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    基于AMPK/mTOR通路介導(dǎo)的自噬探討溫補(bǔ)固腎方對(duì)糖尿病腎纖維化的影響

    2023-10-29 06:50:48禹靜劉續(xù)春李振華
    中醫(yī)藥信息 2023年10期
    關(guān)鍵詞:腎方比值纖維化

    禹靜,劉續(xù)春,李振華

    (1.黃淮學(xué)院直屬附屬駐馬店市中心醫(yī)院,河南 駐馬店 463000;2.鄭州市中心醫(yī)院,河南 鄭州 450001)

    糖尿病腎病是慢性腎臟疾病以及終末期腎衰竭的主要病因,也是糖尿病重要的微血管并發(fā)癥和主要的死亡病因[1]。既往研究發(fā)現(xiàn),全球大約有30%~40%的糖尿病患者會(huì)伴隨疾病的遷延和進(jìn)展成為糖尿病腎病,伴有終末期腎病的患者五年生存率低于20%[2]。因此,延緩或阻止糖尿病腎病進(jìn)展對(duì)于改善患者生存質(zhì)量具有重要的臨床意義。糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,主要包括纖維化、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激以及糖脂代謝紊亂等。眾多研究已證實(shí),腎纖維化是糖尿病腎病進(jìn)行性加重的重要因素[3]。因此,積極尋找能夠抑制腎纖維化的新型治療藥物或方式對(duì)于改善糖尿病腎病進(jìn)展具有重大的意義。

    中醫(yī)藥在治療糖尿病腎病方面療效確切。溫補(bǔ)固腎方以溫陽補(bǔ)腎固腎為治療根本大法,佐以收澀補(bǔ)氣之品[4],本課題組前期研究顯示,其能夠通過下調(diào)collagen Ⅲ、TGF-β1 蛋白表達(dá)抑制腎纖維化,從而改善糖尿病腎損傷[5]。但是有關(guān)溫補(bǔ)固腎方對(duì)糖尿病腎纖維的調(diào)控機(jī)制尚不明晰。自噬是細(xì)胞中代謝產(chǎn)物及錯(cuò)誤折疊蛋白降解的重要途徑,即細(xì)胞能夠通過降解自噬小體內(nèi)包裹的損傷細(xì)胞器、病原體以及蛋白質(zhì),從而維持細(xì)胞正常的生理功能[6]。研究顯示,在糖尿病腎病大鼠中自噬水平被顯著性抑制,而激活細(xì)胞自噬能夠顯著抑制糖尿病腎病腎纖維化,改善糖腎損傷[3]??梢姡?xì)胞自噬與糖尿病腎纖維化的關(guān)系密切,通過調(diào)控細(xì)胞自噬可能是抑制腎纖維化,改善糖尿病腎病的重要機(jī)制。AMPK/mTOR 途徑是調(diào)節(jié)自噬的重要途徑之一,AMPK 激活后能夠激活TSC1/2 蛋白,進(jìn)而抑制mTOR 活化,從而誘導(dǎo)細(xì)胞自噬形成[7]。因此,本研究擬通過構(gòu)建糖尿病腎病大鼠模型,探究溫補(bǔ)固腎方能否通過調(diào)控AMPK/mTOR 通路介導(dǎo)的細(xì)胞自噬,抑制糖尿病腎纖維化,并最終改善糖腎損傷。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 動(dòng)物

    SPF 級(jí)雄性SD 大鼠,購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(滬)2021-0002,100只,體質(zhì)量180~210 g。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d,期間正常飲食、飲水,晝夜12 h/12 h 交替光照,溫度(25±2)℃,相對(duì)濕度45%~55%,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號(hào):20191002),符合3R原則。

