockdown on the expression of Wnt/β-catenin signal pathway-related proteins.Mean±SD.n=3.*P<0.05， **P<0.01 vs si-NC.圖7 沉默CBX4后Wnt/β-catenin信號通路相關蛋白表達的變化

討 論

AEG 作為一種多因素導致的疾病，具體病因尚不明確［20］，可能與遺傳因素、環(huán)境因素、胃食管反流病、肥胖等多種因素有關［21］。但與其他部位的胃癌相比，食管胃交界處的腫瘤更容易出現(xiàn)胃壁深部浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和術后復發(fā)［22］。因此將食管胃結(jié)合部腺癌作為一種獨立的疾病進行研究［23］。目前基因靶向治療已經(jīng)逐漸成為很多疾病的治療方向，而導致AEG 發(fā)展的確切機制仍不清楚，針對AEG 的靶向治療仍未取得很好的進展。因此，研究新的治療靶點對于為AEG提供新的治療方向至關重要。

CBX4 是一種參與腫瘤發(fā)生和細胞周期調(diào)控的特異性PCG 蛋白［22］，其在不同類型的腫瘤中表達有所不同，并具有不同的生物學功能。CBX4在腫瘤中的作用首次在肝細胞癌中發(fā)現(xiàn)，Wang 等［13］研究發(fā)現(xiàn)：CBX4 在肝細胞肝癌中表達增高； Jiang 等［14］研究發(fā)現(xiàn)在腎透明細胞癌中CBX4 表達顯著增加；但是Xiong 等［24］研究發(fā)現(xiàn)在慢性粒細胞白血病中，發(fā)現(xiàn)CBX4表達量在患者外周血白細胞表達低于正常人。盡管如此，關于CBX4 在AEG 中的表達至今未有報道。在本研究中，通過對22 對AEG 組織進行高通量測序的結(jié)果進行分析，發(fā)現(xiàn)CBX4 可能是促進AEG發(fā)展的核心分子，因而后續(xù)實驗中，利用RT-qPCR對40 對AEG 組織以及配對的正常組織進行CBX4 表達量的檢測，結(jié)果表明，CBX4 在40 對AEG 組織中表達明顯高于正常組織。說明CBX4 在AEG 中可能起促進發(fā)展的作用。

HU 等［10］研究提示與正常肺組織相比，CBX4 在肺腫瘤中高度表達。且CBX4表達高時，腫瘤細胞的增殖和遷移能力顯著增強；相反，表達量下降時，人肺癌細胞生長和遷移明顯受到抑制。因而本研究進一步檢測正常細胞與AEG 細胞系中CBX4 的表達量，發(fā)現(xiàn)CBX4 在AEG 細胞系中表達均增高，且在檢測的幾種腫瘤細胞中，AGS 細胞和SK-GT-4 細胞中CBX4的表達量增高更為明顯，因而選用這兩種細胞完成后續(xù)實驗。利用CCK-8 實驗、劃痕實驗及Transwell 侵襲實驗檢測CBX4 的表達量與AEG 細胞增殖、遷移以及侵襲能力的關系，結(jié)果表明當CBX4敲低時，AEG細胞的增殖、遷移和侵襲能力顯著減弱。

Wnt/β-catenin 信號通路是一種復雜的分子機制，它由一系列蛋白質(zhì)組成［25］，具有高度的保守性和嚴格的控制性，能夠調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育、細胞增殖和分化過程［26］，并且在某些情況下會引起異常激活。其異常激活會導致細胞增殖失控，加速細胞的分化和遷移［27］，因而經(jīng)常與發(fā)病率的提高、疾病進一步惡化、預后不良，甚至包括腫瘤相關死亡率上升等因素密切相關［28］。β-catenin 是Wnt/β-catenin 通路的重要調(diào)控因子［29］，當該信號通路被激活時抑制β-catenin 降解，導致細胞內(nèi)β-catenin 大量聚集，進入到細胞核內(nèi)，誘導下游靶基因c-MYC和cyclin D1的轉(zhuǎn)錄［30］。利用GEPIA2 數(shù)據(jù)庫在線分析可得CBX4 與c-MYC正相關，而c-MYC 又是Wnt/β-catenin 信號通路重要分子。進而，我們推測在AEG 中，對于Wnt/β-catenin信號通路的調(diào)控，CBX4 可能參與其中。因而，通過Western blot 法檢測CBX4沉默后，β-catenin、 c-MYC和cyclin D1 表達水平是否發(fā)生變化。結(jié)果表明，當CBX4 表達下降時，在AGS 細胞和SK-GT-4 細胞中β-catenin、c-MYC和cyclin D1的表達水平均有所下降，進而提示在AEG 中CBX4 能夠活化Wnt/β-catenin 信號通路促進惡行表型。

綜上所述，CBX4 在AEG 細胞系中以及在AEG組織中表達升高，當CBX4 表達下降時，AEG 細胞的增殖、遷移和侵襲能力顯著減弱，并且CBX4 可能是通過Wnt/β-catenin信號通路促進AEG細胞的惡行表型。此研究結(jié)果表明，沉默CBX4可能對AEG 的發(fā)生發(fā)展具有抑制作用，為AEG 患者的靶向治療以及早期診斷提供新的參考點。