噴他佐辛對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠的心肌保護(hù)作用及機(jī)制

朱麗麗,洪楚亮,刁秀萍

心肌缺血再灌注損傷是臨床心肺復(fù)蘇術(shù)以及體外循環(huán)術(shù)中較常見的病理過(guò)程,可導(dǎo)致炎性因子釋放及大量代謝產(chǎn)物產(chǎn)生,嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)全身炎性反應(yīng),如何防治其發(fā)生一直是臨床研究的重點(diǎn)[1-3]。噴他佐辛是一種人工合成的嗎啡類衍生物,能夠拮抗μ受體并激動(dòng)σ受體,常用于麻醉后鎮(zhèn)痛治療[4-6]。有研究表明,噴他佐辛用于心肌缺血再灌注患者具有較好的抗炎作用[7-8],但關(guān)于噴他佐辛對(duì)心肌缺血再灌注的具體作用機(jī)制尚未有明確定論?；诖?本研究旨在探討噴他佐辛對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠的心肌保護(hù)作用及機(jī)制,以期為臨床提供參考,報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 于2021年5月—2022年5月選取健康成年SD大鼠(廣東醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供)51只,體質(zhì)量210～250 g,周齡為8～13周,采用隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型組及噴他佐辛組,每組17只。大鼠均在相同環(huán)境下飼養(yǎng),包括溫度、進(jìn)食以及飲水等。

1.2 建模與治療方法

1.2.1 心肌缺血再灌注模型制備:大鼠均予以戊巴比妥鈉溶液50 mg/kg腹腔注射,進(jìn)行麻醉,之后將其固定于手術(shù)臺(tái),連接心電圖后進(jìn)行動(dòng)靜脈穿刺,同時(shí)監(jiān)測(cè)血壓、心率(HR);切開大鼠氣管行氣管插管后連接呼吸機(jī),進(jìn)行開胸,對(duì)其冠狀動(dòng)脈左前降支用無(wú)損傷線穿線,平穩(wěn)15 min后,在血管以及縫合線之間墊硅膠管,結(jié)扎30 min,大鼠心肌顏色發(fā)紺,心電圖顯示為R波高聳或ST段抬高,表明心肌缺血損傷建模成功,而后予以血流灌注120 min,大鼠缺血組織的顏色恢復(fù)正常,且ST段下降,則表明大鼠心肌缺血再灌注成功。

1.2.2 干預(yù)措施:假手術(shù)組大鼠僅進(jìn)行開胸穿線但并不結(jié)扎,即并不建立心肌缺血再灌注損傷模型;模型組大鼠進(jìn)行冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎30 min,之后對(duì)其進(jìn)行血流灌注120 min,期間僅予以0.9%氯化鈉溶液;噴他佐辛組大鼠在進(jìn)行冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎30 min,之后對(duì)其進(jìn)行血流灌注120 min,在進(jìn)行血流灌注前15 min注射噴他佐辛注射液(華仁藥業(yè)子公司安徽恒星制藥有限公司生產(chǎn))。

1.3 觀察指標(biāo)與方法

1.3.1 血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo):比較各組大鼠缺血前(T0)、缺血30 min時(shí)(T1)、血流再灌注60 min時(shí)(T2)及血流再灌注120 min時(shí)(T3)的平均動(dòng)脈壓(MAP)、心率收縮壓乘積(RPP)及HR。

1.3.2 心肌缺血、梗死體積比例:隨機(jī)選取每組大鼠6只,對(duì)模型組、噴他佐辛組大鼠進(jìn)行120 min血流再灌注后再次阻斷冠狀動(dòng)脈,假手術(shù)組不作處理;之后,注射伊文氏藍(lán)溶液使大鼠未缺血組織染至藍(lán)色,剪斷大血管取出心臟,對(duì)其左心臟進(jìn)行分離,制作成組織塊。使用TTC染色法將組織染色后使用甲醛進(jìn)行固定,在顯微鏡下觀察藍(lán)色(正常區(qū)域)、紅色(缺血未梗死區(qū)域)及灰白色(缺血梗死區(qū)域),對(duì)其進(jìn)行稱重,計(jì)算心肌缺血、梗死體積比例。