    1.1.2 藥物與試劑

    溫補(bǔ)固腎方制劑由廣東一方制藥有限公司提供,組方:黨參0.1 g,山茱萸0.12 g,芡實(shí)0.2 g,枸杞子0.1 g,覆盆子0.1 g,菟絲子 0.1 g,淫羊藿 0.1 g,益智仁 0.1 g;達(dá)格列凈片(AstraZeneca Pharmaceuticals LP,規(guī)格:10 mg/片,國(guó)藥準(zhǔn)字J20170040);AMPK 抑制劑Compound C(美國(guó)Selleck公司,貨號(hào):S7306);蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色試劑盒、PAS 染色試劑盒、Masson 染色試劑盒、蛋白質(zhì)濃度測(cè)定試劑盒、發(fā)光液、山羊抗兔二抗、山羊抗小鼠二抗(上海碧云天生物技術(shù)公司,貨號(hào):C0105S、T4106、T4104、P0011、P0018 FS、A0409、A0413);免疫組化檢測(cè)試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,貨號(hào):SP-9001);鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)、4%多聚甲醛、2.5%戊二醛固定液(北京索萊寶科技有限公司,貨號(hào):S8050、20151211、P1126);α-SMA 抗體、E-Cadherin 抗體、LC3 抗體、AMPK 抗體、p-AMPK 抗體、mTOR 抗體、p-mTOR 抗體(英國(guó)Abcam 公司,貨號(hào):ab5694、ab76055、ab192890、ab271188、ab131357、ab134903、ab137133)。

    1.1.3 儀器

    血糖儀(瑞士Roche 公司,型號(hào):卓越精采型);多功能酶標(biāo)儀(長(zhǎng)春樂鏷科技有限公司,型號(hào):LP-5117);熒光倒置顯微鏡(日本/奧林巴斯Olympus,型號(hào):CKX53);高速冷凍離心機(jī)(湖南可成儀器設(shè)備有限公司,型號(hào):H3-18KR);凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)Bio-Rad伯樂公司,型號(hào):Gel Doc XR+)。

    1.2 方法

    1.2.1 糖尿病腎病模型構(gòu)建、分組及干預(yù)

    SD 大鼠腹腔一次性注射STZ(60 mg/kg)構(gòu)建糖尿病腎病模型。判定標(biāo)準(zhǔn):STZ 注射后3 d,血糖值均 ≥16.7 mmol/L,且尿液蛋白呈現(xiàn)陽性者,被確認(rèn)為模型構(gòu)建成功。雄性SPF 級(jí)SD 大鼠100 只,除對(duì)照組20 只外,均采用腹腔注射鏈脲佐菌素(60 mg/kg)構(gòu)建糖尿病腎病模型。其中60 只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、糖尿病腎病組、達(dá)格列凈組(1.0 mg/kg)、溫補(bǔ)固腎方低、中、高劑量組(0.92、1.84、3.68 g/kg),每組各10 只。除對(duì)照組外,其余各組大鼠均采用STZ 誘導(dǎo)糖尿病腎病模型。溫補(bǔ)固腎方低劑量組劑量為0.92 g/kg,中、高劑量組分別為低劑量組的2 倍和4 倍。達(dá)格列凈組給予1.0 mg/kg 劑量達(dá)格列凈灌胃。對(duì)照組及糖尿病腎病組大鼠給予等量生理鹽水灌胃。以上各組大鼠1次/d,連續(xù)灌胃12 周。剩余40 只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、糖尿病腎病組、溫補(bǔ)固腎方高劑量組(3.68 g/kg)、溫補(bǔ)固腎方高劑量組 + AMPK 抑制劑組(20 mg/kg),每組各10 只。除對(duì)照組外,其余各組大鼠均采用STZ 誘導(dǎo)糖尿病腎病模型。溫補(bǔ)固腎方高劑量組大鼠給予3.68 g/kg劑量灌胃。溫補(bǔ)固腎方高劑量組 + AMPK 抑制劑組大鼠給予3.68 g/kg 溫補(bǔ)固腎方灌胃,同時(shí)予以腹腔注射AMPK 抑制劑Compound C 20 mg/kg[8]。對(duì)照組及糖尿病腎病組大鼠予以腹腔注射等量生理鹽水。以上各組大鼠均為1次/d,干預(yù)12周。

    1.2.2 腎功能生化指標(biāo)檢測(cè)

