• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    氨基酸帶電量及分布對蛋白質(zhì)單鏈自組裝行為的影響

    2023-11-01 08:33:46俞志超姜舟婷
    中國計量大學學報 2023年3期
    關(guān)鍵詞:回轉(zhuǎn)半徑范德華珠子

    俞志超,姜舟婷

    (中國計量大學 理學院,浙江 杭州 310018)

    蛋白質(zhì)作為一種聚電解質(zhì),由多種不同的氨基酸構(gòu)成,表現(xiàn)出不同的結(jié)構(gòu)多樣性。由于蛋白質(zhì)的生物學功能在很大程度上取決于其獨特的結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)由殘基之間復雜的相互作用決定。相互作用包括靜電相互作用、親疏水相互作用、范德華相互作用、吸附-電中和作用與吸附-架橋機理等[1-5],因此蛋白質(zhì)鏈結(jié)構(gòu)導致的多種機械和熱力學性質(zhì),甚至生物功能,引起了科學家的廣泛興趣。聚合物鏈結(jié)構(gòu)的形成,如聚合物結(jié)晶、蛋白質(zhì)折疊、嵌段共聚物的自組裝,最近已成為化學、物理、生物學和材料科學領(lǐng)域關(guān)注的焦點[6-9]。

    根據(jù)安芬森的變性和復性實驗已知,蛋白質(zhì)的三維構(gòu)象直接由其一級結(jié)構(gòu)(氨基酸序列)決定[10]。帶電氨基酸殘基-殘基接觸過程中產(chǎn)生的靜電相互作用在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變過程中起著至關(guān)重要的作用,對蛋白質(zhì)及其復合物的形成至關(guān)重要。2020年Dahal等[11]采用粗粒化分子動力學方法研究過氧化氫酶吸附帶電表面的行為,實驗發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的吸附行為由表面和非均勻分布的蛋白質(zhì)殘基之間的局部靜電相互作用決定,且隨著表面吸附蛋白質(zhì)的增加,其結(jié)構(gòu)會因為蛋白質(zhì)殘基之間的靜電排斥作用而改變。2020年Adesina等[12]通過使用腈探針(T46C-CN)插入大腸桿菌DHFR(EcDHFR)、其構(gòu)象受損變體(EcDHFR-S148P)和嗜熱脂肪土桿菌DHFR(BsDHFR)的二氫葉酸還原酶(DHFRs)反應中心附近,實驗發(fā)現(xiàn)當輔因子與酶結(jié)合時,底物向探針投射的電場抵消了輔因子施加的電場,這表明控制具有靜電性質(zhì)的配體-配體相互作用可能是創(chuàng)造高效酶的關(guān)鍵因素。2016年Tsai等[13]在基于AWSEM模型模擬靜電作用對13個單體蛋白質(zhì)和4個二聚體結(jié)構(gòu)的影響并對其進行結(jié)構(gòu)預測。模擬結(jié)果表明,對于單體蛋白質(zhì),除非蛋白質(zhì)具有特殊的帶電氨基酸分布,如核糖體蛋白S6,否則靜電相互作用的添加不會顯著提高結(jié)構(gòu)預測的質(zhì)量。靜電作用在二聚體的結(jié)合過程中發(fā)揮著更重要的作用,提供了電荷與電荷之間的穩(wěn)定性,如蛋白質(zhì)復合物KIX-pKID的結(jié)合在很大程度上由靜電作用輔助。

    基于原子水平的計算機模擬方法對蛋白質(zhì)相互作用方式進行研究,已被越來越多的科學家所采納。但是隨著研究體系的不斷增大,常規(guī)的全原子模型遇到了瓶頸,比如計算一個原子數(shù)為N的體系,其計算量為NlogN,隨著體系原子數(shù)的增加,其動力學行為會更復雜,構(gòu)象空間也會大大增加,這就要求分子動力學模擬要持續(xù)足夠多的時間來保證體系構(gòu)象空間的采樣。為了解決上述問題,近些年來人們提出了粗?;P?即將較多的自由度整合到較少的自由度從而簡化對體系的描述[14-15]。雖然粗?;P筒荒芙o出蛋白質(zhì)折疊過程中所有的原子細節(jié),但能在更長的時間尺度執(zhí)行計算,這是了解整個相互作用過程的動力學行為和熱力學特征并挖掘潛在物理機制的關(guān)鍵。