1.3.3 心肌肌鈣蛋白I(cTnI)及降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)水平:比較各組大鼠各時(shí)間點(diǎn)cTnI及CGRP水平。使用酶聯(lián)免疫分析試劑盒進(jìn)行檢測(cè),所有操作均按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)比較 T0,3組MAP、RPP、HR比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。T1、T2、T3,模型組、噴他佐辛組MAP、RPP、HR低于T0(P<0.05);T1、T2、T3,模型組、噴他佐辛組MAP、RPP、HR低于假手術(shù)組,但噴他佐辛組T1、T2MAP、RPP、HR低于模型組,T3各指標(biāo)高于模型組(P<0.05),見表1。

表1 3組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)比較

2.2 心肌缺血、梗死體積比例比較 3組心肌缺血體積比例比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);模型組及噴他佐辛組心肌梗死體積比例高于假手術(shù)組,但噴他佐辛組低于模型組(P<0.05),見表2。

表2 3組大鼠心肌缺血、梗死體積比例比較

2.3 cTnI及CGRP水平比較 T0、T1、T2,3組cTnI及CGRP水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);T3,手術(shù)組cTnI水平及噴他佐辛組CGRP水平高于T0(P<0.05);T3,噴他佐辛組cTnI水平低于假手術(shù)組、模型組,CGRP水平高于假手術(shù)組、模型組(P<0.05),見表3。

表3 3組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)cTnI及CGRP水平比較

3 討 論

心肌缺血再灌注損傷是臨床心臟手術(shù)后常見的并發(fā)癥,如不能及時(shí)處理,易導(dǎo)致炎癥發(fā)生,甚至引發(fā)全身炎性反應(yīng),導(dǎo)致死亡等不良事件,故如何保護(hù)心功能是臨床研究的重點(diǎn)。對(duì)于心肌缺血再灌注患者的治療方法較多,但關(guān)于其具體作用機(jī)制尚未有明確結(jié)論。本研究成功制備了心肌缺血再灌注大鼠模型,經(jīng)過(guò)不同干預(yù)后,結(jié)果顯示,T1、T2、T3,模型組、噴他佐辛組MAP、RPP、HR低于假手術(shù)組,表明心肌缺血灌注大鼠模型制備成功,大鼠心臟舒張及收縮功能受損,可能會(huì)導(dǎo)致心肌損傷。

噴他佐辛是一種阿片受體激動(dòng)/拮抗劑,鎮(zhèn)痛效果顯著[9-10]。有研究表明,噴他佐辛可激動(dòng)患者部分阿片受體[11],藥物進(jìn)入人體后前期主要通過(guò)拮抗μ受體、后期主要通過(guò)激動(dòng)σ受體產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效果,而在

機(jī)體產(chǎn)生炎癥時(shí),其主要通過(guò)激動(dòng)κ受體發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。本研究結(jié)果顯示,噴他佐辛組T1、T2MAP、RPP、HR低于模型組,T3各指標(biāo)高于模型組,表明在心肌缺血再灌注中應(yīng)用噴他佐辛可減小對(duì)大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響。cTnI僅在心肌細(xì)胞中表達(dá)[12],對(duì)診斷心肌損傷具有較高的特異度及靈敏度。有研究表明,心肌細(xì)胞可分泌CGRP,且心肌組織中還存在CGRP表達(dá)及腎上腺素的細(xì)胞,可同時(shí)表達(dá)δ阿片受體,刺激CGRP的合成及分泌[13],因此CGRP可作為噴他佐辛保護(hù)心肌的途徑。CGRP不僅可擴(kuò)張血管,還可介導(dǎo)CGRP受體加強(qiáng)心肌收縮[14]。本研究結(jié)果顯示,T3,噴他佐辛組cTnI水平低于假手術(shù)組、模型組,CGRP水平高于假手術(shù)組、模型組,表明在心肌缺血再灌注中應(yīng)用噴他佐辛可通過(guò)調(diào)節(jié)CGRP表達(dá)明顯減輕模型大鼠心肌損傷。此外,模型組及噴他佐辛組心肌梗死體積比例高于假手術(shù)組,但噴他佐辛組低于模型組,表明心肌缺血再灌注中應(yīng)用噴他佐辛可起到心肌保護(hù)作用,減輕心肌梗死。

綜上所述,在心肌缺血再灌注中應(yīng)用噴他佐辛可明顯減輕心肌缺血再灌注損傷,減小對(duì)機(jī)體血流動(dòng)力學(xué)的影響,CGRP可能參與其作用機(jī)制。

利益沖突：所有作者聲明無(wú)利益沖突。