    各組大鼠分別干預(yù)12 周后,每組隨機(jī)取6 只大鼠進(jìn)行尾靜脈采血,測(cè)定血糖值。收集尿液,按照試劑盒檢測(cè)說明書測(cè)定尿蛋白、肌酐及尿素氮含量。

    1.2.3 腎組織病理學(xué)觀察

    將腎組織放于10%的多聚甲醛中固定24 h、梯度乙醇脫水、二甲苯透明、組織石蠟包埋、切片3~5 μm,行HE、PAS 及Masson 染色,顯微鏡下觀察心肌組織形態(tài)學(xué)變化及心肌纖維化程度。

    1.2.4 免疫組化檢測(cè)α-SMA和E-Cadherin表達(dá)

    每組隨機(jī)取6 只大鼠進(jìn)行腎組織切片,經(jīng)內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑阻斷、抗原修復(fù)、組織封閉后,滴加α-SMA 抗體及E-Cadherin 抗體(1∶500),孵育過夜,對(duì)應(yīng)二抗孵育2 h,滴加DAB 顯色液,蘇木素復(fù)染,于400倍顯微鏡下觀察腎組織α-SMA 及E-Cadherin 著色情況,并通過ImageJ 軟件計(jì)算腎組織α-SMA 及E-Cadherin 陽性細(xì)胞數(shù)量,以胞漿或胞膜呈棕色顆粒為陽性表達(dá)。

    免疫組化陽性細(xì)胞表達(dá)率(%)=免疫組化陽性細(xì)胞數(shù)量/細(xì)胞總數(shù)×100%

    1.2.5 電鏡觀察自噬小體及腎組織病理變化

    將腎組織修剪成大小為1 mm×1 mm×1 mm組織塊,在1%四氧化鋨中固定3 h。采用分級(jí)乙醇和丙酮梯度脫水后,將樣品嵌入Spurr 樹脂中,并切成70 nm厚的薄片,最后采用醋酸鈾酰和檸檬酸鉛染色,并用10 000 倍透射電子顯微鏡觀察自噬小體形態(tài)與數(shù)量。2.5%戊二醛固定腎組織,制備切片,電鏡下觀察腎組織病理形態(tài)變化。

    1.2.6 Western blot 檢測(cè)腎組織LC3-Ⅱ、p-AMPK、p-mTOR表達(dá)

    給藥12周后,立即將大鼠處死,剪取大鼠腎組織并提取總蛋白,按照1∶5質(zhì)量與體積比加入細(xì)胞裂解液,于4 ℃條件下裂解40 min;BCA法測(cè)定各組大鼠腎組織蛋白質(zhì)濃度;蛋白上樣(按照每孔上樣量30 μg計(jì)算得出上樣體積);凝膠電泳;濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜;5% BSA室溫封閉2 h;分別加p-AMPK抗體(1∶1 000)、AMPK抗體(1∶1 000)、p-mTOR抗體(1∶500)、mTOR抗體(1∶1 000)、LC3抗體(1∶1 000)及β-actin抗體(1∶2000),4 ℃孵育過夜;加對(duì)應(yīng)的山羊抗兔二抗或者山羊抗鼠二抗(1∶5 000),室溫孵育1~2 h;TBST洗滌3次,每次5 min,滴加顯影液,顯影并拍照。通過Image J 軟件定量分析各組蛋白相對(duì)表達(dá)量。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,多組間比較采用多因素方差分析,組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 各組大鼠腎功能情況比較

    與對(duì)照組比較,糖尿病腎病組大鼠FBG、BUN、Scr和24 h-UA均顯著增加(P<0.01)。與糖尿病腎病組比較,溫補(bǔ)固腎方各劑量組和達(dá)格列凈組大鼠FBG、BUN、Scr 和24 h-UA 均顯著降低(P<0.05,P<0.01)。見表1。

    表1 各組大鼠腎功能生化指標(biāo)比較(±s)

    表1 各組大鼠腎功能生化指標(biāo)比較(±s)