    LAMMPS作為一款開源性軟件,隨著近些年各領(lǐng)域的研究者對其算法進行更新迭代,使其功能不斷完善,如2018年Edorh等[16]基于多重網(wǎng)格算法對P3M模型進行更新,能夠高效計算自適應約束系統(tǒng)中粒子的靜電勢。由于LAMMPS極易擴展的特點,研究者可根據(jù)自身需求構(gòu)建模型,設置外界條件,對于粗?;P偷姆治鍪址奖?如2021年Ford等[17]對粘蛋白(MUC5B)進行粗粒化模擬,通過LAMMPS探索在1.5~5 mg/mL質(zhì)量濃度下MUC5B結(jié)構(gòu)域之間疏水和靜電相互作用強度。實驗發(fā)現(xiàn),隨著粘蛋白濃度的升高,其相互作用強度越大;粘蛋白濃度和化學相互作用強度都在粘液中發(fā)現(xiàn)的結(jié)構(gòu)形態(tài)和流變性方面發(fā)揮作用。

    利用計算機模擬各種勢能場中的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和性質(zhì),可以在一些領(lǐng)域獲得與實驗相同的結(jié)果從而驗證實驗的準確性[18-19],也可以根據(jù)物理化學性質(zhì)構(gòu)造蛋白質(zhì)鏈,研究其結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變的影響因素,為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預測、蛋白質(zhì)功能改造等方面提供理論支持。本文利用LAMMPS軟件對蛋白質(zhì)鏈進行粗粒化建模,利用分子動力學模擬由不同帶電量及連續(xù)帶電氨基酸的數(shù)目組成的蛋白質(zhì)鏈的結(jié)構(gòu)特征,分析二者對蛋白質(zhì)體系的能量和結(jié)構(gòu)并找出內(nèi)在聯(lián)系。

    1 模型及計算方法

    對于聚合物科學中的許多問題,詳細描述聚合物的化學結(jié)構(gòu)和參數(shù)會使模擬的主要特征淹沒在無窮的細節(jié)之中,浪費有限的計算資源,但是模型過于簡化又會使模擬結(jié)果無法反映體系的主要特征。我們采用非格點(珠鏈)模型,保留基本大分子的特征,如鏈分子的連接性、非鍵合相互作用,同時考慮氨基酸殘基的屬性,對蛋白質(zhì)鏈進行構(gòu)建[20-21],用簡化的氨基酸殘基組合來表示蛋白質(zhì)的序列,從而簡化蛋白質(zhì)能量的計算。

    本文所有的分子動力學模擬均采用全原子Dreiding力場[22]進行,構(gòu)造的模型鏈由200個氨基酸構(gòu)成,模擬盒子大小為20 nm×20 nm×20 nm,并采用周期性邊界條件。模擬期間非鍵相互作用的截斷半徑為1 nm,模擬溫度為300 K,模擬時間步長為2.5 fs,每隔5 ps輸出一次坐標。

    蛋白質(zhì)體系能量由鍵能和非鍵能構(gòu)成,其中鍵能包括鍵伸縮能、鍵角彎曲能、鍵扭轉(zhuǎn)能,非鍵能包括靜電能、范德華能。

    本文通過改變蛋白質(zhì)鏈上單個氨基酸的帶電量q(0~1C)和帶相同極性電荷氨基酸的連續(xù)數(shù)目M(5、10、20、25、50),來研究單鏈的行為。為了使模擬體系整體呈電中性,蛋白質(zhì)單鏈上帶有相反電荷的氨基酸數(shù)目相同,且正負極性的帶電量之和相等。M為10的蛋白質(zhì)鏈初始構(gòu)型如圖1,10個連續(xù)的紅色珠子表示10個連續(xù)帶正電的氨基酸,10個連續(xù)的藍色珠子表示10個連續(xù)帶負電的氨基酸。在總長為200的蛋白質(zhì)鏈上,紅色珠子與藍色珠子數(shù)目相同,說明蛋白質(zhì)鏈上氨基酸帶電量之和為0,體系呈電中性。

    圖1 帶相同極性電荷氨基酸的連續(xù)數(shù)目M=10的蛋白質(zhì)鏈初始構(gòu)型圖Figure 1 Initial configuration diagram of protein chains with continuous number M=10 of amino acids with the same polar charge

    我們用一個珠子代表一個氨基酸,使用5個勢函數(shù)來構(gòu)建模型蛋白質(zhì)鏈[23-24],其中鍵能包括鍵伸縮能、鍵彎曲能和鍵扭轉(zhuǎn)能,非鍵能包括范德華能和靜電能。它們的表達式如下。

    1)相鄰珠子的鍵伸縮能:

    (1)

    其中,l0為平衡鍵長,大小為0.153 nm,li為相鄰珠子i-1和i之間的鍵長。鍵伸縮能常數(shù)kd=2.929×105kJ/(nm2·mol)。

    2)每三個相鄰珠子的鍵彎曲能:

    (2)

    其中,平衡鍵角θ0=1.231 rad和θi是3個相鄰珠子i-2、i-1和i之間的鍵角。鍵彎曲勢能常數(shù)kθ=418.4 kJ/(rad2·mol)。

    3)每4個相鄰珠子的鍵扭轉(zhuǎn)能:

