骨碎補(bǔ)與習(xí)用品光亮密網(wǎng)蕨中柚皮苷含量的比較分析

馬潔

骨碎補(bǔ)與習(xí)用品光亮密網(wǎng)蕨中柚皮苷含量的比較分析

馬潔

目的研究骨碎補(bǔ)中有效成分柚皮苷的含量與習(xí)用品光亮密網(wǎng)蕨中柚皮苷含量的比較。方法采用薄層色譜法對骨碎補(bǔ)與習(xí)用品光亮密網(wǎng)蕨中的柚皮苷進(jìn)行鑒別。采用高效液相色譜法對骨碎補(bǔ)與習(xí)用品中光亮密網(wǎng)蕨中的柚皮苷含量進(jìn)行測定。測定柚皮苷采用Hypersel C18柱；以甲醇-醋酸-水(35∶4∶65)為流動相；檢測波長為283 nm。結(jié)果薄層色譜顯示光亮密網(wǎng)蕨的色斑不明顯, 高效液相色譜顯示光亮密網(wǎng)蕨中所含柚皮苷微量。結(jié)論該方法顯示骨碎補(bǔ)同科植物習(xí)用品光亮密網(wǎng)蕨和骨碎補(bǔ)相比, 所含柚皮苷的量較少。

骨碎補(bǔ)；光亮密網(wǎng)蕨；柚皮苷

骨碎補(bǔ)為中醫(yī)骨傷科常用中藥, 別名毛姜、猴姜、石巖姜、申姜[1］, 可療傷止痛, 補(bǔ)腎強(qiáng)骨；外用消風(fēng)祛斑[2］。其性味苦, 溫。歸肝、腎經(jīng)。用于跌撲閃挫, 筋骨折傷, 腎虛腰痛,筋骨痿軟, 耳鳴耳聾, 牙齒松動；外治斑禿, 白癜風(fēng)[2］。其正品來源于水龍骨科(Polypodiaceae)植物槲蕨Drynaria fortunei (Kunze)J.Sm.的干燥根莖[2］。

光亮密網(wǎng)蕨, 曾為骨碎補(bǔ)的習(xí)用品, 為骨碎補(bǔ)同科植物水龍骨科(Polypodiaceae)植物光亮密網(wǎng)蕨Phymatodes lucida (Roxb.) Ching的干燥根莖[3］。別名為綠爬山虎、大蕨菜、豬毛蕨、青竹標(biāo)。其性味澀、溫、有小毒?？苫钛? 止痛, 接骨, 消腫。主治跌打損傷, 骨折[3］, 與骨碎補(bǔ)在治療中醫(yī)骨傷科疾病方面的功效相似。

骨碎補(bǔ)的主要有效化學(xué)成分之一為柚皮苷, 其藥理作用研究較為廣泛, 且對于治療疾病機(jī)理方面研究相對深入。研究顯示, 柚皮苷溶液可以提高成骨細(xì)胞株MC3T3-E1的增殖能力和分化能力[4］, 可以糾正T2DM大鼠的糖代謝和脂質(zhì)代謝紊亂狀況, 減輕胰島素抵抗, 增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力, 對肝臟起到保護(hù)作用[5］。而曾作為骨碎補(bǔ)習(xí)用品的光亮密網(wǎng)蕨,因其藥性有小毒, 在廣西部分地區(qū)曾作為骨碎補(bǔ)藥材使用,但光亮密網(wǎng)蕨中是否含柚皮苷及其具體含量的多少等, 這些問題在臨床安全、有效用藥的篩選使用中有重要意義。故設(shè)計試驗(yàn)檢驗(yàn)光亮密網(wǎng)蕨中是否含柚皮苷及測定其中的具體含量, 具體方法如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀：日本島津LC-10Avp高效液相色譜儀, SPDM-10Av二級管陣列檢測器, Class-vp5.0色譜工作站。

1.2 試藥 骨碎補(bǔ)從藥店購買；光亮密網(wǎng)蕨由廣西當(dāng)?shù)剞r(nóng)民提供購得；柚皮苷購自中國藥品生物制品鑒定所(批號：110722-2006610, 定性鑒別、含量測定中應(yīng)用)；甲醇、乙腈均為色譜純；水為重蒸水, 其他試劑均為分析純。

2 方法

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 對照溶液的制備方法 取柚皮苷對照品, 加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液, 作為對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備方法 取骨碎補(bǔ)粉末0.5 g, 加甲醇30 ml, 加熱回流1 h, 放冷, 濾過, 濾液蒸干, 殘渣加甲醇1 ml使溶解, 作為骨碎補(bǔ)的供試品溶液。

取光亮密網(wǎng)蕨粉末0.5 g, 加甲醇30 ml, 加熱回流1 h, 放冷、濾過、濾液蒸干、殘渣加甲醇1 ml使溶解, 作為光亮密網(wǎng)蕨的供試品溶液。