    注:與對(duì)照組比較,**P<0.01;與糖尿病腎病組比較,#P<0.05,##P<0.01。

    組別對(duì)照組糖尿病腎病組達(dá)格列凈組溫補(bǔ)固腎方低劑量組溫補(bǔ)固腎方中劑量組溫補(bǔ)固腎方高劑量組24 h-UA/mg 5.49±1.35 44.13±7.39**11.12±2.31##35.74±4.77#30.43±4.45##28.65±5.74##n6 6 6 6 6 6劑量/(g/kg)——0.001 0.92 1.84 3.68 FBG/(mmol/L)5.28±0.25 28.20±4.05**10.59±2.42##23.66±1.99#18.05±2.29##16.23±2.41##BUN/(μmol/L)6.47±1.16 26.75±4.33**8.95±1.54##17.94±4.30##16.53±1.96##12.63±2.42##Scr/(μmol/L)45.07±7.05 101.16±15.82**49.98±7.59##76.69±12.15#69.45±11.19##52.23±11.05##

    2.2 各組大鼠組織病理學(xué)情況比較

    與對(duì)照組比較,糖尿病腎病組大鼠腎小球體積增大,間質(zhì)增寬,且腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性,可見有部分紫紅色糖原沉積,呈典型的糖尿病腎損傷。與糖尿病腎病組比較,溫補(bǔ)固腎方各劑量組和達(dá)格列凈組大鼠腎小球體積增大,間質(zhì)增寬以及腎小管上皮細(xì)胞空泡變性程度均有不同程度的減輕,且紫紅色糖原沉積明顯降低。見圖1。

    圖1 各組大鼠腎組織病理學(xué)圖(×400)

    2.3 各組大鼠腎纖維化情況比較

    與對(duì)照組比較,糖尿病腎病組大鼠α-SMA 表達(dá)顯著升高,E-Cadherin 表達(dá)顯著降低(P<0.01)。與糖尿病腎病組比較,溫補(bǔ)固腎方各劑量組和達(dá)格列凈組大鼠α-SMA 表達(dá)顯著降低,E-Cadherin 表達(dá)顯著升高(P<0.01)。見圖2。

    圖2 各組大鼠腎組織α-SMA和E-Cadherin表達(dá)

    2.4 各組大鼠腎組織細(xì)胞自噬水平情況比較

    透射電鏡觀察各組大鼠腎組織自噬小體數(shù)量。結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,糖尿病腎病組大鼠自噬小體數(shù)量顯著減少。與糖尿病腎病組比較,溫補(bǔ)固腎方各劑量組和達(dá)格列凈組大鼠自噬小體數(shù)量均顯著增加。Western blot檢測(cè)各組大鼠腎組織自噬標(biāo)志性蛋白LC3表達(dá)。結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,糖尿病腎病組大鼠腎組織LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值顯著降低(P<0.01)。與糖尿病腎病組比較,溫補(bǔ)固腎方各劑量組和達(dá)格列凈組大鼠腎組織LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值顯著增加(P<0.05或P<0.01)。見圖3。

    2.5 各組大鼠AMPK/mTOR通路蛋白表達(dá)情況比較

    與對(duì)照組比較,糖尿病腎病組大鼠p-AMPK/AMPK 比值降低,p-mTOR/mTOR 比值升高(P<0.01)。與糖尿病腎病組組比較,溫補(bǔ)固腎方各治療組和達(dá)格列凈組大鼠p-AMPK/AMPK 比值升高,pmTOR/mTOR比值降低(P<0.05或P<0.01)。見圖4。

    圖4 各組大鼠腎組織AMPK/mTOR通路蛋白表達(dá)