    (3)

    其中,φi是由4個連續(xù)的珠子i-3、i-2、i-1和i沿著主線組成的兩個平面的二面角。鍵扭轉(zhuǎn)能常數(shù)kφ=8.368 kJ/mol。

    4)范德華能通過截斷的12-6LJ勢作用于所有兩個以上鍵的珠子組合:

    (4)

    其中rij是珠子i和珠子j間的距離。范德華相互作用參數(shù)值分別為ε=0.830 1 kJ/mol,σ=0.362 4 nm。

    5)兩個帶電珠子的靜電能:

    (5)

    其中rij是珠子i和珠子j之間的距離。C是一個能量轉(zhuǎn)換常數(shù),ε是介電常數(shù),qi和qj是這兩個珠子上的電荷,在本文中作為模擬體系的變量。

    蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特征是我們討論的重點,主要根據(jù)體系的回轉(zhuǎn)半徑(Rg)和其可視化結(jié)構(gòu)圖分析蛋白質(zhì)鏈隨氨基酸帶電荷情況的變化趨勢。

    結(jié)構(gòu)參量回轉(zhuǎn)半徑(radius of gyration,Rg)描述蛋白質(zhì)分子的整體尺寸,標志著蛋白質(zhì)分子的疏松程度?;剞D(zhuǎn)半徑值越大說明體系越松散?;剞D(zhuǎn)半徑Rg的定義為

    (6)

    其中N是體系中蛋白質(zhì)原子的數(shù)量,r(i)和rcenter分別是第i原子的坐標和質(zhì)心的坐標。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 能量分析

    圖2給出了蛋白質(zhì)鏈的范德華能(a)、靜電能(b)、鍵能(c)和總勢能(d)隨連續(xù)帶同極性電荷的氨基酸數(shù)目M的變化趨勢,其中鍵能是鍵伸縮能、鍵彎曲能和鍵扭轉(zhuǎn)能之和。在圖2(a)中,當單個氨基酸帶電量q小于等于0.2C時,體系的范德華能處于負值,其隨M的增加變化并不明顯,范德華能隨著氨基酸帶電量的影響也較小;當q大于0.2C時,范德華能為正,并隨M的增加而

    圖2 由帶電量為q的氨基酸組成的蛋白質(zhì)鏈的不同能量隨連續(xù)相同電荷氨基酸數(shù)目M的變化趨勢圖Figure 2 Different energy of the protein constructed by the residues with charge q and the number of sequentially changed residues M

    上升的趨勢變得顯著,尤其當M值小于25時更為明顯,同時,范德華能隨單個氨基酸帶電量的增加而增加,即上升趨勢與單個氨基酸帶電量q的大小呈正相關(guān)。當?shù)鞍踪|(zhì)鏈上帶相同極性電荷氨基酸的連續(xù)數(shù)目M大于25時,體系范德華能變化趨勢逐漸緩慢。圖2(b)中,靜電能隨單個氨基酸的帶電量q及連續(xù)相同電荷氨基酸數(shù)目M的變化情況,與范德華能的趨勢都相反,即體系的靜電勢能隨M的增加而呈下降趨勢,并且這種趨勢在相同極性電荷氨基酸的連續(xù)數(shù)目M小于25時,變化明顯。但當?shù)鞍踪|(zhì)鏈上M值大于25時,體系靜電勢能變化趨勢逐漸緩慢,同時,靜電能隨單個氨基酸帶電量的增加而減少,帶電量越大,變化越顯著。在圖2(c)給出了蛋白質(zhì)鏈體系的總的鍵能,其變化趨勢和圖2(a)相同,但是從能量變化范圍來看,圖2(a)在1 600 kJ/mol,而圖2(c)的鍵能變化范圍僅為圖2(a)的1/4左右。說明體系鍵能與一級結(jié)構(gòu)的氨基酸總數(shù)密切相關(guān),但是受氨基酸的種類和分布的影響較小,而范德華能與氨基酸空間分布有關(guān)。當然,受參數(shù)影響最大的是靜電能,體系靜電勢能的絕對值要遠遠大于鍵能和范德華能,因此,蛋白質(zhì)體系的總能量的變化趨勢圖2(d)與圖2(b)即靜電能隨M和q值的變化趨勢一致,即體系主要受靜電相互作用的影響。