2.1.3 薄層色譜條件 對上述三種溶液各精密吸取5 μl, 分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上, 展開劑為甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1∶12∶2.5∶3)的上層溶液, 薄層板經(jīng)展開, 取出, 晾干,再噴三氯化鋁試液, 后置紫外光燈(365 nm)下檢視。

2.1.4 結(jié)果 紫外光燈(365 nm)下顯示, 兩種供試品的色譜中, 骨碎補(bǔ)的供試品色譜與對照品的色譜在相對應(yīng)的位置上, 顯相同顏色的熒光斑點(diǎn), 而光亮密網(wǎng)蕨的供試品色譜在對照品色譜相對應(yīng)的位置上顯示較微弱的熒光斑點(diǎn)。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 美國熱電C18色譜柱(Hypersi 填料,4.6×250 mm,5μm), 柱溫設(shè)定30℃；進(jìn)樣量為10 μl, 流動相是甲醇-醋酸-水(35∶4∶65)；檢測波長為283 nm, 流速1.0 ml/min。理論踏板數(shù)按柚皮苷峰計算, 應(yīng)不低于3000。按此色譜條件測定, 柚皮苷的保留時間約為8 min。

2.2.2 對照品溶液的制備 取柚皮苷對照品適量, 精密稱定, 置錐形瓶中, 加甲醇30 ml, 加熱回流3 h, 放冷, 濾過, 濾液置50 ml量瓶中, 用少量甲醇分?jǐn)?shù)次洗滌容器, 洗液濾入同一量瓶中加甲醇至刻度線搖勻即可。

2.3.3 供試品溶液的制備 取骨碎補(bǔ)粗粉約0.25 g, 精密稱定, 置錐形瓶中, 加甲醇30 ml, 加熱回流3 h, 放冷, 濾過, 濾液置50 ml量瓶中, 與對照品溶液的制備相同, 用少量甲醇分?jǐn)?shù)次洗滌容器, 洗液濾入同一量瓶中, 加甲醇至刻度, 搖勻, 即得骨碎補(bǔ)供試品溶液。

取光亮密網(wǎng)蕨粗粉約0.25 g, 精密稱定, 置錐形瓶中, 加甲醇30 ml, 加熱回流3 h, 放冷, 濾過, 濾液置50 ml量瓶中,同法, 加甲醇至刻度, 搖勻, 即得光亮密網(wǎng)蕨供試品溶液。

2.3.4 結(jié)果 高效液相色譜結(jié)果經(jīng)計算顯示光亮密網(wǎng)蕨中柚皮苷的含量很少。

3 結(jié)果

上述試驗(yàn)結(jié)果表明：光亮密網(wǎng)蕨和骨碎補(bǔ)中均含有柚皮苷成分, 但和骨碎補(bǔ)相比, 光亮密網(wǎng)蕨中柚皮苷的含量較少。

4 討論

該方法能夠清晰顯示出中藥骨碎補(bǔ)與同科植物習(xí)用品光亮密網(wǎng)蕨中所含柚皮苷多少的不同, 方法簡單, 試驗(yàn)結(jié)果明確, 具有一定的意義。同時試驗(yàn)結(jié)果表明光亮密網(wǎng)蕨中含柚皮苷但含量較少, 而作為骨碎補(bǔ)習(xí)用品的光亮密網(wǎng)蕨, 因其藥性有小毒, 在已明確柚皮苷含量較少的情況下, 考慮到臨床用藥的安全、有效, 其能否作為骨碎補(bǔ)的代用品應(yīng)做進(jìn)一步的篩選考察。另外, 光亮密網(wǎng)蕨與骨碎補(bǔ)雖均可用于骨傷科疾病, 但兩者的功效并不完全相同, 鑒于中藥所含成份的多樣性, 以及我國藥用資源的嚴(yán)峻現(xiàn)狀, 應(yīng)對光亮密網(wǎng)蕨所含成份以及不同成份治療疾病的機(jī)理進(jìn)行深入研究, 以期發(fā)現(xiàn)光亮密網(wǎng)蕨的主要藥用成份, 進(jìn)而對其進(jìn)行新的分類歸屬而不是將其作為骨碎補(bǔ)的習(xí)用品用于臨床。

[1]徐國鈞, 王強(qiáng), 曾金虎, 等.中草藥彩色圖譜.福建:福建科學(xué)技術(shù)出版社,1989:298.

[2]國家藥典委員會.中國藥典(一部).北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

[3]謝宗萬, 范崔生, 朱兆儀.全國中草藥匯編.北京:人民衛(wèi)生出版社,1975:617.

[4]丁佩惠, 唐琪, 陳莉麗.柚皮苷對小鼠成骨細(xì)胞MC3T-E1增殖、分化、和礦化得影響.中國中藥雜志,2009,34(13):1712.

[5]周燕文, 時雪峰.柚皮苷對實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病大鼠的作用研究.中國藥師,2012,15(4):471.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.02.162

2014-11-03］

455000 河南省安陽市中醫(yī)院