    2.6 AMPK 抑制對(duì)溫補(bǔ)固腎方改善糖尿病腎病大鼠腎纖維化的影響

    與對(duì)照組比較,糖尿病腎病組大鼠腎組織出現(xiàn)明顯的病理損傷,腎小球基底膜彌散性不均增厚,且伴有明顯的系膜基質(zhì)增生,膠原沉積增多。與糖尿病腎病組比較,溫補(bǔ)固腎方高劑量組大鼠腎組織病理性損傷減輕,腎小球基底膜增厚程度明顯減輕,膠原沉積減少。與溫補(bǔ)固腎方高劑量組比較,溫補(bǔ)固腎方高劑量組 +AMPK抑制劑組大鼠腎組織病理損傷加重,腎小球基底膜增厚程度明顯加重,膠原沉積增多。與對(duì)照組比較,糖尿病腎病組大鼠自噬標(biāo)志性蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值顯著降低,p-AMPK/AMPK 比值降低,p-mTOR/mTOR 比值升高(P<0.01)。與糖尿病腎病組比較,溫補(bǔ)固腎方高劑量組大鼠自噬標(biāo)志性蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值顯著升高,p-AMPK/AMPK 比值升高,p-mTOR/mTOR 比值降低(P<0.01)。與溫補(bǔ)固腎方高劑量組比較,溫補(bǔ)固腎方高劑量組 + AMPK 抑制劑組大鼠自噬標(biāo)志性蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值顯著降低,p-AMPK/AMPK 比值降低,p-mTOR/mTOR 比值升高(P<0.01)。見圖5和圖6。

    圖5 AMPK抑制劑對(duì)糖尿病腎病大鼠腎組織病理形態(tài)及纖維化的影響

    圖6 AMPK抑制劑對(duì)AMPK/mTOR通路介導(dǎo)的細(xì)胞自噬的影響

    3 討論

    糖尿病腎病屬于“腎濁”“水腫”“關(guān)格”“腎勞”“溺毒”等范疇,以水液潴留、腎虛陰陽失衡為主要特征,陽氣虛衰為糖尿病腎病的主要征象,尤其以腎陽虛為主,另伴有瘀血內(nèi)阻之象。因此,中醫(yī)臨床治療糖尿病腎病多以補(bǔ)腎、溫陽、固腎為主。溫補(bǔ)固腎方具有補(bǔ)氣健脾、溫陽、補(bǔ)腎之功[4]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),溫補(bǔ)固腎方能夠改善糖尿病腎病腎損傷,抑制腎纖維化[5]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組比較,糖尿病腎病組大鼠腎功能出現(xiàn)明顯病理損傷,α-SMA 表達(dá)增加,ECadherin 表達(dá)降低,腎組織纖維化程度明顯加重。與糖尿病腎病組比較,溫補(bǔ)固腎方各劑量組大鼠FBG、BUN、Scr、24 h-UA 水平顯著降低,腎損傷明顯降低,α-SMA表達(dá)降低,E-Cadherin表達(dá)增加,表明溫補(bǔ)固腎方具有抗糖尿病腎纖維化作用。但是,目前有關(guān)溫補(bǔ)固腎方抗纖維化的作用機(jī)制尚不明晰。