    2.2 結(jié)構(gòu)分析

    本文研究了在單個氨基酸帶電荷相同的情況下連續(xù)帶電荷的氨基酸數(shù)目對蛋白質(zhì)鏈結(jié)構(gòu)的影響,通過研究蛋白質(zhì)鏈的回轉(zhuǎn)半徑判斷蛋白質(zhì)鏈結(jié)構(gòu)的松散程度,如圖3。圖3(a)中可以看出,在單個氨基酸帶電量q為0.05C的情況下,鏈的回轉(zhuǎn)半徑大小在0.792~0.945 nm范圍內(nèi),且無論M值為多大,其回轉(zhuǎn)半徑波動范圍均在0.05 nm左右。圖中M為50的情況下,回轉(zhuǎn)半徑曲線穩(wěn)定在0.8 nm左右,其余情況下的回轉(zhuǎn)半徑曲線穩(wěn)定在0.85 nm左右。這說明當鏈上連續(xù)帶同極性電荷氨基酸數(shù)目越多時,蛋白質(zhì)鏈結(jié)構(gòu)越緊密。圖3(b)中可以看出,在單個氨基酸帶電量q為0.4C的情況下,M為5、10的回轉(zhuǎn)半徑相較于q為0.05C的情況均有不同幅度的上升,而M為20、25和50的回轉(zhuǎn)半徑卻有下降,且曲線的波動幅度從0.05 nm降至0.02 nm,這說明單個氨基酸帶電量增大時,蛋白質(zhì)鏈上受靜電作用影響的片段越長,更容易使整條鏈結(jié)構(gòu)變得穩(wěn)定而緊密。圖3(c)為單個氨基酸帶電量q為0.8C時回轉(zhuǎn)半徑隨時間的變化,Rg的大小與M值呈負相關(guān)。和圖3(a)和3(b)相比,M為5時回轉(zhuǎn)半徑隨氨基酸帶電量q的增大,其上升趨勢更為明顯,M為10、20、25時回轉(zhuǎn)半徑隨氨基酸帶電量q的增大略有上升,M為50時回轉(zhuǎn)半徑隨氨基酸帶電量q的增大有下降趨勢,證實了圖3(b)所總結(jié)出來的結(jié)論。圖3(d)中可以看出,在單個氨基酸帶電量q為1C的情況下,M為5的回轉(zhuǎn)半徑相較于q為0.8C的情況有小幅度上升,回轉(zhuǎn)半徑曲線的波動幅度從0.1 nm降至0.05 nm,M為10、20、25和50的回轉(zhuǎn)半徑變化較小。這表明,當?shù)鞍踪|(zhì)鏈上單個氨基酸帶電量過大時,靜電相互作用會使整條蛋白質(zhì)鏈上帶異種電荷的氨基酸牢牢吸附在一起,形成固定結(jié)構(gòu)。

    圖3 蛋白質(zhì)鏈在不同單個氨基酸帶電量下回轉(zhuǎn)半徑隨模擬時間的演化圖Figure 3 Time evolution of radius of gyration on the protein constructed by residues with different charge

    圖4為氨基酸帶4種電量情況下,蛋白質(zhì)回轉(zhuǎn)半徑平均值與連續(xù)帶電荷的氨基酸數(shù)目M的關(guān)系圖。當M為5時,回轉(zhuǎn)半徑值與帶電荷量q呈正相關(guān),即,蛋白質(zhì)的回轉(zhuǎn)半徑隨著氨基酸帶電荷的增加而增加。隨著M增大,不同q值下的回轉(zhuǎn)半徑均值逐漸趨同,當M不低于25時,q值對回轉(zhuǎn)半徑影響較小。結(jié)合圖3和圖4得出結(jié)論:第一,在氨基酸帶電量較小的情況下,蛋白質(zhì)鏈的回轉(zhuǎn)半徑隨連續(xù)帶電荷的氨基酸數(shù)目變化的區(qū)分度不明顯,隨著氨基酸帶電量的增大,在連續(xù)帶電荷的氨基酸數(shù)目不同的情況下,蛋白質(zhì)鏈的回轉(zhuǎn)半徑區(qū)分度增強;第二,隨著連續(xù)帶電荷的氨基酸數(shù)目的增大,不同蛋白質(zhì)鏈回轉(zhuǎn)半徑差距越小。

    圖4 蛋白質(zhì)鏈的回轉(zhuǎn)半徑與相同電荷氨基酸數(shù)目M的變化趨勢圖Figure 4 Radius of gyration of the protein constructed by the residues with charge q versus the number of sequentially changed residues M