    自噬是一種高度保守的溶酶體降解途徑,是維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)的重要調(diào)節(jié)機(jī)制。既往研究發(fā)現(xiàn),糖尿病腎病中持續(xù)性的高糖能夠抑制自噬相關(guān)蛋白(LC3、Beclin-1)表達(dá),降低自噬水平,阻礙細(xì)胞器中積累產(chǎn)生的受損蛋白以及細(xì)胞毒性產(chǎn)物的清除,從而導(dǎo)致糖尿病腎病腎損傷以及腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞功能障礙[9-10]。激活細(xì)胞自噬可以顯著抑制高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞損傷,改善細(xì)胞功能[11]。以上研究表明,自噬水平的不足可能是導(dǎo)致糖尿病腎病進(jìn)展的重要機(jī)制。GUO 等[12]研究發(fā)現(xiàn),在STZ 誘導(dǎo)的糖尿病腎病大鼠腎小管間質(zhì)纖維化中,伴有明顯的自噬抑制,提示自噬可能是糖尿病腎纖維化的重要調(diào)節(jié)機(jī)制。另外,CAO 等[13]研究證實(shí),激活細(xì)胞自噬能夠抑制高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化以及糖尿病腎病大鼠腎小管間質(zhì)纖維化。本研究結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,糖尿病腎病組大鼠自噬小體數(shù)量明顯減少,且自噬標(biāo)志性蛋白LC3-Ⅱ表達(dá)顯著降低。與糖尿病腎病組比較,溫補(bǔ)固腎方各劑量組大鼠自噬小體數(shù)量均顯著增加,且自噬標(biāo)志性蛋白LC3-Ⅱ表達(dá)顯著升高,表明溫補(bǔ)固腎方可以通過誘導(dǎo)細(xì)胞自噬,抑制糖尿病大鼠腎纖維化。細(xì)胞自噬受到多種誘因和基因調(diào)控的影響,如mTOR、AMPK 以及沉默信息調(diào)節(jié)劑T1等,以上信號(hào)通路與糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。高糖環(huán)境下上述信號(hào)通路的激活/抑制是誘導(dǎo)/抑制自噬活性的關(guān)鍵,能夠加重/緩解糖尿病腎損傷加重[14-16]。AMPK 和mTOR 是自噬啟動(dòng)環(huán)節(jié)重要的調(diào)節(jié)因子,其構(gòu)成的AMPK/mTOR 信號(hào)通路是調(diào)控細(xì)胞自噬形成的重要通路之一[17]。研究發(fā)現(xiàn),mTOR 可以形成兩種不同的復(fù)合物,即mTORC1 和mTORC2。在糖尿病腎病大鼠中能夠觀察到mTORC1信號(hào)通路被顯著激活。在營(yíng)養(yǎng)豐富的條件下,mTORC1能夠通過磷酸化ULK1和ATG13,從而抑制細(xì)胞自噬,被認(rèn)為是自噬的負(fù)調(diào)節(jié)劑[18]。與mTOR 通路相反,AMPK 是自噬的正調(diào)節(jié)劑。研究發(fā)現(xiàn),在糖尿病腎病動(dòng)物模型中AMPK 磷酸化水平被顯著抑制。另外,AMPK 能夠抑制mTOR 通路的活化,降低mTORC1對(duì)ULK1 磷酸化的抑制作用,提高ULK1 活性,從而促進(jìn)自噬啟動(dòng)環(huán)節(jié)[19]。本研究結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,糖尿病腎病組大鼠p-AMPK/AMPK 比值顯著降低,p-mTOR/mTOR 比值顯著升高。與糖尿病腎病組比較,溫補(bǔ)固腎方各劑量組大鼠p-AMPK/AMPK 比值顯著升高,p-mTOR/mTOR 比值顯著降低。以上研究結(jié)果初步表明,溫補(bǔ)固腎方能夠通過調(diào)控AMPK/mTOR信號(hào)通路介導(dǎo)的細(xì)胞自噬抑制糖尿病大鼠腎纖維化。張哲等[20]研究發(fā)現(xiàn),利拉魯肽能夠通過激活A(yù)MPK/mTOR 信號(hào)通路,增加自噬水平,從而減輕糖尿病心肌病大鼠心肌炎癥和氧化應(yīng)激損傷,而給予AMPK 抑制劑Compound C 可以逆轉(zhuǎn)利拉魯肽對(duì)AMPK/mTOR 通路的作用,抑制自噬,加重糖尿病心肌病心肌炎癥和氧化應(yīng)激損傷。為進(jìn)一步明確AMPK/mTOR 信號(hào)通路介導(dǎo)的細(xì)胞自噬在溫補(bǔ)固腎方治療糖尿病腎纖維化中的作用。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)溫補(bǔ)固腎方干預(yù)組大鼠給予AMPK 抑制劑Compound C。結(jié)果顯示,AMPK 抑制劑能夠逆轉(zhuǎn)溫補(bǔ)固腎方對(duì)糖尿病腎纖維化的作用,主要表現(xiàn)為p-AMPK/AMPK 比值降低,p-mTOR/mTOR 比值升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低,膠原沉積及腎損傷加重。

    4 結(jié)論

    溫補(bǔ)固腎方能夠激活A(yù)MPK/mTOR 通路介導(dǎo)的自噬改善糖尿病大鼠腎纖維化。本研究結(jié)果初步闡明了溫補(bǔ)固腎方治療糖尿病腎纖維化的作用及調(diào)控機(jī)制,為其治療糖尿病腎纖維化提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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