    圖5給出在不同條件下構(gòu)造的蛋白質(zhì)鏈的典型構(gòu)型圖。其中,圖5(a)(b)(c)分別給出了連續(xù)帶電荷氨基酸數(shù)目M為5的情況下,單個氨基酸帶電荷量q為0.05C、0.4C、1C三個條件下的蛋白質(zhì)鏈的可視化結(jié)構(gòu)圖。在此條件下圖5(a)(b)(c)的回轉(zhuǎn)半徑均值分別為0.86、1.07、1.74 nm,從數(shù)據(jù)上來看,回轉(zhuǎn)半徑均值隨著q值增大而增大,說明蛋白質(zhì)鏈的體系結(jié)構(gòu)隨著單個氨基酸帶電荷量的增大變得越來越松散。我們從結(jié)構(gòu)圖中看出,圖5(a)組成單個螺旋的珠子(氨基酸)數(shù)目在15~20之間,圖5(b)中組成單個螺旋的珠子數(shù)目在10~15之間,圖5(c)無螺旋結(jié)構(gòu),說明M為5的情況下蛋白質(zhì)鏈隨著帶電荷量的增大逐漸從團簇狀逐漸向長城狀轉(zhuǎn)變。圖5(d)(e)(f)分別給出了連續(xù)帶電氨基酸數(shù)目M為25的情況下,單個氨基酸帶電荷量q為0.05C、0.4C、1C三個條件下的蛋白質(zhì)鏈可視化結(jié)構(gòu)圖。在此條件下圖5(d)(e)(f)的回轉(zhuǎn)半徑均值分別為0.84、0.79、0.76 nm,從數(shù)據(jù)上來看,回轉(zhuǎn)半徑均值隨著氨基酸帶電荷量q增大20倍的情況下仍然變化不大,說明M為25的情況下蛋白質(zhì)鏈的體系結(jié)構(gòu)受電荷量影響較小。從可視化結(jié)構(gòu)圖來看,圖5(d)組成單個螺旋的珠子數(shù)目在50左右,圖5(e)組成單個螺旋的珠子數(shù)目在15~20之間,圖5(f)組成單個螺旋的珠子數(shù)目在10~15之間,說明M為25的情況下電荷量對蛋白質(zhì)鏈的松散程度影響較小,但是組成蛋白質(zhì)單個螺旋的氨基酸數(shù)目在減少。

    圖5 蛋白質(zhì)鏈在不同M和q情況下的典型結(jié)構(gòu)圖Figure 5 Typical structural diagrams of protein chains under different M and q conditions

    3 結(jié) 論

    本文對一個含有200個氨基酸的蛋白質(zhì)鏈進行粗?;肿觿恿W模擬,通過研究體系能量和回轉(zhuǎn)半徑,對模擬結(jié)果得出以下結(jié)論:1)無論是改變鏈上連續(xù)帶同極性電荷的氨基酸數(shù)還是改變單個氨基酸帶電量,體系的范德華能與靜電勢能總是呈相反的變化趨勢??倓菽艿淖兓厔莺挽o電勢能的變化趨勢相同,且靜電勢能絕對值遠遠大于鍵能和范德華能,所以體系非鍵相互作用的主導作用為靜電相互作用;2)當體系中單個帶電氨基酸帶電量大于0.2C時,蛋白質(zhì)鏈的回轉(zhuǎn)半徑隨著同極性氨基酸的連續(xù)數(shù)目的減小而增大;3)蛋白質(zhì)鏈的回轉(zhuǎn)半徑隨著氨基酸帶電荷量的增大而增大,且同極性氨基酸連續(xù)數(shù)量越小,回轉(zhuǎn)半徑隨帶電荷量的變化關(guān)系越明顯。這些結(jié)論說明,蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)主要是由沿蛋白質(zhì)鏈相距較遠但在空間上相互閉合的非鍵相互作用引起的,其中靜電相互作用發(fā)揮了極大優(yōu)勢,這為理解蛋白質(zhì)在不同靜電相互作用下的結(jié)構(gòu)特征及轉(zhuǎn)變行為提供了理論依據(jù),并為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預測提供了思路。

    猜你喜歡
    回轉(zhuǎn)半徑范德華珠子
    新策略讓晶圓級二維超導材料成功堆疊
    二維GeC/BP 范德華異質(zhì)結(jié)的能帶結(jié)構(gòu)與功率因子的第一性原理計算
    二維GeC/BP 范德華異質(zhì)結(jié)的能帶結(jié)構(gòu)與功率因子的第一性原理計算
    與樹一樣大的珠子
    考慮范德華力的微型活齒傳動系統(tǒng)應力分析
    擺珠子
    紙珠子
    好孩子畫報(2017年9期)2017-09-27 04:26:18
    巖土施工履帶式起重機的選型
    山西建筑(2016年13期)2016-11-25 06:24:22
    火炮回轉(zhuǎn)半徑測邊網(wǎng)檢測法及其誤差分析
    中國測試(2016年11期)2016-04-01 03:53:04
    猜珠子
    讀寫算(上)(2015年6期)2015-11-07 07:17:55
    制服丝袜大香蕉在线| 成人av一区二区三区在线看| 色吧在线观看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 在线看三级毛片| 精品一区二区三区av网在线观看| 成年女人看的毛片在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 91在线观看av| 男女午夜视频在线观看| 日韩欧美免费精品| 首页视频小说图片口味搜索| 国产午夜精品论理片| 此物有八面人人有两片| 久久久精品欧美日韩精品| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲天堂国产精品一区在线| 动漫黄色视频在线观看| 香蕉av资源在线| 91久久精品国产一区二区成人 | 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲片人在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 精品福利观看| 一a级毛片在线观看| 免费观看人在逋| 精品无人区乱码1区二区| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产99白浆流出| 97超视频在线观看视频| 午夜精品在线福利| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产爱豆传媒在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久久色成人| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产一级毛片七仙女欲春2| 香蕉av资源在线| 男女视频在线观看网站免费| 亚洲精品456在线播放app | 亚洲在线自拍视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 老汉色av国产亚洲站长工具| 无人区码免费观看不卡| 国产午夜精品论理片| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产一区二区在线av高清观看| 国产精华一区二区三区| 一级毛片女人18水好多| 此物有八面人人有两片| 欧美性感艳星| 校园春色视频在线观看| av福利片在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 日韩av在线大香蕉| 精品日产1卡2卡| 免费看光身美女| 成人国产一区最新在线观看| 国产精品女同一区二区软件 | 亚洲av免费高清在线观看| 男女视频在线观看网站免费| 女人被狂操c到高潮| 亚洲成av人片在线播放无| 国内精品美女久久久久久| 美女黄网站色视频| 好男人在线观看高清免费视频| 日本一本二区三区精品| 久久精品91蜜桃| 丰满的人妻完整版| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲人成电影免费在线| 国产欧美日韩精品一区二区| 999久久久精品免费观看国产| 在线观看一区二区三区| 免费搜索国产男女视频| 亚洲不卡免费看| 少妇高潮的动态图| 搡老岳熟女国产| 国产高清有码在线观看视频| svipshipincom国产片| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产一区在线观看成人免费| 午夜免费激情av| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲av五月六月丁香网| 精品国产美女av久久久久小说| 欧美黑人巨大hd| 中出人妻视频一区二区| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 午夜福利18| 国产精品精品国产色婷婷| 午夜激情欧美在线| 淫妇啪啪啪对白视频| 久久香蕉精品热| avwww免费| 午夜福利在线观看吧| 国产高清videossex| 日本成人三级电影网站| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 成人永久免费在线观看视频| 热99在线观看视频| 国产亚洲精品久久久com| 高清在线国产一区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 免费大片18禁| 婷婷丁香在线五月| 欧美三级亚洲精品| 久久久久久大精品| 亚洲不卡免费看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 床上黄色一级片| 午夜激情福利司机影院| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲精品成人久久久久久| 欧美激情在线99| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 欧美黄色淫秽网站| 少妇高潮的动态图| 一二三四社区在线视频社区8| 三级毛片av免费| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久久久久久久大av| 国产亚洲av嫩草精品影院| 看片在线看免费视频| 亚洲真实伦在线观看| av视频在线观看入口| svipshipincom国产片| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 老汉色av国产亚洲站长工具| 91麻豆av在线| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品久久久久久久久免 | 日韩免费av在线播放| 亚洲性夜色夜夜综合| 午夜福利成人在线免费观看| 身体一侧抽搐| 亚洲av第一区精品v没综合| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲中文字幕日韩| 天天添夜夜摸| 久久人妻av系列| 在线观看av片永久免费下载| 两个人视频免费观看高清| 国产av一区在线观看免费| 我的老师免费观看完整版| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 最新在线观看一区二区三区| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 一个人免费在线观看电影| 久久久久精品国产欧美久久久| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 天天添夜夜摸| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲自拍偷在线| 亚洲精品影视一区二区三区av| 99热这里只有是精品50| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲av电影在线进入| 色综合欧美亚洲国产小说| 精品不卡国产一区二区三区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 九色国产91popny在线| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产伦人伦偷精品视频| 久久久精品大字幕| 亚洲精品成人久久久久久| 午夜福利视频1000在线观看| 无限看片的www在线观看| 日本与韩国留学比较| 91久久精品国产一区二区成人 | 一级a爱片免费观看的视频| 桃红色精品国产亚洲av| 人人妻人人看人人澡| 五月伊人婷婷丁香| 少妇人妻精品综合一区二区 | 人妻夜夜爽99麻豆av| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久亚洲真实| 亚洲午夜理论影院| 色吧在线观看| 精品日产1卡2卡| 国产免费一级a男人的天堂| 一夜夜www| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产精品亚洲美女久久久| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 欧美日韩乱码在线| 精品人妻1区二区| 亚洲av熟女| 亚洲av成人精品一区久久| 婷婷精品国产亚洲av在线| 男女视频在线观看网站免费| netflix在线观看网站| 日本 av在线| 国产麻豆成人av免费视频| 国内精品一区二区在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 色av中文字幕| 一区二区三区高清视频在线| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产伦在线观看视频一区| 欧美午夜高清在线| 国产日本99.免费观看| 99视频精品全部免费 在线| 久久久久久大精品| 日韩大尺度精品在线看网址| 国内揄拍国产精品人妻在线| 美女 人体艺术 gogo| 国产黄片美女视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 精品久久久久久久久久久久久| 神马国产精品三级电影在线观看| 日本 欧美在线| 欧美高清成人免费视频www| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲五月天丁香| 真人做人爱边吃奶动态| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲avbb在线观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 成年人黄色毛片网站| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲七黄色美女视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 少妇人妻一区二区三区视频| 成人性生交大片免费视频hd| 免费av观看视频| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 91久久精品电影网| 性色avwww在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产精品一区二区三区四区久久| av黄色大香蕉| 亚洲成人精品中文字幕电影| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产精品98久久久久久宅男小说| 天美传媒精品一区二区| 人人妻人人看人人澡| 草草在线视频免费看| 99热6这里只有精品| 精品不卡国产一区二区三区| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲18禁久久av| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产一级毛片七仙女欲春2| 成人午夜高清在线视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产黄a三级三级三级人| 在线播放国产精品三级| 亚洲片人在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 一本久久中文字幕| 亚洲专区国产一区二区| 岛国在线免费视频观看| 成人永久免费在线观看视频| 九色成人免费人妻av| 色av中文字幕| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 少妇高潮的动态图| 狠狠狠狠99中文字幕| 少妇的逼水好多| 国产91精品成人一区二区三区| 99久国产av精品| 中文字幕av成人在线电影| 午夜免费激情av| 99久久九九国产精品国产免费| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲在线自拍视频| 亚洲av美国av| 欧美大码av| 美女免费视频网站| 最新在线观看一区二区三区| 日本五十路高清| av女优亚洲男人天堂| 午夜两性在线视频| 日韩高清综合在线| av福利片在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| h日本视频在线播放| 舔av片在线| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 精品久久久久久久久久免费视频| 高清日韩中文字幕在线| 久久伊人香网站| 久久国产乱子伦精品免费另类| 真人一进一出gif抽搐免费| 精品福利观看| 天天躁日日操中文字幕| 免费看光身美女| 久久久久久大精品| 一级毛片女人18水好多| 一二三四社区在线视频社区8| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 色av中文字幕| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲精品456在线播放app | ponron亚洲| 日本一二三区视频观看| 日本成人三级电影网站| 在线观看午夜福利视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 天美传媒精品一区二区| 日本熟妇午夜| 69人妻影院| 在线播放无遮挡| 日本精品一区二区三区蜜桃| xxx96com| 88av欧美| 一级毛片女人18水好多| 国产黄a三级三级三级人| 精品久久久久久久久久免费视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产色婷婷99| 高清日韩中文字幕在线| 久久国产精品人妻蜜桃| avwww免费| 婷婷丁香在线五月| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲精品456在线播放app | 国产精品综合久久久久久久免费| 成人av在线播放网站| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 日本一二三区视频观看| 国内精品美女久久久久久| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 免费看十八禁软件| 欧美日韩综合久久久久久 | 黄色女人牲交| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久这里只有精品中国| 亚洲国产精品久久男人天堂| 久久这里只有精品中国| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 老司机午夜福利在线观看视频| 91字幕亚洲| 久99久视频精品免费| 不卡一级毛片| 亚洲国产精品成人综合色| 一个人看视频在线观看www免费 | 动漫黄色视频在线观看| 1024手机看黄色片| 成人av一区二区三区在线看| 禁无遮挡网站| 成人av一区二区三区在线看| 午夜激情福利司机影院| 国产野战对白在线观看| 成人鲁丝片一二三区免费| 午夜免费成人在线视频| 欧美3d第一页| 91av网一区二区| 老司机午夜福利在线观看视频| 少妇人妻一区二区三区视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产真实伦视频高清在线观看 | 在线观看日韩欧美| 亚洲专区中文字幕在线| 在线看三级毛片| 男女午夜视频在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 草草在线视频免费看| 色尼玛亚洲综合影院| 久久这里只有精品中国| 最新美女视频免费是黄的| 日韩欧美三级三区| 窝窝影院91人妻| 成年女人永久免费观看视频| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲欧美日韩东京热| 男女之事视频高清在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 一边摸一边抽搐一进一小说| 日本黄色视频三级网站网址| 精品熟女少妇八av免费久了| 此物有八面人人有两片| 国产69精品久久久久777片| 日韩欧美精品v在线| 亚洲精品456在线播放app | 亚洲精品一区av在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产欧美日韩一区二区三| 国产色爽女视频免费观看| 国产精品一区二区三区四区久久| 一区二区三区国产精品乱码| 香蕉丝袜av| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 日韩av在线大香蕉| 成人特级黄色片久久久久久久| 精品欧美国产一区二区三| 老熟妇仑乱视频hdxx| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 日本与韩国留学比较| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产真人三级小视频在线观看| 午夜福利成人在线免费观看| 国产91精品成人一区二区三区| 国产成人av激情在线播放| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 免费大片18禁| 亚洲av二区三区四区| 国产成人影院久久av| 日本黄大片高清| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产久久久一区二区三区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产综合懂色| 亚洲av成人av| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 我的老师免费观看完整版| 成人av在线播放网站| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久草成人影院| 亚洲美女视频黄频| 国产成人a区在线观看| 亚洲av成人av| 韩国av一区二区三区四区| 日日干狠狠操夜夜爽| av福利片在线观看| 毛片女人毛片| 大型黄色视频在线免费观看| 国产69精品久久久久777片| 欧美bdsm另类| 日本一本二区三区精品| 九九热线精品视视频播放| 欧美乱色亚洲激情| 一区二区三区免费毛片| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 女警被强在线播放| 丁香欧美五月| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产黄a三级三级三级人| 搡老熟女国产l中国老女人| 成人午夜高清在线视频| 久久精品91蜜桃| 美女 人体艺术 gogo| 精华霜和精华液先用哪个| 日韩欧美在线二视频| 亚洲18禁久久av| 欧美高清成人免费视频www| 欧美成人性av电影在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲第一电影网av| 国产一区二区激情短视频| 无限看片的www在线观看| 精品久久久久久久末码| 久久久久久九九精品二区国产| 欧美黄色淫秽网站| 久久久久久久久大av| 丁香六月欧美| 国产伦人伦偷精品视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 欧美乱码精品一区二区三区| 久久6这里有精品| 成人特级黄色片久久久久久久| 黄色片一级片一级黄色片| 在线视频色国产色| 久久人妻av系列| 露出奶头的视频| www日本在线高清视频| 亚洲五月婷婷丁香| 嫩草影视91久久| 人妻久久中文字幕网| 在线免费观看的www视频| 中文字幕av在线有码专区| а√天堂www在线а√下载| 国产精品久久久久久久电影 | 一a级毛片在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 精品福利观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 日韩大尺度精品在线看网址| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 免费在线观看成人毛片| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 99精品在免费线老司机午夜| 最近最新中文字幕大全免费视频| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产伦一二天堂av在线观看| 日本一二三区视频观看| 免费看a级黄色片| 日本在线视频免费播放| 九色成人免费人妻av| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 成年人黄色毛片网站| 久久国产乱子伦精品免费另类| 最近最新中文字幕大全电影3| 嫩草影院精品99| 在线a可以看的网站| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 婷婷六月久久综合丁香| 久久久久久久久中文| 欧美成人a在线观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 日韩欧美在线二视频| 久久久久久久午夜电影| 亚洲av五月六月丁香网| 黄色片一级片一级黄色片| 日本 av在线| 麻豆一二三区av精品| 欧美黑人巨大hd| 又粗又爽又猛毛片免费看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 免费高清视频大片| 免费看光身美女| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 手机成人av网站| 国产淫片久久久久久久久 | 五月玫瑰六月丁香| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久久色成人| 一a级毛片在线观看| 99久久精品一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 此物有八面人人有两片| 午夜久久久久精精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 欧美日韩综合久久久久久 | 午夜亚洲福利在线播放| 国产免费一级a男人的天堂| 老司机福利观看| 国产三级黄色录像| 白带黄色成豆腐渣| 怎么达到女性高潮| 精品免费久久久久久久清纯| 日韩欧美 国产精品| 99热这里只有精品一区| 综合色av麻豆| 国产精品亚洲一级av第二区| 女人被狂操c到高潮| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 岛国在线观看网站| 嫁个100分男人电影在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 国内精品久久久久精免费| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产高清视频在线播放一区| 久久伊人香网站| 极品教师在线免费播放| 不卡一级毛片| 国产精品久久电影中文字幕| 国产精品爽爽va在线观看网站| 中文亚洲av片在线观看爽| 免费看日本二区| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 黄色成人免费大全| 日本黄色片子视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美日韩精品网址| 精品无人区乱码1区二区| 97超视频在线观看视频| 中文资源天堂在线| 国产精华一区二区三区| 一a级毛片在线观看| 免费av观看视频| 久久九九热精品免费| 一级a爱片免费观看的视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 在线观看午夜福利视频| 成人三级黄色视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 日韩高清综合在线| av国产免费在线观看| 看黄色毛片网站| 亚洲最大成人手机在线| 午夜a级毛片| 国产av麻豆久久久久久久| 日本 欧美在线| 午夜福利18| 国产欧美日韩精品一区二区| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 中国美女看黄片| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产av麻豆久久久久久久| 俺也久久电影网| 欧美bdsm另类| 国产熟女xx| 亚洲人成电影免费在线|